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Streptomyces maritimus苯丙氨酸变位酶的制备、表征及催化合成β-芳香丙氨酸
被引量：
1
1
作者
朱龙宝
陶玉贵
+3 位作者
葛飞
李婉珍
刘义
堵国成
《高等学校化学学报》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2017年第2期206-211,共6页
克隆Streptomyces maritimus来源的苯丙氨酸变位酶(Sm PAM)基因,并进行异源表达,制备了重组Sm PAM,用于一步合成高附加值的β-芳香丙氨酸.提取S.maritimus的基因组,设计1对特异性引物,采用PCR扩增编码Sm PAM的结构基因pam,与表达载体p E...
克隆Streptomyces maritimus来源的苯丙氨酸变位酶(Sm PAM)基因,并进行异源表达,制备了重组Sm PAM,用于一步合成高附加值的β-芳香丙氨酸.提取S.maritimus的基因组,设计1对特异性引物,采用PCR扩增编码Sm PAM的结构基因pam,与表达载体p ET28a连接,构建重组表达质粒p ET28a-pam,转入E.coli BL21中表达,采用亲和层析柱分离纯化重组酶Sm PAM.结果表明,克隆得到编码523个氨基酸长度的Sm PAM基因pam,并在大肠杆菌中实现了高效表达,制得电泳纯的重组Sm PAM.该酶在最适温度30℃,p H=9.0条件下活力达到2.5 U/mg,具有较高的热稳定性和p H稳定性,在60~70℃下保持3 h未见活性下降,在p H=9~11保持24 h,残余酶活力达到98%.Sm PAM具有较宽的底物谱,可催化苯环上携带不同基团的3-芳香丙烯酸合成β-芳香丙氨酸,当苯环上携带吸电子基团时催化反应更易完成,其中2-硝基-β-苯丙氨酸的产率最高,达到93%.
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关键词
苯
丙
氨
酸
变位酶
β-芳香丙氨酸
基因克隆
异源表达
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职称材料
重组Taxus chinensis苯丙氨酸变位酶性质表征及R-β-芳香丙氨酸合成
被引量：
1
2
作者
丰国强
徐文亮
+4 位作者
宋平
李婉珍
陶玉贵
葛飞
朱龙宝
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2021年第6期82-87,共6页
为实现酶法合成高附加值的β-苯丙氨酸,首先化学合成来源于紫衫(Taxus chinensis)的苯丙氨酸变位酶(phenylalanine aminomutase,PAM)基因(Tcpam),构建大肠杆菌重组质粒Pet-sumo-Tcpam,转入大肠杆菌中进行异源诱导表达,采用镍柱亲和层析...
为实现酶法合成高附加值的β-苯丙氨酸,首先化学合成来源于紫衫(Taxus chinensis)的苯丙氨酸变位酶(phenylalanine aminomutase,PAM)基因(Tcpam),构建大肠杆菌重组质粒Pet-sumo-Tcpam,转入大肠杆菌中进行异源诱导表达,采用镍柱亲和层析制备电泳纯的重组酶TcPAM,用于催化合成R-β-苯丙氨酸。结果表明:重组质粒Pet-sumo-Tcpam成功在大肠杆菌中实现高效表达,获得可溶性的重组TcPAM,经过亲和层析制备出电泳纯的重组TcPAM。质谱和圆二色谱检测分析结果表明,TcPAM能够催化α-苯丙氨酸异构化为R构型的β-苯丙氨酸。TcPAM在最适温度30℃、pH 9的条件下,酶活力达到4.11 U/mg,金属离子K^(+)、Fe^(2+)和Ca^(2+)对TcPAM的活性影响较小,而Cu^(2+)和Zn^(2+)有强烈抑制性,表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵、十二烷基硫酸钠、Triton X-100和Tween 80对重组酶活力影响较小,相对酶活力保持在90%以上。进一步利用TcPAM催化α-芳香丙氨酸异构合成β-芳香丙氨酸,结果表明:苯环上携带不同基团的α-芳香丙氨酸为底物时,苯环上携带供电子基团比吸电子基团的底物转化率更高,底物的α-氨基容易转移至β位,其中4-MeO-β-苯丙氨酸的产率最高,达到45%,为建立酶法合成R-β-芳香丙氨酸提供了参考。
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关键词
紫衫
苯
丙
氨
酸
变位酶
β-芳香丙氨酸
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职称材料
题名
Streptomyces maritimus苯丙氨酸变位酶的制备、表征及催化合成β-芳香丙氨酸
被引量：
1
1
作者
朱龙宝
陶玉贵
葛飞
李婉珍
刘义
堵国成
机构
安徽工程大学生物与化学工程学院
西华大学食品与生物工程学院
江南大学工业生物技术教育部重点实验室
出处
《高等学校化学学报》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2017年第2期206-211,共6页
基金
国家自然科学基金(批准号:31671797
21506172)
安徽省高校自然科学基金(批准号:KJ2016A801)资助~~
文摘
克隆Streptomyces maritimus来源的苯丙氨酸变位酶(Sm PAM)基因,并进行异源表达,制备了重组Sm PAM,用于一步合成高附加值的β-芳香丙氨酸.提取S.maritimus的基因组,设计1对特异性引物,采用PCR扩增编码Sm PAM的结构基因pam,与表达载体p ET28a连接,构建重组表达质粒p ET28a-pam,转入E.coli BL21中表达,采用亲和层析柱分离纯化重组酶Sm PAM.结果表明,克隆得到编码523个氨基酸长度的Sm PAM基因pam,并在大肠杆菌中实现了高效表达,制得电泳纯的重组Sm PAM.该酶在最适温度30℃,p H=9.0条件下活力达到2.5 U/mg,具有较高的热稳定性和p H稳定性,在60~70℃下保持3 h未见活性下降,在p H=9~11保持24 h,残余酶活力达到98%.Sm PAM具有较宽的底物谱,可催化苯环上携带不同基团的3-芳香丙烯酸合成β-芳香丙氨酸,当苯环上携带吸电子基团时催化反应更易完成,其中2-硝基-β-苯丙氨酸的产率最高,达到93%.
关键词
苯
丙
氨
酸
变位酶
β-芳香丙氨酸
基因克隆
异源表达
Keywords
Phenylalanine aminomutase
β-
Arylalanine
Gene cloning
Heterologous expression
分类号
O629 [理学—有机化学]
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职称材料
题名
重组Taxus chinensis苯丙氨酸变位酶性质表征及R-β-芳香丙氨酸合成
被引量：
1
2
作者
丰国强
徐文亮
宋平
李婉珍
陶玉贵
葛飞
朱龙宝
机构
安徽工程大学生物与化学工程学院
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2021年第6期82-87,共6页
基金
国家自然科学基金面上项目(31671797)
安徽工程大学拔尖人才项目(2016BJRC006)。
文摘
为实现酶法合成高附加值的β-苯丙氨酸,首先化学合成来源于紫衫(Taxus chinensis)的苯丙氨酸变位酶(phenylalanine aminomutase,PAM)基因(Tcpam),构建大肠杆菌重组质粒Pet-sumo-Tcpam,转入大肠杆菌中进行异源诱导表达,采用镍柱亲和层析制备电泳纯的重组酶TcPAM,用于催化合成R-β-苯丙氨酸。结果表明:重组质粒Pet-sumo-Tcpam成功在大肠杆菌中实现高效表达,获得可溶性的重组TcPAM,经过亲和层析制备出电泳纯的重组TcPAM。质谱和圆二色谱检测分析结果表明,TcPAM能够催化α-苯丙氨酸异构化为R构型的β-苯丙氨酸。TcPAM在最适温度30℃、pH 9的条件下,酶活力达到4.11 U/mg,金属离子K^(+)、Fe^(2+)和Ca^(2+)对TcPAM的活性影响较小,而Cu^(2+)和Zn^(2+)有强烈抑制性,表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵、十二烷基硫酸钠、Triton X-100和Tween 80对重组酶活力影响较小,相对酶活力保持在90%以上。进一步利用TcPAM催化α-芳香丙氨酸异构合成β-芳香丙氨酸,结果表明:苯环上携带不同基团的α-芳香丙氨酸为底物时,苯环上携带供电子基团比吸电子基团的底物转化率更高,底物的α-氨基容易转移至β位,其中4-MeO-β-苯丙氨酸的产率最高,达到45%,为建立酶法合成R-β-芳香丙氨酸提供了参考。
关键词
紫衫
苯
丙
氨
酸
变位酶
β-芳香丙氨酸
Keywords
Taxus chinensis
phenylalanine ainomutase
β-
arylalanine
分类号
Q814.9 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Streptomyces maritimus苯丙氨酸变位酶的制备、表征及催化合成β-芳香丙氨酸
朱龙宝
陶玉贵
葛飞
李婉珍
刘义
堵国成
《高等学校化学学报》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2017
1
在线阅读
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职称材料
2
重组Taxus chinensis苯丙氨酸变位酶性质表征及R-β-芳香丙氨酸合成
丰国强
徐文亮
宋平
李婉珍
陶玉贵
葛飞
朱龙宝
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2021
1
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