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鳜鱼(Siniperca chuatsi)β-肌动蛋白基因cDNA全序列与5′侧翼区的克隆与分析 被引量：16
1
作者 刘秀霞 梁旭方 +3 位作者 王琳 端金霞 李光照 廖婉琴 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期102-108,共7页
采用RT-PCR及RACE法,分离、克隆鳜鱼β-肌动蛋白基因cDNA全序列,再用基因组步行法(Genome Walker)克隆鳜鱼β-肌动蛋白基因5′调控区。序列分析结果表明,鳜鱼β-肌动蛋白基因全长1897bp,其中5′-UTR长94bp,3′-UTR长675bp,编码区长1128... 采用RT-PCR及RACE法,分离、克隆鳜鱼β-肌动蛋白基因cDNA全序列,再用基因组步行法(Genome Walker)克隆鳜鱼β-肌动蛋白基因5′调控区。序列分析结果表明,鳜鱼β-肌动蛋白基因全长1897bp,其中5′-UTR长94bp,3′-UTR长675bp,编码区长1128bp,编码375个氨基酸。将所得序列与其它动物类群的β-肌动蛋白基因序列进行比较分析显示,鱼类、两栖类、鸟类、哺乳类等不同类群脊椎动物β-肌动蛋白氨基酸序列同源性均在96%以上,说明该基因在生物进化过程中高度保守。通过鳜鱼与其它脊椎动物β-肌动蛋白基因的核苷酸序列构建的进化树显示,脊椎动物β-肌动蛋白聚类成3个分支,鱼类β-肌动蛋白基因形成一个独立的分化群,说明鱼类β-肌动蛋白基因起源于一个共同祖先。克隆得到的鳜鱼β-肌动蛋白基因5'侧翼序列长1399bp,对其进行序列分析,在其起始密码字ATG上游200bp范围内发现含有CAATbox、CC(A/T)6GG(CArGbox)、TATA box对转录调控起重要作用的顺式元件,同时在侧翼区也发现含有GC box、MYOD、YY1、SP1、GATA等多个潜在调控元件。鳜鱼β-肌动蛋白基因5′侧翼序列的克隆成功,为今后转基因鳜鱼的研究工作奠定了基础。 展开更多
关键词 β-肌动蛋白基因 CDNA序列 5′调控区 克隆 鳜鱼
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稀有鮈鲫β-肌动蛋白基因片段的克隆及其同源性分析 被引量：2
2
作者 彭扣 王玉凤 +3 位作者 刘绪生 胡炜 陈伟伟 赵浩斌 《华中师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2006年第4期580-584,共5页
采用RT-PCR方法,从稀有鮈鲫肌肉组织中分离和克隆出β-肌动蛋白基因cDNA部分序列,长度为1 029 bp,编码343个氨基酸残基.序列分析表明,该cDNA序列与其他物种β-肌动蛋白基因同源性非常高.RT-PCR能够检出该基因在稀有鮈鲫肌肉、眼、脑、... 采用RT-PCR方法,从稀有鮈鲫肌肉组织中分离和克隆出β-肌动蛋白基因cDNA部分序列,长度为1 029 bp,编码343个氨基酸残基.序列分析表明,该cDNA序列与其他物种β-肌动蛋白基因同源性非常高.RT-PCR能够检出该基因在稀有鮈鲫肌肉、眼、脑、心脏、肝、肠、鳃、睥、卵巢等组织中广普表达,在胚胎不同发育时期持续恒量表达.并基于已知的鱼类β-肌动蛋白基因序列构建了进化树. 展开更多
关键词 β-肌动蛋白基因 稀有鮈鲫 克隆 组织表达 同源性比较
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拟穴青蟹β-肌动蛋白基因的克隆、组织表达及作为内参的可靠性分析 被引量：2
3
作者 徐真 马洪雨 +5 位作者 马春艳 冯娜娜 李新苍 李淑娟 蒋伟 马凌波 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期105-112,共8页
采用RT-PCR和RACE技术,从拟穴青蟹肌肉组织中鉴定出β-actin基因的cDNA全序列。序列分析结果表明,拟穴青蟹β-actin基因全长1 434 bp,包括完整的开放阅读框1 131 bp、5'端非翻译区60 bp及3'端非翻译区243 bp。该基因编码376个... 采用RT-PCR和RACE技术,从拟穴青蟹肌肉组织中鉴定出β-actin基因的cDNA全序列。序列分析结果表明,拟穴青蟹β-actin基因全长1 434 bp,包括完整的开放阅读框1 131 bp、5'端非翻译区60 bp及3'端非翻译区243 bp。该基因编码376个氨基酸,蛋白分子量为41.79 kD,等电点为5.205。同源性比较表明,该基因与其它物种具有高度的氨基酸保守性。聚类分析表明,拟穴青蟹与百慕大陆蟹的亲缘关系最近。荧光定量PCR分析表明,β-actin基因在拟穴青蟹血液、心脏、肝胰腺、胃、鳃、肌肉、精巢、结缔组织组织中均有表达,在肌肉组织中的表达量最高,在胃、精巢、血液、肝胰腺、心脏、鳃组织中的表达量依次降低,在结缔组织中的表达量最低。由于该基因在拟穴青蟹不同组织中的表达量存在明显的差异,因此不适用于作为内参基因使用。 展开更多
关键词 拟穴青蟹 β-肌动蛋白基因 基因克隆 组织表达 内参
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曼氏无针乌贼(Sepiella maindroni)β-肌动蛋白基因的cDNA全长克隆与序列分析 被引量：2
4
作者 李继姬 郭宝英 吴常文 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期787-793,共7页
采用RT-PCR和快速扩增cDNA末端(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术首次克隆了曼氏无针乌贼β-肌动蛋白基因的cDNA全序列,该序列全长为2000bp,由长197bp的5’非翻译区(untranslated region,UTR),669bp的3’非翻译区,和1134bp... 采用RT-PCR和快速扩增cDNA末端(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术首次克隆了曼氏无针乌贼β-肌动蛋白基因的cDNA全序列,该序列全长为2000bp,由长197bp的5’非翻译区(untranslated region,UTR),669bp的3’非翻译区,和1134bp的开放阅读框(open reading frame,ORF)组成。阅读框共编码377个氨基酸,推算的分子量约为42.0kDa,理论等电点为5.16。曼氏无针乌贼β-actin氨基酸序列中Ile12、Ser172、Ser174、Gln223、His227、Ile231、Gly232、Ser320、Glu328、Thr360等10个氨基酸残基具有特异性,以及2个特殊的氨基酸残基位点和2个软体动物特有的氨基酸残基。曼氏无针乌贼β-actin氨基酸序列与软体动物、节肢动物、脊椎动物的相似性高达97%。NJ法系统进化分析显示曼氏无针乌贼首先与软体动物聚在一起,然后与节肢动物聚在一起,再与鱼类、两栖类、哺乳类聚在一起。 展开更多
关键词 曼氏无针乌贼 CDNA 快速扩增cDNA末端(RACE) β-肌动蛋白基因
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巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因的克隆和分析 被引量：2
5
作者 尚常花 朱顺妮 +1 位作者 袁振宏 王忠铭 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第28期17172-17175,共4页
[目的]获得巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因cDNA全长序列。[方法]以巴夫杜氏藻cDNA为模板,采用简并引物进行PCR扩增,获得533bp特异cDNA片段。在此基础上,设计特异引物,采用5'-Genome Walking和3'-RACE的方法,获得基因的5'-端DNA... [目的]获得巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因cDNA全长序列。[方法]以巴夫杜氏藻cDNA为模板,采用简并引物进行PCR扩增,获得533bp特异cDNA片段。在此基础上,设计特异引物,采用5'-Genome Walking和3'-RACE的方法,获得基因的5'-端DNA序列和3'-端cDNA序列,进而获得β-肌动蛋白基因cDNA全长序列。[结果]获得了巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因的特异cDNA片段、5'-端DNA和3'-端cDNA片段。经拼接后,扩增出全长cDNA。β-肌动蛋白基因cDNA全长1754bp,包括1137bp的开放读码框和617bp的3'-非翻译区序列。氨基酸序列相似性分析发现,巴夫杜氏藻β-肌动蛋白氨基酸序列与杜氏盐藻、莱茵衣藻等的同源性较高。系统发育分析表明,巴夫杜氏藻β-肌动蛋白与杜氏盐藻的相似性最高。[结论]首次获得了巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因cDNA全长序列,并发现巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因非常保守。 展开更多
关键词 巴夫杜氏藻 β-肌动蛋白基因 克隆
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华山松大小蠹β-肌动蛋白基因的克隆与组织表达
6
作者 张然然 王全坡 陈辉 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2014年第7期95-101,共7页
【目的】获得华山松大小蠹β-肌动蛋白基因序列,探讨其作为内参基因的可行性。【方法】通过比对其他昆虫β-肌动蛋白的氨基酸序列设计简并引物,用PCR的方法获得华山松大小蠹β-肌动蛋白基因片段,进一步通过RT-PCR和qRT-PCR的方法,研究β... 【目的】获得华山松大小蠹β-肌动蛋白基因序列,探讨其作为内参基因的可行性。【方法】通过比对其他昆虫β-肌动蛋白的氨基酸序列设计简并引物,用PCR的方法获得华山松大小蠹β-肌动蛋白基因片段,进一步通过RT-PCR和qRT-PCR的方法,研究β-肌动蛋白基因在华山松大小蠹不同发育阶段和成虫不同组织的表达情况。【结果】获得了1 461bp的华山松大小蠹β-肌动蛋白基因cDNA序列,与其他昆虫肌动蛋白基因核苷酸序列的相似性在86%以上,且该基因在华山松大小蠹幼虫、蛹、成虫3个发育阶段以及成虫的头、胸、腹、足、翅等组织中表达稳定,且表达量无明显差异。【结论】成功获得了华山松大小蠹β-肌动蛋白基因片段,且该基因片段可以作为基因表达差异性研究的内参基因。 展开更多
关键词 华山松大小蠹 β-肌动蛋白基因 反转录PCR 定量PCR 基因序列分析
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近江牡蛎等7种养殖鱼虾贝类参照基因β-肌动蛋白cDNA序列的克隆与比较分析 被引量：8
7
作者 林群 梁旭方 +2 位作者 王琳 李光照 胡永乐 《生态毒理学报》 CAS CSCD 2008年第3期256-261,共6页
为进一步研究水产养殖动物功能基因的表达调控,采用RT-PCR及RACE法,分离、克隆了近江牡蛎(Crassostrea ariakensis)肝脏β-肌动蛋白基因cDNA全序列.结果表明,近江牡蛎β-肌动蛋白基因cDNA全长1343bp,其中5′、3′非翻译区(UTR)分别长68b... 为进一步研究水产养殖动物功能基因的表达调控,采用RT-PCR及RACE法,分离、克隆了近江牡蛎(Crassostrea ariakensis)肝脏β-肌动蛋白基因cDNA全序列.结果表明,近江牡蛎β-肌动蛋白基因cDNA全长1343bp,其中5′、3′非翻译区(UTR)分别长68bp、144bp,开放阅读框(ORF)为1131bp,编码376个氨基酸.实验同时成功获得了中华圆田螺(Cipangopaludina cahayensis)、日本沼虾(Macrobrachium nipponensis)、斑鳢(Channa maculata)、胡子鲶(Clarias fuscus)、鳙鱼(Aristichthys nobilis)、鲮鱼(Cirrhinus molitorella)6种重要淡水养殖动物肝脏β-肌动蛋白基因cDNA的核心序列及氨基酸序列.所获基因与其它动物类群的β-肌动蛋白基因氨基酸同源性高达96%以上,表明软体类、节肢类、鱼类、两栖类、鸟类和哺乳类等不同类群动物β-肌动蛋白基因在生物进化过程中高度保守.系统发育分析显示软体类、节肢类、鱼类、两栖类、鸟类和哺乳类脊椎动物β-肌动蛋白分类与传统的分类基本一致. 展开更多
关键词 β-肌动蛋白基因 基因克隆 序列分析 近江牡蛎(Crassostrea ariakensis)
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可在鱼体内表达hu-IFN-α的基因重组构建及转化 被引量：9
8
作者 张学文 章怀云 +3 位作者 符少辉 陈韬 陈立祥 肖调义 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第4期1-5,共5页
通过分子重组 ,将人α 干扰素 (hu IFN α)基因编码序列克隆到鲤鱼β 肌动蛋白基因启动子下游 ,构建成能在鱼体内组成型表达hu IFN α的基因重组分子。经限制性酶切分析、Southern杂交和序列测定 ,证明重组分子构建的正确性。采用显微... 通过分子重组 ,将人α 干扰素 (hu IFN α)基因编码序列克隆到鲤鱼β 肌动蛋白基因启动子下游 ,构建成能在鱼体内组成型表达hu IFN α的基因重组分子。经限制性酶切分析、Southern杂交和序列测定 ,证明重组分子构建的正确性。采用显微注射法将这一重组基因转化草鱼受精卵 ,获得了表达人α 展开更多
关键词 人α-干扰素 鲤鱼β-肌动蛋白基因启动子 基因重组 出血病 转基因草鱼
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