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米曲霉GX0011β-果糖基转移酶的性质研究 被引量:8
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作者 覃益民 唐江涛 +3 位作者 苏加坤 姚评佳 魏远安 梁锦添 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期123-126,135,共5页
β-果糖基转移酶是酶法由蔗糖生产低聚果糖所必需的酶,本文对从米曲霉GX0011分离纯化得到的β-果糖基转移酶性质进行了研究。结果表明,该酶催化蔗糖转化成蔗果三糖的Km和Vmax分别为0.319mol/L和0.713mol/min/L,最适pH和最适温度分别为5.... β-果糖基转移酶是酶法由蔗糖生产低聚果糖所必需的酶,本文对从米曲霉GX0011分离纯化得到的β-果糖基转移酶性质进行了研究。结果表明,该酶催化蔗糖转化成蔗果三糖的Km和Vmax分别为0.319mol/L和0.713mol/min/L,最适pH和最适温度分别为5.0~6.0和45℃。葡萄糖是该酶的竞争性抑制剂,其抑制常数Ki=0.608mol/L。经苯甲磺酸氟(PMSF)、N-溴代二酰亚胺(NBS)、1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)和间硝基苯磺酸钠(TNBS)对酶进行化学修饰及底物保护实验,推测该酶活性中心可能包括丝氨酸/苏氨酸、色氨酸、天冬氨酸(谷氨酸)残基,而赖氨酸残基可能与维系酶活性中心构象有关,但不是酶活性必需基团。实验还表明,超声波能在一定程度上提高酶活力,在300W功率下作用5min可提高酶活12%左右。低浓度乙醇对酶活影响并不十分显著,乙醇浓度达20%时,酶活仅损失19%。 展开更多
关键词 米曲霉 β-果糖基转移酶 性质 化学修饰
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米曲霉GX0011 β-果糖基转移酶的分离纯化 被引量:2
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作者 覃益民 苏加坤 +3 位作者 唐江涛 王机 姚评佳 魏远安 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第4期710-714,共5页
通过热变性、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sephadex A-50(柱1)、Octyl-Sepharose CL-4B、Sephacryl S-300、DEAE-Sephadex A-50(柱2)层析等分离纯化步骤对本实验室自行筛选诱变的米曲霉GX0011来源的β-果糖基转移酶进行了分离纯化,并通过SDS-P... 通过热变性、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sephadex A-50(柱1)、Octyl-Sepharose CL-4B、Sephacryl S-300、DEAE-Sephadex A-50(柱2)层析等分离纯化步骤对本实验室自行筛选诱变的米曲霉GX0011来源的β-果糖基转移酶进行了分离纯化,并通过SDS-PAGE检测了该酶的纯度和亚基分子量。结果表明电泳一条带,亚基表观分子量为5.1×104,小于多数文献报道的结果。纯化倍数为121.7,比活和活力回收分别为1975U-mg-1和17%。酶活测定表明该酶只起到转果糖基的作用而无水解活性。 展开更多
关键词 低聚果糖 米曲霉 β-果糖基转移酶 分离纯化
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超声波对β-果糖基转移酶催化活性的影响 被引量:3
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作者 覃益民 唐江涛 +1 位作者 魏远安 姚评佳 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2007年第5期23-25,共3页
研究超声波在不同功率及作用时间下对FTS的影响效果。结果表明:超声波在一定作用参数下能提高FTS催化活力,在20kHz、300W功率下(有底物存在时为250W)作用5min提高的酶活力最大,比对照提高了约12%。经荧光光谱分析,在无底物存在时,FTS经... 研究超声波在不同功率及作用时间下对FTS的影响效果。结果表明:超声波在一定作用参数下能提高FTS催化活力,在20kHz、300W功率下(有底物存在时为250W)作用5min提高的酶活力最大,比对照提高了约12%。经荧光光谱分析,在无底物存在时,FTS经超声波处理后,其荧光发射波长发生了红移,最大发射波长由343nm变为348nm,荧光强度有所提高;而有底物存在时,经超声波处理前后的FTS荧光光谱无明显变化。 展开更多
关键词 β-果糖基转移酶 催化活性 超声波 荧光光谱分析
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米曲霉GX0011β-果糖基转移酶光谱特性的研究
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作者 覃益民 唐江涛 +2 位作者 魏远安 姚评佳 梁锦添 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期349-352,共4页
Spectroscopic characteristics of the β-fructosyltransferase(EC2.4.1.9 FTS) from Aspergillus oryzae GX0011 was studied by ultraviolet absorbance spectrum,fluorescence spectrum and circular dichroism.The enzyme exhibit... Spectroscopic characteristics of the β-fructosyltransferase(EC2.4.1.9 FTS) from Aspergillus oryzae GX0011 was studied by ultraviolet absorbance spectrum,fluorescence spectrum and circular dichroism.The enzyme exhibited that the characteristic peaks of ultraviolet absorbance spectrum,of fluorescence emission spectrum were at 280nm and 343nm.In low concentration of ,the fluorescence quenching was in line with the Sterm-Volmer’s equation and the percentage of Trp residue reacted by was 0.72.By comparing the fluorescence spectra of FTS substrate-perturbation,it was implied that some inner Trp residues participated in catalysis and might be involved in the active site of the enzyme.Furthermore,the secondary structures of FTS were quantitatively determined by circular dichroism.The relative percentage content of each secondary structure were:25.1±0.8% α-helix,5.3±2.3% β-sheet,31.4±1.5%β-turn and 38.2±1.1% random coil respectively. 展开更多
关键词 β-果糖基转移酶 光谱特性 紫外光谱 荧光光谱 园二色光谱 二级结构
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高产β-果糖基转移酶的米曲霉菌株的筛选及其产酶条件优化
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作者 高斌 梁露 +3 位作者 李娅 李斌 刘成梅 付桂明 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期224-230,共7页
从本实验室保藏的6株米曲霉A-F01、A-F02、A-F03、A-F04、A-F05和A-F06中,利用高效液相色谱HPLC-示差折光检测器RID测定6株米曲霉生物合成β-果糖基转移酶(β-FTase)酶活,筛选出高产β-果糖基转移酶的米曲霉菌株A-F04,并通过单因素实验... 从本实验室保藏的6株米曲霉A-F01、A-F02、A-F03、A-F04、A-F05和A-F06中,利用高效液相色谱HPLC-示差折光检测器RID测定6株米曲霉生物合成β-果糖基转移酶(β-FTase)酶活,筛选出高产β-果糖基转移酶的米曲霉菌株A-F04,并通过单因素实验和正交实验对其产酶发酵条件和培养基进行了优化。结果显示,影响发酵产酶因素的主次顺序为接种量、培养温度和转速;影响A-F04菌株发酵培养基组成因素的主次顺序为庶糖、酵母粉、p H、硫酸铵;确定了A-F04菌株最佳产酶条件,即培养基组成为0.4%(m/v)的蔗糖、0.15%(m/v)的酵母粉、0.15%(m/v)的硫酸铵和0.2%(m/v)的氯化钠,起始p H7.0,接种量为1.0%(v/v),培养时间为96 h,培养温度为35℃,转速为200 r/min,其β-FTase酶活力可达519.65 U/g,相比在发酵基础培养基和初始条件下的酶活466.25 U/g,提高了11.45%。 展开更多
关键词 β-果糖基转移酶 米曲霉 高产菌株 条件优化
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米曲霉A-F04的β-果糖基转移酶基因的克隆鉴定及其生物信息学分析
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作者 高斌 李棒 +3 位作者 李娅 李斌 刘成梅 付桂明 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第16期220-225,共6页
以实验室前期筛选出的高产β-果糖基转移酶(β-fructosyltransferase,β-FTase)的米曲霉(Aspergillus oryzae)菌株A-F04出发,提取米曲霉A-F04基因组DNA和RNA,采用PCR和RT-PCR技术克隆β-FTase基因,得到β-FTase基因完整编码序列和... 以实验室前期筛选出的高产β-果糖基转移酶(β-fructosyltransferase,β-FTase)的米曲霉(Aspergillus oryzae)菌株A-F04出发,提取米曲霉A-F04基因组DNA和RNA,采用PCR和RT-PCR技术克隆β-FTase基因,得到β-FTase基因完整编码序列和内含子序列,利用重组技术构建β-果糖基转移酶质粒基因库,并构建基因的进化树,预测β-FTase分子量、等电点、氨基酸组成等物化性质,预测其N-糖基化位点和信号肽,运用SWISS-MODEL对β-FTase的三级结构预测。结果显示,成功鉴定出菌株A-F04具有β-FTase基因;菌株A-F04的β-FTase基因编码区长度为1630 bp,含有一个52 bp的内含子,位于173 bp与224 bp之间;编码序列的开放阅读框总长为1578 bp;软件分析得知β-FTase为亲水性的稳定蛋白,其分子量为57.4653 ku,理论等电点为4.83,由525个氨基酸组成;可能的N-糖基化位点有6处;信号肽分析软件得知其编码的1~17位置处的氨基酸为信号肽;SWISS-MODEL构建的3个模型质量较高,有利于后期对β-FTase的结构和功能的研究。 展开更多
关键词 米曲霉A-F04 β-果糖基转移酶 基因鉴定 生物信息学分析
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β-呋喃果糖苷酶的抑制及其在低聚果糖生产中的应用 被引量:8
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作者 苏加坤 王机 +2 位作者 姚评佳 梁锦添 魏远安 《化学与生物工程》 CAS 2007年第5期64-66,共3页
研究了复合抑制剂A、B对β-呋喃果糖苷酶(FFS)与β-果糖基转移酶(FTS)活性的影响。结果表明:复合抑制剂A在抑制β-呋喃果糖苷酶活力69.7%的同时,使β-果糖基转移酶活力提高到314.9%;复合抑制剂B则在使FFS活力降低51.5%的同时使FTS活力... 研究了复合抑制剂A、B对β-呋喃果糖苷酶(FFS)与β-果糖基转移酶(FTS)活性的影响。结果表明:复合抑制剂A在抑制β-呋喃果糖苷酶活力69.7%的同时,使β-果糖基转移酶活力提高到314.9%;复合抑制剂B则在使FFS活力降低51.5%的同时使FTS活力提高到386.9%。反应产物中有效成分低聚果糖(FOS)的含量从50%-55%提高到60%-63%,为改善低聚果糖产品质量、提高低聚果糖收率提供了可行途径。 展开更多
关键词 低聚果糖 抑制剂 β-果糖基转移酶 伊呋喃果糖苷酶
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共固定化——低聚果糖生产新技术
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作者 朱泽远 周维仁 乐国伟 《饲料工业》 北大核心 2004年第2期43-46,共4页
关键词 共固定化技术 低聚果糖 生产技术 低聚果糖 蔗糖 β-果糖基转移酶 饲料添加剂
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