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过量表达大豆异丙基苹果酸脱氢酶基因GmIPMDH促进植株开花和生长
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作者 刘薇 王玉斌 +4 位作者 李伟 张礼凤 徐冉 王彩洁 张彦威 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期613-622,共10页
异丙基苹果酸合成酶(isopropylmalate synthase,IPMS)和异丙基苹果酸脱氢酶(isopropylmalate dehydrogenase,IPMDH)是亮氨酸生物合成中的重要限速酶,但二者在植物生长发育中的功能鲜有报道。本研究对拟南芥AtIPMDH2基因在大豆中的同源基... 异丙基苹果酸合成酶(isopropylmalate synthase,IPMS)和异丙基苹果酸脱氢酶(isopropylmalate dehydrogenase,IPMDH)是亮氨酸生物合成中的重要限速酶,但二者在植物生长发育中的功能鲜有报道。本研究对拟南芥AtIPMDH2基因在大豆中的同源基因GmIPMDH进行了克隆和分析。该基因编码的氨基酸序列中含有Iso_dh亚家族保守结构域,且启动子中含有大量的光反应元件及激素应答元件。实时荧光定量PCR显示大豆叶片中GmIPMDH的表达量随着植株的生长发育逐渐升高。对GmIPMDH进行了烟草的异位表达和大豆的过量表达,表型分析发现GmIPMDH的过量表达显著提前了烟草和大豆的开花时间,且株高和节数均显著增加。转录组分析显示,GmIPMDH过量表达大豆叶片中的若干开花相关基因及赤霉素合成相关基因的表达量发生变化,推测GmIPMDH可能通过赤霉素合成通路参与赤霉素介导的植物开花诱导和株型调控。本研究首次阐明了GmIPMDH在开花期调控中的作用,为今后进一步研究GmIPMDH调控大豆开花和生长发育的分子机制提供了一定的基础。 展开更多
关键词 大豆 异丙基苹果酸 GmIPMDH 开花期 株高
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西方蜜蜂六个亚种苹果酸脱氢酶Ⅱ基因的遗传差异 被引量:7
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作者 刘艳荷 陈盛禄 +1 位作者 童富淡 张传溪 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期188-192,共5页
研究了西方蜜蜂Apismellifera 6亚种———浙农大 1号意蜂 (ZND A .m .ligustica)、东北黑蜂 (A .m .ssp .)、卡尼鄂拉蜂 (A .m .carnica)、喀尔巴阡蜂 (A .m .carpatica)、高加索蜂 (A .m .caucasica)和乌克兰蜂 (A .m .acervorum)苹... 研究了西方蜜蜂Apismellifera 6亚种———浙农大 1号意蜂 (ZND A .m .ligustica)、东北黑蜂 (A .m .ssp .)、卡尼鄂拉蜂 (A .m .carnica)、喀尔巴阡蜂 (A .m .carpatica)、高加索蜂 (A .m .caucasica)和乌克兰蜂 (A .m .acervorum)苹果酸脱氢酶Ⅱ的基因型频率、基因频率和杂合纯合度。浙农大 1号意蜂、喀尔巴阡蜂和高加索蜂的纯合度较高 ,但浙农大 1号意蜂等位基因c频率最高 ,喀尔巴阡蜂等位基因b频率最高 ,高加索蜂等位基因a频率最高 ;东北黑蜂、卡尼鄂拉蜂和乌克兰蜂是高度杂合的亚种 ,但东北黑蜂等位基因a、b、c的频率差异较小 ,卡尼鄂拉蜂和乌克兰蜂主要存在a、c两个等位基因 ,b出现频率很小 ;6亚种的基因型频率、基因频率和杂合纯合度都有极显著差异。这些差异将从遗传和生化角度为西方蜜蜂 6个亚种的鉴别提供依据。 展开更多
关键词 西方密蜂 苹果酸基因 遗传差异 亚种
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实验小鼠肾匀浆中苹果酸酶-1和异柠檬酸脱氢酶-1实验室检测能力验证结果评价 被引量:6
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作者 王洪 魏杰 +2 位作者 于鹏丽 巩薇 岳秉飞 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期199-203,共5页
目的通过实验小鼠肾匀浆中苹果酸酶-1和异柠檬酸脱氢酶-1检测能力验证计划,了解实验动物检测机构检验能力,提高实验动物质量检测水平。方法按照CNAS批准的能力验证方案,通过样品制备,经过稳定性和均匀性检验合格,作为能力验证样品。采... 目的通过实验小鼠肾匀浆中苹果酸酶-1和异柠檬酸脱氢酶-1检测能力验证计划,了解实验动物检测机构检验能力,提高实验动物质量检测水平。方法按照CNAS批准的能力验证方案,通过样品制备,经过稳定性和均匀性检验合格,作为能力验证样品。采用随机编号,发样给参加单位,并附作业指导书。在规定时限提交检验报告和原始记录复印件,其结果与样品预检结果一致的判为满意结果,不一致或未能提交结果的判为不满意结果。结果共有10个实验室参加本次能力验证项目,其中满意结果的实验室8个,占总参加机构的80%,不满意的实验室有2个,占20%。结论实验动物质量检测机构在实验小鼠肾匀浆中苹果酸酶-1和异柠檬酸脱氢酶-1的检测能力较高,实施能力验证计划能够反映实验室的检测水平。 展开更多
关键词 能力验证 实验动物 苹果酸-1 异柠檬酸-1
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甘蔗细胞质型苹果酸脱氢酶基因的克隆及其表达分析 被引量:3
4
作者 徐景升 阙友雄 +6 位作者 颜克伟 唐唯其 许莉萍 高三基 郭晋隆 董萌 陈如凯 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期455-461,共7页
对甘蔗(Saccharum officinarum L.)叶片全长cDNA文库进行测序,获得了1个细胞质型苹果酸脱氢酶(cMDH)基因的全长cDNA序列,命名为Sc-cMDH。生物信息学分析表明,该基因全长1314 bp,开放阅读框为999 bp,编码332个氨基酸。Sc-cMDH与其他植物c... 对甘蔗(Saccharum officinarum L.)叶片全长cDNA文库进行测序,获得了1个细胞质型苹果酸脱氢酶(cMDH)基因的全长cDNA序列,命名为Sc-cMDH。生物信息学分析表明,该基因全长1314 bp,开放阅读框为999 bp,编码332个氨基酸。Sc-cMDH与其他植物cMDH的氨基酸序列同源性高达86.5%~97.0%。Sc-cMDH包含典型的NAD+结合基元T11GAAGQI17和催化基元I184WGNH188,还有相当保守的6个半胱氨酸残基,因此推断该基因为细胞质型NAD-MDH。定量PCR分析结果表明,该基因在甘蔗叶片和根中的表达量高于茎。 展开更多
关键词 甘蔗 细胞质型苹果酸基因 实时定量PCR
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大豆苹果酸脱氢酶基因的电子克隆与生物信息学分析 被引量:3
5
作者 李文爽 刘渊 +2 位作者 常文锁 刘梦星 李喜焕 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第3期23-28,共6页
利用电子克隆技术获得大豆中的苹果酸脱氢酶基因cDNA序列,并对基因及其编码蛋白进行生物信息学分析和预测,为进一步克隆该基因、解决植物磷高效基因数量缺乏等问题提供依据。结果表明,大豆中的苹果酸脱氢酶基因(GmMDH1)cDNA序列长度为1 ... 利用电子克隆技术获得大豆中的苹果酸脱氢酶基因cDNA序列,并对基因及其编码蛋白进行生物信息学分析和预测,为进一步克隆该基因、解决植物磷高效基因数量缺乏等问题提供依据。结果表明,大豆中的苹果酸脱氢酶基因(GmMDH1)cDNA序列长度为1 574 bp,开放阅读框1 230 bp,编码409个氨基酸残基;编码蛋白含有NAD bindingsite,Dimerization interface,Substrate binding site,MDH_glyoxysomal_mitochondrial结合位点和保守域,属于LDH_MDH_like Superfamily家族;亚细胞定位分析显示,编码蛋白位于植物细胞的叶绿体中。 展开更多
关键词 磷高效基因 大豆 苹果酸 电子克隆
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猪带绦虫苹果酸脱氢酶基因的克隆表达及免疫学分析 被引量:2
6
作者 江楠 席晓兰 +3 位作者 王杰 戴佳琳 廖兴江 黄江 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期423-426,共4页
目的对猪带绦虫苹果酸脱氢酶基因(malate dehydrogenase,MDH)进行克隆,表达及免疫学特性的初步研究。方法将猪带绦虫MDH基因克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL21/DE3中用异丙基--βD-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物通过... 目的对猪带绦虫苹果酸脱氢酶基因(malate dehydrogenase,MDH)进行克隆,表达及免疫学特性的初步研究。方法将猪带绦虫MDH基因克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL21/DE3中用异丙基--βD-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹(Western Blot)进行免疫学分析。结果成功构建pET-28a(+)-MDH重组质粒,并获得高纯度蛋白,该重组蛋白可被其免疫SD大鼠血清识别,同时也能被感染猪带绦虫的病人及猪、感染牛带绦虫病人及感染亚带绦虫病人血清所识别。结论猪带绦虫苹果酸脱氢酶基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的高效表达,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 猪带绦虫 苹果酸基因 基因克隆 原核表达
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亚洲牛带绦虫36kDa胞浆型苹果酸脱氢酶基因的表达、纯化及免疫学分析
7
作者 黄江 胡旭初 +4 位作者 徐劲 余新炳 包怀恩 郎书源 廖兴江 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期655-658,共4页
目的对亚洲牛带绦虫胞浆型苹果酸脱氢酶基因(malate dehydrogenase,MDH)进行克隆、表达和免疫学研究。方法将亚洲牛带绦虫成虫MDH克隆到原核表达质粒pET-30a(+)中,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-... 目的对亚洲牛带绦虫胞浆型苹果酸脱氢酶基因(malate dehydrogenase,MDH)进行克隆、表达和免疫学研究。方法将亚洲牛带绦虫成虫MDH克隆到原核表达质粒pET-30a(+)中,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹(Western Blotting)进行免疫学分析。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET-30a(+)-TaMDH重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明目的基因在大肠埃希菌BL-21/DE3中获得高效表达,经亲和层析获得了高纯度蛋白。重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别,表明其具有免疫原性;并且能识别感染了亚洲牛带绦虫的猪血清,表明其具有免疫反应性。结论亚洲牛带绦虫苹果酸脱氢酶基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的高效表达,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 亚洲牛带绦虫 苹果酸基因 基因克隆 原核表达
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三嗪染料修饰曲通X-100亲和分离苹果酸脱氢酶
8
作者 杨梅 唐江涛 +1 位作者 李步海 唐尹萍 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1020-1024,共5页
三嗪染料(Cibacron blue F3G-A)的蒽醌部分结构类似于腺嘌呤,可以用于亲和分离以NAD+(NADP+)和FAD为辅酶的脱氢酶。三嗪染料通过亲核取代反应修饰曲通X-100,形成的三嗪染料-曲通X-100与成相聚合物吐温80、磷酸钾盐构成液-固亲和萃取体... 三嗪染料(Cibacron blue F3G-A)的蒽醌部分结构类似于腺嘌呤,可以用于亲和分离以NAD+(NADP+)和FAD为辅酶的脱氢酶。三嗪染料通过亲核取代反应修饰曲通X-100,形成的三嗪染料-曲通X-100与成相聚合物吐温80、磷酸钾盐构成液-固亲和萃取体系。从猪心肌匀浆液纯化苹果酸脱氢酶的条件:三嗪染料-曲通X-100浓度为1.2%(W/V),吐温80浓度9%(V/V),猪心肌匀浆液0.25 mL(2.5%),pH 8.0,加入成相磷酸钾终浓度1.6 mol/L,形成液固两相,固相酶活力平均收得率为81.01%,纯化倍数为4.93。固相30℃保温溶解,加入成相盐磷酸钾,终浓度为0.7 mol/L,二次成相。低盐浓度条件下,近80%的酶反萃回液相,简化了苹果酸脱氢酶后续加工工艺。 展开更多
关键词 三嗪染料 曲通X-100 吐温80 -固亲和萃取 苹果酸
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殊异韦荣菌苹果酸脱氢酶的基因克隆及其重组蛋白的表达和活性测定
9
作者 刘晓红 何钟勤 +3 位作者 孙晓宇 高心 薛莹 李倪娜 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2013年第11期1008-1011,1015,共5页
目的:对殊异韦荣菌(V·dispar)苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,MDH)基因进行克隆和重组表达,并对其重组蛋白进行纯化和活性测定。方法:提取殊异韦荣菌基因组DNA,PCR扩增MDH同源区序列片段,克隆入pET-28a载体并转化至大肠杆菌DH5... 目的:对殊异韦荣菌(V·dispar)苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,MDH)基因进行克隆和重组表达,并对其重组蛋白进行纯化和活性测定。方法:提取殊异韦荣菌基因组DNA,PCR扩增MDH同源区序列片段,克隆入pET-28a载体并转化至大肠杆菌DH5α,酶切及PCR鉴定,测序。将重组质粒转入BL21(DE3)中,选择最佳表达条件,提纯及测定活性。结果:PCR扩增产物特异,全长1139bp。测序结果包含MDH基因,并与GenBank中所报道的大肠杆菌MDH基因序列进行对比分析,其同源性为99%。MDH纯化后的蛋白活性值为0.4403U/mL。结论:成功克隆殊异韦荣菌MDH基因,并通过基因序列和氨基酸分析证明其具有完整的阅读框架。还获得了重组表达MDH蛋白的最适表达条件,并测出韦荣菌苹果酸脱氢酶的活性。 展开更多
关键词 韦荣菌 苹果酸 基因克隆 重组表达 活性测定
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渗透剂对苹果酸脱氢酶包含体的复性作用 被引量:1
10
作者 刘建华 董晓燕 +1 位作者 付敏玲 孙彦 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第11期2864-2870,共7页
将甜菜碱和海藻糖两种渗透剂作为添加剂,考察了其促进苹果酸脱氢酶包含体的复性作用。结果显示,甜菜碱和海藻糖均可有效促进大肠杆菌苹果酸脱氢酶包含体的复性。在本文实验条件下,随添加甜菜碱浓度的升高,复性后苹果酸脱氢酶的比活增大... 将甜菜碱和海藻糖两种渗透剂作为添加剂,考察了其促进苹果酸脱氢酶包含体的复性作用。结果显示,甜菜碱和海藻糖均可有效促进大肠杆菌苹果酸脱氢酶包含体的复性。在本文实验条件下,随添加甜菜碱浓度的升高,复性后苹果酸脱氢酶的比活增大;而海藻糖则出现最佳添加浓度使复性后苹果酸脱氢酶的比活最大;同时在盐酸胍浓度较高、不添加渗透剂时复性效果较差的复性体系中,若添加合适浓度的甜菜碱或海藻糖即可有效促进苹果酸脱氢酶的复性,显示出渗透剂作为添加剂在实际包含体蛋白质复性过程中的应用前景。另外,通过外源荧光分析发现,添加甜菜碱和海藻糖均可降低苹果酸脱氢酶表面疏水性区域的暴露程度;圆二色光谱分析则表明,甜菜碱和海藻糖可以促进苹果酸脱氢酶α-螺旋结构的生成。 展开更多
关键词 渗透剂 大肠杆菌苹果酸 复性 1-苯胺基萘-8-磺酸 圆二色光谱
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意蜂苹果酸脱氢酶同工酶的电泳表型和基因型 被引量:11
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作者 李举怀 李绍文 《北京大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1990年第2期237-242,共6页
用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳测定了意蜂不同级别和不同发育阶段的苹果酸脱氢酶(MDH)同工酶。意蜂的MDH有3个区带,其中MDHⅡ由3个等位基因编码,雌性峰是双倍体,有6种电泳表型,纯合子和杂合子各3种。雄性蜂是单倍体,有3种电泳表型。雌... 用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳测定了意蜂不同级别和不同发育阶段的苹果酸脱氢酶(MDH)同工酶。意蜂的MDH有3个区带,其中MDHⅡ由3个等位基因编码,雌性峰是双倍体,有6种电泳表型,纯合子和杂合子各3种。雄性蜂是单倍体,有3种电泳表型。雌蜂和雄雌的幼虫与其成虫的酶谱相同。蛹期有1~2条附加带,卵期测不出MDHⅡ的活性。 展开更多
关键词 意蜂 苹果酸 同功 基因
全文增补中
苹果6-磷酸山梨醇脱氢酶基因启动子的转化及其转录活性 被引量:3
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作者 杨国婵 谢银鹏 +2 位作者 马锋旺 梁东 邹养军 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2016年第9期166-173,共8页
【目的】研究6-磷酸山梨醇脱氢酶基因启动子(S6PDHp)的组织表达特点。【方法】利用Gateway技术构建了S6PDHp与GUS基因的融合表达载体,然后通过农杆菌介导法转化番茄"中蔬5号",对转基因植株进行PCR检测,对鉴定为阳性的植株进行... 【目的】研究6-磷酸山梨醇脱氢酶基因启动子(S6PDHp)的组织表达特点。【方法】利用Gateway技术构建了S6PDHp与GUS基因的融合表达载体,然后通过农杆菌介导法转化番茄"中蔬5号",对转基因植株进行PCR检测,对鉴定为阳性的植株进行GUS组织化学染色,验证S6PDHp的组织表达特性。【结果】将S6PDHp-GUS融合表达载体转化番茄,经PCR检测显示,成功获得了转S6PDHp基因的阳性番茄植株。对阳性植株各组织器官的GUS化学染色和活性检测结果显示,除叶片外许多器官都有很强的GUS活性,且在转基因番茄成熟期植株的茎部活性最高,根部活性最低;叶片从新叶到老叶的各个时期,GUS活性持续降低。【结论】S6PDHp表达在植物衰老过程中降低;且在转基因番茄茎部的GUS活性最强,说明该启动子具有组织表达特异性。 展开更多
关键词 苹果 6-磷酸山梨醇 启动子 基因 GUS染色
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1-磷酸甘露醇脱氢酶基因转化水稻的研究 被引量:16
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作者 王慧中 刘俊君 +6 位作者 卢德赵 赵艳 颜美仙 钱前 彭学贤 陈受宜 黄大年 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期6-10,共5页
PCR和 Southern blotting检测表明 ,来自大肠杆菌的 mtl D基因已通过农杆菌介导整合进水稻基因组。mtl D基因在 T1代出现分离 ,T2 代出现纯系。在 0 .75% Na Cl胁迫下 ,7个转基因 T3 代株系都能检测到 mtl D酶活性 ,与对照相比细胞膜的... PCR和 Southern blotting检测表明 ,来自大肠杆菌的 mtl D基因已通过农杆菌介导整合进水稻基因组。mtl D基因在 T1代出现分离 ,T2 代出现纯系。在 0 .75% Na Cl胁迫下 ,7个转基因 T3 代株系都能检测到 mtl D酶活性 ,与对照相比细胞膜的相对电导率和大分子渗漏值明显降低。部分转基因株系能在 1 .0 % Na Cl浓度下正常生长 ,而对照在 0 .5% Na Cl浓度下已不能存活。通过有性杂交途径实现了 mtl D和 gut D两个基因的聚合 ,部分杂交后代株系能在 1 .2 5% Na Cl胁迫下正常生长结实。 展开更多
关键词 水稻 1-磷酸甘露醇基因 6-磷酸山梨醇基因 基因植株 耐盐性 产量性性 有性杂交 农艺性状
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草莓ζ-胡萝卜素脱氢酶基因ZDS的克隆及特征分析 被引量:17
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作者 李永平 朱海生 +2 位作者 温庆放 花秀凤 林珲 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期670-674,共5页
用RT-PCR和RACE技术从草莓(Fragaria ananassa Duchesne)果实中克隆到ζ-胡萝卜素脱氢酶基因ZDS,命名为FaZDS,其cDNA全长2148 bp,具有1个1710 bp的完整开放阅读框(ORF),编码569个氨基酸。序列分析表明,FaZDS编码的氨基酸序列与其它植物... 用RT-PCR和RACE技术从草莓(Fragaria ananassa Duchesne)果实中克隆到ζ-胡萝卜素脱氢酶基因ZDS,命名为FaZDS,其cDNA全长2148 bp,具有1个1710 bp的完整开放阅读框(ORF),编码569个氨基酸。序列分析表明,FaZDS编码的氨基酸序列与其它植物的ZDS蛋白有很高的相似性。系统进化树分析表明,草莓与苹果的ZDS蛋白亲缘关系较近。原核表达结果表明FaZDS基因在大肠杆菌中能高效表达。用半定量RT-PCR技术进行组织表达模式分析表明,FaZDS基因在草莓的花、叶片和果实中均有表达,表达量为花>红果>粉红果>白果>青果>叶。 展开更多
关键词 草莓 ζ-胡萝卜素 FaZDS基因 基因克隆
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柽柳甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因的克隆与表达分析 被引量:12
15
作者 于丽丽 高彩球 +4 位作者 王玉成 姚启超 刘桂丰 杨传平 刘燕 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期105-108,共4页
从柽柳(Tamarix hispida)cDNA文库中分离出甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(ThGAPDH)全长cDNA序列,该基因全长1294bp。其中:5′非翻译区84bp,3′非翻译区184bp,开放阅读框1206bp,编码含341个氨基酸的蛋白质,编码蛋白的相对分子质量为37200,理... 从柽柳(Tamarix hispida)cDNA文库中分离出甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(ThGAPDH)全长cDNA序列,该基因全长1294bp。其中:5′非翻译区84bp,3′非翻译区184bp,开放阅读框1206bp,编码含341个氨基酸的蛋白质,编码蛋白的相对分子质量为37200,理论等电点(pI)为6.97。采用实时定量RT-PCR方法研究了刚毛柽柳在PEG、NaCl、NaHCO3及CdCl2胁迫下不同时间该基因ThGAPDH的表达模式。结果表明:PEG、NaCl及CdCl2处理均能诱导ThGAPDH基因在根中的表达而抑制其在茎和叶中的表达,而NaHCO3处理均能诱导该基因在根、茎、叶中的表达。基因ThGAPDH的cDNA序列在GenBank中的登录号为GQ478708。 展开更多
关键词 刚毛柽柳 甘油醛-3-磷酸 实时定量RT-PCR 基因表达
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花生Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶基因启动子的克隆及功能分析 被引量:8
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作者 石磊 苗利娟 +7 位作者 齐飞艳 张忠信 高伟 孙子淇 黄冰艳 董文召 汤丰收 张新友 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1629-1637,共9页
Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶(SAD)是决定植物体内饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸比值的关键酶。以花生品种豫花9326基因组DNA为模板,通过基因组步移技术,克隆到花生Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶基因(Ah SAD)起始密码子ATG上游720 bp片段,利用5'RAC... Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶(SAD)是决定植物体内饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸比值的关键酶。以花生品种豫花9326基因组DNA为模板,通过基因组步移技术,克隆到花生Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶基因(Ah SAD)起始密码子ATG上游720 bp片段,利用5'RACE方法获得了该基因的5'UTR序列,通过序列比对确定720 bp片段为Ah SAD启动子区域。PLACE在线启动子预测分析表明,该序列具有真核生物启动子必需的核心元件TATA-box和CAAT-box,含有多个与光诱导和激素响应相关顺式序列元件。将Ah SAD启动子片段替换pBI121质粒中的CaMV35S启动子驱动下游GUS基因表达,构建植物表达载体pBI-PAh SAD。通过农杆菌介导法转化拟南芥和在花生不同组织中瞬时表达,利用GUS组织化学染色研究其表达特性。表明在拟南芥和花生受体中,AhSAD启动子主要调控下游基因在根、茎、叶片和子叶中表达,在花生的果针中也检测到GUS活性;拟南芥的茎生叶只有叶脉中具有GUS活性,而花生整个叶片中都具有GUS活性。 展开更多
关键词 花生 Δ9-硬脂酰-ACP基因(SAD) 启动子 基因组步移 GUS报告基因
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广东潮州地区新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因突变分析 被引量:12
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作者 詹小芬 杨辉 +5 位作者 杨惠钿 陆志为 陈江涛 郑淑妍 林敏 杨立业 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1749-1752,共4页
目的:了解潮州地区新生儿的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency,G6PD)缺乏症的发病率及基因突变特点。方法:采用荧光斑点法对2010至2012年潮州市中心医院出生的2 500例新生儿进行G6PD缺乏筛查。对初筛... 目的:了解潮州地区新生儿的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency,G6PD)缺乏症的发病率及基因突变特点。方法:采用荧光斑点法对2010至2012年潮州市中心医院出生的2 500例新生儿进行G6PD缺乏筛查。对初筛阳性的67例标本用高分辨熔解曲线分析技术(high-resolution melting,HRM)和PCR-DNA测序法进行基因分型。结果:本次筛查发现潮州地区新生儿人群的G6PD缺乏症总发生率为2.6%(67/2 500),其中男婴44例(3.22%,44/1 365),女婴23例(2.03%,23/1 135),男女检出率比为1.91∶1(44/23),两者之间无统计学差异(χ2=3.404,P=0.065)。67例初筛阳性标本中58例检测出有突变,9例未检出突变,共检出7种基因突变,含26例1 376 G>T(c.1466G>T,44.83%),22例1 388 G>A(c.1478G>A,37.94%),5例95 A>G(c.185A>G,8.62%),2例871 G>A(c.961G>A,3.45%),1例392 G>T(c.482G>T,1.72%),1例493 A>G(c.583A>G,1.72%),1例1360 C>T(c.1450C>T,1.72%),没有检出复合突变类型。结论:潮州地区具有较高的G6PD发生率。G6PD Canton(1376 G>T)、G6PD Kaiping(1388 G>A)和G6PD Gaohe(95 A>G)3种突变类型最常见。 展开更多
关键词 葡萄糖-6-磷酸缺乏症 新生儿筛查 基因突变 高分辨熔解曲线 DNA测序
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普通油茶两个Δ-12脂肪酸脱氢酶基因序列特征及表达模式研究 被引量:8
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作者 林萍 周长富 +1 位作者 姚小华 曹永庆 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2016年第5期743-751,共9页
[目地]研究普通油茶油脂成分形成的调控机制。[方法]通过转录组测序获得2条普通油茶Δ-12脂肪酸脱氢酶基因序列,分别命名为Cofad6和Cofad2-2,并对这两个基因及其编码蛋白的序列特征进行比较,对其基因表达量与脂肪酸成分含量的相关性进... [目地]研究普通油茶油脂成分形成的调控机制。[方法]通过转录组测序获得2条普通油茶Δ-12脂肪酸脱氢酶基因序列,分别命名为Cofad6和Cofad2-2,并对这两个基因及其编码蛋白的序列特征进行比较,对其基因表达量与脂肪酸成分含量的相关性进行分析。[结果]Cofad6基因c DNA编码区全长1 347 bp,编码448个氨基酸;Cofad2-2基因c DNA编码区全长1 152 bp,编码383个氨基酸。经比对,Co FAD6蛋白与其余物种FAD6蛋白有65.7%83.68%的氨基酸同源,Co FAD2-2与浙江红花油茶FAD2-2蛋白有99.22%的氨基酸同源,与其余物种的蛋白质78.59%81.72%同源。蛋白质二级结构分析表明,Co FAD6和Co FAD2-2均具有一个脂肪酸去饱和酶结构域,属于脂酰-Co A去饱和酶基因家族;两者均为跨膜蛋白,且Co FAD2-2具有定位于内质网的保守模序。定量PCR检测发现,在普通油茶‘长林4号’无性系未成熟种子中,Cofad6表达量随着种子发育先升高后降低,而Cofad2-2基因随着种子发育表达量逐渐降低,与种子油脂中亚油酸、亚麻酸含量变化趋势呈显著正相关,与油酸含量变化呈显著负相关。[结论]推测Cofad2-2基因是调控普通油茶种子油脂中油酸和亚油酸含量的关键基因之一,该研究为普通油茶油脂改良基因工程育种奠定了基础。 展开更多
关键词 普通油茶 -12脂肪酸基因 表达模式 实时定量PCR
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谷子3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的克隆与结构分析 被引量:10
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作者 崔润丽 王永芳 +4 位作者 智慧 李伟 李海权 黄占景 刁现民 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第3期10-14,共5页
3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)在谷子盐旱胁迫早期高频率表达,为研究该基因在胁迫反应及其他代谢中的详细功能,本研究利用RACE技术克隆了谷子的GAPDH基因。该基因cDNA全长1 328 bp,包括1 008 bp的开放阅读框,共编码338个氨基酸,肽段的... 3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)在谷子盐旱胁迫早期高频率表达,为研究该基因在胁迫反应及其他代谢中的详细功能,本研究利用RACE技术克隆了谷子的GAPDH基因。该基因cDNA全长1 328 bp,包括1 008 bp的开放阅读框,共编码338个氨基酸,肽段的分子量为35 911.03 Da,极性氨基酸占29.12%。序列比较分析发现,谷子的GAPDH同玉米的同源序列表现了最高的相似性,同水稻和小麦同源序列的相似性次之,同双子叶植物的同源序列则相差较远。 展开更多
关键词 谷子 3-磷酸甘油醛(GAPDH) 基因克隆
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贵州三都水族居民葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因突变研究 被引量:6
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作者 修瑾 齐晓岚 +6 位作者 单可人 谢渊 何燕 吴昌学 李毅 吴晓黎 任锡麟 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第1期147-150,共4页
为了了解贵州省少数民族居民葡萄糖 6 磷酸脱氢酶 (glucose 6 phosphatedehydrogenase ,G6PD)缺乏症的发病率、基因突变类型特点及分布特征 ,进一步从分子水平揭示G6PD基因突变的异质性 ,对贵州省三都水族自治县 10 90名当地水族居... 为了了解贵州省少数民族居民葡萄糖 6 磷酸脱氢酶 (glucose 6 phosphatedehydrogenase ,G6PD)缺乏症的发病率、基因突变类型特点及分布特征 ,进一步从分子水平揭示G6PD基因突变的异质性 ,对贵州省三都水族自治县 10 90名当地水族居民采用噻唑蓝定性法、G6PD 6PGD活性比值法进行G6PD缺乏症的筛查 ,再经错配引物介导的聚合酶链反应 限制性酶切分析法检测中国人中最常见的 3种G6PD基因突变型 :1376G→T、1388G→A、95A→G。结果表明 :在受检的 10 90人中 ,共检出G6PD缺乏症 98例 ,检出率 8.99% ,在G6PD缺乏症中检出最常见的3种G6PD基因突变型 :1376G→T 2 4例 ;1388G→A 12例 ;95A→G 9例 ;并在国内首次检出 1376G→T、95A→G复合型突变 1例。 1376G→T突变频率为 0 .2 4 5 ;1388G→A突变频率为 0 .12 2 ;95A→G突变频率为 0 0 92。结论 :1376G→T、1388G→A、95A→G为贵州省三都水族居民的常见G6PD突变型 ,这个结果提示贵州三都水族与中国其它少数民族在起源上可能有共同的渊源。 展开更多
关键词 葡萄糖-6-磷酸 葡萄糖-6-磷酸缺乏症 基因突变
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