摘要：目的应用AdEasy腺病毒改良载体系统构建携带β-半乳糖苷酶（β-galactosidase，β-gal）基因重组腺病毒。方法将β-gal基因克隆到腺病毒载体质粒pAdTrack—CMV上，在BJ5183大肠杆菌内与pAdEasyl骨架质粒完成同源重组；经脂质体介...摘要：目的应用AdEasy腺病毒改良载体系统构建携带β-半乳糖苷酶（β-galactosidase，β-gal）基因重组腺病毒。方法将β-gal基因克隆到腺病毒载体质粒pAdTrack—CMV上，在BJ5183大肠杆菌内与pAdEasyl骨架质粒完成同源重组；经脂质体介导转入HEK293细胞包装、扩增并经反复乒乓感染获得携带β-gal基因的重组腺病毒Ad—β-gal；有限稀释法检测病毒滴度；X—gal组织化学染色检测重组腺病毒Ad—β-gal在HEK293细胞中的功能。结果成功构建携带β-gal基因的重组腺病毒Ad—β-gal，病毒滴度达（2．5～4．0）×10^11EFU／ml；感染复数（multiplicity of infection，MOI）为10时对HEK293细胞48h转染率达70％，并在X—gal试剂作用下，细胞呈现蓝色。结论成功构建了携带β-gal基因的重组腺病毒，能高效感染293细胞，并功能性表达β-半乳糖苷酶。展开更多
文摘摘要：目的应用AdEasy腺病毒改良载体系统构建携带β-半乳糖苷酶（β-galactosidase，β-gal）基因重组腺病毒。方法将β-gal基因克隆到腺病毒载体质粒pAdTrack—CMV上，在BJ5183大肠杆菌内与pAdEasyl骨架质粒完成同源重组；经脂质体介导转入HEK293细胞包装、扩增并经反复乒乓感染获得携带β-gal基因的重组腺病毒Ad—β-gal；有限稀释法检测病毒滴度；X—gal组织化学染色检测重组腺病毒Ad—β-gal在HEK293细胞中的功能。结果成功构建携带β-gal基因的重组腺病毒Ad—β-gal，病毒滴度达（2．5～4．0）×10^11EFU／ml；感染复数（multiplicity of infection，MOI）为10时对HEK293细胞48h转染率达70％，并在X—gal试剂作用下，细胞呈现蓝色。结论成功构建了携带β-gal基因的重组腺病毒，能高效感染293细胞，并功能性表达β-半乳糖苷酶。
