遗传性白内障小鼠晶状体的比较蛋白质组分析 被引量：1

1

作者 季樱红 卢奕 +4 位作者 李娜 金红 杨芃原 孔祥银 燕顺生 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1415-1419,共5页

目的:比较研究先天性遗传性白内障的晶状体蛋白质表达谱的改变。方法:采用自发的Crygs基因突变先天性隐性遗传白内障小鼠模型,分别提取白内障与正常小鼠晶状体总蛋白,进行固相pH梯度(IPG)等电聚焦双向电泳,R-250染色,使用PDQuest7.30图... 目的:比较研究先天性遗传性白内障的晶状体蛋白质表达谱的改变。方法:采用自发的Crygs基因突变先天性隐性遗传白内障小鼠模型,分别提取白内障与正常小鼠晶状体总蛋白,进行固相pH梯度(IPG)等电聚焦双向电泳,R-250染色,使用PDQuest7.30图像分析软件分析电泳图像。选择部分差异蛋白点胶上酶解,应用MALDI-TOF/TOF仪器进行串联质谱(MS/MS)鉴定及分析。结果:上样量为882μg时,白内障和正常小鼠分别检测到(417±53)个蛋白点(n=3)和(370±41)个蛋白点(n=3)。上样量为190μg时,白内障和正常小鼠分别检测到(60±7)个蛋白点和(57±5)个蛋白点(n=3)。对γS、BFSP/filensin、γF、βA1、βB1、βB2和αB等7种差异蛋白进行了鉴定。突变小鼠晶状体正常γS、念珠状纤维结构蛋白(BFSP/filensin)缺失,γF表达下调(<4倍),异常βA1、βB1、βB2和αB表达上调(>4倍),分子量比正常小,提示βA1、βB1、βB2和αB可能发生裂解。结论:蛋白质的双向电泳和质谱分析有助于基因突变后下游蛋白的功能分析。Crygs基因突变导致γS晶状体蛋白的异常,并引起细胞骨架蛋白(BFSP/filensin)和其它晶状体蛋白(γF、βA1、βB1、βB2和αB等)继发改变,从而间接诱发白内障。 展开更多

关键词 小鼠 晶体蛋白类 蛋白质组

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先天性白内障一家系中两个β-晶体蛋白基因的突变筛查 被引量：1

2

作者 胡继元 廖荣丰 +2 位作者 杨森 方巧云 周伏圣 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2008年第5期570-573,共4页

目的对一中国常染色体显性先天性粉尘状白内障家系进行β-晶体蛋白基因(cryba1、crybb1)的突变筛查。方法对一中国先天性白内障家系进行研究,通过直接测序,筛查此家系中全部患者的cryba1基因、crybb1基因外显子以及临近的内含子的剪接... 目的对一中国常染色体显性先天性粉尘状白内障家系进行β-晶体蛋白基因(cryba1、crybb1)的突变筛查。方法对一中国先天性白内障家系进行研究,通过直接测序,筛查此家系中全部患者的cryba1基因、crybb1基因外显子以及临近的内含子的剪接位点。结果直接测序后发现该粉尘状白内障家系cryba1基因和crybb1基因的外显子及其临近的内含子中,均未发现任何突变。结论该表型的先天性白内障家系并非是由这两个β-晶体蛋白基因突变引起。 展开更多

关键词 白内障/先天性 白内障/遗传学 β晶体蛋白质类/遗传学 突变 系谱

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遗传性珊瑚状白内障突变晶状体蛋白分子构型及超微结构分析 被引量：1

3

作者 徐伟珍 郑树 +3 位作者 董琦 蔡善荣 姚克 张苏展 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2005年第3期243-247,共5页

　目的:探讨珊瑚状遗传性白内障家系P23T突变的γD晶状体蛋白与病变晶状体结构的关系。方法:记录晶状体摘除术前的晶状体裂隙灯照片;应用SWISS-MODEL程序,建立人γD晶状体蛋白及其P23T突变体的计算机立体结构模型;透射和扫描电镜观测晶... 　目的:探讨珊瑚状遗传性白内障家系P23T突变的γD晶状体蛋白与病变晶状体结构的关系。方法:记录晶状体摘除术前的晶状体裂隙灯照片;应用SWISS-MODEL程序,建立人γD晶状体蛋白及其P23T突变体的计算机立体结构模型;透射和扫描电镜观测晶状体提取物。结果:蛋白立体结构模型分析发现,P23T的突变降低了蛋白最终分子总势能,使蛋白表面结构发生改变。电镜检查发现,白内障晶状体内有大小不等的结晶片和异常的卵圆形结构,晶状体上皮细胞出现裂解。结论:γD晶状体蛋白P23T突变体可能与晶状体内异常结晶片和晶状体上皮细胞的病理改变有关,其发生机制还有待分子动力学的研究。 展开更多

关键词 白内障/遗传学 突变 晶体蛋白类/化学 γD晶状体蛋白 白内障/超微结构

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胆固醇酯转移蛋白基因多态性与血脂的研究 被引量：5

4

作者 朱燕林 严晓伟 +1 位作者 鄢盛恺 朱文玲 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 2004年第1期21-23,共3页

目的　研究胆固醇酯转移蛋白 (CETP)TaqⅠB基因多态性对血脂水平的影响。方法　应用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性测定 186例研究对象为CETPTaqⅠB基因型 ,分析基因型与血脂水平的关系。结果　不同基因型间血清总胆固醇、甘油三... 目的　研究胆固醇酯转移蛋白 (CETP)TaqⅠB基因多态性对血脂水平的影响。方法　应用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性测定 186例研究对象为CETPTaqⅠB基因型 ,分析基因型与血脂水平的关系。结果　不同基因型间血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平无显著差异 ;B2等位基因携带者 [B1B2 :( 1.33± 0 .36 )mmol L ,B2B2 :( 1.37± 0 .2 4 )mmol L]高密度脂蛋白胆固醇水平均较B1纯合子 [B1B1:( 1.2 0± 0 .33)mmol L]显著增高 ;载脂蛋白A1水平在B1和B2纯合子间差异显著 [( 1138.4 2± 2 2 3.5 7)mg Lvs( 12 76 .70± 14 2 .6 3)mg L],这种差异在男性表现更为明显 ;TaqⅠB基因多态性对CETP浓度无显著影响 ;高密度脂蛋白胆固醇与CETP浓度无显著负相关 ;TaqⅠB基因多态性可以说明 1.9%高密度脂蛋白胆固醇的变化。 展开更多

关键词 载体蛋白质类 胆固醇酯类 脂蛋白类 HDL胆固醇 多态现象(遗传学)

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肺炎链球菌comD/E/C基因重组表达及ComD/C与β-内酰胺类抗生素耐药的相关性 被引量：4

5

作者 樊欢 孙爱华 +2 位作者 夏肖萍 孙琦 严杰 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期276-282,共7页

目的：构建肺炎链球菌调控感受态形成的二元信号传导系统（TCS）基因comD/comE/comC的原核表达系统,探讨ComD和ComC封闭后细菌耐药性变化。方法：采用PCR扩增全长comD、comE和comC基因,并用常规基因工程技术建立其原核表达系统。采用SDS... 目的：构建肺炎链球菌调控感受态形成的二元信号传导系统（TCS）基因comD/comE/comC的原核表达系统,探讨ComD和ComC封闭后细菌耐药性变化。方法：采用PCR扩增全长comD、comE和comC基因,并用常规基因工程技术建立其原核表达系统。采用SDS-PAGE及Bio-Rad凝胶图像分析系统检测目的重组蛋白rComD、rComE和rComC表达量。免疫家兔制备rComD、rComE和rComC抗血清。检测肺炎链球菌菌株ComD和ComC被抗血清封闭后对青霉素和头孢胺噻耐药性的变化。结果：与报道序列比较,所克隆的comD、comE和comC基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为98.4%-99.3%和99.1%-100%。所构建的工程菌E.coli BL21DE3pET42a-comD、E.coliBL21DE3pET42a-comE和E.coli BL21DE3pET32a-comC能有效表达目的重组蛋白rComD、rComE和rComC,其产量分别为细菌总蛋白的28%、25%和35%。rComD、rComE和rComC抗血清免疫双扩散效价分别为1∶4、1∶4和1∶8。ComD和/或ComC被抗血清封闭后,头孢胺噻敏感菌株可出现耐药性,但耐药菌株耐药性无明显改变,也不影响各菌株对青霉素的耐药性。结论：本研究成功地构建了肺炎链球菌comD/come/comC基因原核表达系统,为深入研究感受态形成相关TCS与耐药性关系奠定了基础。ComD和ComC与肺炎链球菌对头孢胺噻耐药性有关。 展开更多

关键词 链球菌 肺炎/遗传学 聚合酶链反应 信号传导 Β内酰胺酶类 抗药性 细菌 基因表达 重组蛋白质类 基因表达调控 细菌

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CXC趋化因子受体4通过S期激酶相关蛋白2调控乳腺癌细胞周期的机制 被引量：5

6

作者 王海凤 陈天天 +7 位作者 王月月 李钰 张凌宇 丁勇兴 陈素莲 王文锐 杨清玲 陈昌杰 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期357-363,共7页

目的:探讨CXC趋化因子受体4(CXCR4)通过PI3K/Akt和ERK信号通路调控S期激酶相关蛋白2(Skp2)的表达,进而影响乳腺癌细胞周期的机制。方法:利用干扰及过表达技术下调或上调CXCR4的表达后,通过实时定量PCR和蛋白质印迹法检测CXCR4与Skp2调... 目的:探讨CXC趋化因子受体4(CXCR4)通过PI3K/Akt和ERK信号通路调控S期激酶相关蛋白2(Skp2)的表达,进而影响乳腺癌细胞周期的机制。方法:利用干扰及过表达技术下调或上调CXCR4的表达后,通过实时定量PCR和蛋白质印迹法检测CXCR4与Skp2调控的关联性;蛋白质印迹法检测CXCR4干扰及过表达后对信号蛋白及Skp2下游相关基因表达的影响;通过碘化丙啶(PI)染色法检测CXCR4、PI3K/Akt通路抑制剂LY294002及ERK通路抑制剂U0126对乳腺癌细胞周期的影响。结果:干扰CXCR4后,Skp2表达下调;过表达CXCR4后,Skp2表达上调。CXCR4可通过对信号蛋白的调控影响Skp2及Skp2下游相关基因的表达。干扰CXCR4后,G_0/G_1期细胞比例增加,S期细胞比例相应减少,CXCR4与LY294002及U0126联合作用对细胞周期的阻断更加明显。结论:CXCR4能够通过对信号蛋白PI3K/Akt及ERK的调控,影响Skp2及Skp2下游相关基因的表达,阻断CXCR4/Akt/Skp2或CXCR4/ERK/Skp2信号通路后可有效诱导细胞周期阻滞,从而抑制乳腺癌细胞的增殖。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤/病理生理学 受体 CXCR4/生物合成 受体 CXCR4/遗传学 S期激酶相关蛋白质类/代谢 细胞系 肿瘤/代谢 细胞增殖 细胞周期

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重组人尼克酰胺磷酸核糖转移酶及其活性位点突变体蛋白的制备及体外酶活性检测 被引量：1

7

作者 王峰 黄鹏 +4 位作者 刘主 卢韵碧 魏尔清 张纬萍 唐淳 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期156-162,共7页

目的:制备和纯化重组人NAMPT和NAMPT(H247A)蛋白,并对其体外酶活性进行检测。方法:以pcDNA3.1-hnampt为模板,通过PCR扩增获得两端分别为BamHⅠ和NdeⅠ酶切位点的hnampt片断,将该片断与pET-11a(+)表达型载体连接,通过点突变获得pET-11a(+... 目的:制备和纯化重组人NAMPT和NAMPT(H247A)蛋白,并对其体外酶活性进行检测。方法:以pcDNA3.1-hnampt为模板,通过PCR扩增获得两端分别为BamHⅠ和NdeⅠ酶切位点的hnampt片断,将该片断与pET-11a(+)表达型载体连接,通过点突变获得pET-11a(+)-hnampt(H247A),以测序鉴定构建质粒。将野生型和突变型分别转化至BL21star大肠杆菌,以IPTG诱导蛋白表达,以镍柱和分子筛纯化目标蛋白,以SDS凝胶电泳和质谱鉴定目标蛋白,以核磁共振的方法检测两个重组蛋白在体外酶活性。结果:测序结果表明,pET-11a(+)-hnampt(野生型)及pET-11a(+)-hnampt(H247A)(突变型)表达载体构建成功,突变位点正确。两种蛋白均在BL21star大肠杆菌获得表达,裂解后为可溶性蛋白,通过镍柱、分子筛获得纯化蛋白,SDS凝胶电泳和质谱鉴定证明重组蛋白为分子量约56 kD的NAMPT。核磁共振体外酶活性检测发现野生型NAMPT具有酶活性,而NAMPT(H247A)的酶活性降低了约5～10倍。结论:成功获得了有体外酶活性的人NAMPT蛋白和酶活性较低的人NAMPT(H247A)蛋白,为NAMPT蛋白作用研究提供了基础。 展开更多

关键词 磁共振波谱学 大肠杆菌 磷酸转移酶类/遗传学 点突变 质粒 遗传载体 重组蛋白质类 NAMPT 蛋白纯化 核磁共振

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s-lap/GFP融合蛋白在Hela细胞中的表达与定位 被引量：1

8

作者 宋忆淑 宋志宇 +2 位作者 费向东 贺冰 李玉新 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期39-41,共3页

目的 :观察 s- lap/ GFP融合蛋白在 Hela细胞中的表达及定位。方法 :根据 s- lap基因的编码区序列 ,应用 PCR技术突变其 3′末端终止密码子 ,并通过基因重组技术将其与 GFP基因融合 ,构建 s- lap/ GFP重组质粒 ;采用脂质体转染法 ,将 s-... 目的 :观察 s- lap/ GFP融合蛋白在 Hela细胞中的表达及定位。方法 :根据 s- lap基因的编码区序列 ,应用 PCR技术突变其 3′末端终止密码子 ,并通过基因重组技术将其与 GFP基因融合 ,构建 s- lap/ GFP重组质粒 ;采用脂质体转染法 ,将 s- lap/ GFP融合基因转入 Hela细胞中 ,用荧光显微镜观察其表达。结果 :s- lap/ GFP重组质粒序列测定的结果与预期设计完全一致。荧光显微镜显示 ,在转染 GFP基因的 Hela细胞中 ,荧光呈网状均匀分布于细胞浆内 ,而细胞核内低表达 ;在转染 s- lap/ GFP融合基因的 Hela细胞中 ,荧光均匀分布于整个细胞 ,尤其以细胞核内高表达。结论 :s- lap/ GFP融合蛋白可在人 Hela细胞中表达 ,并主要定位于细胞核。 展开更多

关键词 s-lap/GFP融合蛋白 重组融合蛋白质类/遗传学 基因融合/方法 HELA细胞

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复杂性疾病遗传研究中Tag SNP的筛选及其潜在功能预测 被引量：3

9

作者 朱益民 许玉洋 凌洁 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期237-244,共8页

利用公共数据库筛选与复杂性疾病相关的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)。运用FastSNP、SNP Function Prediction、F-SNP等多种SNP功能预测软件筛选有潜在功能的SNPs;通过HapMap等数据库筛选Tag SNP;综合比较各软... 利用公共数据库筛选与复杂性疾病相关的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)。运用FastSNP、SNP Function Prediction、F-SNP等多种SNP功能预测软件筛选有潜在功能的SNPs;通过HapMap等数据库筛选Tag SNP;综合比较各软件结果。以IGFBP 7基因为例,筛选转录因子结合位点SNPs 11个,内含子增强子31个,内含子增强子和转录因子结合位点4个,剪接位点1个,共47个SNPs。 展开更多

关键词 胰岛素样生长因子结合蛋白质类/遗传学 多态性 单核苷酸 转录因子 数据库 文献型

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幽门螺杆菌cagA基因片段原核表达载体的构建及其cagA基因和CagA蛋白及感染者血清抗体的检测 被引量：2

10

作者 王媛 罗依惠 严杰 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2005年第3期223-229,共7页

　目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)cagA基因片段的原核表达系统,建立ELISA检测CagA及其抗体,了解表达CagA的Hp菌株(CagA+Hp)感染与所致疾病种类的关系。方法:从快速尿素酶试验阳性的156例患者胃黏膜活检标本中分离Hp。采用... 　目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)cagA基因片段的原核表达系统,建立ELISA检测CagA及其抗体,了解表达CagA的Hp菌株(CagA+Hp)感染与所致疾病种类的关系。方法:从快速尿素酶试验阳性的156例患者胃黏膜活检标本中分离Hp。采用PCR检测109株HpcagA基因,并从临床菌株Y06中扩增2148bp的cagA基因片段(cagA1)。构建cagA1原核表达系统,用SDS-PAGE检查目的重组蛋白(rCagA1)的表达情况,用Westernblot和免疫双扩散试验鉴定rCagA1的免疫反应性和抗原性。建立ELISA,检测109株HpCagA表达和相应患者血清中CagA抗体。分析CagA+Hp感染与胃炎和消化性溃疡的关系。结果:80.8%胃黏膜活检标本中分离出Hp(126/156),97.2%的Hp菌株(106/109)cagA基因阳性。与文献报道比较,所克隆的cagA1片段核苷酸和氨基酸序列同源性分别为94.83%和93.30%。所构建的原核表达系统表达的rCagA1量约为细菌总蛋白的30.0%。rCagA1能与Hp全菌抗体发生结合反应,免疫家兔产生双扩散效价为1∶4的抗体。92.6%菌株(101/109)可表达CagA,88.1%患者(96/109)血清CagA抗体阳性。消化性溃疡标本中CagA+Hp菌株分离阳性率(97.9%)高于胃炎标本(88.5%),但无统计学差异(χ2=3.48,P>0.05)。 展开更多

关键词 抗体 细菌/分析 CAGA基因 基因表达 抗原 细菌 克隆 分子 螺杆菌 幽门/免疫学 螺杆菌 幽门/遗传学 免疫性 细菌蛋白质类/遗传学

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人tau融合蛋白的原核表达及纯化

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作者 梁燕 王海萍 +2 位作者 冯利杰 李琪 沈玉先 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2007年第4期367-370,共4页

目的构建人His-tau和GST-tau融合蛋白表达质粒并在大肠杆菌中诱导表达及纯化。方法以质粒pEGFP-tau为模板通过PCR扩增出人tau全长cDNA,并构建到原核表达载体pET28a和pGEX-5X-1中,挑选阳性重组子,经限制性内切酶鉴定后转化到大肠杆菌BL21... 目的构建人His-tau和GST-tau融合蛋白表达质粒并在大肠杆菌中诱导表达及纯化。方法以质粒pEGFP-tau为模板通过PCR扩增出人tau全长cDNA,并构建到原核表达载体pET28a和pGEX-5X-1中,挑选阳性重组子,经限制性内切酶鉴定后转化到大肠杆菌BL21中,然后用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE染色及Western-blot方法鉴定表达的融合蛋白。分别使用His Bind Resin和Glutathione Sepharose 4B与融合蛋白结合来纯化融合蛋白。结果成功构建原核表达质粒pET28a-tau和pGEX-5X-1-tau并在大肠杆菌BL21中诱导其大量表达。经His Bind Resin和Glutathione Sepharose 4B纯化后,可以得到较纯化的His-tau和GST-tau融合蛋白。SDS-PAGE及Western-blot分析显示,特异性的抗tau单克隆抗体(tau-5)所识别的融合蛋白分子量与理论值相近。结论构建了人tau两种原核表达的融合蛋白质粒,并高效表达和纯化了该蛋白,为进一步的tau与其它功能性蛋白的相互作用研究奠定了基础。 展开更多

关键词 tau蛋白质类/遗传学 大肠杆菌 基因表达 质粒

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重组腺病毒载体介导外源性水通道蛋白基因经导管逆行注射治疗干燥综合征研究进展

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作者 何虹 张洁銎 +2 位作者 范艳 孙晓爽 朱玉豪 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期86-90,97,共6页

腺病毒在感染周期中能最大程度合成病毒蛋白而关闭宿主蛋白质合成，不会引起患者染色体结构破坏，安全性好，基因转染效率也高。人工泪液、唾液或口服激素和免疫抑制剂、酸刺激和手术等等传统疗法的局限性，外源性水通道蛋白转染至干燥... 腺病毒在感染周期中能最大程度合成病毒蛋白而关闭宿主蛋白质合成，不会引起患者染色体结构破坏，安全性好，基因转染效率也高。人工泪液、唾液或口服激素和免疫抑制剂、酸刺激和手术等等传统疗法的局限性，外源性水通道蛋白转染至干燥综合征小鼠涎腺组织可以改变细胞膜对水的通透性，并将残余导管上皮细胞转变为能分泌水分和盐分的腺泡样细胞，改变细胞的类型与功能，增加腺液分泌，实现涎腺功能重建。上述机制已经得到动物实验证实，美国已经批准应用腺病毒介导的人水通道蛋白对涎腺放射性损伤患者进行I期临床试验。 展开更多

关键词 水孔蛋白质类 干燥综合征/代谢 腺病毒科/遗传学 重组 遗传 基因疗法 综述

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苦瓜核糖体失活蛋白MAP30的原核表达和生物活性研究 被引量：3

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作者 张黎黎 丁倩 詹金彪 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期264-271,共8页

目的:从苦瓜籽中克隆HIV-1整合酶抑制剂MAP30,构建其表达载体,并在大肠杆菌中进行表达,用于MAP30在细胞内的转运机理研究。方法:从成熟苦瓜种子中提取基因组DNA,通过PCR的方法扩增出MAP30基因的全长,并将其克隆进入原核表达载体pET-30a... 目的:从苦瓜籽中克隆HIV-1整合酶抑制剂MAP30,构建其表达载体,并在大肠杆菌中进行表达,用于MAP30在细胞内的转运机理研究。方法:从成熟苦瓜种子中提取基因组DNA,通过PCR的方法扩增出MAP30基因的全长,并将其克隆进入原核表达载体pET-30a,转化Eoli.BL21(DE3),IPTG诱导表达,Ni-NTA亲和纯化,梯度咪唑洗脱。MTT法分析生物学活性。结果:测序发现插入的MAP30基因序列正确,SDS-PAGE鉴定表达产物分子量正确,且MAP30主要以可溶形式表达。MTT法测定重组的MAP30具有生物学活性,且对肿瘤细胞的毒性远远大于对正常细胞的毒性。结论:本研究成功地构建了MAP30的表达系统,并实现了MAP30的可溶性表达,表达后的蛋白具有生物学活性,可用于抗体-毒素的肿瘤靶向药物的合成。 展开更多

关键词 MAP30 苦瓜 植物蛋白质类 核糖体蛋白质类 遗传学技术 重组 遗传

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PML蛋白参与三氧化二砷治疗急性早幼粒细胞白血病的分子生物学机制研究 被引量：3

14

作者 郝睿 苏力德 +3 位作者 邵一鸣 部娜 马丽亚 那仁满都拉 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期541-551,共11页

PML蛋白作为一种肿瘤抑制因子,在三氧化二砷治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的过程中发挥重要作用。绝大多数APL患者的典型特征是细胞内PML基因和RARα基因发生融合,该融合基因所表达的PML-RARα融合蛋白是APL发病的主要原因。三氧化二... PML蛋白作为一种肿瘤抑制因子,在三氧化二砷治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的过程中发挥重要作用。绝大多数APL患者的典型特征是细胞内PML基因和RARα基因发生融合,该融合基因所表达的PML-RARα融合蛋白是APL发病的主要原因。三氧化二砷作为临床治疗APL的一线药物,通过直接作用于PML-RARα融合蛋白的PML部分,诱导相关蛋白多聚化,并招募多种功能蛋白,促进PML核小体重构,使PML-RARα蛋白发生小泛素修饰蛋白(SUMO)化和泛素化,最终经蛋白酶体途径降解,达到治疗APL的目的。PML蛋白发生点突变会导致APL复发及三氧化二砷耐药。本文阐述了PML蛋白的结构和功能、PMLRARα融合蛋白诱导APL发病的机制、PML蛋白参与三氧化二砷治疗APL的分子机制以及PML蛋白发生突变导致APL患者发生三氧化二砷耐药的现象,以期为目前治疗方案的优化及针对耐药患者有效治疗手段的开发提供理论指导。 展开更多

关键词 白血病 早幼粒细胞 急性/药物疗法 砷剂/治疗应用 肿瘤蛋白质类/生物合成 小泛素相关修饰蛋白质类/遗传学

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低密度脂蛋白受体与代谢综合征的相关性研究进展 被引量：4

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作者 金文媛 赵正言 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期101-107,共7页

低密度脂蛋白受体（LDLR）与代谢综合征（MS）关系密切。LDLR的表达量、反馈调节水平和降解水平的变化，LDLR缺陷对血脂水平的影响，LDLR在胰岛β细胞损伤和胆固醇稳态失调中的作用， LDLR基因核转录因子的表达以及基因片段的多态性等均... 低密度脂蛋白受体（LDLR）与代谢综合征（MS）关系密切。LDLR的表达量、反馈调节水平和降解水平的变化，LDLR缺陷对血脂水平的影响，LDLR在胰岛β细胞损伤和胆固醇稳态失调中的作用， LDLR基因核转录因子的表达以及基因片段的多态性等均与MS特定组分的发生、发展存在一定的相关性。近年来，多个与LDLR及MS相关的靶点和干预机制得到了广泛研究。了解LDLR与MS的相关性，对MS的防治具有十分重要的意义。本文就LDLR与MS的相关性研究进展作一综述。 展开更多

关键词 受体 LDL/遗传学 脂蛋白类 LDL胆固醇 代谢综合征X 基因 转录因子 胆固醇调节元件结合蛋白质类 综述

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sflk1-IFN-γ双功能蛋白基因重组质粒的构建和表达及生物学活性鉴定

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作者 吴茜茜 陈鸿鹄 +2 位作者 郭佳 王圣超 潘建平 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期350-356,共7页

目的:构建表达可溶性血管内皮生长因子受体2(sVEGFR2,在小鼠又称sflk1)与IFN-γ双功能蛋白的重组质粒pcDNA3.1(+)/sflk1-IFN-γ,对表达的sflk1-IFN-γ重组蛋白的生物学活性进行鉴定。方法:以RT-PCR法分别扩增出sflk1与小鼠IFN-γ基因片... 目的:构建表达可溶性血管内皮生长因子受体2(sVEGFR2,在小鼠又称sflk1)与IFN-γ双功能蛋白的重组质粒pcDNA3.1(+)/sflk1-IFN-γ,对表达的sflk1-IFN-γ重组蛋白的生物学活性进行鉴定。方法:以RT-PCR法分别扩增出sflk1与小鼠IFN-γ基因片段,克隆入pcDNA3.1(+)载体,将该重组质粒表达于真核细胞,以ELISA和W estern blotting分别检测胞外及胞内sflk1-IFN-γ双功能重组蛋白的表达,并对该蛋白的生物学活性进行鉴定。结果:构建的pcDNA3.1(+)/sflk1-IFNγ-重组质粒能够在真核细胞中有效表达,且表达的sflk1-IFN-γ重组蛋白兼有sflk1和IFN-γ两者的生物学活性。结论:成功构建和表达了sflk1-IFN-γ双功能蛋白基因重组质粒,为进一步研究该双功能蛋白的抗肿瘤作用打下了基础。 展开更多

关键词 蛋白质类/遗传学 血管内皮生长因子受体2/遗传学 sflk-1 IFN-γ 双功能蛋白 基因重组

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从脆性X染色体痴呆症的分子机制展望蛋白合成在学习记忆过程中的功能(英文)

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作者 冯越 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期630-635,共6页

外界环境所激发的学习与记忆是由繁复的分子机制所调控的。关于脆性X染色体综合征蛋白 (FMRP)的研究表明 ,蛋白合成的调节在学习记忆过程中起着重要的作用。脆性X染色体综合征是世界上最常见的遗传性痴呆病。这种疾病起源于FMRP缺失所... 外界环境所激发的学习与记忆是由繁复的分子机制所调控的。关于脆性X染色体综合征蛋白 (FMRP)的研究表明 ,蛋白合成的调节在学习记忆过程中起着重要的作用。脆性X染色体综合征是世界上最常见的遗传性痴呆病。这种疾病起源于FMRP缺失所导致的大脑神经元突触发育障碍 ,从而造成学习记忆能力低下。体外实验结果表明 ,FMRP是蛋白翻译的抑制因子。在大脑神经元中 ,FMRP高度表达 ,并选择性作用于其靶基因的信使核糖核酸 (mRNA) ,从而进一步与执行翻译功能的核糖体结合 ,对其靶基因的蛋白合成起调控作用。近期研究使用基因芯片技术鉴定了小鼠脑中FMRP的靶基因mRNA ,并进一步证实这些mRNA在患者细胞中呈现翻译功能失调。以上研究提示FMRP是影响学习记忆过程中调控蛋白合成的关键因子 。 展开更多

关键词 精神发育迟滞 遗传学 脆性X染色体综合征 病因学 学习 记忆 突触发育 RNA结合蛋白质类 生物合成

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汉族人群早泄与5-HTTLPR基因多态性相关性的研究 被引量：12

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作者 罗顺文 王峰 +2 位作者 解志远 黄小科 卢一平 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期514-518,共5页

目的:探讨汉族人群5-羟色胺转运体基因连锁多态性区域(5-HTTLPR)与早泄(premature ejaculation,PE)临床特征的相关性。方法:通过病例对照研究的方法,以≥90%次性生活的射精潜伏期(intravagina ejaculation la-tency,IELT)<1 min为早... 目的:探讨汉族人群5-羟色胺转运体基因连锁多态性区域(5-HTTLPR)与早泄(premature ejaculation,PE)临床特征的相关性。方法:通过病例对照研究的方法,以≥90%次性生活的射精潜伏期(intravagina ejaculation la-tency,IELT)<1 min为早泄主要临床特点,病例组分为原发性早泄组(primary PE,PPE)119例、继发性早泄组(sec-ondary PE,SPE)60例,而正常对照组为同地区的IELT≥3 min的健康成年男性90例,应用PCR检测5-HTTLPR基因,比较3组间的基因频率和等位基因频率的差异。结果:PPE组中S/S基因型的频率比健康对照组明显增高(51.3%vs.37.8%,P<0.01),L/S基因型的频率比健康对照组显著降低(28.6%vs.34.4%,P<0.05),等位基因S出现的频率比健康对照组均显著增高(67.2%vs.55.0%,P<0.05)。S等位基因和含S的基因型在PPE患者的比率高,而SPE组与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PPE与5-HTTLPR基因多态性相关,提示遗传因素在PPE发病中起重要作用,在SPE中未见相关性,PPE和SPE的病因学可能不同。 展开更多

关键词 早泄 血清素质膜转运蛋白质类 多态现象 遗传学 汉族

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非胰岛素依赖型糖尿病易感基因定位研究进展 被引量：5

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作者 李文君 李波 +1 位作者 寇长贵 刘雅文 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期991-993,共3页

随着人类疾病构成的变化 ,全球疾病防治重点逐渐从传染病转向慢性非传染性疾病 ,其中以糖尿病最为突出。糖尿病的发病机制较为复杂 ,至今尚未完全明了。近年来 ,新兴的分子流行病学和遗传流行病学的发展使非胰岛素依赖型糖尿病 (2型糖尿... 随着人类疾病构成的变化 ,全球疾病防治重点逐渐从传染病转向慢性非传染性疾病 ,其中以糖尿病最为突出。糖尿病的发病机制较为复杂 ,至今尚未完全明了。近年来 ,新兴的分子流行病学和遗传流行病学的发展使非胰岛素依赖型糖尿病 (2型糖尿病 )的病因研究深入到一个新的阶段。目前 ,人类普遍认为 2型糖尿病是一种高度遗传异质性疾病。本文主要介绍了 2型糖尿病易感基因定位研究进展 ,着重叙述了钙激活蛋白酶 10 (calpain10 ,CAPN10 )基因与该病关系的研究概况。 展开更多

关键词 糖尿病 非胰岛素依赖型 多态现象(遗传学) 钙结合蛋白质类 遗传学 卡配因 遗传学

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HPV 16L1基因的原核表达及表达条件的优化 被引量：4

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作者 彭方毅 姜海蓉 +5 位作者 陈远翔 陈盛珍 林治华 彭方亮 赵卫兵 陈保德 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期395-398,418,共5页

目的:构建HPV16L1基因的原核表达质粒,并优化其表达条件。方法:根据GeneBank中的HPV序列及pGEX-KG中的多克隆位点设计引物,以含有HPV全长基因片段重组质粒为模板,经PCR扩增出1 500 bp的DNA片段。将所得片段与pGEX-KG载体连接,转化JM109... 目的:构建HPV16L1基因的原核表达质粒,并优化其表达条件。方法:根据GeneBank中的HPV序列及pGEX-KG中的多克隆位点设计引物,以含有HPV全长基因片段重组质粒为模板,经PCR扩增出1 500 bp的DNA片段。将所得片段与pGEX-KG载体连接,转化JM109大肠杆菌,筛选阳性克隆。其扩增片段测序结果与原序列一致,表明原核表达载体pGEX-KG-HPV16L1已构建成功。提取pGEX-KG-HPV16L1质粒转化到BL21(DE3)表达菌株中,经IPTG诱导后收集菌体,进行SDS-PAGE,Western Blot鉴定。结果:在大肠杆菌中获得HPV16L1基因融合表达,融合蛋白的相对分子量为83kDa;表达的蛋白能与抗HPV16L1抗体发生特异性反应。结论:HPV16L1基因在大肠杆菌中获得高效表达,为HPV16L1疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 病毒蛋白质类/生物合成 病毒蛋白质类/遗传学 大肠杆菌/遗传学 基因表达 克隆 分子 乳头状瘤病毒 人/遗传学 HPV16L1 原核表达 GST融合蛋白 疫苗

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