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α6/α3β4烟碱型乙酰胆碱受体β4亚基双点突变体的制备及其功能研究 被引量:1
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作者 李旭扬 陈舒苗 +2 位作者 于津鹏 罗素兰 长孙东亭 《热带生物学报》 2021年第4期403-411,共9页
在烟碱型乙酰胆碱受体家族中,含α6亚型的受体是比较特殊的一类。研究发现α6β4^(*)亚型(^(*)表示含其他亚基)在神经系统方面具有一定的调节作用,与神经性疼痛、成瘾等多种疾病的发病机制密切相关,可作为潜在的治疗靶点。比对大鼠与人... 在烟碱型乙酰胆碱受体家族中,含α6亚型的受体是比较特殊的一类。研究发现α6β4^(*)亚型(^(*)表示含其他亚基)在神经系统方面具有一定的调节作用,与神经性疼痛、成瘾等多种疾病的发病机制密切相关,可作为潜在的治疗靶点。比对大鼠与人类α6和β4亚基的序列,以野生型基因为模板,采用基因定点突变的方式,成功得到3种相邻位点突变的α6/α3β4受体突变型基因。通过体外转录、显微注射等手段,构建α6/α3β4受体野生型和突变型在非洲爪蟾卵母细胞上的表达模型,并使用双电极电压钳检测受体的表达情况。结果表明,与野生型受体相比,突变体α6/α3β4[S52N, I53V]对ACh的敏感性有所提升,EC_(50)为59.58μmol·L^(-1),是野生型的1/2,而其他两种突变体的敏感性与野生型相同。 展开更多
关键词 α6/α3β4烟碱型乙酰胆碱受体 相邻位点突变 体外表达 双电极电压钳
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ZnFe_(2)O_(4)纳米颗粒影响烟碱型乙酰胆碱受体突变型黑腹果蝇的寿命和发育 被引量:1
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作者 闫汶浩 唐雯聪 +4 位作者 喻琪 白珠君 牛津 杨进军 孙永彦 《昆虫学报》 北大核心 2025年第6期797-806,共10页
【目的】本研究旨在考察ZnFe_(2)O_(4)纳米颗粒对烟碱型乙酰胆碱受体突变型(Rye)黑腹果蝇Drosophila melanogaster寿命和发育的影响。【方法】针对Rye黑腹果蝇设置了3组ZnFe_(2)O_(4)纳米颗粒暴露处理(分别含200,400和600μg/mL ZnFe_(2... 【目的】本研究旨在考察ZnFe_(2)O_(4)纳米颗粒对烟碱型乙酰胆碱受体突变型(Rye)黑腹果蝇Drosophila melanogaster寿命和发育的影响。【方法】针对Rye黑腹果蝇设置了3组ZnFe_(2)O_(4)纳米颗粒暴露处理(分别含200,400和600μg/mL ZnFe_(2)O_(4)),并监测其成虫寿命,同时收集产生的F_(1)代记录其发育情况,检测亲代Rye果蝇成虫的氧化应激水平。【结果】ZnFe_(2)O_(4)纳米颗粒暴露后黑腹果蝇亲代成虫寿命缩短,F_(1)代化蛹进程加快、羽化的成虫数减少、雌雄比例上升。与无ZnFe_(2)O_(4)的对照组相比,400和600μg/mL ZnFe_(2)O_(4)纳米颗粒暴露下,雌成虫寿命分别缩短了9%和24%,雄成虫寿命分别缩短了7%和31%;F_(1)代在暴露于200-600μg/mL ZnFe_(2)O_(4)纳米颗粒时前3 d化蛹率提升了34%~109%;暴露于400和600μg/mL ZnFe_(2)O_(4)纳米颗粒后羽化的雌成虫数分别减少了33%和53%,羽化的雄成虫数分别减少了21%和59%,雌雄性别比分别上升40%和71%。对亲代Rye黑腹果蝇的氧化应激水平分析结果显示,200-600μg/mL ZnFe_(2)O_(4)纳米颗粒暴露引起氧化损伤,显著提高雌雄成虫体内抗氧化酶包括过氧化氢酶(catalase,CAT)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,引起雌雄成虫体内总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)显著增强,并造成雄成虫体内活性氧(reactive oxygen species,ROS)显著积累。【结论】200-600μg/mL ZnFe_(2)O_(4)纳米颗粒暴露可引发Rye黑腹果蝇产生氧化应激响应,缩短成虫寿命,减少后代数量,造成氧化损伤,同时发现ZnFe_(2)O_(4)纳米颗粒暴露对Rye黑腹果蝇雄成虫的影响更为显著。本研究丰富了对昆虫响应锌铁氧体纳米材料暴露的机制的认识,为合理评估锌铁氧体纳米材料对昆虫的影响提供了参考。 展开更多
关键词 黑腹果蝇 烟碱乙酰胆碱受体突变 纳米颗粒 ZnFe_(2)O_(4) 发育 氧化应激
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α6/α3β4乙酰胆碱受体在非洲爪蟾卵母细胞中的表达 被引量:1
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作者 熊洋 朱晓鹏 +2 位作者 吴勇 长孙东亭 罗素兰 《热带生物学报》 2020年第4期391-398,共8页
α6/α3β4烟碱型乙酰胆碱受体(α6β4*nAChRs,*代表其他亚基)主要分布于大脑海马区、外周神经节和人源肾上腺嗜铬细胞等,与神经性疼痛和炎症反应、情绪等生理疾病密切相关。本研究拟对大鼠α6/α3β4 nAChR在非洲爪蟾(Xenopus laevis)... α6/α3β4烟碱型乙酰胆碱受体(α6β4*nAChRs,*代表其他亚基)主要分布于大脑海马区、外周神经节和人源肾上腺嗜铬细胞等,与神经性疼痛和炎症反应、情绪等生理疾病密切相关。本研究拟对大鼠α6/α3β4 nAChR在非洲爪蟾(Xenopus laevis)卵母细胞膜上进行重组表达,并利用双电极电压钳电生理学技术检测该重组受体的功能。在不同浓度的激动剂乙酰胆碱的刺激下,比较了α6/α3和β4亚基的不同配比形成的受体通道开放而产生的电流大小,并用其拮抗剂α−芋螺毒素TxID验证了该受体的敏感性。结果表明,亚基不同配比的α6/α3β4 nAChR均可在非洲爪蟾卵母细胞膜上成功表达,并具有较好的配体门控敏感性。 展开更多
关键词 α6/α3β4烟碱型乙酰胆碱受体 非洲爪蟾卵母细胞 双电极电压钳 重组表达
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新烟碱型乙酰胆碱受体吡啶基醚类配体的3维定量构效关系 被引量:3
4
作者 刘春萍 戴梅 张华北 《北京师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期785-789,共5页
采用比较分子力场分析方法 ,对一系列与烟碱型乙酰胆碱受体作用的吡啶基醚类配体进行构效关系分析 ,建立了这类化合物的 3维构效模型 .其交叉验证回归系数R2cv、非交叉验证回归系数R2ncv和标准偏差s分别为 0 .74 4,0 .973和 0 .2 5 6 .... 采用比较分子力场分析方法 ,对一系列与烟碱型乙酰胆碱受体作用的吡啶基醚类配体进行构效关系分析 ,建立了这类化合物的 3维构效模型 .其交叉验证回归系数R2cv、非交叉验证回归系数R2ncv和标准偏差s分别为 0 .74 4,0 .973和 0 .2 5 6 .结论说明该系列化合物的分子立体场和静电场的分布与生物活性之间有良好的相关性 .该模型对训练集分子的活性预测结果较好 ,表明该力场模型有一定的预测能力 。 展开更多
关键词 比较分子力场分析 3维定量构效关系 烟碱乙酰胆碱受体 3-吡啶基醚类配体
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烟粉虱烟碱型乙酰胆碱受体α亚基Btα4基因的克隆和序列分析 被引量:2
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作者 姚明德 杨亦桦 +1 位作者 武淑文 吴益东 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期61-66,共6页
利用RT-PCR和RACE技术,对烟粉虱烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)α亚基的1个基因进行了克隆和序列分析。获得的烟粉虱nAChRα亚基基因的全长cDNA序列含有2 090 bp,其开放阅读框编码564个氨基酸。根据该基因编码的氨基酸序列与其他昆虫乙酰胆... 利用RT-PCR和RACE技术,对烟粉虱烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)α亚基的1个基因进行了克隆和序列分析。获得的烟粉虱nAChRα亚基基因的全长cDNA序列含有2 090 bp,其开放阅读框编码564个氨基酸。根据该基因编码的氨基酸序列与其他昆虫乙酰胆碱受体α亚基氨基酸序列之间的相似性,将该基因命名为Btα4(GenBank注册号为EF590120)。Btα4编码的α亚基含有2个结构域:N端的胞外结构域和C端的跨膜结构域,N端的胞外结构域含有2个相邻的半胱氨酸(α亚基特征序列)、15个氨基酸构成的半胱氨酸环和乙酰胆碱结合区。研究结果对于揭示烟粉虱潜在的对新烟碱类杀虫剂靶标抗性的分子机制具有重要意义。 展开更多
关键词 烟粉虱 烟碱乙酰胆碱受体 Α亚基 Bta4 烟碱类杀虫剂
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α4亚基Arg-188和Pro-198突变促进α4β2烟碱型乙酰胆碱受体开放
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作者 俞柳彤 王柳珺 +2 位作者 长孙东亭 吴勇 罗素兰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期673-679,共7页
目的:探讨乙酰胆碱、尼古丁、伐尼克兰和金雀花碱4种激动剂与α4β2烟碱型乙酰胆碱受体(nAChRs)及其突变体相互作用的活性关键位点。方法:体外转录法制备野生型(wt)与突变型α4亚基cRNAs,注射入非洲爪蟾卵母细胞,应用电生理方法,测定4... 目的:探讨乙酰胆碱、尼古丁、伐尼克兰和金雀花碱4种激动剂与α4β2烟碱型乙酰胆碱受体(nAChRs)及其突变体相互作用的活性关键位点。方法:体外转录法制备野生型(wt)与突变型α4亚基cRNAs,注射入非洲爪蟾卵母细胞,应用电生理方法,测定4种激动剂对α4β2 nAChRs及其突变体的门控活性。结果:乙酰胆碱对wtα4β2、α4(R188I)β2、α4(P198Q)β2和α4(R188I,P198Q)β2 nAChRs的半数有效浓度(EC50)分别为67.15、63.83、22.43和1.37μmol/L,尼古丁对wtα4β2、α4(R188I)β2、α4(P198Q)β2和α4(R188I,P198Q)β2 nAChRs的EC50分别为1.43、0.63、1.05和0.27μmol/L。与乙酰胆碱(10 mmol/L)诱导的峰值电流幅度相比,金雀花碱对wtα4β2和α4(R188I,P198Q)β2 nAChRs的最大激动效率(E_(max))从37.62%提升至95.14%,伐尼克兰对wtα4β2和α4(R188I,P198Q)β2 nAChRs的E_(max)也从67.94%提升至94.69%。结论:α4亚基第188位精氨酸(argi⁃nine,Arg,R)和第198位脯氨酸(proline,Pro,P)分别突变成异亮氨酸(isoleucine,Ile,I)和谷氨酰胺(glutamine,Gln,Q)后,增强了α4β2 nAChRs对乙酰胆碱和尼古丁的敏感性,并提高了α4β2 nAChRs对金雀花碱与伐尼克兰的通道开放效率。 展开更多
关键词 α4β2烟碱乙酰胆碱受体 α4亚基突变 双电极电压钳
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朱砂叶螨烟碱型乙酰胆碱受体α4亚基基因的克隆与序列特征分析
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作者 高品 王帅 +2 位作者 管学琼 卜春亚 师光禄 《北京农学院学报》 2015年第4期1-8,共8页
烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)是一种对神经递质乙酰胆碱起快速反应的激动剂门控离子通道,也是新烟碱类杀虫剂的作用靶标。此研究利用同源克隆结合RACE技术,从朱砂叶螨敏感品系中克隆了一条nAChR基因,全长为2 023bp,开放阅读框长1 635bp,编... 烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)是一种对神经递质乙酰胆碱起快速反应的激动剂门控离子通道,也是新烟碱类杀虫剂的作用靶标。此研究利用同源克隆结合RACE技术,从朱砂叶螨敏感品系中克隆了一条nAChR基因,全长为2 023bp,开放阅读框长1 635bp,编码544个氨基酸。预测分子量(Mr)为62.20kDa,等电点(pI)为5.00。根据同源性及系统发育分析,将其命名为Tcα4,提交至NCBI数据库,获得GenBank登陆号为KP694228。Tcα4具有nAChRα亚基典型结构特征:N端胞外结构域和C端跨膜结构域。Tcα4与二斑叶螨nAChRα4亚基基因序列同源性高达98.71%,与二斑叶螨其他nAChR亚基基因同源性仅在20.07%~43.16%之间,与其他昆虫nAChRα4亚基基因同源性在45.96%~56.07%之间。系统发育分析结果表明朱砂叶螨与二斑叶螨和肩突硬蜱nAChRα4亚基基因在同一分支,与其他昆虫nAChRα4亚基基因则较远。朱砂叶螨nAChRα4亚基基因的克隆为朱砂叶螨其他nAChR亚基基因的研究及以nAChR为作用靶标的新型杀螨剂的研究提供了一种新途径,奠定了基础。 展开更多
关键词 朱砂叶螨 烟碱乙酰胆碱受体 α4亚基 基因克隆 序列分析
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烟碱型乙酰胆碱受体β4亚基点突变体的构建
8
作者 张璐 朱晓鹏 +1 位作者 长孙东亭 罗素兰 《热带生物学报》 2019年第4期307-313,共7页
利用PCR介导的定点突变技术构建包含β4亚基的烟碱型乙酰胆碱受体点突变体模型,同时采用双电极电压钳技术,对激动剂ACh和拮抗剂α-CTx RegIIA对突变受体的活性进行检测。结果表明:β4亚基胞外N端序列第168位的异亮氨酸(Ile)成功突变成... 利用PCR介导的定点突变技术构建包含β4亚基的烟碱型乙酰胆碱受体点突变体模型,同时采用双电极电压钳技术,对激动剂ACh和拮抗剂α-CTx RegIIA对突变受体的活性进行检测。结果表明:β4亚基胞外N端序列第168位的异亮氨酸(Ile)成功突变成了丝氨酸(Ser),突变后的受体对激动剂ACh的活性降低,对拮抗剂α-CTx RegIIA的活性降低了1.4倍,半阻断剂量(IC50)为170 nmol·L^-1。 展开更多
关键词 烟碱乙酰胆碱受体 β4亚基 PCR介导的定点突变 双电极电压钳技术
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α7烟碱型乙酰胆碱受体在单核/巨噬细胞介导的炎症反应与极化调控中的作用 被引量:4
9
作者 陈玲 张虹 +1 位作者 郑长伟 谢凤杰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1561-1565,共5页
单核细胞和巨噬细胞在健康和疾病中均发挥重要作用,是固有免疫的重要组成,在其介导的炎症反应中保护宿主、清除病原体和调节免疫平衡,可通过清除细胞碎片、异物及调节炎症和愈合过程等维持内环境稳定。根据微环境和细胞激活状态,巨噬细... 单核细胞和巨噬细胞在健康和疾病中均发挥重要作用,是固有免疫的重要组成,在其介导的炎症反应中保护宿主、清除病原体和调节免疫平衡,可通过清除细胞碎片、异物及调节炎症和愈合过程等维持内环境稳定。根据微环境和细胞激活状态,巨噬细胞可通过改变不同表型影响疾病转归。近二十年人们对胆碱能抗炎通路(CAP)在炎症反应中的作用及机制研究越来越深入,尤其是该通路中的重要结构——α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR),其本质为神经免疫系统的配体门控离子通道,且在调控单核/巨噬细胞吞噬、趋化因子和细胞因子产生、细胞存活和极化等方面发挥重要作用,相关机制涉及NLRP3炎症小体,可作为多种炎症性疾病的潜在治疗靶点。本文综述α7nAChR在炎症和免疫介导的疾病中对单核/巨噬细胞功能调控和极化的作用。 展开更多
关键词 胆碱能抗炎通路 Α7烟碱乙酰胆碱受体 巨噬细胞 极化 NLRP3炎症小体
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α7烟碱型乙酰胆碱受体基因敲除小鼠牙髓炎模型的构建 被引量:1
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作者 朱晓东 许是 +3 位作者 蒋玫 沈天晖 范益 张光东 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期832-837,共6页
目的:构建α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nicotine acetylcholine receptor,α7 n AChR)基因敲除小鼠牙髓炎模型,为研究α7 nAChR在牙髓炎发生发展过程中的作用机制提供实验模型。方法:取16只α7 n AChR基因敲除(knock out,KO)小鼠和16只... 目的:构建α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nicotine acetylcholine receptor,α7 n AChR)基因敲除小鼠牙髓炎模型,为研究α7 nAChR在牙髓炎发生发展过程中的作用机制提供实验模型。方法:取16只α7 n AChR基因敲除(knock out,KO)小鼠和16只野生型(wide type,WT)C57BL/6鼠的上颌第一磨牙的牙髓暴露法建立牙髓炎模型,分别在牙髓暴露后1、3、7 d处死小鼠,HE染色、免疫组化检测牙髓组织NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)表达情况。结果:HE染色结果显示牙髓暴露后1 d,α7 n AChR KO鼠及WT鼠的穿髓孔周围血管充血、组织水肿;牙髓暴露后3 d,炎症细胞聚集,α7 n AChR KO鼠炎症细胞聚集已达冠髓底部,WT鼠的炎症细胞主要聚集在穿髓孔周围的牙髓组织中;牙髓暴露后7 d,α7 nAChR KO鼠的牙髓炎症细胞浸润至根部牙髓,而WT鼠的牙髓炎症细胞仍然主要聚集于冠髓底部。免疫组化染色结果显示,牙髓暴露后,α7 n AChR KO鼠牙髓NLRP3表达高于WT鼠,差异有统计学意义(P <0.05)。结论:成功建立了α7 n AChR基因敲除鼠的牙髓炎模型,而且α7nAChR基因敲除鼠牙髓炎症浸润明显快于WT小鼠。 展开更多
关键词 基因敲除小鼠 牙髓炎 α7烟碱乙酰胆碱受体 NLRP3炎症小体
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α-芋螺毒素TxID异构体对人类乙酰胆碱受体的活性研究 被引量:1
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作者 长孙东亭 朱晓鹏 +3 位作者 吴勇 胡远艳 邴晖 罗素兰 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期483-490,共8页
研究α-芋螺毒素Tx ID 3个二硫键异构体对人类α3β4与α6/α3β4乙酰胆碱受体的阻断活性。采用Fmoc固相合成法,分别合成α-芋螺毒素Tx ID的3个二硫键异构体的线性肽,利用2步氧化法进行氧化折叠,获得具有定点连接二硫键的异构体多肽。... 研究α-芋螺毒素Tx ID 3个二硫键异构体对人类α3β4与α6/α3β4乙酰胆碱受体的阻断活性。采用Fmoc固相合成法,分别合成α-芋螺毒素Tx ID的3个二硫键异构体的线性肽,利用2步氧化法进行氧化折叠,获得具有定点连接二硫键的异构体多肽。利用非洲爪蟾卵母细胞表达人类α3β4与α6/α3β4乙酰胆碱受体亚型,测定3个异构体对该乙酰胆碱受体的电流与洗脱速率的影响情况。α-芋螺毒素Tx ID的3个二硫键异构体对人类α3β4与α6/α3β4乙酰胆碱受体亚型的阻断活性差异很大,阻断是可逆的,洗脱速率较快。其中具有天然构象的球状异构体活性最强,其半数阻断剂量(IC50)仅约为9.3 nmol/L;其次是带状异构体具有很微弱的抑制活性,其IC50大于5μmol/L;而珠子状异构体几乎没有阻断活性,其IC50大于10μmol/L。成功合成了α-芋螺毒素Tx ID的3个二硫键异构体,并获知了3个二硫键异构体分别对人类α3β4与α6/α3β4乙酰胆碱受体亚型的阻断活性,为α-芋螺毒素Tx ID后续海洋新药研发提供理论基础。 展开更多
关键词 α-芋螺毒素Tx ID 二硫键异构体 多肽人工合成 人类α3β4乙酰胆碱受体 人类α6/α4乙酰胆碱受体
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胆碱对乌头碱和哇巴因所诱发的心律失常的保护作用 被引量:3
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作者 刘艳 戚汉平 +7 位作者 解晶 赵华 陈巍 陈立朋 张秀菊 杜娟 蒋雅楠 李咏梅 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1447-1451,共5页
目的探讨胆碱对乌头碱和哇巴因所诱发的心律失常的保护作用。方法大鼠和豚鼠分别注射乌头碱或哇巴因制备心律失常模型,观察预先给予低剂量(5 mg.kg-1)和高剂量(20 mg.kg-1)的胆碱对心律失常的保护作用。结果给予胆碱可明显对抗乌头碱或... 目的探讨胆碱对乌头碱和哇巴因所诱发的心律失常的保护作用。方法大鼠和豚鼠分别注射乌头碱或哇巴因制备心律失常模型,观察预先给予低剂量(5 mg.kg-1)和高剂量(20 mg.kg-1)的胆碱对心律失常的保护作用。结果给予胆碱可明显对抗乌头碱或哇巴因所诱发的心律失常,表现为明显延迟心律失常的出现,推迟动物死亡时间等。高剂量胆碱对心律失常的保护作用优于低剂量。结论胆碱对心律失常具有保护作用,高剂量的作用优于低剂量。 展开更多
关键词 心律失常 胆碱 保护作用 4-DAMP M3乙酰胆碱受体 乌头碱 哇巴因
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α7 cDNA真核表达载体的构建及其在H4细胞中的表达
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作者 卢家红 吕传真 《复旦学报(医学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第6期559-561,568,共4页
目的 构建一个含α7 cDNA的真核表达载体,并在人神经胶质瘤细胞H4中进行表达。方法 采用分子克隆技术将经测序证实的人α7 cDNA同真核表达载体pNASS-CMV-Neo连接,克隆PCR及酶切筛选出阳性重组体,并采用脂质体转染法将其导入H4细胞,免疫... 目的 构建一个含α7 cDNA的真核表达载体,并在人神经胶质瘤细胞H4中进行表达。方法 采用分子克隆技术将经测序证实的人α7 cDNA同真核表达载体pNASS-CMV-Neo连接,克隆PCR及酶切筛选出阳性重组体,并采用脂质体转染法将其导入H4细胞,免疫印迹、免疫染色、标记钙法检测α7的表达。结果 α7 cD-NA连接至pNASS-CMV-Neo载体,并在H4细胞中获得表达。结论 含人 α7 cDNA的真核表达重组体可在人神经胶质瘤细胞中有效而稳定地表达。 展开更多
关键词 α7 CDNA 真核表达载体 H4细胞 Α7烟碱乙酰胆碱受体 阿尔茨海默病 基因表达
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脓毒症通过抑制AKT/GSK3β磷酸化导致骨骼肌细胞膜nAChRs聚集障碍 被引量:2
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作者 李天梅 刘力 王晓斌 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1337-1343,共7页
目的探究蛋白质丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(AKT)/糖原合成酶激酶3β(GSK3β)介导的信号通路在脓毒症导致骨骼肌细胞膜上烟碱型乙酰胆碱受体(nAChRs)聚集障碍中的作用。方法小鼠源性C2C12肌原细胞经2%马血清诱导分化为肌管后随机分为4组:Sham... 目的探究蛋白质丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(AKT)/糖原合成酶激酶3β(GSK3β)介导的信号通路在脓毒症导致骨骼肌细胞膜上烟碱型乙酰胆碱受体(nAChRs)聚集障碍中的作用。方法小鼠源性C2C12肌原细胞经2%马血清诱导分化为肌管后随机分为4组:Sham组:假手术小鼠血清处理;Sepsis组:脓毒症小鼠血清处理;Sepsis+D组:脓毒症小鼠血清和二甲基亚砜(DMSO)处理;Sepsis+SB组:脓毒症小鼠血清和GSK3β抑制剂SB216763处理,各组在作相应处理前均加入Agrin蛋白诱导nAChRs聚集。血清处理5.5 h后采用Alexa Fluor 594-conjugatedα-bungarotoxin(α-BTX)标记肌管膜上nAChRs聚集簇,采用Western blotting检测AKT、磷酸化AKT(p-AKT)、GSK3β、磷酸化GSK3β(p-GSK3β)、细胞质连接蛋白相关蛋白2(CLASP2)的表达水平,采用免疫共沉淀(Co-IP)检测磷酸化CLASP2(p-CLASP2)以及CLASP2与微管蛋白α-tubulin的结合水平。结果与Sham组相比,Sepsis组C2C12肌管膜上nAChRs聚集簇面积和密度均降低,p-AKT、p-GSK3β水平下降,p-CLASP2水平升高,CLASP2与α-tubulin的结合减少;与Sepsis+D组相比,Sepsis+SB组C2C12肌管膜上nAChRs聚集簇面积和密度均增加,p-CLASP2水平降低,CLASP2与α-tubulin的结合水平增加。结论脓毒症小鼠血清通过抑制Akt/GSK3β磷酸化导致下游信号分子CLASP2与α-tubulin结合减少,引起C2C12肌管膜上nAChRs聚集障碍。 展开更多
关键词 脓毒症 烟碱乙酰胆碱受体 糖原合成酶激酶 微管
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α-芋螺毒素TxID对肺癌的细胞毒性 被引量:1
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作者 钱江 孙志华 +3 位作者 刘益巧 谢品希 长孙东亭 罗素兰 《热带生物学报》 2019年第2期99-105,共7页
对α-芋螺毒素TxID在小细胞肺癌DMS114中的细胞毒性进行研究。使用两步氧化法对α-芋螺毒素TxID进行合成,质谱鉴定TxID,并通过高效液相色谱(HPLC)确定其纯度;对DMS114中的α3和β4 nAChR亚基进行克隆;使用MTT试验检测α-芋螺毒素TxID单... 对α-芋螺毒素TxID在小细胞肺癌DMS114中的细胞毒性进行研究。使用两步氧化法对α-芋螺毒素TxID进行合成,质谱鉴定TxID,并通过高效液相色谱(HPLC)确定其纯度;对DMS114中的α3和β4 nAChR亚基进行克隆;使用MTT试验检测α-芋螺毒素TxID单用或与阿霉素(ADM)联用对DMS114和HEL细胞的细胞毒性作用。本实验通过固相合成和两步氧化法,成功制备了α-芋螺毒素TxID;通过基因克隆实验,在DMS114细胞中检测到α3和β4 nAChR亚基;细胞毒性试验表明α-芋螺毒素TxID对肺癌细胞DMS114和正常细胞HEL都具有细胞毒性且在一定浓度TxID对肺癌细胞的毒性大于正常细胞;此外,TxID和ADM等比联用对DMS114细胞的毒性大于各自单独给药之和。本研究首次证明α3β4 nAChR特异性阻断剂α-芋螺毒素TxID能够抑制小细胞肺癌DMS114的增殖并具有细胞毒性作用,可为新型抗癌药物的研究与开发提供指导。 展开更多
关键词 α-芋螺毒素TxID 小细胞肺癌 α3β4烟碱乙酰胆碱受体 基因克隆 细胞毒性
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α-芋螺毒素LvIA第11位氨基酸的新突变体合成及其靶点活性
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作者 李浩楠 杨奕帅 +2 位作者 长孙东亭 朱晓鹏 罗素兰 《热带生物学报》 2023年第1期1-7,共7页
为了进一步探究第11位氨基酸的性质对LvIA靶点结合活性的影响,设计了LvIA的2个新型突变体[D11R]LvIA和[D11H]LvIA,即用2个碱性氨基酸-精氨酸(R)和组氨酸(H)分别替换原来的酸性氨基酸D。先人工合成了这2个新突变体的线性肽,然后采用2步... 为了进一步探究第11位氨基酸的性质对LvIA靶点结合活性的影响,设计了LvIA的2个新型突变体[D11R]LvIA和[D11H]LvIA,即用2个碱性氨基酸-精氨酸(R)和组氨酸(H)分别替换原来的酸性氨基酸D。先人工合成了这2个新突变体的线性肽,然后采用2步氧化法进行折叠,以获得在第1位和第3位半胱氨酸(Cys 1~3)、第2位和第4位半胱氨酸(Cys 2~4)之间定点连接形成二硫键。经高效液相色谱分离纯化和质谱鉴定,合成了含有Cys(1~3, 2~4)二硫键连接方式的多肽,其分子质量正确,纯度在95%以上。利用双电极电压钳电生理学技术对这2种突变体与α3β2 nAChR的结合活性进行了检测。结果发现,当该位点的氨基酸性质由酸性转换为碱性后,对LvIA的活性影响巨大,直接导致对α3β2 nAChR的阻断活性丧失。[D11R]LvIA和[D11H]LvIA的活性与野生型LvIA相比分别降低了574.38%和408.62%。由此表明,第11位氨基酸的酸碱性对LvIA的活性至关重要。 展开更多
关键词 α-芋螺毒素LvIA 突变体设计与合成 α3β2烟碱乙酰胆碱受体 靶点结合活性 电生理学技术
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