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酿酒酵母α-半乳糖苷酶基因重组菌株的表达分析 被引量:3
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作者 陈英 陈东 +2 位作者 陆琦 芦志龙 黄日波 《广西科学》 CAS 2013年第2期143-147,共5页
PCR扩增里氏木霉(Trichoderma reesei)2个α-半乳糖苷酶基因agl2和agl3,将其分别与表达载体pY-ES2连接,电转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)INVSc1菌株。从重组菌株提取载体进行单酶切凝胶电泳检测,证实agl2和agl3分别在重组菌株A... PCR扩增里氏木霉(Trichoderma reesei)2个α-半乳糖苷酶基因agl2和agl3,将其分别与表达载体pY-ES2连接,电转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)INVSc1菌株。从重组菌株提取载体进行单酶切凝胶电泳检测,证实agl2和agl3分别在重组菌株AGL2和AGL3表达。以葡萄糖和棉子糖为碳源培养菌株,2株重组菌的生长速率均显著高于原始菌株,提前8h菌数达到最大,其中以AGL3的生长速率提高较为明显,重组还使菌株在液体培养基由原来的部分絮凝转变为完全游离状。2株重组菌株均不能利用蜜二糖为碳源生长。 展开更多
关键词 α-半乳糖苷酶基因pYES2酿酒酵母 细胞生长 细胞形态
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分枝犁头霉WL511热稳定α-半乳糖苷酶基因克隆及序列分析 被引量:1
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作者 李荷 游娟 +1 位作者 顾取良 刘玉焕 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期124-130,共7页
构建并筛选耐热分枝犁头霉cDNA文库获得639 bp热稳定α-半乳糖苷酶基因片段,并以5′-RACE和3-′RACE技术获得上下游片段1817 bp和1092 bp,拼接得α-半乳糖苷酶全长序列2228 bp,其完整开放读码框为2142 bp,编码713个氨基酸,G+C含量43%;... 构建并筛选耐热分枝犁头霉cDNA文库获得639 bp热稳定α-半乳糖苷酶基因片段,并以5′-RACE和3-′RACE技术获得上下游片段1817 bp和1092 bp,拼接得α-半乳糖苷酶全长序列2228 bp,其完整开放读码框为2142 bp,编码713个氨基酸,G+C含量43%;产物预测等电点5.2,预测相对分子质量81000。该基因(GenBank No.DQ234280)属α-半乳糖苷酶36家族,与其他来源的α-半乳糖苷酶基因同源性较低,与链霉菌Streptomyces avermitilis MA-4680的α-半乳糖苷酶同源性最高为38%。 展开更多
关键词 热稳定α-半乳糖苷酶基因 克隆 序列分析
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基于α-半乳糖苷酶基因为筛选标记的酿酒酵母诱导型表达载体的构建及应用
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作者 张伟 郭钦 +1 位作者 阮辉 何国庆 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期43-47,共5页
以α-半乳糖苷酶基因为筛选标记,构建GAL1诱导型启动子介导的酿酒酵母表达载体YGM-α-gal质粒,将枯草芽孢杆菌的β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因克隆到此载体中,构建质粒YGMPA-α-gal,转化宿主酵母后,实现β-1,3-1,4-葡聚糖酶在酿酒酵母中的分... 以α-半乳糖苷酶基因为筛选标记,构建GAL1诱导型启动子介导的酿酒酵母表达载体YGM-α-gal质粒,将枯草芽孢杆菌的β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因克隆到此载体中,构建质粒YGMPA-α-gal,转化宿主酵母后,实现β-1,3-1,4-葡聚糖酶在酿酒酵母中的分泌表达.结果表明:在2%半乳糖诱导下,摇瓶发酵24h后分泌表达的β-葡聚糖酶活性达到411.9U爛mL-1,而在培养60h后,发酵液中α-半乳糖苷酶活性可达64.2U爛mL-1.说明α-半乳糖苷酶基因可用作酿酒酵母表达载体转化的有效筛选标记,为食品级酿酒酵母表达系统的构建提供了新选择. 展开更多
关键词 α-半乳糖苷酶基因 筛选标记 酿酒酵母 Β-1 3-1 4-葡聚糖
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原核基因工程制备新型重组α-半乳糖苷酶应用于人B→O血型改造的研究 被引量:12
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作者 高红伟 李素波 +6 位作者 鲍国强 檀英霞 王玲燕 金泗虎 王颖丽 季守平 宫锋 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2011年第2期503-507,共5页
本研究利用基因工程方法制备脆弱类杆菌来源的新型α-半乳糖苷酶并将其应用于人B→O血型改造。在获得了能够表达细菌α-半乳糖苷酶工程菌株的基础上,从诱导时间、诱导剂浓度两个方面对工程菌株的诱导条件进行优化,获得细菌α-半乳糖苷... 本研究利用基因工程方法制备脆弱类杆菌来源的新型α-半乳糖苷酶并将其应用于人B→O血型改造。在获得了能够表达细菌α-半乳糖苷酶工程菌株的基础上,从诱导时间、诱导剂浓度两个方面对工程菌株的诱导条件进行优化,获得细菌α-半乳糖苷酶的最佳可溶性表达条件;超声上清经过阳离子交换层析和阴离子交换层析等方法进行纯化。利用纯化后的α-半乳糖苷酶在磷酸盐缓冲液(pH 6.8)中处理B型红细胞2小时,制备O型红细胞。结果表明细菌α-半乳糖苷酶最佳诱导表达条件为:37℃、起始D600为0.8,IPTG浓度为0.1 mmol/L,诱导时间为2小时。纯化后α-半乳糖苷酶的纯度为电泳纯,比活由纯化前的0.42 U/mg提高到了2.1 U/mg。该酶在26℃、接近中性的pH条件(6.8)下经2小时可将B型红细胞改造成O型红细胞,需要的酶量为225μg/ml红细胞。结论:建立了重组细菌α-半乳糖苷酶的表达纯化工艺,制备的重组α-半乳糖苷酶可有效地将B型红细胞改造成O型红细胞,为B→O血型改造提供了更有效的工具酶。 展开更多
关键词 基因重组α-乳糖 血型改造 B→O血型改造
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α-半乳糖苷酶A基因敲除猪胎儿成纤维细胞系的建立
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作者 冷允俊 刘晓蕊 +3 位作者 李琳 王盈 杨海元 戴一凡 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期688-694,共7页
目的 基于CRISPR/Cas9技术构建α-半乳糖苷酶A (GLA)基因敲除的巴马公猪胎儿成纤维细胞(PFFs),为构建人类Fabry病猪模型提供实验材料。方法 利用生物信息学方法对人/猪GLA基因编码的α-Gal A的相似性进行分析,并鉴定出猪α-Gal A的催化... 目的 基于CRISPR/Cas9技术构建α-半乳糖苷酶A (GLA)基因敲除的巴马公猪胎儿成纤维细胞(PFFs),为构建人类Fabry病猪模型提供实验材料。方法 利用生物信息学方法对人/猪GLA基因编码的α-Gal A的相似性进行分析,并鉴定出猪α-Gal A的催化残基位置。通过在线工具在编码催化残基之前的外显子区设计单链向导RNA,构建CRISPR/Cas9打靶载体。将打靶载体与抗性质粒共转染至巴马公猪胎儿PFFs,用G418药物筛选出单克隆细胞,并PCR测序鉴定。结果 人/猪α-Gal A的氨基酸序列一致性为81%,相似性为89%;三维结构的均方根偏差值为0.012。猪α-Gal A的催化残基是第174位和第235位的天冬氨酸。成功构建CRISPR/Cas9打靶载体,并筛选出单克隆细胞,PCR测序鉴定其基因型。结论 用生物信息学方法验证了人/猪α-Gal A具有高度的相似性。利用CRISPR/Cas9技术获得了GLA基因敲除的巴马公猪PFFs细胞系,为构建人类Fabry病猪模型奠定了基础。 展开更多
关键词 FABRY病 α-乳糖A基因 α-乳糖A CRISPR/Cas9 猪胎儿成纤维细胞
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不同来源α-半乳糖苷酶对肉仔鸡生产性能及血液生化指标的影响 被引量:5
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作者 刘树栋 贾丽楠 +3 位作者 史酉川 党国旗 陈宝江 于会民 《中国家禽》 北大核心 2016年第9期33-37,共5页
试验旨在研究微生物和转基因玉米两种来源的α-半乳糖苷酶对肉仔鸡生产性能以及血液理化指标的影响。选取648只1日龄AA肉仔鸡随机分为3组,每组12个重复,每个重复18只(公母各半)。1组饲喂添加90 U/kg微生物来源α-半乳糖苷酶的饲粮,2组... 试验旨在研究微生物和转基因玉米两种来源的α-半乳糖苷酶对肉仔鸡生产性能以及血液理化指标的影响。选取648只1日龄AA肉仔鸡随机分为3组,每组12个重复,每个重复18只(公母各半)。1组饲喂添加90 U/kg微生物来源α-半乳糖苷酶的饲粮,2组饲喂α-半乳糖苷酶转基因玉米(酶活150 U/kg)替代50%亲本玉米,3组饲喂α-半乳糖苷酶转基因玉米替代100%亲本玉米的饲粮,试验期为6周。结果显示:各组间肉鸡日增重、采食量差异不显著(P>0.05),2组饲料报酬优于1组;2组和3组粪便中的棉籽糖、水苏糖含量显著低于1组(P<0.05);各组间肉鸡血液生化指标无显著区别。试验表明转基因玉米来源的α-半乳糖苷酶在改善肉鸡饲料报酬、降低粪便中棉籽糖和水苏糖含量效果优于微生物源α-半乳糖苷酶。 展开更多
关键词 α-乳糖基因玉米 肉鸡 生产性能 棉籽糖 水苏糖
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重组α-半乳糖苷酶酶解大豆低聚糖研究 被引量:3
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作者 王璇琳 李素波 +3 位作者 高红伟 田曙光 宫锋 章扬培 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第12期222-226,共5页
本研究应用本实验室基因重组咖啡豆α-半乳糖苷酶对棉籽糖和水苏糖进行了酶解,应用薄层层析(TLC)和高效液相色谱(HPLC)法检测了酶解前后大豆低聚糖的变化情况,结合大豆制品传统加工工艺,提出了酶的添加方式和工艺。
关键词 大豆低聚糖 肠胃胀气 基因重组α-乳糖
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