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气单胞菌属低温淀粉酶基因改造与原核表达
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作者 楚敏 史应武 +3 位作者 顾美英 杨红梅 霍向东 张志东 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期479-484,共6页
【目的】获取低温淀粉酶基因,分析其相关功能,为工业生产上的应用提供参考。【方法】以气单胞菌(Aeromonas)LA77为出发菌株克隆低温α-淀粉酶基因,以BL-21(DE3)为宿主菌进行克隆。分析其它已知气单胞菌属低温α-淀粉酶基因同源性,设计... 【目的】获取低温淀粉酶基因,分析其相关功能,为工业生产上的应用提供参考。【方法】以气单胞菌(Aeromonas)LA77为出发菌株克隆低温α-淀粉酶基因,以BL-21(DE3)为宿主菌进行克隆。分析其它已知气单胞菌属低温α-淀粉酶基因同源性,设计特异引物,PCR扩增获得C13片段,将其克隆到pMAL-2X,转化到BL-21(DE3)中,筛选蓝白斑,验证PCR及EcoRⅠ和HindⅢ的双酶切,获得高效表达生物工程菌株pMAL-2X-C13。设计定点突变引物,以pMAL-2X-C13为模板,获得低温淀粉酶基因突变株三株C19、C29、C43。【结果】表达蛋白的分子大小为114kD,突变菌株C19蛋白表达量均高于pMAL-2X-C13。【结论】低温淀粉酶基因突变株C19比原始菌株pMAL-2X-C13淀粉酶基因蛋白表达量更高。 展开更多
关键词 气单胞菌属 α-低温淀粉酶 基因改造 原核表达
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低温α-淀粉酶产生菌GS230发酵条件与酶学性质研究 被引量:8
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作者 刘红飞 吕明生 +2 位作者 王淑军 房耀维 李华钟 《中国酿造》 CAS 北大核心 2008年第7期13-18,共6页
对分离自连云港海域的低温α-淀粉酶产生菌Pseudoalteromonas sp.GS230进行了产酶条件的优化和酶学性质的研究。结果表明,该酶在0.4%可溶性淀粉、0.25%牛肉膏、1.5%蛋白胨以及5%接种量、培养32 h产酶量达到最高。对低温α-淀粉酶性质进... 对分离自连云港海域的低温α-淀粉酶产生菌Pseudoalteromonas sp.GS230进行了产酶条件的优化和酶学性质的研究。结果表明,该酶在0.4%可溶性淀粉、0.25%牛肉膏、1.5%蛋白胨以及5%接种量、培养32 h产酶量达到最高。对低温α-淀粉酶性质进行研究发现,该酶的最适作用温度和pH值分别是30℃和pH 8.0、0℃时相对酶活达28%。对酶稳定性的研究发现,该酶对热敏感,30℃半衰期为1.5h,Ca2+可以提高酶的稳定性;在反应体系中添加5 mmol/L Ca2+,30℃保温1.5h,残余酶活达93%。Na+、K+、Ca2+等对酶有激活作用,而Pb2+、Cu2+、Fe3+等强烈抑制酶活性。 展开更多
关键词 低温α-淀粉酶产生菌 低温α-淀粉酶 产酶条件 酶学性质
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双水相萃取法分离低温α-淀粉酶的研究 被引量:7
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作者 房耀维 刘姝 +4 位作者 吕明生 徐炜枫 王淑军 陈丽 焦豫良 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第18期159-162,共4页
对利用聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)-磷酸盐双水相体系从Pseudoalteromonas arctic GS230发酵液中直接萃取分离低温α-淀粉酶进行研究。探讨PEG分子量、相浓度、pH值对低温α-淀粉酶在PEG-磷酸盐双水相中分配系数、纯化系数及回... 对利用聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)-磷酸盐双水相体系从Pseudoalteromonas arctic GS230发酵液中直接萃取分离低温α-淀粉酶进行研究。探讨PEG分子量、相浓度、pH值对低温α-淀粉酶在PEG-磷酸盐双水相中分配系数、纯化系数及回收率的影响,并进行直线放大实验。结果表明:在pH5.0,PEG-100015%-磷酸盐15%的双水相体系中,低温α-淀粉酶的纯化系数及回收率分别为4.8和87%。 展开更多
关键词 双水相体系 分离 低温α-淀粉酶
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低温α-淀粉酶对饲料淀粉酶解及肉鸡生长性能的影响 被引量:6
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作者 刘迎春 辛守帅 +1 位作者 张相伦 周岩民 《中国家禽》 北大核心 2016年第23期24-27,共4页
试验研究了低温α-淀粉酶对饲料中淀粉的酶解及肉鸡生长性能的影响。酶解试验模拟胃、小肠两步消化,分析低温α-淀粉酶对饲料中还原糖释放的影响。动物试验选用600只1日龄爱拔益加(AA)肉仔鸡,随机分为4组,对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ、... 试验研究了低温α-淀粉酶对饲料中淀粉的酶解及肉鸡生长性能的影响。酶解试验模拟胃、小肠两步消化,分析低温α-淀粉酶对饲料中还原糖释放的影响。动物试验选用600只1日龄爱拔益加(AA)肉仔鸡,随机分为4组,对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别在基础日粮中添加100、150和200 g/t低温α-淀粉酶,试验期为42 d。结果:1低温α-淀粉酶提高了饲料在胃消化阶段1、2 h(P<0.05)和小肠消化阶段2、4 h(P=0.093)的还原糖生成量。2日粮添加100 g/t低温α-淀粉酶显著提高了42日龄肉鸡体重、后期平均日增重(P<0.05);低温α-淀粉酶降低了前期(P=0.071)、后期(P<0.05)和全期(P<0.05)料重比。结论:在本试验条件下,低温α-淀粉酶提高了饲料中还原糖在胃消化阶段的释放量;肉鸡日粮中添加低温α-淀粉酶可以改善生长性能,添加量以100 g/t为宜。 展开更多
关键词 低温α-淀粉酶 淀粉 肉鸡 生产性能
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α-淀粉酶低温适应性分子机制的研究进展 被引量:10
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作者 韩萍 魏云林 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2006年第4期77-81,共5页
低温酶由于在低温下仍能保持高催化活性而具有很高的工业应用价值。而关于低温酶是如何适应低温环境以及在低温下如何保持高催化活性等问题,同样引起了各国科学家们的广泛关注。其中低温α-淀粉酶是在结构和功能方面研究得最为透彻的酶... 低温酶由于在低温下仍能保持高催化活性而具有很高的工业应用价值。而关于低温酶是如何适应低温环境以及在低温下如何保持高催化活性等问题,同样引起了各国科学家们的广泛关注。其中低温α-淀粉酶是在结构和功能方面研究得最为透彻的酶,它也是第一个被结晶的低温酶,其热、动力学特征已通过内荧光法、圆二色性和差示扫描量热法等进行了深入研究。建立在三维结构分析和热力学特征研究的基础上,科学家们目前正尝试着解开低温酶的低温适应性之谜。对低温α-淀粉酶的研究进展作一简要的综述。 展开更多
关键词 低温 低温α-淀粉酶 低温适应性
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海洋低温α-淀粉酶菌株Bacillus thuringiensis dsh 19-1发酵条件研究 被引量:2
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作者 窦少华 周新尚 +1 位作者 迟乃玉 修志龙 《中国酿造》 CAS 北大核心 2017年第4期36-39,共4页
α-淀粉酶是催化淀粉水解的酶类,其广泛应用于食品、医学等领域。该研究利用响应面法设计试验,优化了海洋低温α-淀粉酶菌株Bacillus thuringiensis dsh 19-1的发酵条件。其最佳发酵条件为发酵时间42.4 h,发酵温度20.6℃,接种量4.1%。... α-淀粉酶是催化淀粉水解的酶类,其广泛应用于食品、医学等领域。该研究利用响应面法设计试验,优化了海洋低温α-淀粉酶菌株Bacillus thuringiensis dsh 19-1的发酵条件。其最佳发酵条件为发酵时间42.4 h,发酵温度20.6℃,接种量4.1%。在上述优化条件下α-淀粉酶酶活可达3.06 U/mL,较优化前提高17.69%。 展开更多
关键词 低温α-淀粉酶 发酵条件优化 响应面试验
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一种低温α-淀粉酶的酶学性质研究 被引量:11
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作者 闫祥洲 刘金爱 +3 位作者 吴勃 杜晓阳 陈敏杰 何俊佳 《饲料工业》 北大核心 2014年第6期15-17,共3页
经分离纯化及诱变育种得到1株低温α-淀粉酶高产菌株。研究结果表明,该菌株产生的酶是一种内切型淀粉酶,最适作用温度为50℃,最适作用pH值为5.2。该酶具有较好的耐热性和耐酸性,经85℃高温制粒,酶活存留率达88.1%;用pH值4.0的乙酸-乙酸... 经分离纯化及诱变育种得到1株低温α-淀粉酶高产菌株。研究结果表明,该菌株产生的酶是一种内切型淀粉酶,最适作用温度为50℃,最适作用pH值为5.2。该酶具有较好的耐热性和耐酸性,经85℃高温制粒,酶活存留率达88.1%;用pH值4.0的乙酸-乙酸钠缓冲液处理4 h后,酶活存留率达90%以上。体外模拟耐胃蛋白酶试验,证明胃蛋白酶对该低温α-淀粉酶无影响。对酶解产物进行分析,分子量集中在5 000以下,比例达到70.26%。 展开更多
关键词 低温α-淀粉酶 酶学性质 酶解产物
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海洋低温α淀粉酶水解玉米淀粉及其产物生物活性 被引量:2
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作者 吕明生 王淑军 +4 位作者 房耀维 焦豫良 刘姝 刘媛 徐艳 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第23期152-156,共5页
本研究旨在开发适用于工业生产的新型酶制剂,采用研制的新型海洋低温α-淀粉酶,研究该酶水解玉米淀粉最佳工艺条件以及其产物特性。低温α-淀粉酶最佳的工艺条件为温度30℃、时间90 min、淀粉浓度4.5%、加酶量8 U/g、p H6.5。酶解产物通... 本研究旨在开发适用于工业生产的新型酶制剂,采用研制的新型海洋低温α-淀粉酶,研究该酶水解玉米淀粉最佳工艺条件以及其产物特性。低温α-淀粉酶最佳的工艺条件为温度30℃、时间90 min、淀粉浓度4.5%、加酶量8 U/g、p H6.5。酶解产物通过TLC和HPLC分析,酶解产物中主要为麦芽糖、麦芽三糖、异麦芽三糖、麦芽四糖和麦芽五糖,其中麦芽四糖和麦芽五糖的和达到69.62%。酶解产物对羟自由基和DPPH自由基均有清除作用,对羟自由基的清除效果要好于对DPPH自由基的清除。 展开更多
关键词 低温α-淀粉酶 玉米淀粉 酶解 羟自由基 DPPH自由基
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