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茶树β-葡萄糖苷酶基因mRNA的表达 被引量:18
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作者 李远华 江昌俊 余有本 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期103-106,共4页
采用原位杂交技术对茶树β葡萄糖苷酶基因mRNA的表达进行了研究。结果表明,β葡萄糖苷酶基因mRNA主要在茶树叶片栅栏组织、叶主脉的薄壁组织表达;不同品种之间的表达位置基本相似,但表达信号却有差异,以龙井43号最强,福鼎大白茶、槠叶... 采用原位杂交技术对茶树β葡萄糖苷酶基因mRNA的表达进行了研究。结果表明,β葡萄糖苷酶基因mRNA主要在茶树叶片栅栏组织、叶主脉的薄壁组织表达;不同品种之间的表达位置基本相似,但表达信号却有差异,以龙井43号最强,福鼎大白茶、槠叶齐次之,而大叶乌龙、迎霜最弱。结果还显示,不同季节的表达信号以春梢最强,秋梢次之,夏梢最弱。 展开更多
关键词 茶树 β-葡萄糖苷酶基因 表达 MRNA 原位杂交
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茶树叶片β-葡萄糖苷酶基因的原位PCR研究 被引量:6
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作者 李远华 江昌俊 余有本 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期147-150,共4页
关键词 茶树 β-葡萄糖苷酶基因 原位PCR
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两种茶树β-葡萄糖苷酶基因cDNA在原核中表达的研究 被引量:3
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作者 王让剑 江昌俊 +2 位作者 张正竹 李叶云 邓威威 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第4期102-105,116,共5页
采用原核表达系统pET-32a(+)载体和BL21trxB(DE3)菌株对两条茶树β-葡萄糖苷酶基因cDNA(GluⅠ和GluⅡ)进行了表达,研究了不同诱导时间、不同诱导温度对两个茶树β-葡萄糖苷酶表达量的影响并测定了两者的活性。表达分析结果表明,诱导6h... 采用原核表达系统pET-32a(+)载体和BL21trxB(DE3)菌株对两条茶树β-葡萄糖苷酶基因cDNA(GluⅠ和GluⅡ)进行了表达,研究了不同诱导时间、不同诱导温度对两个茶树β-葡萄糖苷酶表达量的影响并测定了两者的活性。表达分析结果表明,诱导6h、25℃时,GluⅠ在总蛋白中所占比例最高;诱导6h、37℃时,GluⅡ在总蛋白中所占比例最高,活性测定结果表明,两种表达蛋白均具有正常的β-葡萄糖苷酶活性,在相同的测定条件下,GluⅡ活性(0.310±0.03U·ml-1)比GluⅠ(0.234±0.03U·ml-1)活性更高。 展开更多
关键词 茶树 β-葡萄糖苷酶基因 CDNA 原核表达 活性
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绿色木霉β-葡萄糖苷酶基因在大肠杆菌中的克隆 被引量:1
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作者 刘颖 韩春然 +2 位作者 张帅 张玮玮 窦博鑫 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第24期177-180,共4页
以绿色木霉(Trichoderma viride)的总RNA为模板,根据GenBank上检索的β-葡萄糖苷酶基因bglⅠ(M55080)DNA序列,设计特异性引物,进行PT-PCR扩增bglⅠ片段,将其连接到pMD18-T载体并转化到大肠杆菌JM109测序。测序结果表明,所获得的DNA序列... 以绿色木霉(Trichoderma viride)的总RNA为模板,根据GenBank上检索的β-葡萄糖苷酶基因bglⅠ(M55080)DNA序列,设计特异性引物,进行PT-PCR扩增bglⅠ片段,将其连接到pMD18-T载体并转化到大肠杆菌JM109测序。测序结果表明,所获得的DNA序列与GenBank上检索的β-葡萄糖苷酶基因的核苷酸序列同源性达98.8%。 展开更多
关键词 绿色木霉 β-葡萄糖苷酶基因 大肠杆菌 克隆
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土壤宏基因组文库中3个新β-葡萄糖苷酶基因的克隆及其酶学特性 被引量:4
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作者 唐婧 苏迪 +2 位作者 袁帅 杨七 乙引 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2013年第4期14-18,共5页
为从喀斯特土壤宏基因组DNA中筛选获得新型β-葡萄糖苷酶基因,采用β-葡萄糖苷酶活性筛选策略,从宏基因组文库中筛选β-葡萄糖苷酶基因,并对其进行初步酶学性质分析。结果表明:构建宏基因组文库中外源DNA总量约为5.4×107bp,平均插... 为从喀斯特土壤宏基因组DNA中筛选获得新型β-葡萄糖苷酶基因,采用β-葡萄糖苷酶活性筛选策略,从宏基因组文库中筛选β-葡萄糖苷酶基因,并对其进行初步酶学性质分析。结果表明:构建宏基因组文库中外源DNA总量约为5.4×107bp,平均插入片段约为2.7kb。筛选获得3个编号为pGLU-001、pGLU-002和pGLU-003的表达β-葡萄糖苷酶活性的克隆。其外源片段分别包含有1 383bp、1 437bp和1 227bp的ORF,分别编码460、478和408氨基酸组成的蛋白质,PI分别为5.12、4.78和8.78,蛋白质分子量分别为52.3KD、52.6KD和47.7KD。BLAST软件分析结果,pGLU-001和pGLU-002分别与来自Di-ctyoglomus thermophilum和Bacillus subtilis TU-B-10的β-葡萄糖苷酶的氨基酸组成上有78.3%和66.7%的相似性,而pGLU-003经BLAST比对后未发现与目前报道的β-葡萄糖苷酶基因的核酸及氨基酸水平上有相似性,从而推测pGLU-003蛋白是来源于未培养微生物的新型β-葡萄糖苷酶。进一步酶学性质研究表明,3个β-葡萄糖苷酶最适温度分别约为30℃、40℃及50℃,最适pH分别约为6.0、9.0及10.0。Mg2+对3个酶有较强的促进作用,同时Zn2+对pGLU-001也有较强的促进作用,而EDTA和Fe3+对于3个酶都有不同程度的抑制作用。 展开更多
关键词 基因β-葡萄糖 喀斯特土壤 纤维素
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苹果树腐烂病菌β-葡萄糖苷酶基因的克隆及表达分析 被引量:4
6
作者 李婷 练森 +2 位作者 李保华 梁文星 王彩霞 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期78-84,共7页
为探究苹果树腐烂病菌β-葡萄糖苷酶基因VmGluI的序列特征及其在病菌侵染致病过程中的表达,以强致病力菌株LXS080601为材料,利用RT-PCR技术克隆基因c DNA序列,通过生物信息学软件对VmGluI编码蛋白的系统进化关系、理化性质和二级结构进... 为探究苹果树腐烂病菌β-葡萄糖苷酶基因VmGluI的序列特征及其在病菌侵染致病过程中的表达,以强致病力菌株LXS080601为材料,利用RT-PCR技术克隆基因c DNA序列,通过生物信息学软件对VmGluI编码蛋白的系统进化关系、理化性质和二级结构进行分析,采用实时荧光定量PCR技术测定VmGluI的表达量。结果显示,苹果树腐烂病菌VmGluI的开放阅读框为1 689 bp(GenBank登录号KY646110),编码562个氨基酸,蛋白分子量62.7 k Da。VmGluI编码的蛋白具有糖基水解酶1家族的保守功能域,其二级结构主要以α-螺旋和无规则卷曲为主,β-转角较少。VmGluI编码氨基酸序列与苹果和梨树腐烂病菌β-葡萄糖苷酶基因(KUI68239.1和KUI56905.1)同源性最高,分别为98.7%和87.8%,而与非植物病原真菌β-葡萄糖苷酶基因亲缘关系较远。接种苹果树腐烂病菌的富士枝条中,VmGluI显著上调表达,推测其在腐烂病菌侵染致病过程中起重要作用。离体枝条接种48 h后基因表达量开始显著升高,72 h时表达量最高为对照6.3倍;活体枝条接种12 h后,基因表达量已为对照的11.2倍,接种后48 h基因表达出现低谷,但96 h时表达量为对照的16.8倍,表明苹果树腐烂病菌在侵染离体和活体枝条过程中,VmGluI表达水平和时序变化存在明显差异。 展开更多
关键词 苹果树腐烂病菌 β-葡萄糖苷酶基因 基因克隆 生物信息学分析 基因表达
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茶树β-葡萄糖苷酶基因mRNA的表达(摘要)
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作者 李远华 《福建茶叶》 2007年第3期26-26,共1页
采用原位杂交技术对茶树β-葡萄糖苷酶基因mRNA的表达进行了研究。结果表明,β-葡萄糖苷酶基因mRNA主要在茶树叶片栅栏组织、叶主脉的薄壁组织表达;不同品种之间的表达位置基本相似,但表达信号却有差异,以龙井43号最强,福鼎大白茶... 采用原位杂交技术对茶树β-葡萄糖苷酶基因mRNA的表达进行了研究。结果表明,β-葡萄糖苷酶基因mRNA主要在茶树叶片栅栏组织、叶主脉的薄壁组织表达;不同品种之间的表达位置基本相似,但表达信号却有差异,以龙井43号最强,福鼎大白茶、槠叶齐次之,而大叶乌龙、迎霜最弱。结果还显示,不同季节的表达信号以春梢最强,秋梢次之,夏梢最弱。 展开更多
关键词 β-葡萄糖苷酶基因 MRNA 茶树叶片 摘要 原位杂交技术 龙井43号 福鼎大白茶 栅栏组织
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黑曲霉NRRL3135 bgl基因的克隆及序列分析
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作者 陈俊 杨之帆 +1 位作者 刘晓黎 方登科 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期208-215,共8页
利用RT-PCR技术从黑曲霉菌株NRRL3135中扩增了β-葡萄糖苷酶(BGL)基因的全长cDNA序列,被命名为bgl3135(GenBank登录号:FN430671)。对该基因编码的BGL进行了同源性分析并预测了其三维构象。试验结果表明,bgl3135的全长cDNA为2598bp,含有... 利用RT-PCR技术从黑曲霉菌株NRRL3135中扩增了β-葡萄糖苷酶(BGL)基因的全长cDNA序列,被命名为bgl3135(GenBank登录号:FN430671)。对该基因编码的BGL进行了同源性分析并预测了其三维构象。试验结果表明,bgl3135的全长cDNA为2598bp,含有一个2583bp的开放阅读框(ORF),编码一个长度为860个氨基酸残基的蛋白质。同源性分析表明,该基因编码的蛋白与来自黑曲霉As3.350和CBS513.88的BGL(GenBank登录号分别为DQ655704和XM_001398779)的相似性最高,其氨基酸序列同源性分别达99%。参照已发表的β-葡萄糖苷酶(BGL)的氨基酸保守序列,判断本研究所克隆的bgl基因属于糖苷水解酶基因家族3的成员。三维结构预测表明,该BGL的立体构象中存在20个α-螺旋和15个β-折叠,对构成和维持酶的底物识别和催化活性位点可能起着重要作用。 展开更多
关键词 β-葡萄糖苷酶基因 RT—PCR 基因克隆序列分析
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桂花扩展蛋白基因OfEXPA2、OfEXPA4和OfEXLA1启动子克隆及活性分析 被引量:3
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作者 高晓月 董彬 +4 位作者 张超 付建新 胡绍庆 赵宏波 梁立军 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期23-29,共7页
为研究扩展蛋白基因在桂花花开放过程中的作用机制,利用染色体步移法,从桂花(Osmanthus fragrans)中克隆得到花开放相关基因OfEXPA2、OfEXPA4和OfEXLA1起始密码子上游1 108、808、945 bp的启动子序列。利用在线数据库Plantcare预测启动... 为研究扩展蛋白基因在桂花花开放过程中的作用机制,利用染色体步移法,从桂花(Osmanthus fragrans)中克隆得到花开放相关基因OfEXPA2、OfEXPA4和OfEXLA1起始密码子上游1 108、808、945 bp的启动子序列。利用在线数据库Plantcare预测启动子中的顺式作用元件,发现这3个启动子序列中均存在基本元件TATA盒和CAAT盒,还含有脱落酸、生长素、水杨酸等激素诱导元件及响应干旱、高温等多个与植物非生物胁迫相关的元件,如MBS、HSE。分别将这3个启动子与β-葡萄糖苷酸酶(β-glucuronidase, GUS)报告基因融合进行瞬时表达,结果显示:OfEXPA2、OfEXPA4和OfEXLA1的启动子均能够驱动GUS基因在转基因烟草叶片中的表达。 展开更多
关键词 桂花 扩展蛋白基因 启动子 β-葡萄糖基因
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