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α-银环蛇毒素基因的克隆及其非融合型原核表达 被引量:5
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作者 胡延春 张乃生 +3 位作者 邓俊良 左之才 廖玉辉 欧阳红生 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期463-469,共7页
根据文献报道α-银环蛇毒素的氨基酸序列推导出其DNA序列,设计并人工合成两两互补的14条寡核苷酸片段。经片段延伸、PCR、克隆,成功构建α-银环蛇毒素基因克隆质粒;质粒经XbaⅠ和EcoRⅠ双酶切回收后连接于表达载体pET28a(+)中,分别转化B... 根据文献报道α-银环蛇毒素的氨基酸序列推导出其DNA序列,设计并人工合成两两互补的14条寡核苷酸片段。经片段延伸、PCR、克隆,成功构建α-银环蛇毒素基因克隆质粒;质粒经XbaⅠ和EcoRⅠ双酶切回收后连接于表达载体pET28a(+)中,分别转化BL21(DE3)、BL21(DE3)Codon plus、BL21(DE3)plysS进行诱导表达,表达产物经Tris/tricine系统进行SDS-PAGE分析。结果表明:该基因已在大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌中进行了非融合表达,其表达量占细菌总蛋白的11.98%,主要以包涵体形式存在;同时对表达条件进行了优化,其表达量可达16.28%。经Western blot分析,在大约8 kDa处出现明显的目的带,与预计蛋白分子量大小一致,说明表达产物与天然α-银环蛇毒素具有相似的免疫原性。表达产物纯化、复性后经动物毒性试验表明:表达的α-银环蛇毒素蛋白具有生物学活性,小鼠腹腔注射其LD50约为1.28μg/g。 展开更多
关键词 α-银环蛇毒素 基因克隆 非融合原核表达 免疫原性 生物学活性
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重组α-银环蛇毒素的纯化及活性分析 被引量:3
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作者 段海清 张兆山 +1 位作者 李淑琴 黄翠芬 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第5期747-751,共5页
以表达重组α-银环蛇毒素的高效表达菌株BL21(PDZ04)为材料,研究重组α-银环蛇毒素(α-bungarotoxin,α-BgTx)的分离纯化.采取亲和色谱和离子交换色谱的方法都得到了重组α-银环蛇毒素的纯品.首先从天然的银环蛇毒干粉中分离纯化得到了... 以表达重组α-银环蛇毒素的高效表达菌株BL21(PDZ04)为材料,研究重组α-银环蛇毒素(α-bungarotoxin,α-BgTx)的分离纯化.采取亲和色谱和离子交换色谱的方法都得到了重组α-银环蛇毒素的纯品.首先从天然的银环蛇毒干粉中分离纯化得到了天然α-银环蛇毒素的纯品.然后以天然α-银环蛇毒素为对照来检测重组α-银环蛇毒素的抗原性和毒性.ELISA结果显示其具有与天然α-银环蛇毒素相似的抗原性,以小鼠为动物模型,纯化的重组α-银环蛇毒素与天然α-银环蛇毒素相比,其腹腔注射的LD50也基本一致,约为0.22μg/g.结果表明利用基因工程的方法生产蛇神经毒素是可行的. 展开更多
关键词 蛇神经毒素 重组 α-银环蛇毒素 纯化 生物活性
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α-银环蛇毒素对中枢烟碱诱发小鼠惊厥效应的影响
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作者 刘洁生 杨子江 彭志英 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 1997年第5期78-83,共6页
100μg/kgα-银环蛇毒素(α-Bungarotoxin,α-BGT)对大鼠脑室内注射烟碱50μg/kg引起的惊厥反应的抑制率为40%,d-筒箭毒ED50为12.7μg/kg,六烃季胺ED50为228.2μg/k... 100μg/kgα-银环蛇毒素(α-Bungarotoxin,α-BGT)对大鼠脑室内注射烟碱50μg/kg引起的惊厥反应的抑制率为40%,d-筒箭毒ED50为12.7μg/kg,六烃季胺ED50为228.2μg/kg.在人工呼吸条件下,以烟碱引起的脑皮层电图去同步化为指标,130μg/kgα-BGT对烟碱效应的抑制率可达60%,烟碱引起脑皮层电图低频区域的变化受到α-BGT的明显影响. 展开更多
关键词 α-银环蛇毒素 烟碱 惊厥 脑皮层电图
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中枢神经系统烟碱受体:性质的多样性,功能的未知性 被引量:4
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作者 刘振伟 刘传缋 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期149-152,共4页
中枢神经系统烟碱受体其药理学和生理学性质表现为多样性特点。位于突触前的烟碱受体具有调节突触传递的作用。中枢由烟碱受体介导的功能性快突触传递 ,长期以来 (自 1966年 )已经明确的只存在于脊髓前角运动神经元与闰绍细胞间 ,只是... 中枢神经系统烟碱受体其药理学和生理学性质表现为多样性特点。位于突触前的烟碱受体具有调节突触传递的作用。中枢由烟碱受体介导的功能性快突触传递 ,长期以来 (自 1966年 )已经明确的只存在于脊髓前角运动神经元与闰绍细胞间 ,只是到最近 ( 1998年 )才在脑中发现。尽管如此 ,中枢神经系统尤其是脑内的烟碱受体 ,其生理功能目前仍然是个谜。 展开更多
关键词 烟碱受体 中枢神经系统 α-银环蛇毒素 快突触传递
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