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嗜热芽胞杆菌α-环糊精葡萄糖基转移酶在枯草芽胞杆菌中的表达 被引量：7
1
作者 陈龙军 林陈强 +3 位作者 张慧 贾宪波 方宇 陈济琛 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期600-605,共6页
【目的】构建分泌表达α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGTase)的重组枯草芽胞杆菌,实现α-CGTase的安全高效表达。【方法】通过PCR法扩增嗜热地芽胞杆菌α-CGTase基因,运用EcoRI/XhoI分别对α-CGTase基因及pBES进行双酶切,然后将该基因片... 【目的】构建分泌表达α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGTase)的重组枯草芽胞杆菌,实现α-CGTase的安全高效表达。【方法】通过PCR法扩增嗜热地芽胞杆菌α-CGTase基因,运用EcoRI/XhoI分别对α-CGTase基因及pBES进行双酶切,然后将该基因片段插入到大肠杆菌-枯草芽胞杆菌穿梭载体pBES中,再电转化法转化枯草芽胞杆菌RIK1285;对重组枯草芽胞杆菌B.subtilisRIK1285/pBE-CGT发酵条件进行探索。【结果】(1)利用发酵培养基分泌表达α-CGTase,重组枯草芽胞杆菌工程菌B.subtilisRIK1285/pBE-CGT发酵上清液产酶达到2.9U·mL-1。(2)TB为最适发酵培养基(配方:甘油0.5%,蛋白胨1.2%,酵母粉2.4%,K2HPO41.64%,KH2PO40.23%);在初始pH6.5,温度为37℃下,摇瓶发酵培养24h后,α-环糊精酶的环化活性达到5.3U·mL-1,是野生菌株嗜热地芽胞杆菌(0.66U·mL-1)的8倍。【结论】成功构建了枯草芽胞杆菌B.subtilisRIK1285/pBE-CGT工程菌,并确定其最适发酵培养基和培养条件。 展开更多
关键词 枯草杆菌工程菌 α-环糊精葡萄糖基转移酶 表达 优化
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α-环糊精葡萄糖基转移酶菌株的筛选与鉴定 被引量：3
2
作者 张智维 雷新辉 张海群 《陕西科技大学学报（自然科学版）》 2012年第6期89-92,共4页
从富含淀粉的土样中,初筛出22株产α-环糊精葡萄糖基转移酶菌株,然后用透明圈法筛选出3株酶活力较高的菌株,最后绘制酶活力曲线,得到一株酶活力为0.64U/mL的菌株N1.通过菌落形态、显微观察和生理生化特性,鉴定N1为肠杆菌科的产酸克雷伯... 从富含淀粉的土样中,初筛出22株产α-环糊精葡萄糖基转移酶菌株,然后用透明圈法筛选出3株酶活力较高的菌株,最后绘制酶活力曲线,得到一株酶活力为0.64U/mL的菌株N1.通过菌落形态、显微观察和生理生化特性,鉴定N1为肠杆菌科的产酸克雷伯氏菌. 展开更多
关键词 α-环糊精葡萄糖基转移酶 筛选 鉴定 酶活力
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α-环糊精葡萄糖基转移酶高产菌株YLW-8的鉴定 被引量：1
3
作者 邓媛 李皎 +2 位作者 杨国武 毛勇 汪大敏 《陕西农业科学》 2015年第12期1-4,共4页
[目的]鉴定α-环糊精葡萄糖基转移酶高产菌株YLW-8。[方法]通过分析YLW-8菌株的形态、生理生化反应及16Sr DNA基因序列鉴定菌株的种类,并对YLW-8产α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGTase)基因进行序列测定和同源性分析。[结果]菌株YLW-8根... [目的]鉴定α-环糊精葡萄糖基转移酶高产菌株YLW-8。[方法]通过分析YLW-8菌株的形态、生理生化反应及16Sr DNA基因序列鉴定菌株的种类,并对YLW-8产α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGTase)基因进行序列测定和同源性分析。[结果]菌株YLW-8根据形态、生理生化反应初步鉴定其属于芽孢杆菌属(Bacillus),其16Sr DNA基因序列(Gen Bank登录号为KF010776)与多粘芽孢杆菌同源性高达99%以上。结合形态、生理生化特性以及16Sr DNA序列分析,鉴定YLW-8菌株为多粘芽孢杆菌(Paenibacillus)。YLW-8产α-CGTase基因测序结果在NCBI中进行比对,与Paenibacillus macerans的α-CGTase基因的同源性为99%(GenBank登录号为KF010775)。[结论]该研究为后续α-CD工业化生产研究提供技术参数和理论依据。 展开更多
关键词 α-环糊精葡萄糖基转移酶 α-环糊精 菌种鉴定 基因测序
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基因工程大肠杆菌发酵生产α-环糊精葡萄糖基转移酶的培养基优化 被引量：1
4
作者 张江 李啸 杜浪 《天津农业科学》 CAS 2012年第6期73-77,共5页
对基因工程大肠杆菌发酵生产α-环糊精葡萄糖基转移酶的培养基进行了优化,首先通过单因素试验,挑选出对菌株产酶有较大影响的因子及浓度范围,再通过两水平析因试验和最陡爬坡试验确定显著影响因子和浓度拐点,最后采用响应面分析法确定... 对基因工程大肠杆菌发酵生产α-环糊精葡萄糖基转移酶的培养基进行了优化,首先通过单因素试验,挑选出对菌株产酶有较大影响的因子及浓度范围,再通过两水平析因试验和最陡爬坡试验确定显著影响因子和浓度拐点,最后采用响应面分析法确定得到培养基成分的最佳配比为:甘油10.74g·L-1,酵母提取物51.85g·L-1,酵母蛋白胨10g·L-1,磷酸氢二钾22.82g·L-1,磷酸二氢钾2.85g·L-1。与原始培养基生产水平相比,采用优化培养基后,酶活提高了48.4%。 展开更多
关键词 基因工程 大肠杆菌 α-环糊精葡萄糖基转移酶 最陡爬坡试验 响应面设计
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金属离子对重组大肠杆菌发酵生产α-环糊精葡萄糖基转移酶的影响 被引量：5
5
作者 罗宇笛 李啸 +1 位作者 张江 石小丹 《天津农业科学》 CAS 2014年第12期10-15,共6页
本文研究了金属离子对α-环糊精葡萄糖基转移酶发酵生产的影响。首先,采用单因素分析确定几种微量元素的最佳产酶浓度;其次,通过两水平析因试验确定了关键的影响因子及其最大响应区域,其分别是Mg SO4·7H2O,Fe SO4·7H2O,MnSO4&... 本文研究了金属离子对α-环糊精葡萄糖基转移酶发酵生产的影响。首先,采用单因素分析确定几种微量元素的最佳产酶浓度;其次,通过两水平析因试验确定了关键的影响因子及其最大响应区域,其分别是Mg SO4·7H2O,Fe SO4·7H2O,MnSO4·H2O;最后,通过Box-Benhnken中心组合试验建立数学模型,并采用响应面分析法获得了微量元素的最优配比参数为:MgSO4·7H2O 10.94 mmol·L-1,Fe SO4·7H2O 6.48 mmol·L-1,Mn SO4·H2O 0.51 mmol·L-1,Ca Cl2·5H2O 3 mmol·L-1。与对照组相比,酶活提高了1.4倍。 展开更多
关键词 大肠杆菌 α-环糊精葡萄糖基转移酶 金属离子 响应面设计
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产α-环糊精葡萄糖基转移酶的菌株筛选、鉴定与酶学性质的初步研究 被引量：5
6
作者 陶大炜 宁喜斌 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期145-151,共7页
从上海浦东新区新场镇某农场种植田筛选出1株高产α-环糊精葡萄糖基转移酶的菌株,初步研究其酶学性质,以获得有良好热稳定性和pH稳定性的酶。通过形态学特征、生理生化试验鉴定和16S rRNA序列比对分析,确定该菌株为浸麻类芽孢杆菌(Paeni... 从上海浦东新区新场镇某农场种植田筛选出1株高产α-环糊精葡萄糖基转移酶的菌株,初步研究其酶学性质,以获得有良好热稳定性和pH稳定性的酶。通过形态学特征、生理生化试验鉴定和16S rRNA序列比对分析,确定该菌株为浸麻类芽孢杆菌(Paenibacillus macerans),命名为P.macerans TLLY7。酶学性质测定结果表明,该酶的酶活性为1.35 U/mL,其最适反应温度为50℃、最适反应pH值为6.0,并且在40~45℃、pH 6.0~9.0稳定性良好。Ca^(2+)、Mn^(2+)和Zn^(2+)对酶表现出促进作用,Fe^(2+)、Cu^(2+)和Co^(2+)则对该酶表现出抑制作用。其中Ca^(2+)对酶的促进作用最强,酶活性促进率为25%,Cu^(2+)对酶的抑制作用最强,酶活性抑制率为33%。K^(+)、Mg^(2+)对酶活性的影响较小。菌株TLLY7所产α-环糊精葡萄糖基转移酶的酶学性质初步研究表明其具有深入研究的价值和应用的潜力。 展开更多
关键词 α-环糊精葡萄糖基转移酶 菌株筛选 分离鉴定 浸麻类芽孢杆菌 酶学性质
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复合诱变选育高产α-环糊精葡萄糖基转移酶的菌株及产酶条件优化 被引量：3
7
作者 陶大炜 张小丹 +1 位作者 宁喜斌 孙梦洁 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2021年第19期63-70,共8页
对出发菌株Paenibacillus macerans TLLY7进行紫外-微波复合诱变,以获得高产α-环糊精葡萄糖基转移酶的菌株,并用响应面法优化复合诱变菌株的发酵条件来提高酶活力。确定了紫外、微波诱变的最佳条件:20 W紫外灯照射70 s,微波低火档辐照6... 对出发菌株Paenibacillus macerans TLLY7进行紫外-微波复合诱变,以获得高产α-环糊精葡萄糖基转移酶的菌株,并用响应面法优化复合诱变菌株的发酵条件来提高酶活力。确定了紫外、微波诱变的最佳条件:20 W紫外灯照射70 s,微波低火档辐照60 s。筛选出复合诱变菌株UM2-6,经过8次连续传代培养,验证其遗传性能较稳定,菌株酶活力可达3.09 U/mL,是出发菌株酶活力(1.35 U/mL)的2.29倍。在单因素试验的基础上,通过Plackett-Burman试验筛选出影响发酵的3个显著性因素:培养温度、初始pH、接种量,设计Box-Behnken中心组合试验确定菌株最优发酵条件。结果表明,最佳发酵培养基成分为可溶性淀粉10 g/L、酵母浸粉10 g/L、NaCl_(2)g/L、CaCl_(2)0.2 g/L、K_(2)HPO 4·3H_(2)O 1 g/L,最佳发酵条件为培养温度37.1℃、初始pH 6.9、接种量4%,此时突变菌株UM2-6产α-环糊精葡萄糖基转移酶的酶活力为4.19 U/mL,为优化之前酶活力(3.09 U/mL)的1.36倍。该研究为进一步工业化开发利用性状稳定且高产α-环糊精葡萄糖基转移酶的菌株提供了借鉴。 展开更多
关键词 复合诱变 紫外诱变 微波诱变 α-环糊精葡萄糖基转移酶 发酵条件优化
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环糊精葡萄糖基转移酶催化莱鲍迪苷A糖基化短链产物特异性研究
8
作者 樊朝悦 倪晔 +1 位作者 刘思言 韩瑞枝 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第5期29-35,共7页
莱鲍迪苷A(rebaudioside A,RA)是从甜叶菊中提取的一类低热量甜味剂,被认为是理想的蔗糖替代品,但其令人不愉快的后苦味限制了其在食品领域的应用。对RA进行适度酶法糖基化被认为是减缓其后苦味有效的方法之一。环糊精葡萄糖基转移酶(cy... 莱鲍迪苷A(rebaudioside A,RA)是从甜叶菊中提取的一类低热量甜味剂,被认为是理想的蔗糖替代品,但其令人不愉快的后苦味限制了其在食品领域的应用。对RA进行适度酶法糖基化被认为是减缓其后苦味有效的方法之一。环糊精葡萄糖基转移酶(cyclodextrin glucosyltransferase,CGTase)是目前催化RA糖基化最常用的酶,其主要缺点是反应生成的产物复杂多样,尤其是长链糖基化产物的占比较高,严重影响了产物的口感和品质。该研究探索了不同来源的CGTase催化RA糖基化反应,选择转化率及短链产物特异性均较好的α-CGTase(来源于Paenibacillus macerans)进行研究。通过酶学性质研究及反应条件优化,获得最佳反应条件:以pH 6.0的PBS为反应介质,水溶性淀粉为糖基供体,底物质量比为RA∶水溶性淀粉=1∶1,加酶量25μg/mL,40℃下反应12 h可达平衡,RA的转化率最高达到74.8%,短链产物(RA-nG,n≤2)占总产物的占比为86.5%,较优化前提高了10%。因此,在此条件下可有效提高短链糖苷化RA的特异性,在甜菊糖苷的工业应用中具有更大的潜力。 展开更多
关键词 莱鲍迪苷A 甜菊糖苷 糖基化 环糊精葡萄糖基转移酶 短链产物特异性
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产环糊精葡萄糖基转移酶的菌株选育及酶分子改造研究进展 被引量：2
9
作者 陶大炜 张颖琦 赵赛赛 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第15期359-371,共13页
环糊精(cyclodextrin,CD)因其内疏水外亲水的特殊结构被广泛运用,而酶法制备CD是常用方法,主要应用环糊精葡萄糖基转移酶(cyclodextrin glycosyltransferase,CGT酶)。该文对产CGT酶的菌株选育和酶分子改造这两方面进行综述,重点讨论提... 环糊精(cyclodextrin,CD)因其内疏水外亲水的特殊结构被广泛运用,而酶法制备CD是常用方法,主要应用环糊精葡萄糖基转移酶(cyclodextrin glycosyltransferase,CGT酶)。该文对产CGT酶的菌株选育和酶分子改造这两方面进行综述,重点讨论提升酶表达量的4种异源表达常用优化策略:产酶条件优化、信号肽选择、启动子优化、密码子优化,以及定点突变、定点饱和突变、易错PCR这3种常用的酶分子改造方法对酶相关特性的影响。 展开更多
关键词 环糊精葡萄糖基转移酶 诱变育种 异源表达 分子改造
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环糊精葡萄糖基转移酶my20结构域删除突变体的表达和酶学性能
10
作者 孙腾腾 王伟 +2 位作者 孙晶晶 江承程 郝建华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第20期154-160,共7页
本实验以海洋来源的环糊精葡萄糖基转移酶(cyclodextrin glycosyltransferase,CGTase)my20为研究对象,构建了D、E以及DE结构域截短突变体,通过pET-24a载体和宿主菌E.coli BL21(DE3)进行异源表达,并利用镍亲和层析柱纯化得到纯酶。以my2... 本实验以海洋来源的环糊精葡萄糖基转移酶(cyclodextrin glycosyltransferase,CGTase)my20为研究对象,构建了D、E以及DE结构域截短突变体,通过pET-24a载体和宿主菌E.coli BL21(DE3)进行异源表达,并利用镍亲和层析柱纯化得到纯酶。以my20环化比活力为100%计,my20ΔD、my20ΔE、my20ΔDE相对环化活力分别约为197%、22%、17%,表明E结构域是CGTase催化环化反应的重要结构域,D结构域的存在可能降低了底物分子进入催化结构域的能力。my20为耐热酶,3种截短突变酶相较之下耐热性均有不同程度的降低,说明D、E结构域在CGTase耐热性方面具有重要的作用。my20在缺失了DE结构域后,催化产物中α-环糊精占比相较其他截短酶提升约8%,表明缺失DE结构域影响其产物的特异性。本实验结果可为CGTase通过结构域改造在工业生产方面发挥作用提供一定的理论基础。 展开更多
关键词 环糊精葡萄糖基转移酶 结构域 环化活力 酶学性质
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Bacillussp.HA-1产环糊精葡萄糖基转移酶发酵工艺研究 被引量：16
11
作者 王雁萍 谈重芳 +3 位作者 段宇珩 秦广雍 许平辉 霍裕平 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期12-15,共4页
在10 L 发酵罐中,研究了环糊精葡萄糖基转移酶产生菌 Bacillus sp．HA-1的发酵规律,结果表明,在菌体对数增长期,发酵液溶氧处于较低状态,发酵液 pH 在对数增长前期持续下降,中期后回升,菌体产酶呈增长趋势；当菌体增长进入稳定期,发酵... 在10 L 发酵罐中,研究了环糊精葡萄糖基转移酶产生菌 Bacillus sp．HA-1的发酵规律,结果表明,在菌体对数增长期,发酵液溶氧处于较低状态,发酵液 pH 在对数增长前期持续下降,中期后回升,菌体产酶呈增长趋势；当菌体增长进入稳定期,发酵液溶氧迅速回升至初始状态,pH 也回升至起始值,菌体产酶接近峰值。根据发酵规律优化发酵工艺,通过有效增加菌体对数增长期发酵液溶氧,使菌株产酶到达高峰的时间缩短了 50%以上。应用该菌株在5 m^3生产罐中发酵,24 h 产酶水平达到6 800 IU/mL。 展开更多
关键词 环糊精葡萄糖基转移酶 发酵规律 发酵工艺
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重组β-环糊精葡萄糖基转移酶生产β-环糊精的工艺条件优化 被引量：7
12
作者 杨玉路 王蕾 +1 位作者 陈晟 吴敬 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期175-181,共7页
将来自于Bacillus circulans 251的β-CGTase编码基因克隆到表达载体pET-20b(+),转化Escherichia coli BL21(DE3)。经酶活检测培养基上清中的β-CGTase酶活为20 U/mL。对酶转化淀粉生成β-环糊精的反应条件进行了优化,结果表明,当底物... 将来自于Bacillus circulans 251的β-CGTase编码基因克隆到表达载体pET-20b(+),转化Escherichia coli BL21(DE3)。经酶活检测培养基上清中的β-CGTase酶活为20 U/mL。对酶转化淀粉生成β-环糊精的反应条件进行了优化,结果表明,当底物马铃薯淀粉浓度15%,反应初始pH5.5,温度30℃,加酶量10 U/g干淀粉,环己烷浓度2.5%-5%(V/V),转化周期24 h,β-环糊精转化率达到最高值75.3%,是国内外报道的酶法生产β-环糊精的最高水平。 展开更多
关键词 环糊精葡萄糖基转移酶 Β-环糊精 酶转化 重组表达 淀粉
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金属离子协同氨基酸提高重组β-环糊精葡萄糖基转移酶在枯草芽孢杆菌中的表达 被引量：4
13
作者 李才明 黄敏 +4 位作者 石建中 顾正彪 洪雁 程力 李兆丰 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1-8,共8页
随着环糊精的应用越来越广,其生产所必需的环糊精葡萄糖基转移酶(EC 2.4.1.19,简称CGT酶)已成为研究热点。为了克服天然菌种产环糊精葡萄糖基转移酶(CGT)能力低等缺陷,该文将来源于Bacillus circulans STB01的β-CGT酶基因插入质粒p ST... 随着环糊精的应用越来越广,其生产所必需的环糊精葡萄糖基转移酶(EC 2.4.1.19,简称CGT酶)已成为研究热点。为了克服天然菌种产环糊精葡萄糖基转移酶(CGT)能力低等缺陷,该文将来源于Bacillus circulans STB01的β-CGT酶基因插入质粒p ST中,构建了分泌型表达载体cgt/p ST并在宿主B.subtilis WB600中成功表达;通过对摇瓶发酵产CGT酶的条件进行优化发现,当发酵培养基为TB,p H为7.0时,37℃培养48 h后胞外酶活力达到27.9 U/m L,与天然菌株B.circulans STB01在较优发酵条件下所分泌的胞外酶活力相比,提高了近19倍;对TB培养基碳源、氮源进一步优化,以6 g/L的玉米淀粉替代TB培养基中的甘油,以30 g/L的酵母提取物作为氮源,胞外酶活可达到31.2 U/m L;亮氨酸、天冬氨酸的添加能明显促进β-CGT酶的胞外表达,而0.5mmol/L Fe3+的添加能进一步将胞外酶活提高到36.9 U/m L。这是目前报道的β-CGT酶在B.subtilis中胞外表达的最高β-环化活力。 展开更多
关键词 环糊精葡萄糖基转移酶 枯草芽孢杆菌 分泌表达 金属离子 氨基酸
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β-环糊精葡萄糖基转移酶高产菌株MS-UD2的选育及产酶条件的研究 被引量：2
14
作者 郭利伟 王卫卫 +1 位作者 陈兴都 李端 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第12期439-443,共5页
采用紫外线、硫酸二乙酯和UV+DES复合诱变,对一株产环糊精葡萄糖基转移酶的嗜碱芽孢杆菌IS进行诱变育种,获得了产酶能力是出发菌株2.96倍且产酶性能稳定的高产菌株MS-UD2,并利用单因素分析和正交试验获得突变株的最佳产酶培养基组成为:... 采用紫外线、硫酸二乙酯和UV+DES复合诱变,对一株产环糊精葡萄糖基转移酶的嗜碱芽孢杆菌IS进行诱变育种,获得了产酶能力是出发菌株2.96倍且产酶性能稳定的高产菌株MS-UD2,并利用单因素分析和正交试验获得突变株的最佳产酶培养基组成为:玉米粉2.0%、玉米浆6.0%、K2HPO4 0.15%、MgSO4·7H2O 0.02%;在温度28℃、pH10.0、接种量8%、250ml三角瓶装液量为50ml的发酵条件下,180r/min二级摇瓶振荡培养36h产酶活力达5741.6U/ml。5L发酵罐36h产环糊精葡萄糖基转移酶活力为5920.0U/ml。 展开更多
关键词 嗜碱芽孢杆菌 环糊精葡萄糖基转移酶 诱变育种 条件优化
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产β-环糊精葡萄糖基转移酶高温菌株HY15发酵条件优化 被引量：3
15
作者 曹冬梅 胡耀辉 《中国酿造》 CAS 2013年第10期40-43,共4页
以一株产β-环糊精葡萄糖基转移酶(β-CGTase)的嗜热菌株HY15为研究对象,采用单因素试验研究碳源、氮源、初始pH值、培养温度、MgSO4·7H2O等对酶活力影响。并设计正交试验优化其发酵条件。结果表明最优的发酵条件为:碳源为玉米淀粉... 以一株产β-环糊精葡萄糖基转移酶(β-CGTase)的嗜热菌株HY15为研究对象,采用单因素试验研究碳源、氮源、初始pH值、培养温度、MgSO4·7H2O等对酶活力影响。并设计正交试验优化其发酵条件。结果表明最优的发酵条件为:碳源为玉米淀粉+糖蜜,氮源为玉米浆,初始pH7.0,培养温度60℃、摇床转速220r/min,MgSO4浓度10mmol/L,在此条件下,β-CGTase酶活力可达1794.3U/mL。 展开更多
关键词 β-环糊精葡萄糖基转移酶 发酵条件 优化
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基于响应面法优化HY15发酵生产β-环糊精葡萄糖基转移酶的发酵条件 被引量：2
16
作者 曹冬梅 胡耀辉 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期97-100,共4页
为了提高β-环糊精葡萄糖基转移酶产酶活力,应用Plackett-Burman设计法对影响高温菌株HY15发酵的10个因素进行了筛选,确定了主要影响因素,然后通过响应面法优化了各因素的最优质量浓度,建立了β-环糊精葡萄糖基转移酶产率的二次多项式... 为了提高β-环糊精葡萄糖基转移酶产酶活力,应用Plackett-Burman设计法对影响高温菌株HY15发酵的10个因素进行了筛选,确定了主要影响因素,然后通过响应面法优化了各因素的最优质量浓度,建立了β-环糊精葡萄糖基转移酶产率的二次多项式数学模型,并分析了模型的有效性与因子间的交互作用。结果表明:影响β-环糊精葡萄糖基转移酶产率的主要因素及其最优质量浓度为:糖蜜+玉米淀粉22.45 g/L,K2HPO40.97 g/L,MgSO40.18 g/L,玉米浆+酵母21.82 g/L,pH值6.98。在优化后的培养基条件下,β-环糊精葡萄糖基转移酶酶活力达到1 409.70 U/mL,验证值1401.81 U/mL,二者吻合较好。 展开更多
关键词 β-环糊精葡萄糖基转移酶 高温菌株HY15 响应面法 发酵
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β-环糊精葡萄糖基转移酶突变基因的表达及突变酶酶学性质分析
17
作者 王华 李华 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第13期180-183,188,共5页
通过对已构建的β-CGTase质粒载体采用一步PCR法进行大片段基因的定点突变,得到三个带有突变位点的质粒载体,并将其进行转化得到突变菌株。分析突变酶的酶学性质并与β-环糊精葡萄糖基转移酶比较,结果表明突变酶酶活力提高到原酶活力的... 通过对已构建的β-CGTase质粒载体采用一步PCR法进行大片段基因的定点突变,得到三个带有突变位点的质粒载体,并将其进行转化得到突变菌株。分析突变酶的酶学性质并与β-环糊精葡萄糖基转移酶比较,结果表明突变酶酶活力提高到原酶活力的1.6倍以上,且突变酶作用的最适温度60℃、最适p H6.0、在60℃下和p H5~8范围内均非常稳定,经方差分析突变酶与原酶的酶学性质差异不显著（p〉0.05）,但是酶活力差异显著（p〈0.05）。 展开更多
关键词 β-环糊精葡糖糖基转移酶 定点突变 环化活性 温度 p H
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环糊精葡萄糖基转移酶生产α-熊果苷的反应条件优化及分子改造 被引量：2
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作者 张文蕾 宿玲恰 +1 位作者 陶秀梅 吴敬 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期49-53,共5页
选择4种环糊精葡萄糖基转移酶(CGTase)分别为来源于Paenibacillus macerans的α-CGTase,Bacillus circulans 251的β-CGTase,Bacillus stearothermophilus NO_2和Anaerobranca gottschalkii的α/β-CGTase,研究不同种类的CGTase生产α-... 选择4种环糊精葡萄糖基转移酶(CGTase)分别为来源于Paenibacillus macerans的α-CGTase,Bacillus circulans 251的β-CGTase,Bacillus stearothermophilus NO_2和Anaerobranca gottschalkii的α/β-CGTase,研究不同种类的CGTase生产α-熊果苷的情况。以麦芽糊精为供体,对苯二酚(Hydroquinone HQ)为受体,通过CGTase和淀粉葡萄糖苷酶的两步酶法反应催化合成α-熊果苷。分别优化不同类型的酶合成α-熊果苷的条件,发现Anaerobranca gottschalkii来源的CGTase在如下最优条件下获得的HQ摩尔转化率最高,为25%:以葡萄糖当量(DE)值为9%~13%的50 g/L麦芽糊精作为供体,8 g/L HQ为受体,缓冲液pH 6.0,在40℃下反应24 h,沸水浴灭活后,加入糖化酶处理,高效液相色谱检测产物。为了进一步提高CGTase对底物的转化率,利用定点突变技术对A.gottschalkii CGTase进行分子改造,得到1个突变体Y299A,在最优的反应条件下突变体的HQ转化率可达40%。 展开更多
关键词 环糊精葡萄糖基转移酶 α-熊果苷 酶催化 定点突变
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产β-环糊精葡萄糖基转移酶菌株的筛选、鉴定及酶学性质 被引量：2
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作者 陈希 王淑芬 +1 位作者 王天赐 吴华伟 《湖北农业科学》 北大核心 2014年第8期1891-1894,共4页
利用环糊精葡萄糖基转移酶（CGTase）快速筛选法从枝江酒业的酵泥中筛选获得11株CGTase产生菌。用酚酞法测定所得11株菌株的酶活,最终得到β-CGTase酶活最高的一株菌株,命名为Hhj-1。通过对菌株的形态观察以及16S rDNA测定,并建立该菌... 利用环糊精葡萄糖基转移酶（CGTase）快速筛选法从枝江酒业的酵泥中筛选获得11株CGTase产生菌。用酚酞法测定所得11株菌株的酶活,最终得到β-CGTase酶活最高的一株菌株,命名为Hhj-1。通过对菌株的形态观察以及16S rDNA测定,并建立该菌株的系统发育树,确定该菌株属于坎皮纳斯类芽孢杆菌（Paenibacillus campinasensis）。对该菌所产的β-CGTase粗酶液酶学性质进行研究,结果表明,该酶的最适反应温度为70℃,最适反应pH为7.5。在35~45℃保温1 h相对酶活仍可保持在90%以上,且该酶在pH 5.0~10.0的较宽范围内都较稳定,说明其对pH适应范围较广,因此应用有较大的灵活性。 展开更多
关键词 β-环糊精葡萄糖基转移酶 鉴定 坎皮纳斯类芽孢杆菌(Paenibacillus campinasensis) 酶学性质
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β-环糊精葡萄糖基转移酶基因的克隆、表达及酶学性质 被引量：3
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作者 谌恩华 李相前 吴华伟 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期77-81,共5页
获取来自坎皮纳斯类芽孢杆菌(Paenibacillus campinasensis)的编码β-环糊精葡萄糖基转移酶(β-cyclodextrin glycosyltransferase,β-CGTase)的基因cgt,并将带有His-Tag去除信号肽的cgt基因克隆到表达载体p ET28a(+)后,转入大肠杆菌BL2... 获取来自坎皮纳斯类芽孢杆菌(Paenibacillus campinasensis)的编码β-环糊精葡萄糖基转移酶(β-cyclodextrin glycosyltransferase,β-CGTase)的基因cgt,并将带有His-Tag去除信号肽的cgt基因克隆到表达载体p ET28a(+)后,转入大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。通过热变性和Ni-NTA获得重组β-CGTase纯化酶,再通过SDSPAGE检测,蛋白分子量在74 k Da左右,并初步研究了重组β-CGTase的酶学性质。结果表明:重组β-CGTase的酶促反应的最适p H为7.0,并且在p H为5.5~10.0范围稳定,最适反应温度为为65℃,重组酶在55℃保温5 h时仍保持90%以上的活性。研究一些金属离子和化学试剂对重组酶的影响发现β-CGTase是一种金属酶,Ca^(2+)对酶的催化起关键作用,尤其是在低浓度下对酶的活性有促进作用。对重组酶的酶促反应动力学研究得出Km为3.75 mg/m L,Vmax为0.33 mg/(min·m L)。该研究成功实现了β-CGTase基因的异源表达,为进一步实现β-CGTase的工业化生产和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 β-环糊精葡萄糖基转移酶 坎皮纳斯类芽孢杆菌 克隆 大肠杆菌 酶学性质
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