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类转录激活因子效应物核酸酶(TALEN)介导的基因组定点修饰技术 被引量：52
1
作者 沈延 肖安 +3 位作者 黄鹏 王唯晔 朱作言 张博 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期395-409,共15页
人工构建的序列特异性核酸内切酶能够识别并切割特定的DNA靶序列,造成双链断裂,从而引起基因组结构的定点改变。人工核酸内切酶技术使得研究人员有可能对任意物种的基因组进行定点修饰,开启了反向遗传学研究的新天地。类转录激活因子效... 人工构建的序列特异性核酸内切酶能够识别并切割特定的DNA靶序列,造成双链断裂,从而引起基因组结构的定点改变。人工核酸内切酶技术使得研究人员有可能对任意物种的基因组进行定点修饰,开启了反向遗传学研究的新天地。类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)自2010年底开始成功应用于基因打靶,很快成为一种比锌指核酸酶(Zinc-finger nuclease,ZFN)更容易设计、特异性更高和毒性更低的人工核酸内切酶。文章综述了TALEN技术的研究进展及应用前景,重点介绍TALEN的结构、作用机制与构建方法和利用TALEN进行基因组定点修饰的策略,以及目前利用这一技术已成功实现突变的物种及内源基因,特别是在斑马鱼中的应用,为开展这一领域的研究工作提供参考。 展开更多
关键词 类转录激活因子效应物(TALE) 类转录激活因子效应物核酸酶(talen) 人工核酸内切酶(EEN) 基因组编辑 基因组定点修饰
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TALEN构建与斑马鱼基因组定点突变的实验方法与流程 被引量：21
2
作者 沈延 黄鹏 张博 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期533-544,共12页
类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)是最近发展起来的一类新型的人工核酸内切酶,它由特异性的TALE DNA结合结构域和非特异性的FokⅠ核酸内切酶切割结构域组成。TALEN能够根据用户需要... 类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)是最近发展起来的一类新型的人工核酸内切酶,它由特异性的TALE DNA结合结构域和非特异性的FokⅠ核酸内切酶切割结构域组成。TALEN能够根据用户需要切割特定的核苷酸靶序列,造成DNA双链断裂,从而诱导该靶序列产生indel突变,目前已成功地应用于多个物种或体外培养细胞的基因组定点突变。文章介绍TALEN靶点的选择与确认,采用"单元组装法"构建人工TALEN的原理与步骤,以及通过显微注射TALEN mRNA诱导并筛选斑马鱼突变体的实验流程与经验。这些方法理论上也适用于对其他物种进行基因打靶。 展开更多
关键词 类转录激活因子效应物核酸酶(talen) 斑马鱼 基因组定点突变 基因打靶 反向遗传学技术
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应用TALEN技术对兔CCR5基因进行靶向修饰 被引量：6
3
作者 唐成程 张全军 +4 位作者 李小平 樊娜娜 杨翌 全龙泉 赖良学 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期360-368,共9页
缺少合适的能够被人免疫缺陷病毒1型（Human immunodeficiency virus 1,HIV-1）感染的动物模型是获得性免疫缺陷综合征/艾滋病（Acquired immunedeficiency syndrome,AIDS）疫苗和药物研发的瓶颈.HIV-1能在野生型兔子中形成持续感染,在... 缺少合适的能够被人免疫缺陷病毒1型（Human immunodeficiency virus 1,HIV-1）感染的动物模型是获得性免疫缺陷综合征/艾滋病（Acquired immunedeficiency syndrome,AIDS）疫苗和药物研发的瓶颈.HIV-1能在野生型兔子中形成持续感染,在共表达人CD4和CCR5的兔细胞系中,HIV-1能高效复制,并形成合胞体.若在家兔中高表达人CD4和CCR5,就可能获得研究AIDS的理想动物模型.文章采用高效基因打靶技术—类转录激活因子效应物核酸酶（Transcription activator-like effector nuclease,TALEN）,探讨在家兔CCR5基因位点定点敲入人CD4和CCR5,获得能够感染HIV-1家兔模型的可能性.针对家兔CCR5基因,设计了两对TALENs和一个同源打靶载体,TALEN mRNAs和DNA同源片段显微注射到家兔受精卵中,体外培养3～5 d后,收集24枚胚胎,对胚胎的基因突变情况进行PCR和测序分析.结果显示,在家兔CCR5位点,24枚胚胎均发生了基因敲除,5枚胚胎还发生了人CD4和CCR5基因敲入.该结果为建立艾滋病研究新动物模型奠定了基础. 展开更多
关键词 类转录激活因子效应物核酸酶(talen) 家兔 CCR5基因 基因修饰
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TALENs编辑绵羊成纤维细胞FGF 5基因 被引量：3
4
作者 皮文辉 周平 +5 位作者 王立民 唐红 郭延华 张译元 刘守仁 王新华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期704-710,共7页
类转录激活因子效应物(Transcription activator-like effector,TALE)已经成为基因组编辑和基因转录调控的有效工具,在多个物种的基因组中实现特定位点的删除、插入和突变。针对绵羊成纤维细胞生长因子5(Fibroblast growth factor 5,FG... 类转录激活因子效应物(Transcription activator-like effector,TALE)已经成为基因组编辑和基因转录调控的有效工具,在多个物种的基因组中实现特定位点的删除、插入和突变。针对绵羊成纤维细胞生长因子5(Fibroblast growth factor 5,FGF5)基因起始密码子ATG位点,设计构建TALENs(Transcription activator-like effector nucleases,TALENs)。通过比较分析正常培养和基因组编辑处理的绵羊成纤维细胞,电转TALENs组合,Surveyor突变检测,筛选获得1对有效的TALENs。有限稀释细胞传代培养,PCR扩增FGF5基因片段,经PAGE检测筛选发生突变的细胞,测序确认FGF5基因ATG位点产生缺失突变细胞。获得具有编辑活性的TALENs,为该基因的定点编辑奠定基础。Surveyor检测和测序结果表明,在绵羊FGF5基因ATG起始密码子上游104碱基位点,存在1个G/C单核苷酸多态。 展开更多
关键词 类转录激活因子效应物核酸酶 基因组编辑 成纤维细胞生长因子5基因 单核苷酸多态 绵羊
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TALEN技术研究进展 被引量：3
5
作者 严爱芬 刘婉霞 +1 位作者 刘芳 唐冬生 《广东农业科学》 CAS 2015年第23期145-150,共6页
类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)是近年来新兴的分子生物学工具。该技术可高效地介导DNA编辑修饰,如基因敲除、基因敲入、碱基替换、点突变等。近年来,随着人们对TALEN系统研究的不... 类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)是近年来新兴的分子生物学工具。该技术可高效地介导DNA编辑修饰,如基因敲除、基因敲入、碱基替换、点突变等。近年来,随着人们对TALEN系统研究的不断深入和改造,TALEN已成功地应用于人类细胞、鼠、斑马鱼等物种中,成为一项具有广阔应用前景的基因编辑技术。对TALEN的来源、构建及应用情况进行阐述,并对其未来发展进行展望。 展开更多
关键词 人工核酸酶 类转录激活因子效应物核酸酶 基因组编辑
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基因编辑新技术研究进展 被引量：16
6
作者 刘蓓 尉玮 王丽华 《亚热带农业研究》 2013年第4期262-269,共8页
基因编辑是一项旨在对基因组进行定点修饰的新技术,目前主要有人工核酸酶介导的锌指核酸酶(ZFN)技术、转录激活子样效应物核酸酶(TALEN)技术和RNA引导的CRISPR-Cas核酸酶(CRISPR-Cas RGNs)技术。它们都能特异性地识别靶位点,对其单链或... 基因编辑是一项旨在对基因组进行定点修饰的新技术,目前主要有人工核酸酶介导的锌指核酸酶(ZFN)技术、转录激活子样效应物核酸酶(TALEN)技术和RNA引导的CRISPR-Cas核酸酶(CRISPR-Cas RGNs)技术。它们都能特异性地识别靶位点,对其单链或双链进行精准切割后,由细胞内源性的修复机制来完成对靶标基因的敲除和替换。本文比较了这3种基因编辑技术,并对其应用进展做了介绍。 展开更多
关键词 基因编辑 锌指核酸酶 转录激活因子样效应物核酸酶 RNA引导的CRISPR—Cas核酸酶 基因敲除
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基因编辑技术原理及其在动植物研究中的应用 被引量：6
7
作者 张泗举 栾维江 《天津师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2019年第3期1-9,共9页
自人类基因组计划开展以来,越来越多生物的基因组序列得到了测定,基因的功能逐步得到鉴定.人们期望通过对基因表达的改变,来治疗人类疾病或提高生物的产量和品质.早期突变技术对基因的改变是不定向的,近年来,锌指核酸酶(ZFN)、转录激活... 自人类基因组计划开展以来,越来越多生物的基因组序列得到了测定,基因的功能逐步得到鉴定.人们期望通过对基因表达的改变,来治疗人类疾病或提高生物的产量和品质.早期突变技术对基因的改变是不定向的,近年来,锌指核酸酶(ZFN)、转录激活子样效应因子核酸酶(TALEN)和CRISPR/Cas9等技术可对某个已知基因进行编辑.特别是CRISPR/Cas9技术,由于具有操作方便、效率高等优点,因此成为对基因进行定向操作的强有力工具.本文对几种基因编辑技术的原理和应用进行简要介绍和展望. 展开更多
关键词 基因编辑 CRISPR/Cas9 转录激活子样效应因子核酸酶 锌指核酸酶
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新一代基因组编辑技术在基因治疗及生物制药领域中的应用 被引量：5
8
作者 张然 田浤 +1 位作者 高向东 姚文兵 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期504-510,共7页
近年来,随着锌指核酸酶、转录激活子样效应因子核酸酶和成簇可调控间隔短回文重复RNA引导核酸酶的出现,"基因组编辑"技术得到广泛应用。由于此类技术具有高效和可定制的特点,在基因治疗、细胞模型、糖基化工程、细胞工程等方... 近年来,随着锌指核酸酶、转录激活子样效应因子核酸酶和成簇可调控间隔短回文重复RNA引导核酸酶的出现,"基因组编辑"技术得到广泛应用。由于此类技术具有高效和可定制的特点,在基因治疗、细胞模型、糖基化工程、细胞工程等方面许多新策略、新方法不断涌现,产生了十分重要的影响。本文就近年来基因组编辑技术的发展及其在基因治疗和生物制药领域的应用进行综述。 展开更多
关键词 基因组编辑 锌指核酸酶 转录激活子样效应因子核酸酶 成簇可调控间隔短回文重复RNA引导核酸酶 基因治疗 生物制药
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人工核酸酶介导的基因组编辑技术 被引量：2
9
作者 支大龙 牛昱宇 季维智 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1132-1137,共6页
传统的基因组编辑技术是基于胚胎干细胞和同源重组实现生物基因组定向改造,但是该技术打靶效率低,严重制约了生命科学以及医学的研究.因此,研究新的基因组编辑技术十分重要.人工核酸酶介导的基因组编辑技术是通过特异性识别靶位点造成DN... 传统的基因组编辑技术是基于胚胎干细胞和同源重组实现生物基因组定向改造,但是该技术打靶效率低,严重制约了生命科学以及医学的研究.因此,研究新的基因组编辑技术十分重要.人工核酸酶介导的基因组编辑技术是通过特异性识别靶位点造成DNA双链断裂,引起细胞内源性的修复机制实现靶基因的修饰.与传统的基因组编辑技术相比,人工核酸酶技术打靶效率高,这对于基因功能的研究、构建人类疾病动物模型以及探索新型疾病治疗方案有着重要的意义.人工核酸酶技术有3种类型:锌指核酸酶(ZFN)、类转录激活因子核酸酶(TALEN)及规律成簇的间隔短回文重复序列(CRISPR).本文将对以上3种人工核酸酶技术的原理以及在生命科学和医学研究的应用进行综述. 展开更多
关键词 基因组编辑 锌指核酸酶 类转录激活因子核酸酶 规律成簇的间隔短回文重复序列
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GOLPH2基因敲除小鼠模型的建立及其基因型分析
10
作者 肖鹏 晏文君 +1 位作者 杜庆林 马小京 《合肥工业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1693-1698,共6页
高尔基磷酸化蛋白2(Golgi phosphoprotein 2,GOLPH2)是一种与多种疾病密切相关的高尔基体膜蛋白,研究该蛋白的结构、功能、在正常组织和肿瘤组织中的表达调控机制及其与疾病的关系等具有十分重要的应用价值。文章采用转录激活样效应因... 高尔基磷酸化蛋白2(Golgi phosphoprotein 2,GOLPH2)是一种与多种疾病密切相关的高尔基体膜蛋白,研究该蛋白的结构、功能、在正常组织和肿瘤组织中的表达调控机制及其与疾病的关系等具有十分重要的应用价值。文章采用转录激活样效应因子核酸酶(transcription activator-like effector nuclease,TALEN)技术完成GOLPH2基因敲除小鼠模型的构建及其基因型分析。通过TALEN识别位点确定、TALEN质粒对的设计与构建、TALEN体外转录、TALEN mRNA受精卵注射及胚胎移植等技术手段和方法,获得编码GOLPH2序列出现移码的纯合子雄鼠(F0)。通过若干代繁殖稳定获得GOLPH2敲除纯合子小鼠。 展开更多
关键词 高尔基磷酸化蛋白2 转录激活样效应因子核酸酶技术 基因型分析 纯合子小鼠
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