检测猪圆环病毒2型抗体SPA胶体金免疫层析方法的建立 被引量：11

1

作者 范晓娟 李刚 +2 位作者 史利军 张锦秀 李伟 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第7期158-161,共4页

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并将其标记SPA,将金标SPA包被至玻璃纤维膜上,将猪圆环病毒2型(PCV-2)Cap蛋白、抗SPA抗体分别包被至硝酸纤维素膜的检测线与质控线上,建立了一种检测PCV-2抗体的胶体金免疫层析方法。检测阳性样品时... 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并将其标记SPA,将金标SPA包被至玻璃纤维膜上,将猪圆环病毒2型(PCV-2)Cap蛋白、抗SPA抗体分别包被至硝酸纤维素膜的检测线与质控线上,建立了一种检测PCV-2抗体的胶体金免疫层析方法。检测阳性样品时,在检测线和质控线处均出现红色条带;检测阴性样品时,仅在质控线处出现红色条带。该方法与ELISA相比,其灵敏度为89.19%,特异性为100%,并且与PCV-1、猪瘟病毒(HCV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)阳性血清无交叉反应。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 胶体金免疫层析 抗体检测 葡萄球菌蛋白A

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SPA预处理对小鼠金葡菌致死性攻击的保护作用 被引量：3

2

作者 侯晓睿 陈益国 +2 位作者 朱平 刘北一 富宁 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期403-406,共4页

目的:探讨金葡菌A蛋白(SPA)预处理小鼠对金葡菌致死性攻击的保护作用。方法:于0、24小时对BALB/c小鼠行腹腔注射SPA 20μg/只/次,对照组以生理盐水替代SPA。第二次处理24小时后,腹腔注射致死量(3×1010CFU/kg)金葡菌(ATCC25923),观... 目的:探讨金葡菌A蛋白(SPA)预处理小鼠对金葡菌致死性攻击的保护作用。方法:于0、24小时对BALB/c小鼠行腹腔注射SPA 20μg/只/次,对照组以生理盐水替代SPA。第二次处理24小时后,腹腔注射致死量(3×1010CFU/kg)金葡菌(ATCC25923),观察小鼠生存率;非致死量金葡菌(2×108CFU/只)腹腔感染6小时后,ELISA、Q-PCR检测小鼠血清及脾脏中TNF-α、IL-6、IFN-γ含量及表达量。结果:与对照组小鼠2天内全部死亡比较,致死量细菌攻击后,SPA预处理组小鼠2周生存率为30%,显著高于对照组(P<0.05);非致死量细菌感染后,预处理组小鼠血清及脾脏中TNF-α、IL-6、IFN-γ含量及表达量显著低于对照组(P<0.05),IL-10表达量降低。结论:SPA预处理增强BALB/c小鼠抵御S.aureus致死攻击。 展开更多

关键词 金葡菌 金葡菌A蛋白 感染 细胞因子

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SPA基因启动子的克隆及转录靶向活性分析 被引量：2

3

作者 史雪梅 张惠兰 +7 位作者 熊盛道 甄国华 熊维宁 张珍祥 徐永健 胡琼洁 赵建平 倪望 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期2002-2007,共6页

目的:克隆大鼠肺表面活性蛋白A(SPA)基因启动子并构建该启动子的荧光报告系统,探讨该启动子的活性及转录靶向性,为进一步研究SPA基因的表达调控机制和探讨靶向性基因治疗奠定基础。方法:①从GenBank中获取大鼠SPA基因序列,对其上游基因... 目的:克隆大鼠肺表面活性蛋白A(SPA)基因启动子并构建该启动子的荧光报告系统,探讨该启动子的活性及转录靶向性,为进一步研究SPA基因的表达调控机制和探讨靶向性基因治疗奠定基础。方法:①从GenBank中获取大鼠SPA基因序列,对其上游基因组序列进行计算机生物信息学分析,推断其上游序列约163bp的区域具有启动子功能。②利用PCR技术扩增SPA基因上游启动子序列,将其亚克隆入pGL3-basic中,构建pGL3-SPA质粒,将其亚克隆于pGL3-control中,构建pGL3-SPA-enhancer质粒。③将构建pGL3-SPA质粒、pGL3-SPA-enhancer质粒、pGL3-control质粒和pGL3-basic质粒分别与内参质粒pRL-TK共转染入A549细胞和H441细胞,用双荧光素酶报告系统检测该质粒在两种细胞中的荧光素酶活性表达。结果:酶切及测序结果均证实成功克隆了SPA基因启动子序列,并已将该序列正确插入到荧光素酶报告基因系列载体中。重组的pGL3-SPA-enhancer质粒、pGL3-SPA质粒转染H441细胞后可以检测到荧光素酶的高表达。结论:成功构建了含有SPA基因启动子序列的荧光素酶基因报告系统,证实了它在高表达SPA蛋白的细胞中有较高的转录活性,为下一步研究SPA基因功能及其转录调控以及探讨基因治疗的靶向性奠定了基础。 展开更多

关键词 基因 spa 启动子 基因表达 转录靶向性 肺表面活性蛋白

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丝素包埋SPA成膜的理化性能和生物效应研究 被引量：1

4

作者 李茂林 杨新林 +1 位作者 王松 朱鹤荪 《北京理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第1期90-94,共5页

研究将丝素溶液包埋金黄色葡萄球菌A蛋白(staphylococcalproteinA)(简称A蛋白或SPA),制成不溶性SPA丝素膜.用粘附生长因子RGD(序列为GLY-ARG-GLY-ASP-SER-PRO-LYS)的抗体IgG结合IgG到该丝素膜的表面,再将RGD结合到不溶性SPA丝素膜表面RG... 研究将丝素溶液包埋金黄色葡萄球菌A蛋白(staphylococcalproteinA)(简称A蛋白或SPA),制成不溶性SPA丝素膜.用粘附生长因子RGD(序列为GLY-ARG-GLY-ASP-SER-PRO-LYS)的抗体IgG结合IgG到该丝素膜的表面,再将RGD结合到不溶性SPA丝素膜表面RGD抗体IgG上,制备成RGD-IgG-SPA丝素膜.用酶联免疫吸附试验(简称ELISA)方法,证明RGD-IgG-SPA丝素膜是稳定的.种植培养血管内皮细胞(vascularendothelialcell,简称EC细胞)于该改性丝素膜的表面,用四甲基偶氮唑盐比色方法(简称MTT法)检测细胞的生长,证明改性丝素膜能有效地促进EC细胞的生长. 展开更多

关键词 葡萄球菌A蛋白 粘附生长因子(RGD) 血管内皮细胞

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金黄色葡萄球菌胶乳凝集试验及spa基因序列改变与万古霉素耐药关系探讨 被引量：1

5

作者 代洪 范学工 《中国感染控制杂志》 CAS 2008年第2期88-91,95,共5页

目的研究金黄色葡萄球菌(金葡菌)胶乳凝集试验及spa基因序列改变与万古霉素耐药的关系。方法检测体外诱导对万古霉素耐药金葡菌过程中的金葡菌胶乳凝集试验结果改变情况,并利用单链构象多态性(SSCP)技术及DNA测序分析金葡菌spa基因序列... 目的研究金黄色葡萄球菌(金葡菌)胶乳凝集试验及spa基因序列改变与万古霉素耐药的关系。方法检测体外诱导对万古霉素耐药金葡菌过程中的金葡菌胶乳凝集试验结果改变情况,并利用单链构象多态性(SSCP)技术及DNA测序分析金葡菌spa基因序列有无改变。结果3株对万古霉素产生中介耐药的金葡菌在诱导过程中胶乳凝集试验发生改变,其中2株金葡菌spa基因序列有改变。结论spa基因碱基序列的改变,可能与金葡菌对万古霉素耐药有一定关联。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 万古霉素 抗药性 微生物 胶乳凝集试验 spa基因 葡萄球菌蛋白A

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特异抗体致敏的SPA菌体浓缩新城疫病毒方法在临床诊断中的应用

6

作者 包世俊 胡永浩 +1 位作者 项光华 姚学萍 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2006年第1期22-24,共3页

为提高新城疫临床诊断的准确率,建立了新城疫病毒浓缩方法,将粪便及脑、肺等器官组织病料中的新城疫病毒经特异性抗体致敏的金黄色葡萄球菌(SPA菌)吸附浓缩后,用RT-PCR进行检测。结果表明,所建立的新城疫病毒浓缩方法应用于临床诊断后,... 为提高新城疫临床诊断的准确率,建立了新城疫病毒浓缩方法,将粪便及脑、肺等器官组织病料中的新城疫病毒经特异性抗体致敏的金黄色葡萄球菌(SPA菌)吸附浓缩后,用RT-PCR进行检测。结果表明,所建立的新城疫病毒浓缩方法应用于临床诊断后,可显著提高检测敏感性,从而提高临床诊断的准确率。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌A蛋白 新城疫病毒 诊断 RT—PCR

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应用SPA的ELISA检测血清胰岛素抗体

7

作者 汪承亚 陈家伟 +4 位作者 顾德生 何戎华 刘鸿义 张静馨 邱宁颜 《南京医学院学报》 CSCD 1990年第4期274-275,278,共3页

应用SPA代替抗人IgG第二抗体的ELISA测定血清胰岛素抗体(IA)。经正交试验分析,受检血清稀释度是影响IA测定的主要因素。选用胰岛素包被浓度为10μg/ml,受检血清1:2.5稀释时,IA测定可获较满意的结果。竞争性结合抑制试验表明IA测定具有... 应用SPA代替抗人IgG第二抗体的ELISA测定血清胰岛素抗体(IA)。经正交试验分析,受检血清稀释度是影响IA测定的主要因素。选用胰岛素包被浓度为10μg/ml,受检血清1:2.5稀释时,IA测定可获较满意的结果。竞争性结合抑制试验表明IA测定具有特异性。血清稀释试验提示OD值大小反映了IA滴度高低。28例正常人血清IA测定结果OD正常值范围(X±2SD)为0.05～0.25。使用胰岛素的DM病例均为阳性,而未使用胰岛素病例未发现IA阳性。本文认为应用该法测定IA是一种稳定、特异、简便的方法。 展开更多

关键词 胰岛素抗体 糖尿病 ELISA

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SPA的实验室制备及标记技术 被引量：4

8

作者 赵培娥 刘冠章 +1 位作者 霍乃蕊 高宇 《山西农业大学学报》 CAS 1998年第1期70-71,共2页

ＳＰＡ具有与ＩｇＧＦＣ段非特异性结合的生物学特性，这一特性使其在免疫学研究中有重要的作用，根据应用目的不同，ＳＰＡ制剂分为三类：菌体试剂、ＩｇＧ－ＳＰＡ、可溶性纯化ＳＰＡ。本文将介绍这三种试剂的实验室制备方法及ＳＰＡ... ＳＰＡ具有与ＩｇＧＦＣ段非特异性结合的生物学特性，这一特性使其在免疫学研究中有重要的作用，根据应用目的不同，ＳＰＡ制剂分为三类：菌体试剂、ＩｇＧ－ＳＰＡ、可溶性纯化ＳＰＡ。本文将介绍这三种试剂的实验室制备方法及ＳＰＡ的ＦＩＴＣ、ＨＲＰ、１２５Ｉ的标记技术。 展开更多

关键词 SPS 非特异性结合 制备方法 标记技术 免疫学

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SPA/SPG融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达

9

作者 孙书华 《动物检疫》 1994年第2期3-5,共3页

葡萄球菌A蛋白（SPA）和链球菌G蛋白（SPG）的IgG结合区编码基因融合后，克隆到大肠杆菌表达载体PGEX，SPA／SPG融合蛋白（SPAG）得到高效表达。可溶性SPAG～GST产物可被谷胱甘肽亲和柱一次性纯化。用琼扩和ELISA试验测定了表达产物与... 葡萄球菌A蛋白（SPA）和链球菌G蛋白（SPG）的IgG结合区编码基因融合后，克隆到大肠杆菌表达载体PGEX，SPA／SPG融合蛋白（SPAG）得到高效表达。可溶性SPAG～GST产物可被谷胱甘肽亲和柱一次性纯化。用琼扩和ELISA试验测定了表达产物与不同种属动物血清反应的性能。SPAG—GST与所有SPA、SPG各自反应的动物IgG结合，对小鼠IgG的反应优于SPA或SPG。在所测试的23种动物血清中，融合蛋白与大部分哺乳动物Ig反应。 展开更多

关键词 spa/SPG 融合蛋白 大肠杆菌 免疫

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用协同凝集试验和SPA—固相免疫电镜技术检测EHFV抗原 被引量：1

10

作者 范辉宙 郑高飞 詹利生 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1989年第2期103-106,共4页

本文建立了检测流行性出血热病毒(EHFV)抗原的协同凝集试验(COA)和SPA—固相免疫电镜技术(SPA—SPIEM)。COA检测粗制抗原时,先以正常鼠脑和肺悬液吸收用于致敏的抗血清,并用Cowanl株葡萄球菌预先处理抗原,可排除非特异性凝集反应。SPA—... 本文建立了检测流行性出血热病毒(EHFV)抗原的协同凝集试验(COA)和SPA—固相免疫电镜技术(SPA—SPIEM)。COA检测粗制抗原时,先以正常鼠脑和肺悬液吸收用于致敏的抗血清,并用Cowanl株葡萄球菌预先处理抗原,可排除非特异性凝集反应。SPA—SPIEM似较COA敏感。研究结果提示COA和SPA—SPIEM均可用于EHFV抗原的检测,有可能被用于EHF疫区宿主流行病学调查和疾病的快速诊断。 展开更多

关键词 出血热病毒 抗原 检测 免疫 电镜术

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SPA-ELISA改良法在检测胸腺素α_1基因表达产物中的应用 被引量：1

11

作者 王震熙 吴章桂 +1 位作者 张胜 林国庆 《浙江医科大学学报》 CSCD 1989年第3期106-109,共4页

本文报道检测人胸腺素α_1基因表达产物的改良SPA-ELISA法.人工合成的Tα_1与BsA相偶联后,经微量免疫法获得了1∶2048滴度的抗Tα_1抗血清.本试验将人Tα_1基因的克隆株PWR590表达的裂解液,以1∶1000稀释后直接包被,经抗Tα_1抗血清、HR... 本文报道检测人胸腺素α_1基因表达产物的改良SPA-ELISA法.人工合成的Tα_1与BsA相偶联后,经微量免疫法获得了1∶2048滴度的抗Tα_1抗血清.本试验将人Tα_1基因的克隆株PWR590表达的裂解液,以1∶1000稀释后直接包被,经抗Tα_1抗血清、HRP-SPA及邻苯二胺底物的酶标法,成功地进行了表达产物的Tα_1检测.根据无Tα_1基因的PWR590克隆株表达的裂解液的结果为阴性,而以人工合成的Tα_1包被者为阳性;阻断试验成立,说明本试验具有较好的特异性.经100份样本的检测,均获得了一致的结果,提示本法稳定.同时我们还将其与双抗体夹心法进行了比较,结果两者亦基本一致. 展开更多

关键词 胸腺素 ELISA spa 基因表达

全文增补中

ICU患者分离金黄色葡萄球菌的耐药性及分子流行病学特征 被引量：21

12

作者 徐修礼 周珊 +3 位作者 白露 刘家云 马越云 郝晓柯 《中国感染控制杂志》 CAS 北大核心 2016年第5期294-298,共5页

目的了解某院重症监护病房(ICU)金黄色葡萄球菌的耐药特点及分子流行病学特征。方法收集2014年1—12月该院ICU分离的金黄色葡萄球菌,进行细菌鉴定及药物敏感性试验,采用金黄色葡萄球菌A蛋白(spa)分型及多位点序列分型(MLST)方法进行分... 目的了解某院重症监护病房(ICU)金黄色葡萄球菌的耐药特点及分子流行病学特征。方法收集2014年1—12月该院ICU分离的金黄色葡萄球菌,进行细菌鉴定及药物敏感性试验,采用金黄色葡萄球菌A蛋白(spa)分型及多位点序列分型(MLST)方法进行分型。结果 160株金黄色葡萄球菌中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)120株(占75.00%)。MRSA对红霉素、克林霉素、左氧氟沙星的耐药率均>80%;MSSA对头孢唑林敏感,对红霉素、克林霉素、左氧氟沙星的耐药率分别为62.50%、35.00%、10.00%。spa分型和MLST结果显示,120株MRSA主要为ST239-t030、ST239-t037、ST5-t2460 3种型别,其中ST239-t030(105株,87.50%)为主要流行菌株,8个ICU均有检出;MSSA存在较多型别,ST59-t437仅在神经内科(8株)和消化科(2株)检出,ST6-t701、ST398-t3625、ST398-t1793和ST121-t2092分别仅在神经内科(7株)、麻醉科(5株)、神经外科(4株)和心外科(4株)检出。结论该院ICU MRSA分离率较高,以ST239-t030克隆株为主,存在医院内流行;不同型别MSSA在各科室内存在流行趋势。 展开更多

关键词 重症监护病房 金黄色葡萄球菌 spa分型 MLST 流行病学 抗药性 微生物 耐药性

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葡萄球菌蛋白A免疫吸附治疗全身型重症肌无力的临床研究 被引量：5

13

作者 赵重波 刘骏峰 +4 位作者 朱雯华 林洁 薛骏 李翔 卢家红 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期537-539,共3页

目的研究葡萄球菌蛋白A免疫吸附治疗全身型重症肌无力(myasthenia gravis,MG)的疗效和安全性。方法采用蛋白A免疫吸附治疗19例成人全身型MG并进行临床疗效和安全性的判定。结果所有入选病人均完成2次免疫吸附治疗;第2次治疗后的IgG、IgA... 目的研究葡萄球菌蛋白A免疫吸附治疗全身型重症肌无力(myasthenia gravis,MG)的疗效和安全性。方法采用蛋白A免疫吸附治疗19例成人全身型MG并进行临床疗效和安全性的判定。结果所有入选病人均完成2次免疫吸附治疗;第2次治疗后的IgG、IgA、IgM浓度明显下降(P<0.0001);Osserman分级、改良美国MG基金会(MGFA)评分、MG日常生活量表(ADL)和徒手肌力量表(MMT)均明显改善(P<0.0001)。MG特异性乙酰胆碱受体(AChR)抗体阳性的患者2次治疗后抗体滴度明显下降;治疗后外周血调节性T细胞百分比明显上升。部分病人有轻度不良反应,但总体耐受性良好,各项安全性临床评定指标在治疗前后的变化均无统计学意义。结论葡萄球菌蛋白A免疫吸附可以迅速改善全身型MG病人的病情。 展开更多

关键词 重症肌无力 治疗 免疫吸附 葡萄球菌蛋白A

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融合蛋白TAP-SSL5对人血小板功能的影响 被引量：6

14

作者 程彦 房兆飞 +4 位作者 曲小龙 胡厚源 宋治远 龚丽莎 张静 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期477-480,共4页

目的探讨抗炎抗凝双效融合蛋白TAP-SSL5对人血小板功能的影响。方法采用健康人富含血小板血浆以凝胶过滤法分离得到人血小板。流式细胞仪检测融合蛋白TAP-SSL5或小鼠抗人CD42b(glycoprotein Ibα,GPIbα)单克隆抗体(HIP1)与血小板的结... 目的探讨抗炎抗凝双效融合蛋白TAP-SSL5对人血小板功能的影响。方法采用健康人富含血小板血浆以凝胶过滤法分离得到人血小板。流式细胞仪检测融合蛋白TAP-SSL5或小鼠抗人CD42b(glycoprotein Ibα,GPIbα)单克隆抗体(HIP1)与血小板的结合情况;以人血小板表面P-选择素的表达及PAC-1的结合反映血小板的激活程度;以全血电阻法定量分析TAP-SSL5对人血小板聚集功能的影响;为评价TAP-SSL5的出血风险,进一步观察了TAP-SSL5对小鼠尾部出血时间的影响。结果融合蛋白TAP-SSL5可与血小板结合,并竞争性抑制HIP1与血小板的结合,提示TAP-SSL5可与血小板表面的GPIbα结合,进而抑制GPIbα与vWF的相互作用。但高浓度的TAP-SSL5(终浓度30 mg/L)也能激活血小板,使人血小板表面P-选择素的表达增加(表达阳性率为90.4%)和PAC-1的结合量上升(阳性率为66.3%);终浓度为10、30 mg/L的TAP-SSL5可引起血小板的显著聚集。给小鼠单次尾静脉注射10 mg/kg的TAP-SSL5,可显著延长尾部出血时间,由对照组的(647.1±33.7)s延长至(753.6±127.3)s(P<0.01);而常规剂量组(3 mg/kg TAP-SSL5)尾部出血时间为(612.8±79.1)s,与对照组相比无显著差异(P>0.05)。结论融合蛋白TAP-SSL5保留了SSL5与血小板GPIbα结合的功能,有助于进一步提高TAP-SSL5的抗血栓作用,但同时也导致融合蛋白TAP-SSL5在高浓度情况下可延长出血时间和激活血小板。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌超抗原样蛋白-5 蜱抗凝血肽 融合蛋白 血小板 糖蛋白GPIbα

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^125I标记融合蛋白TAP-SSL5在健康大耳兔体内的药代动力学研究 被引量：4

15

作者 房兆飞 龚丽莎 +5 位作者 胡厚源 李前伟 曲小龙 程彦 宋治远 张静 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第21期2145-2148,共4页

目的研究125I标记的抗炎抗凝双效融合蛋白TAP-SSL5单次静脉注射后在健康日本大耳兔体内的药代动力学过程。方法采用固相氧化法(Iodogen法)将Na125I直接标记于TAP-SSL5,由耳缘静脉给每只大耳兔注射18.5×103kBq的125I-TAP-SSL5,分别... 目的研究125I标记的抗炎抗凝双效融合蛋白TAP-SSL5单次静脉注射后在健康日本大耳兔体内的药代动力学过程。方法采用固相氧化法(Iodogen法)将Na125I直接标记于TAP-SSL5,由耳缘静脉给每只大耳兔注射18.5×103kBq的125I-TAP-SSL5,分别于注射后1.5、3、5、10、30、60、120、240、480 min采血,称量并测定放射性计数(Counts per minute,cpm),换算为血液放射性浓度,经DAS软件分析得出最佳房室模型及相关药代动力学参数。结果纸层析法测得125I-TAP-SSL5的标记率为(67.32±9.91)%,放射化学纯度为(91.62±3.22)%,比活度为(30.2±4.4)TBq/μmol;TAP-SSL5在大耳兔体内的药代动力学过程符合权重为1的二室模型,分布相半衰期(t1/2α)及消除相半衰期(t1/2β)分别为(0.08±0.04)h和(4.97±0.75)h,清除率(Clearance,CL)为(0.015±0.011)ml/h,一室向二室转运常数(K12)为(6.651±3.642)/h,二室向一室转运常数(K21)为(4.072±1.737)/h。结论125I-TAP-SSL5在健康大耳兔体内的药代动力学过程符合权重系数为1的二室模型,自体清除率缓慢,可保证与组织有更多的结合几率。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌超抗原样蛋白-5 蜱抗凝血肽 融合蛋白 药代动力学 放射性核素标记

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抗炎、抗凝双效融合蛋白TAP-SSL5表达载体的构建及其功能研究 被引量：11

16

作者 曲小龙 胡厚源 +2 位作者 李敏 黄德兴 梁华 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期5-8,共4页

目的构建一种具有抗炎和抗凝双效功能的融合蛋白,并对其功能进行初步鉴定。方法将重组金黄色葡萄球菌超抗原样蛋白-5(staphylococcal superantigen-like protein-5,SSL5)与蜱抗凝血肽(tick anticoagulant peptide,TAP)融合,从金黄色葡萄... 目的构建一种具有抗炎和抗凝双效功能的融合蛋白,并对其功能进行初步鉴定。方法将重组金黄色葡萄球菌超抗原样蛋白-5(staphylococcal superantigen-like protein-5,SSL5)与蜱抗凝血肽(tick anticoagulant peptide,TAP)融合,从金黄色葡萄球NCTC8325菌株中克隆SSL5基因;经DNA重组技术,将编码pelB前导序列、SSL5和TAP的基因重组并克隆于原核表达载体pHOG21中,再转染于大肠杆菌BL21中扩增表达,制备融合蛋白SSL5-TAP或TAP-SSL5,采用流式细胞仪检测融合蛋白是否和SSL5一样,具有与粒细胞表面P-选择素糖蛋白配体-1(P-selectin glycoprotein ligand-1,PSGL-1)结合的特性;采用反应底物法在体外检测融合蛋白对活化的凝血因子X(factor Xa,FXa)活性的抑制作用。结果TAP-SSL5保留了SSL5与PSGL-1结合的特性,并且融合蛋白TAP-SSL5可显著抑制FXa的活性(P<0.01),抑制率达39.5%。结论融合蛋白TAP-SSL5是一种以PSGL-1为靶向的新型抗炎、抗凝双效分子。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌超抗原样蛋白-5 蜱抗凝血肽 融合蛋白 P-选择素糖蛋白配体-1 凝血因子XA

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葡萄球菌A型肠毒素检测竞争ELISA方法的建立 被引量：3

17

作者 徐丹丹 黄金海 +2 位作者 刘莹 孙跃辉 周凤娟 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期380-382,385,共4页

为建立快速、灵敏、特异的检测食品中金黄色葡萄球菌A型肠毒素的方法,应用构建的pGEX-6P-SEA、pET28α-SEA重组质粒表达带有不同融合肽的葡萄球菌A型肠毒素,分别通过谷胱甘肽亲和纯化、镍螯合纯化获得SEA的重组融合表达蛋白HIS-SEA、GST... 为建立快速、灵敏、特异的检测食品中金黄色葡萄球菌A型肠毒素的方法,应用构建的pGEX-6P-SEA、pET28α-SEA重组质粒表达带有不同融合肽的葡萄球菌A型肠毒素,分别通过谷胱甘肽亲和纯化、镍螯合纯化获得SEA的重组融合表达蛋白HIS-SEA、GST-SEA,以HIS-SEA为包被抗原,以GST-SEA、天然SEA肠毒素为竞争抗原,确立了SEA型肠毒素ELISA检测的工作条件:包被浓度为2.5μg/mL,阳性血清稀释度为1∶50,辣根过氧化物酶标记的羊抗鸡免疫球蛋白工作浓度为1∶2000。建立了以重组肠毒素GST-SEA作为竞争抗原检测葡萄球菌肠毒素SEA的间接竞争ELISA(ciELISA)方法,竞争肠毒素GST-SEA蛋白浓度x与P/N值y的关系式:x(GST-SEA)=1.99-y/0.34,R2(GST-SEA)=0.9964,线性检测范围均为1～62.5ng/mL,最低检测量为1ng/mL,此方法丰富了食品中A型肠毒素的检测手段。 展开更多

关键词 葡萄球菌A型肠毒素(SEA) 重组蛋白 间接竞争酶联免疫吸附反应(ciELISA)

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产A型肠毒素金黄色葡萄球菌的筛选及其重组表达 被引量：2

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作者 吴双 张仁利 +2 位作者 耿艺介 高世同 胡章立 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期451-454,共4页

目的分离产A型肠毒素金黄色葡萄球菌标准株,克隆和表达金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA),研究其生物学特征。方法应用PCR扩增SEA基因片段,与克隆载体pGEMT-easy连接,亚克隆到表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导表达和纯化重组蛋... 目的分离产A型肠毒素金黄色葡萄球菌标准株,克隆和表达金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA),研究其生物学特征。方法应用PCR扩增SEA基因片段,与克隆载体pGEMT-easy连接,亚克隆到表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导表达和纯化重组蛋白,用重组蛋白免疫小鼠获得抗血清,进行重组蛋白免疫原性分析。结果成功克隆SEA全长基因,经DNA序列分析证实与GenBank收录序列具有100%的同源性。表达蛋白相对分子质量为31000,以包涵体形式存在。纯化、复性后获得有活性的rSEA蛋白,rSEA蛋白能够识别天然的SEA。结论SEA基因成功克隆到表达质粒内并表达,rSEA具备抗原性,为制备单抗、诊断试剂及金黄色葡萄球菌致病机制研究奠定了基础。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌A型肠毒素 重组表达 蛋白纯化 复性

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动态成像模式下蛋白A胶体金单分子三维构象原子力显微镜研究 被引量：4

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作者 郁毅刚 徐如祥 +2 位作者 蔡颖谦 姜晓丹 柯以铨 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第2期139-142,共4页

目的确定葡萄球菌蛋白A胶体金分子特征性构象。方法应用原子力显微镜扫描生理状态下分布在云母表面的葡萄球菌蛋白A胶体金分子,并进行数据测定建模。结果葡萄球菌蛋白A胶体金分子为48.80nm×42.13nm×20.53nm“反C”形链状分子... 目的确定葡萄球菌蛋白A胶体金分子特征性构象。方法应用原子力显微镜扫描生理状态下分布在云母表面的葡萄球菌蛋白A胶体金分子,并进行数据测定建模。结果葡萄球菌蛋白A胶体金分子为48.80nm×42.13nm×20.53nm“反C”形链状分子三维结构。结论原子力显微镜可以在生理状态下直观测定生物大分子纳米尺度直观结构;葡萄球菌蛋白A胶体金分子的特征性结构可以作为神经细胞膜表面N-甲基-D-天冬氨酸受体原子力显微镜观测的原位标记物。 展开更多

关键词 原子力显微镜 葡萄球菌蛋白A 胶体金 构象

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应用葡萄球菌A蛋白快速检测金黄色葡萄球菌的诊断价值 被引量：3

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作者 吴增斌 潘曙明 +3 位作者 陈峰 刘瑛 贺坚慧 怀文娟 《中国感染与化疗杂志》 CAS 2011年第2期151-154,共4页

目的评价应用葡萄球菌A蛋白(SPA)快速检测金葡菌的临床诊断价值。方法 200株鉴定明确的菌株(金葡菌和非金葡菌各100株)采用SPA法检测,统计检测方法的灵敏度和特异度;118份ICU患者的痰标本,采用双盲法分别对其进行传统痰培养鉴定和SPA镜... 目的评价应用葡萄球菌A蛋白(SPA)快速检测金葡菌的临床诊断价值。方法 200株鉴定明确的菌株(金葡菌和非金葡菌各100株)采用SPA法检测,统计检测方法的灵敏度和特异度;118份ICU患者的痰标本,采用双盲法分别对其进行传统痰培养鉴定和SPA镜下快速检测,计算该诊断试验的评价指标,并对痰培养和SPA方法的相关性进行分析。结果 SPA检测的灵敏度和特异度均为100%;双盲法痰标本SPA检测敏感度为100%,特异度97.7%,SPA检测和痰培养的结果呈高度相关性(P>0.05)。结论 SPA检测法可早期诊断金葡菌感染,是一项快速的、灵敏度和特异度较高的诊断试验。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 葡萄球菌A蛋白 快速诊断

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