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题名抗对硫磷单链抗体在昆虫细胞中的表达及活性鉴定
被引量：2
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作者
刘蕊
项丹丹
刘鹏琰
梁晓
郭逸蓉
朱国念
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机构
浙江大学农药与环境毒理研究所
中国热带农业科学院环境与植物保护研究所
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出处
《农药学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期177-184,共8页
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基金
公益性行业(农业)科研专项(201203094-3)
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文摘
利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,在Sf9昆虫细胞中表达抗对硫磷单链抗体,并评价该重组抗体sc Fv-4C6的分子识别活性。以分泌能特异性识别对硫磷的单克隆抗体的杂交瘤细胞株4C6为RNA来源,采用RT-PCR方法扩增抗体的重链和轻链可变区基因,经重叠延伸PCR方法串联拼接获得单链抗体基因片段(sc Fv-4C6)。构建包含目的片段的重组杆粒Bacmidsc Fv-4C6,转染Sf9细胞表达目的蛋白,采用免疫印迹法(Western blotting)检测表达产物,间接竞争酶联免疫吸附(ic-ELISA)法评价产物的生物活性。结果表明:sc Fv-4C6基因片段拼装正确,成功转染Sf9细胞,并在转染后72 h表达量最高,表达的单链抗体大小为28.3 k D;表达产物能特异性识别对硫磷,IC50值为7.9 ng/m L,对甲基对硫磷和杀螟硫磷分别有12%和1.8%的交叉反应率,与亲本单克隆抗体的识别性能相似。该研究表明,具有生物活性的抗对硫磷单链抗体sc Fv-4C6可在昆虫细胞中成功得到表达。
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关键词
对硫磷
单链抗体
昆虫细胞表达
酶联免疫吸附
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Keywords
parathion-ethyl
single-chain variable fragment（sc fv） antibody
insect cell expression system
ELISA
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分类号
S482.33
[农业科学—农药学]
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题名抗莠去津抗体基因构建及蛋白结构模拟
被引量：1
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作者
东琴
魏松红
李平生
王海宁
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机构
沈阳农业大学植物保护学院
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出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2015年第23期195-199,共5页
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基金
辽宁省自然科学基金项目(201202195)
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文摘
构建抗莠去津单链抗体基因,采用DNAStar软件对单链抗体基因进行氨基酸序列推导,用生物信息学在线网站预测莠去津单链抗体基本特性及二、三级结构。结果表明,抗莠去津单链抗体基因全长744 bp,对应248个氨基酸,单链抗体相对分子质量约为26 061.9,等电点预测值7.81,为碱性蛋白质;二级结构中α-螺旋17处,延伸链85处,β-转角19处,无规卷曲127处;三级结构建模显示,重链和轻链的6个环区共同组成了抗体的抗原结合区,符合单链抗体的结构特点,具有抗原结合位点的空间构象。该研究为抗莠去津单链抗体的进一步表达、纯化和活性研究奠定了基础。
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关键词
莠去津
单链抗体
结构预测
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Keywords
atrazine
single-chain variable fragment（sc fv）
structure prediction
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分类号
TS207.3
[轻工技术与工程—食品科学]
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