CSBV的分离鉴定及其感染幼虫后的应答反应 被引量：2

1

作者 费世港 刘合永 +3 位作者 王叶元 冯敏 王子龙 孙京臣 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期89-96,共8页

本研究旨在为了解江西某蜂场蜜蜂是否感染中蜂囊状幼虫病病毒(CSBV)并探究CSBV感染中蜂幼虫后的应答反应。采集该蜂场疑似感染CSBV的蜜蜂,采用RT-PCR的方法检测CSBV核酸,取阳性的蜜蜂样品进行病毒分离纯化、电镜观察及测序。将纯化鉴定... 本研究旨在为了解江西某蜂场蜜蜂是否感染中蜂囊状幼虫病病毒(CSBV)并探究CSBV感染中蜂幼虫后的应答反应。采集该蜂场疑似感染CSBV的蜜蜂,采用RT-PCR的方法检测CSBV核酸,取阳性的蜜蜂样品进行病毒分离纯化、电镜观察及测序。将纯化鉴定后的CSBV对3日龄的中蜂幼虫进行人工感染,进行转录组测序,分析中蜂幼虫感染CSBV的应答反应。通过RT-PCR验证和电镜观察成功鉴定CSBV,并命名为CSBV-JX。CSBV-JX电镜观察直径为25~30 nm。对其进行分段扩增测序,发现基因组序列为8781 bp,对其进行系统发育分析,表明东方蜜蜂的SBV(AcSBV)与西方蜜蜂的SBV(AmSBV)明显分为两个分支,具有较强的地域分化性。转录组测序分析发现,中蜂幼虫在感染CSBV-JX后2 h有59个基因上调表达,83个基因下调表达;感染后12 h有68个基因上调表达,86个基因下调表达。本研究成功分离鉴定一株中蜂囊状幼虫病毒并命名为CSBV-JX。同时对CSBV-JX感染中蜂幼虫的转录组学分析发现,CSBV-JX感染2 h和12 h引起宿主的响应较小,这可能是CSBV-JX感染的2 h和12 h为病毒增殖的早期阶段病毒载量低,引起的宿主免疫响应小所导致。在CSBV-JX感染中蜂幼虫的2 h和12 h期间引起的差异基因与代谢通路关联较大,研究结果为阐明解析CSBV感染中蜂的分子机制提供了基础。 展开更多

关键词 中蜂囊状幼虫病毒 分离鉴定 系统发育分析 转录组学

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施马伦贝格病毒N蛋白原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

2

作者 李阳 孙睿雪 +3 位作者 陈天杰 刘思彤 曹家慧 赵建军 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第8期3877-3887,共11页

[目的]建立一种具有良好特异性和敏感性的施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)抗体间接ELISA(indirect ELISA,iELISA)检测方法。[方法]将SBV N蛋白编码基因全长序列克隆至pET-28a(+)质粒中,构建重组质粒pET-28a-SBV,利用大肠杆菌... [目的]建立一种具有良好特异性和敏感性的施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)抗体间接ELISA(indirect ELISA,iELISA)检测方法。[方法]将SBV N蛋白编码基因全长序列克隆至pET-28a(+)质粒中,构建重组质粒pET-28a-SBV,利用大肠杆菌表达系统表达目的蛋白并用His镍柱进行纯化,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定后,以纯化的SBV N蛋白作为检测抗原进行包被,建立一种iELISA方法,并对其包被条件、封闭液、封闭时间和血清孵育时间等反应条件进行优化,检测其阴阳性临界值、特异性、灵敏性和重复性。[结果]SDS-PAGE结果显示,SBV N蛋白分子质量为30 ku;Western blotting结果显示,纯化后SBV N蛋白与SBV阳性血清能产生特异性反应。本研究建立的SBV iELISA检测方法最佳条件为:SBV N抗原包被浓度4μg/mL、4℃包被12 h、1%明胶37℃封闭1 h、血清稀释度为1:200、37℃孵育1 h、1:6 000稀释的酶标二抗37℃孵育1 h,其阴阳性临界值为0.371。该iELISA检测方法仅与SBV阳性血清产生特异性反应,与牛副流感病毒3型(BPIV3)、牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和阿卡斑病毒(AKAV)阳性血清均无明显交叉反应,灵敏性较高,SBV阳性血清稀释度为1:1280时仍有明显反应。批间重复试验和批内重复试验变异系数均<10%;与商品化试剂盒相比,其总符合率为94.57%。[结论]本研究建立了一种以SBV N蛋白为检测抗原的SBV iELISA方法,该方法具有良好的特异性和敏感性,能运用于SBV血清学检测,试验结果为SBV的快速诊断提供更多选择。 展开更多

关键词 施马伦贝格病毒(sbv) N蛋白 间接ELISA(iELISA) 原核表达

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中华蜜蜂囊状幼虫病的诊断和防治研究进展 被引量：1

3

作者 李爱芳 王倩芳 +3 位作者 王孜龙 李亚兰 徐朋 冯书营 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第2期864-873,共10页

中华蜜蜂囊状幼虫病(Chinese sacbrood disease, CSBD)是由中华蜜蜂囊状幼虫病病毒(Chinese sacbrood virus, CSBV)引起的一种病毒性疾病。该病对蜂群危害严重,传染性强,死亡率高达100%,给中国养蜂业造成了巨大的经济损失。尽管实际生... 中华蜜蜂囊状幼虫病(Chinese sacbrood disease, CSBD)是由中华蜜蜂囊状幼虫病病毒(Chinese sacbrood virus, CSBV)引起的一种病毒性疾病。该病对蜂群危害严重,传染性强,死亡率高达100%,给中国养蜂业造成了巨大的经济损失。尽管实际生产中采用了多种方法和措施对该病进行预防和治疗,但实际效果欠佳。针对CSBV的检测技术发展迅速,尤其是分子生物学检测手段的更新,使得检测结果的准确性和特异性大大提高。鉴于卵黄抗体(egg yolk antibodies, EYA)在多种病毒性疾病中的应用效果显著,对于CSBD的防治有着潜在的应用开发价值。笔者综述了CSBD诊断和防治的最新研究进展,总结了EYA抗体药物的治疗应用现状。此外,在剖析EYA药物优缺点的基础上,提出了多种EYA协同增效的策略,并从多个方面如新型抗体药物的开发、新型中药单体/配方的鉴定、核苷酸药物的开发等对抗CSBV的研究前景进行望,以期为蜂业病毒性疾病的防控提供参考。 展开更多

关键词 中华蜜蜂囊状幼虫病病毒(Csbv) 诊断 防治 卵黄抗体(EYA)

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中蜂囊状幼虫病病毒(CSBV)核酸的结构研究(英文) 被引量：11

4

作者 张勤奋 杨艺峰 +2 位作者 梁玉尧 卢英 张景强 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期331-334,共4页

本文分别应用冷冻电镜与计算机三维重构技术和分子生物学技术对中蜂囊状幼虫病病毒 (CSBV)的核酸的三维结构和核酸一级结构进行测定和分析 。

关键词 中蜂囊状幼虫病病毒 核酸 一级结构 三维结构 Csbv 冷冻电镜 蜜蜂 计算机三维重构 分子生物学

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中蜂囊状幼虫病毒的免疫应答研究简述

5

作者 庞梓霖 蒋静鑫 +2 位作者 付艳芳 姜玉锁 刘彦杰 《中国蜂业》 2024年第12期50-52,共3页

囊状幼虫病毒(SBV)是威胁中华蜜蜂最为重要的病原,是造成中蜂种群数量下降的重要威胁因素。免疫系统作为生物体抵御病原微生物感染的唯一途径,诱发有效的免疫应答反应是清除病原微生物的关键。因此,针对病毒及其抗原的免疫应答反应是防... 囊状幼虫病毒(SBV)是威胁中华蜜蜂最为重要的病原,是造成中蜂种群数量下降的重要威胁因素。免疫系统作为生物体抵御病原微生物感染的唯一途径,诱发有效的免疫应答反应是清除病原微生物的关键。因此,针对病毒及其抗原的免疫应答反应是防治中蜂囊状幼虫病(CSBV)侵害中华蜜蜂的重要途径。本研究回顾了近年来基于病毒及病毒抗原进行的中蜂自身的免疫应答研究,以及通过体外刺激引起免疫应答反应用于疾病治疗的研究,为深入研究囊状幼虫病毒的免疫应答及基于免疫应答机制的防控提供综合考量。 展开更多

关键词 囊状幼虫病毒(sbv) 免疫应答 免疫基因 抗菌肽

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基于TaqMan探针的蜜蜂囊状幼虫病病毒荧光PCR检测方法的建立和应用 被引量：13

6

作者 宋战昀 王振国 +5 位作者 冯新 刘金华 魏春艳 蔡阳 孟庆峰 周亮 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期920-925,共6页

为建立快速有效的蜜蜂囊状幼虫病检疫方法,依据TaqMan荧光标记探针技术原理,针对蜜蜂囊状幼虫病病毒保守序列,设计出一对特异性引物和一条探针,建立了一种快速检测蜜蜂囊状幼虫病病毒的荧光PCR方法。该方法对蜜蜂囊状幼虫病的检测具有... 为建立快速有效的蜜蜂囊状幼虫病检疫方法,依据TaqMan荧光标记探针技术原理,针对蜜蜂囊状幼虫病病毒保守序列,设计出一对特异性引物和一条探针,建立了一种快速检测蜜蜂囊状幼虫病病毒的荧光PCR方法。该方法对蜜蜂囊状幼虫病的检测具有较好的特异性,与蜜蜂急性麻痹病病毒、蜜蜂慢性麻痹病病毒、蜜蜂残翼病病毒和黑蜂王台病病毒之间均无交叉反应。检测灵敏度可达1.0×102拷贝/μL阳性质粒,可对低病毒含量的样品进行准确检测。重复性和稳定性试验结果显示,变异系数为1.6%,说明该方法具有较好的重复性和稳定性。应用该方法对蜜蜂及蜂制品进行检测,结果显示所建立的荧光PCR检测方法4h内即可报告检测结果,该方法具有快速、灵敏、特异及重复性好等优点,适用于蜜蜂及其制品中蜜蜂囊状幼虫病病毒的快速检疫。 展开更多

关键词 蜜蜂 囊状幼虫病病毒 TAQMAN探针 荧光PCR检测 检疫

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重庆中华蜜蜂囊状幼虫病病毒多聚蛋白基因分子特性分析 被引量：4

7

作者 沈克飞 曹兰 +3 位作者 郑华 杨柳 张邑帆 张素辉 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期959-965,共7页

【目的】分析地处中国南方的重庆地区中华蜜蜂Apis cerana cerana(简称"中蜂")囊状幼虫病病毒(sacbrood virus,SBV)(Ac SBV-S.Chn-CQ)的遗传特性。【方法】采用RT-PCR法对采自重庆23个区县的阳性中蜂幼虫进行SBV多聚蛋白基因... 【目的】分析地处中国南方的重庆地区中华蜜蜂Apis cerana cerana(简称"中蜂")囊状幼虫病病毒(sacbrood virus,SBV)(Ac SBV-S.Chn-CQ)的遗传特性。【方法】采用RT-PCR法对采自重庆23个区县的阳性中蜂幼虫进行SBV多聚蛋白基因扩增、序列测定和序列分析,采用邻接法(neighbor-joining method)基于基因组和基因组片段SB11-SB12构建系统进化树,使用RDP3检测SBV的基因重组。【结果】Ac SBV-S.Chn-CQ与中国南方中蜂SBV(Ac SBV-S.Chn)其他分离株、越南北部东方蜜蜂A.cerana SBV(Ac SBV-N.Vie)、越南北部西方蜜蜂A.mellifera SBV(Am SBV-N.Vie)、韩国东方蜜蜂SBV(Ac SBV-S.Kor)的同源性较高。Ac SBV-S.Chn-CQ在结构蛋白编码区域存在连续51个核苷酸缺失,在非结构蛋白编码区域有3个不连续的核苷酸缺失,与Ac SBV-N.Vie,Am SBV-N.Vie和Ac SBV-S.Kor核苷酸缺失相同。Ac SBV-S.Chn-CQ与Ac SBV-S.Chn-FZ,Ac SBV-N.Vie,Am SBV-N.Vie和Ac SBV-S.Kor在亚洲基因型中形成一亚型,亚型内检测到重组事件。【结论】推测Ac SBV-S.Chn-CQ与SBV-N.Vie和Ac SBVS.Kor可能来自一个共同祖先。 展开更多

关键词 中华蜜蜂 囊状幼虫病病毒 多聚蛋白基因 核苷酸缺失 系统进化

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蜜蜂囊状幼虫病研究进展 被引量：13

8

作者 李薇 薛菲 +4 位作者 Wubie Abebe Jenberie 黄家兴 国占宝 周婷 徐书法 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第6期117-122,共6页

蜜蜂囊状幼虫病是由蜜蜂囊状幼虫病毒(Sacbrood virus,SBV)引起的一种病毒病,对蜂群危害极其严重,对我国本土蜂种的中华蜜蜂危害更甚。到目前为止,我国有20多个省发现中华蜜蜂感染此病,病害侵袭极其严重。由于该病无特效药物可以治疗,... 蜜蜂囊状幼虫病是由蜜蜂囊状幼虫病毒(Sacbrood virus,SBV)引起的一种病毒病,对蜂群危害极其严重,对我国本土蜂种的中华蜜蜂危害更甚。到目前为止,我国有20多个省发现中华蜜蜂感染此病,病害侵袭极其严重。由于该病无特效药物可以治疗,我国部分省份的部分地区由于囊状幼虫病的大流行已经导致该地区中华蜜蜂饲养数量几乎为零,给当地的蜂业生产带来巨大损失。论文从蜜蜂囊状幼虫病的流行规律、病毒的生物学特性、病害诊断方法和蜜蜂抗性机理四个方面对蜜蜂囊状幼虫病研究进展进行概述,旨在为今后有效防控蜜蜂囊状幼虫病提供参考。 展开更多

关键词 蜜蜂 囊状幼虫病 诊断方法 流行

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蜜蜂囊状幼虫病病毒的基因型分析 被引量：15

9

作者 曹兰 沈克飞 +6 位作者 张邑帆 罗文华 王瑞生 任勤 郭军 王志冬 戴荣国 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第1期41-44,共4页

为了解蜜蜂囊状幼虫病病毒的遗传进化规律,依据SB14f/SB15r引物所扩增的RNA依赖的RNA聚合酶基因片段序列对该病毒进行基因型分析。结果表明,该病毒主要分为欧洲型、远东型和南非型3个基因型。欧洲基因型分为中欧和英国亚型,远东基因型... 为了解蜜蜂囊状幼虫病病毒的遗传进化规律,依据SB14f/SB15r引物所扩增的RNA依赖的RNA聚合酶基因片段序列对该病毒进行基因型分析。结果表明,该病毒主要分为欧洲型、远东型和南非型3个基因型。欧洲基因型分为中欧和英国亚型,远东基因型分为东方蜜蜂和西蜂亚型。提示蜜蜂囊状幼虫病病毒总体上按地域分型。 展开更多

关键词 囊状幼虫病病毒 RNA依赖的RNA聚合酶基因 基因型 蜜蜂

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中华蜜蜂囊状幼虫病毒北京分离株VP1蛋白基因序列特征及原核表达 被引量：2

10

作者 李薇 黄家兴 +4 位作者 Abebe Jenberie WUBIE 薛菲 国占宝 周婷 徐书法 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期495-502,共8页

【目的】研究中华蜜蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)VP1蛋白的分子进化特征及遗传多样性。【方法】利用RT-PCR方法,克隆了8株CSBV北京分离株VP1蛋白的基因编码区。【结果】序列分析表明,VP1蛋白基因编码区开放阅读框长945 ... 【目的】研究中华蜜蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)VP1蛋白的分子进化特征及遗传多样性。【方法】利用RT-PCR方法,克隆了8株CSBV北京分离株VP1蛋白的基因编码区。【结果】序列分析表明,VP1蛋白基因编码区开放阅读框长945 bp,编码315个氨基酸,推测编码蛋白的相对分子量和等电点分别为35.42 kDa和9.23,具有亲水性和免疫原性。序列同源性分析表明,不同年份CSBV北京分离株VP1蛋白氨基酸序列间差异较小,仅个别氨基酸存在差异。北京分离株与辽宁分离株及越南分离株VP1核苷酸序列一致性达93%,与印度及韩国分离株VP1核苷酸序列一致性达92%,与英国分离株VP1核苷酸序列一致性最低,为88%。序列分析同时表明,CSBV北京分离株VP1蛋白序列存在特有的序列特征,同其他地区分离株比较,北京分离株VP1蛋白序列中存在着氨基酸的插入突变。序列替换率分析表明,亚洲型分离株间序列替换率低于亚洲分离株与欧洲分离株间的替换率。构建原核表达载体pEASY-E1-VP1,经IPTG诱导,CSBV VP1蛋白在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)pLysS菌株中表达。【结论】本研究提示CSBV不同分离株基因序列存在变异,结果为进一步研究CSBV致病性分化的分子机理奠定了基础。 展开更多

关键词 中华蜜蜂 囊状幼虫病毒 VP1蛋白 系统进化 原核表达

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施马伦贝格病毒核衣壳蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备 被引量：12

11

作者 张永宁 吴绍强 +6 位作者 吕继洲 冯春燕 王彩霞 袁向芬 邓俊花 林祥梅 Wernike Kerstin 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1629-1636,共8页

本研究旨在表达施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)的核衣壳蛋白(N),进而制备其多克隆抗体。以SBV(BH80株)的RNA为模板,RT-PCR扩增N基因序列,并将其克隆至原核表达载体pET-28a-c(+)中,获得pET-28a-SBV-N重组质粒。经酶切和测序鉴... 本研究旨在表达施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)的核衣壳蛋白(N),进而制备其多克隆抗体。以SBV(BH80株)的RNA为模板,RT-PCR扩增N基因序列,并将其克隆至原核表达载体pET-28a-c(+)中,获得pET-28a-SBV-N重组质粒。经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达HisSBV-N融合蛋白。在非变性条件下用Ni-NTA柱纯化His-SBV-N,并以此为抗原免疫新西兰大白兔制备多抗。经免疫亲和层析纯化后,利用Western blot和间接免疫荧光对多抗进行鉴定。结果表明:(1)His-SBV-N融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中同时以可溶性和包涵体2种形式表达,相对分子质量约为30ku;(2)制备的多抗效价高达1∶64 000。该多抗不仅能与His-SBV-N融合蛋白发生特异性反应,而且还能识别SBV的不同毒株,但与布尼亚病毒科内亲缘关系最近的沙门达病毒(Shamonda virus)、道格拉斯病毒(Douglas virus)和赤羽病病毒(Akabane virus)的核衣壳蛋白存在交叉反应。His-SBV-N融合蛋白及其多抗的成功制备,为施马伦贝格病血清学检测方法的建立奠定了物质基础。 展开更多

关键词 施马伦贝格病毒 核衣壳蛋白 原核表达 多克隆抗体 免疫亲和层析

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中蜂囊状幼虫病病毒部分结构蛋白基因的克隆及序列分析 被引量：5

12

作者 冯建勋 余健秀 张景强 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期124-126,共3页

根据小ＲＮＡ 病毒科（ Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ） 中病毒ＲＮＡ 所具有的结构特征， 采用ｍＲＮＡｃａｐｔｕｒｅ ｋｉｔ 提取纯化中蜂囊状幼虫病病毒（Ｃｈｉｎｅｓｅｓｃａｂｒｏｏｄ ｖｉｒｕｓ ＣＳＢＶ） 的ＲＮＡ， 并以... 根据小ＲＮＡ 病毒科（ Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ） 中病毒ＲＮＡ 所具有的结构特征， 采用ｍＲＮＡｃａｐｔｕｒｅ ｋｉｔ 提取纯化中蜂囊状幼虫病病毒（Ｃｈｉｎｅｓｅｓｃａｂｒｏｏｄ ｖｉｒｕｓ ＣＳＢＶ） 的ＲＮＡ， 并以之为ｃＤＮＡ合成的模板． 依据小ＲＮＡ病毒科中的脊髓灰质炎病毒结构蛋白基因序列设计了一对引物ＶＰ５和ＶＰ３ ， 通过ＰＣＲ 扩增获得预期大小约为１ １００ ｂｐ的ＤＮＡ 片段， 将此片段克隆到ｐＧＥＭＴｅａｓｙ载体上并直接测序． 序列分析表明， 该片段为中蜂囊状幼虫病病毒部分结构蛋白基因， 与意蜂幼虫囊状病病毒结构蛋白基因序列的同源性为８６－８ ％ ， 与之对应氨基酸序列的同源性高达９３－４ ％ ． 展开更多

关键词 中蜂 囊状幼虫病 病毒 Csbv 结构蛋白 基因克隆

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中蜂囊状幼虫病病毒特异性半套式RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：14

13

作者 沈克飞 曹兰 +3 位作者 付利芝 任勤 姬聪慧 王介平 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第12期39-42,共4页

基于中蜂囊状幼虫病病毒基因组序列AF469603中的RNA依赖的RNA聚合酶基因,建立该病毒的半套式RT-PCR检测方法。利用建立的方法检测有典型临床症状的病死中蜂幼虫,可扩增到特异的目的片段,序列分析得出,PCR扩增片段与AF469603同源性高于9... 基于中蜂囊状幼虫病病毒基因组序列AF469603中的RNA依赖的RNA聚合酶基因,建立该病毒的半套式RT-PCR检测方法。利用建立的方法检测有典型临床症状的病死中蜂幼虫,可扩增到特异的目的片段,序列分析得出,PCR扩增片段与AF469603同源性高于97%,与其他病原无同源性,表明该方法可用于临床诊断和流行病学研究。 展开更多

关键词 中蜂 囊状幼虫病病毒 半套式RT—PCR

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施马伦贝格病研究进展 被引量：9

14

作者 张永宁 吴绍强 林祥梅 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1029-1037,共9页

施马伦贝格病是自2011年夏季以来在欧洲新发的一种虫媒性病毒病,其病原为施马伦贝格病毒,主要感染绵羊、牛和山羊等反刍动物,可导致成年家畜生产性能下降,怀孕母畜发生流产、产死胎或畸形胎儿。截至目前,中国尚未出现相关疫情。笔者将... 施马伦贝格病是自2011年夏季以来在欧洲新发的一种虫媒性病毒病,其病原为施马伦贝格病毒,主要感染绵羊、牛和山羊等反刍动物,可导致成年家畜生产性能下降,怀孕母畜发生流产、产死胎或畸形胎儿。截至目前,中国尚未出现相关疫情。笔者将从病原学、流行病学、临床症状、发病机制与病理变化、检疫与诊断、预警与防控等方面对取得的最新研究进展进行概述,以期增强人们对该病的认识,并为中国有关部门采取恰当的防控措施提供科学依据。 展开更多

关键词 施马伦贝格病 施马伦贝格病毒 虫媒性病毒病 检疫 防控

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施马伦贝格病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及其特性分析 被引量：7

15

作者 张永宁 吴绍强 +3 位作者 Kerstin WERNIKE 吕继洲 冯春燕 林祥梅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期289-293,共5页

目的制备施马伦贝格病毒(SBV)核衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(mAb)并分析其特性。方法将SBV N基因分别构建至pET-28a-c(+)和pMAL-c5X载体中,在大肠杆菌中诱导表达带组氨酸标签的融合蛋白His-SBV-N和带麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的融合蛋白MBP-... 目的制备施马伦贝格病毒(SBV)核衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(mAb)并分析其特性。方法将SBV N基因分别构建至pET-28a-c(+)和pMAL-c5X载体中,在大肠杆菌中诱导表达带组氨酸标签的融合蛋白His-SBV-N和带麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的融合蛋白MBP-SBV-N,分别用镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)树脂和直链淀粉树脂纯化两种蛋白;用纯化的His-SBVN免疫BALB/c小鼠制备mAb,以MBP-SBV-N为包被抗原间接ELISA筛选分泌mAb的杂交瘤细胞和测定mAb效价,利用蛋白G琼脂糖凝胶从腹水中纯化mAb;应用Western blot和间接免疫荧光分析mAb的反应性和特异性。结果筛选并纯化出1株抗SBV的mAb(命名为1F2),效价为1∶32 000,重链亚型为IgG2α,轻链为κ;1F2既能与重组SBV N蛋白发生反应,又能识别SBV,但与布尼亚病毒科内亲缘关系较近的沙门达病毒、道格拉斯病毒和赤羽病病毒的N蛋白存在交叉反应,而与裂谷热病毒N蛋白无交叉反应。结论成功制备了抗SBV核衣壳蛋白的mAb,为SBV的血清学检测提供了工具。 展开更多

关键词 施马伦贝格病毒 核衣壳蛋白 原核表达 单克隆抗体

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中蜂囊状幼虫病毒结构蛋白预测与鉴定 被引量：4

16

作者 马鸣潇 马臣 +3 位作者 程健 谢振声 李明 费东亮 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1768-1773,共6页

采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法、生物信息学软件和质谱分析对中蜂囊状幼虫病毒(CSBV)辽宁株(CSBV-LN)全基因组进行了分子克隆、序列测定、分子生物学特性分析及结构蛋白预测和鉴定.结果表明,CSBV-LN全基因组序列长度为8863个核苷... 采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法、生物信息学软件和质谱分析对中蜂囊状幼虫病毒(CSBV)辽宁株(CSBV-LN)全基因组进行了分子克隆、序列测定、分子生物学特性分析及结构蛋白预测和鉴定.结果表明,CSBV-LN全基因组序列长度为8863个核苷酸,编码一个大的开放阅读框,其中包括178 nt的5'非编码区的前导序列和79 nt的3'非编码区,后面跟着一个poly(A)的尾巴.通过软件分析表明,CSBV-LN蛋白序列类似于哺乳动物的小RNA病毒蛋白序列,预计存在VP1,VP2,VP3和VP4等4个小的结构蛋白;系统进化分析表明,CSBV、囊状幼虫病毒(SBV)和残翅病毒(DWV)的起源相同,推测CSBV有着类似DWV的结构蛋白序列5'-VP2-VP4VP1VP3-3.基于此,根据PAGE蛋白条带的大小,利用NetPicoRNA软件预测结构蛋白的裂解位点.在此基础上,对纯化后的CSBV进行SDS-PAGE分离,对分离到的4个蛋白进行质谱分析,结果鉴定出VP1,VP3和VP0 3个蛋白. 展开更多

关键词 中蜂囊状幼虫病毒 反转录聚合酶链反应 结构蛋白 质谱分析

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检测蜜蜂囊状幼虫病毒环介导等温扩增技术的建立 被引量：2

17

作者 王向辉 郑言 +4 位作者 隋佳辰 张健 杨倩 宋战昀 王振国 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期137-141,共5页

为建立一种快速检测蜜蜂囊状幼虫病毒（SBV）的环介导等温扩增方法（LAMP）,本研究根据SBV-UK株多聚蛋白基因序列（AF092924.1）设计了4条特异性引物,通过LAMP real-time Turbidimeter仪对SBV的反应体系和反应条件进行检测和实时监控,... 为建立一种快速检测蜜蜂囊状幼虫病毒（SBV）的环介导等温扩增方法（LAMP）,本研究根据SBV-UK株多聚蛋白基因序列（AF092924.1）设计了4条特异性引物,通过LAMP real-time Turbidimeter仪对SBV的反应体系和反应条件进行检测和实时监控,并评价其特异性、敏感性、重复性和稳定性。结果显示,在63℃恒温扩增40 min后,仅SBV核酸扩增,而其他病毒均呈阴性。反应结束后在反应体系中加入SYBR Green I的可视化判定结果与real-time Turbidimeter仪检测结果一致;该方法具有较强的特异性和较高的敏感性,其最低检出量为3.2×10~1拷贝/μL,是普通PCR的100倍;对同一批次和不同批次提取的SBV核酸进行扩增,结果表明重复性和稳定性良好;临床样品检测结果表明LAMP法与常规PCR法检测结果一致。本研究建立的LAMP方法操作简便,适用于SBV的快速检测。 展开更多

关键词 蜜蜂囊状幼虫病毒 环介导等温扩增技术 检测

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检测施马伦贝格病毒核酸的荧光定量RT-PCR方法 被引量：3

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作者 张永宁 吴绍强 +5 位作者 吕继洲 冯春燕 王彩霞 邓俊花 袁向芬 林祥梅 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1824-1829,共6页

根据施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)S基因节段设计一对引物和TaqMan探针,建立了检测SBV核酸的荧光定量RT-PCR方法。通过优化反应体系和反应条件,该方法对101~107半数组织培养感染量(TCID50)的SBV核酸呈现良好的线性关系。利... 根据施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)S基因节段设计一对引物和TaqMan探针,建立了检测SBV核酸的荧光定量RT-PCR方法。通过优化反应体系和反应条件,该方法对101~107半数组织培养感染量(TCID50)的SBV核酸呈现良好的线性关系。利用德国FLI制备和保存的SBV核酸阳性(n=140)、SBV核酸阴性(n=132)和辛波血清群相关病毒核酸样品(n=16),对该方法的敏感性、特异性和重复性进行了验证。结果表明,所建立方法与FLI研制的SBV荧光定量RT-PCR具有相近的敏感性,两者对140份SBV核酸阳性样品的检测符合率达96.4%(135/140);可灵敏地检测出1TCID50的SBV RNA,并具有良好的重复性;除道格拉斯病毒(Douglas virus)外,与辛波血清群相关病毒核酸无交叉反应。用该方法对采自内蒙古呼和浩特市某养殖场的绵羊血清(n=47)和澳大利亚进口绵羊血清(n=47)的RNA进行了检测,结果未发现SBV核酸阳性样品。SBV荧光定量RTPCR检测方法的建立为应对施马伦贝格病提供了有效的检测手段。 展开更多

关键词 施马伦贝格病毒 核酸 引物 TAQMAN探针 荧光定量RT-PCR

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云南边境地区3种外来动物疫病流行情况及病原特性研究 被引量：3

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作者 赵文华 李富祥 +1 位作者 尹伟 杨仕标 《动物医学进展》 北大核心 2021年第12期31-37,共7页

为评估云南边境地区外来动物疫病的风险状况,了解小反刍兽疫(PPR)、裂谷热(RVF)和施马伦贝格(SB)等3种重要外来动物疫病的流行情况,在云南昆明辖区内某大型牲畜交易市场及某规模化奶牛养殖合作社采集绵羊、山羊、牛、马及驴等不同动物... 为评估云南边境地区外来动物疫病的风险状况,了解小反刍兽疫(PPR)、裂谷热(RVF)和施马伦贝格(SB)等3种重要外来动物疫病的流行情况,在云南昆明辖区内某大型牲畜交易市场及某规模化奶牛养殖合作社采集绵羊、山羊、牛、马及驴等不同动物鼻拭子样本及血液样本258份(包含境外家畜),应用已建立的PPRV/RVFV/SBV三重实时荧光定量RT-PCR方法进行检测。检测结果显示,在258份样本中,检测到PPRV核酸阳性样本1份,未检测到RVFV/SBV核酸阳性样本。对PPRV核酸阳性样本,应用普通RT-PCR扩增F-H基因接头位置序列和进一步核苷酸序列测序确定其为PPRV谱系Ⅳ型毒株,与2013年新疆伊犁山羊毒株(KM091959)及2014年吉林家养山羊毒株(KM816619)核苷酸同源性最高,达到99.2%。结果提示,云南边境地区交易的山羊中携带PPRV;未检测到RVFV和SBV。 展开更多

关键词 小反刍兽疫病毒 裂谷热病毒 施马伦贝格病毒 核酸检测 风险评估

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猪瘟病毒与辛德毕斯病毒成熟和释放特征的比较研究 被引量：1

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作者 王镇 梁凤霞 +1 位作者 翟中和 丁明孝 《电子显微学报》 CAS CSCD 1999年第5期496-502,共7页

电镜下观察了二种有囊膜的正链 ＲＮＡ 病毒——猪瘟病毒（ＣＳＦＶ）与辛德毕斯病毒（ＳｂＶ）感染的宿主细胞。在ＳｂＶ ６Ｋ 蛋白突变株感染的ＢＨＫ－２１ 细胞中，可清楚地显示病毒从细胞质膜出芽与释放的过程，并在细胞质中积累... 电镜下观察了二种有囊膜的正链 ＲＮＡ 病毒——猪瘟病毒（ＣＳＦＶ）与辛德毕斯病毒（ＳｂＶ）感染的宿主细胞。在ＳｂＶ ６Ｋ 蛋白突变株感染的ＢＨＫ－２１ 细胞中，可清楚地显示病毒从细胞质膜出芽与释放的过程，并在细胞质中积累了大量的核衣壳。在ＣＳＦＶ 感染的Ｍ ＰＫ 细胞中首次观察到较多的病毒核衣壳与成熟的病毒粒子，因而有可能对其成熟与释放方式的不同进行比较研究。此外。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 辛德毕斯病毒 病毒 成熟 释放

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