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重组截短型人角质细胞生长因子-1的表达及纯化
被引量：
3
1
作者
邓林
刘孝菊
+5 位作者
龚守良
王会岩
田海山
王晓杰
马吉胜
李校堃
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期629-633,共5页
目的:构建高效表达N端缺失的23个氨基酸重组人角质细胞生长因子1(rhKGF1dest23)的基因工程菌,为治疗放化疗后口腔黏膜炎的新药开发提供实验数据。方法:利用PCR方法分别以pET3c-hKGF1及sumo-EGF为模板合成N端缺失的23个氨基酸rhKGF1dest2...
目的:构建高效表达N端缺失的23个氨基酸重组人角质细胞生长因子1(rhKGF1dest23)的基因工程菌,为治疗放化疗后口腔黏膜炎的新药开发提供实验数据。方法:利用PCR方法分别以pET3c-hKGF1及sumo-EGF为模板合成N端缺失的23个氨基酸rhKGF1dest23及sumo基因片段,构建4种原核表达载体pET22b-rhKGF1dest23、pET22b-sumo-rhKGF1dest23、pET3c-rhKGF1dest23和pET3c-sumo-rhKGF1dest23,分别转化原核表达宿主菌Rosetta(DE3)plysS、BL21(DE3)、BL21(DE3)StarplysS、origima(DE3)和BL21AI,筛选rhKGF1dest23蛋白表达的最佳质粒与宿主菌组合。CM离子交换和肝素亲和层析法纯化rhKGF1dest23蛋白,Westernblotting法鉴定rhKGF1dest23蛋白。结果:pET22b-rhKGF1dest23质粒与BL21AI宿主菌为最佳组合表达,经IPTG与阿拉伯糖诱导,SDS-PAGE电泳后表明目的蛋白大部分以可溶性形式存在,约占菌体总蛋白的10%,经CM和肝素两步纯化后rhKGF1dest23蛋白纯度为95%以上,Westernblotting法鉴定为rhKGF1dest23蛋白。结论:成功构建表达人KGF1dest23重组蛋白的基因工程菌,经IPTG与阿拉伯糖诱导,CM弱阳离子与肝素亲合层析后,得到了纯化的rhKGF1dest23蛋白。
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关键词
高效表达
重组截短人角质细胞生长因子-
1
纯化
在线阅读
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职称材料
重组人KGF-1蛋白的表达、纯化及活性研究
被引量：
3
2
作者
周昭
范清林
宋礼华
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2016年第1期13-16,20,共5页
在大肠杆菌中表达可溶性的重组人rh KGF-1蛋白,研究其生物学活性,为rh KGF-1蛋白进一步制药提供基础。合成ΔN23 rh KGF-1(N端缺失23个氨基酸残基的rh KGF-1形式)的基因序列,应用重叠PCR技术,将其与poly His-sumo标签基因序列拼接。构...
在大肠杆菌中表达可溶性的重组人rh KGF-1蛋白,研究其生物学活性,为rh KGF-1蛋白进一步制药提供基础。合成ΔN23 rh KGF-1(N端缺失23个氨基酸残基的rh KGF-1形式)的基因序列,应用重叠PCR技术,将其与poly His-sumo标签基因序列拼接。构建重组表达质粒p ET30a-6His-sumo-rh KGF1,转入E.coli BL21(DE3)中,表达融合蛋白。融合蛋白经Ni-NTA纯化后,切除SUMO标签,再经Ni-NTA纯化获得ΔN23 rh KGF-1蛋白。CCK-8法测定其对人永生化表皮细胞(Ha Cat细胞)的促增殖作用。结果表明,成功构建了p ET30a-6His-sumo-rh KGF1表达质粒,测序结果与预期一致。实现了融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中的可溶性表达,经纯化、酶切获得了ΔN23 rh KGF-1蛋白。制备的ΔN23 rh KGF-1蛋白具有促进Ha Cat细胞增殖的作用,EC50=6.11 ng/m L。
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关键词
重组人角质细胞生长因子-
1
SUMO蛋白
原核表达
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职称材料
题名
重组截短型人角质细胞生长因子-1的表达及纯化
被引量：
3
1
作者
邓林
刘孝菊
龚守良
王会岩
田海山
王晓杰
马吉胜
李校堃
机构
吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心
吉林农业大学生命科学学院
吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室
温州医学院药学院生物技术制药工程重点实验室
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期629-633,共5页
基金
科技部重大新药创制项目资助课题(2009ZX09102)
文摘
目的:构建高效表达N端缺失的23个氨基酸重组人角质细胞生长因子1(rhKGF1dest23)的基因工程菌,为治疗放化疗后口腔黏膜炎的新药开发提供实验数据。方法:利用PCR方法分别以pET3c-hKGF1及sumo-EGF为模板合成N端缺失的23个氨基酸rhKGF1dest23及sumo基因片段,构建4种原核表达载体pET22b-rhKGF1dest23、pET22b-sumo-rhKGF1dest23、pET3c-rhKGF1dest23和pET3c-sumo-rhKGF1dest23,分别转化原核表达宿主菌Rosetta(DE3)plysS、BL21(DE3)、BL21(DE3)StarplysS、origima(DE3)和BL21AI,筛选rhKGF1dest23蛋白表达的最佳质粒与宿主菌组合。CM离子交换和肝素亲和层析法纯化rhKGF1dest23蛋白,Westernblotting法鉴定rhKGF1dest23蛋白。结果:pET22b-rhKGF1dest23质粒与BL21AI宿主菌为最佳组合表达,经IPTG与阿拉伯糖诱导,SDS-PAGE电泳后表明目的蛋白大部分以可溶性形式存在,约占菌体总蛋白的10%,经CM和肝素两步纯化后rhKGF1dest23蛋白纯度为95%以上,Westernblotting法鉴定为rhKGF1dest23蛋白。结论:成功构建表达人KGF1dest23重组蛋白的基因工程菌,经IPTG与阿拉伯糖诱导,CM弱阳离子与肝素亲合层析后,得到了纯化的rhKGF1dest23蛋白。
关键词
高效表达
重组截短人角质细胞生长因子-
1
纯化
Keywords
high expression
recombinant truncated human keratinocyte growth factor-1
purification
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
重组人KGF-1蛋白的表达、纯化及活性研究
被引量：
3
2
作者
周昭
范清林
宋礼华
机构
安徽大学生命科学学院
安徽安科生物股份有限公司
出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2016年第1期13-16,20,共5页
文摘
在大肠杆菌中表达可溶性的重组人rh KGF-1蛋白,研究其生物学活性,为rh KGF-1蛋白进一步制药提供基础。合成ΔN23 rh KGF-1(N端缺失23个氨基酸残基的rh KGF-1形式)的基因序列,应用重叠PCR技术,将其与poly His-sumo标签基因序列拼接。构建重组表达质粒p ET30a-6His-sumo-rh KGF1,转入E.coli BL21(DE3)中,表达融合蛋白。融合蛋白经Ni-NTA纯化后,切除SUMO标签,再经Ni-NTA纯化获得ΔN23 rh KGF-1蛋白。CCK-8法测定其对人永生化表皮细胞(Ha Cat细胞)的促增殖作用。结果表明,成功构建了p ET30a-6His-sumo-rh KGF1表达质粒,测序结果与预期一致。实现了融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中的可溶性表达,经纯化、酶切获得了ΔN23 rh KGF-1蛋白。制备的ΔN23 rh KGF-1蛋白具有促进Ha Cat细胞增殖的作用,EC50=6.11 ng/m L。
关键词
重组人角质细胞生长因子-
1
SUMO蛋白
原核表达
Keywords
recombinant
human
keratinocyte
growth
factor-
1
SUMO protein
prokaryotic expression
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组截短型人角质细胞生长因子-1的表达及纯化
邓林
刘孝菊
龚守良
王会岩
田海山
王晓杰
马吉胜
李校堃
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010
3
在线阅读
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职称材料
2
重组人KGF-1蛋白的表达、纯化及活性研究
周昭
范清林
宋礼华
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2016
3
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职称材料
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