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鸡斑联蛋白基因的慢病毒干扰载体的构建及筛选被引量：2: 1; 作者戴国俊孙大辉 +7 位作者林雨鑫孙明明王翔王金玉张跟喜谢恺舟施会强侍苗苗《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1330-1336,共7页; 本试验旨在构建4条鸡斑联蛋白(zyxin)基因的RNAi慢病毒载体,对其进行滴度测定,并进行有效干扰靶点的筛选,为以后开展鸡zyxin基因抗球虫机理的研究奠定基础。提取鸡胸腺组织的RNA,反转录,扩增zyxin基因的编码区,并将其克隆到真核表达载体... 展开更多; 关键词 zyxin基因 RNAI 慢病毒干扰载体真核表达载体鸡; 在线阅读下载PDF 职称材料

小鼠NR4A1基因小分子干扰RNA重组腺病毒载体的构建与鉴定被引量：3: 2; 作者薛凯李梅 +3 位作者刁飞扬凌静崔毓桂刘嘉茵《医学研究生学报》 CAS 2009年第2期115-119,I0001,共6页; 目的:构建表达小鼠NR4A1基因的小分子干扰RNA(siRNA)重组腺病毒载体。方法:根据siRNA靶序列设计并合成2条互补的64bp寡核苷酸。pShuttle-H1穿梭质粒经BglⅡ、HindⅢ双酶切后,与退火的寡核苷酸进行连接,构建穿梭质粒pShuttle-H1-siRNA。... 展开更多; 关键词 RNA干扰重组腺病毒载体核受体NR4A1 多囊卵巢综合征; 在线阅读下载PDF 职称材料

大鼠CD40基因RNA干扰真核表达载体的构建及鉴定被引量：2: 3; 作者王楠马庆久 +3 位作者鲁建国何显力邹爱民李坤《医学研究生学报》 CAS 2008年第3期259-262,I0003,共5页; 目的:构建靶向大鼠CD40基因小分子干扰RNA(siRNA)真核细胞表达载体。方法:利用Ambion公司的网上设计工具,设计2个靶向CD40基因的发夹状siRNA,通过化学合成的方法合成2对分别互补的寡核苷酸链,退火后将双链DNA片段连接至pSilencer4.1-CMV... 展开更多; 关键词 RNA干扰 CD40 重组载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

靶向Akt2基因RNA干扰重组表达载体的构建和测序: 4; 作者曹婷婷张茂林 +2 位作者赵国强卢滨王静《山东医药》 CAS 北大核心 2008年第28期19-21,共3页; 目的利用RNA干扰技术,以Akt2为靶基因,设计并构建重组表达载体,并进行测序鉴定。方法利用GenBank中已知Akt2的mRNA基因序列设计具有短发夹结构的两条寡核甘酸序列,经退火形成互补双链,与pGEM-T Easy载体进行连接,经蓝白筛选后以T7和SP6... 展开更多; 关键词 Akt2基因 RNA干扰重组表达载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

小鼠NMNAT1基因的过表达和RNAi重组慢病毒的构建包装和检测: 5; 作者赵虹杨子超张惊宇《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期622-629,共8页; 目的:针对小鼠烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1(NMNAT1)基因构建质粒并进行慢病毒包装,同时检测其表达水平和干扰效率,为进一步探讨该基因的功能提供研究工具和实验基础。方法:根据NMNAT1基因信息,用慢病毒载体pLenti6构建三种重组质粒,分... 展开更多; 关键词慢病毒属重组遗传质粒遗传载体烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1 RNA干扰基因过表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

CXCR4-shRNA重组腺病毒表达载体的构建及鉴定: 6; 作者陆航孙巨峰刘学政《山东医药》 CAS 北大核心 2011年第46期22-23,共2页; 目的选择性构建CXC趋化因子受体4(CXCR4)的特异RNA干扰载体。方法在GenBank中获取CXCR4基因的核苷酸序列,设计并合成3条短发夹RNA(shRNA)的DNA序列,并克隆到PL-Dest腺病毒骨架载体(shpAd/PL-Dest)中,组成人趋化因子受体重组腺病毒基因... 展开更多; 关键词 CXC趋化因子受体4 RNA干扰重组腺病毒载体人胚肾293A细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

玉米陈化关键酶基因Zmlox-2的RNA干扰载体的构建% 被引量：3: 7; 作者韩颖赵寿经 +2 位作者杨瑜孙尧王乐《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第3期136-141,共6页; 脂肪酸氧化酶(LOX)催化不饱和脂肪酸过氧化反应,导致玉米(Zea mays L.)种子储藏品质的下降.为抑制玉米陈化关键酶基因Zmlox-2的表达,依据RNA干扰原理,针对玉米Zmlox-2基因进行克隆,采用重组PCR及酶切连接技术成功构建了Zmlox-2基因的RN... 展开更多; 关键词生物工程陈化 RNA干扰表达载体重组PCR 脂肪酸氧化酶; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名鸡斑联蛋白基因的慢病毒干扰载体的构建及筛选被引量：2: 1; 作者戴国俊孙大辉林雨鑫孙明明王翔王金玉张跟喜谢恺舟施会强侍苗苗; 机构扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏京海禽业集团有限公司; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1330-1336,共7页; 基金国家肉鸡产业技术体系(nyctx-42-G1-05) 江苏省高校自然科学研究重大项目(11KJA230001) 江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD); 文摘本试验旨在构建4条鸡斑联蛋白(zyxin)基因的RNAi慢病毒载体,对其进行滴度测定,并进行有效干扰靶点的筛选,为以后开展鸡zyxin基因抗球虫机理的研究奠定基础。提取鸡胸腺组织的RNA,反转录,扩增zyxin基因的编码区,并将其克隆到真核表达载体Pex-6上。设计针对zyxin的shRNA序列,应用基因重组技术插入到Lv3慢病毒表达载体中,将lv3-shRNA载体与包装质粒pGag/Pol、pRev、Pvsv-G共转染293T细胞,进行病毒包装。将得到的病毒原液10倍稀释6个梯度,分别转染293T细胞,进行滴度的测定。将构建好的4条慢病毒载体与Pex-6-zyxin真核表达载体共转染293T细胞,运用RT-PCR和Western-blot方法进行有效干扰靶点的筛选。构建4条针对目的基因zyxin的RNAi慢病毒穿梭质粒表达载体CO1、CO2、CO3、CO4和1个阴性对照质粒,经测序鉴定正确;共转染293T细胞包装病毒并浓缩后滴度达1×108 TU·mL-1,适合感染目的细胞,经过筛选,CO3对zyxin在293T细胞中的表达干扰效果最佳。成功构建了zyxin基因RNA干扰慢病毒表达载体,并进行了有效干扰靶点的筛选,为进一步研究zyxin基因的功能奠定了基础。; 关键词 zyxin基因 RNAI 慢病毒干扰载体真核表达载体鸡; Keywords zyxin RNAi recombinant lenti-virus interference vectors eukaryotic expression vector chicken; 分类号 S813.3 [农业科学—畜牧学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名小鼠NR4A1基因小分子干扰RNA重组腺病毒载体的构建与鉴定被引量：3: 2; 作者薛凯李梅刁飞扬凌静崔毓桂刘嘉茵; 机构南京医科大学第一附属医院临床生殖医学中心; 出处《医学研究生学报》 CAS 2009年第2期115-119,I0001,共6页; 基金国家教育部"长江学者和创新团队发展计划"基金资助项目(批准号:IRT0631) 江苏省"科教兴卫工程"基金资助项目(批准号:LJ200606); 文摘目的:构建表达小鼠NR4A1基因的小分子干扰RNA(siRNA)重组腺病毒载体。方法:根据siRNA靶序列设计并合成2条互补的64bp寡核苷酸。pShuttle-H1穿梭质粒经BglⅡ、HindⅢ双酶切后,与退火的寡核苷酸进行连接,构建穿梭质粒pShuttle-H1-siRNA。PmeⅠ酶切pShuttle-H1-siRNA,然后分别将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1和穿梭质粒pShuttle-H1-siRNA转化至BJ-5183感受态细菌中进行同源重组。PacⅠ酶切线性化重组质粒pAdEasy-H1-siRNA后转染AD-293细胞进行病毒包装和扩增。Westernblot检测NR4A1基因的表达。结果:穿梭质粒pShuttle-H1-siRNA经双酶切和测序证实构建成功,进一步构建了表达小鼠NR4A1基因的siRNA重组腺病毒载体,重组腺病毒AdH1-siRNA/NR4A1感染小鼠睾丸间质细胞瘤细胞(MLTC-1)后显著抑制目的蛋白表达(抑制率为70%～90%)。结论:成功构建了表达小鼠NR4A1基因的siRNA重组腺病毒载体AdH1-siRNA/NR4A1,并在MLTC-1中验证其抑制NR4A1蛋白表达,为进一步研究NR4A1基因在多囊卵巢综合征(PCOS)中的作用奠定了基础。; 关键词 RNA干扰重组腺病毒载体核受体NR4A1 多囊卵巢综合征; Keywords RNA interference recombinant adenovirus vector NR4A1 Polycystic ovarian syndrome; 分类号 R394 [医药卫生—医学遗传学] R735.2 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名大鼠CD40基因RNA干扰真核表达载体的构建及鉴定被引量：2: 3; 作者王楠马庆久鲁建国何显力邹爱民李坤; 机构第四军医大学唐都医院普通外科第四军医大学唐都医院中心实验室; 出处《医学研究生学报》 CAS 2008年第3期259-262,I0003,共5页; 基金陕西省科技攻关项目资助[批准号:2005K09-G12(4)]; 文摘目的:构建靶向大鼠CD40基因小分子干扰RNA(siRNA)真核细胞表达载体。方法:利用Ambion公司的网上设计工具,设计2个靶向CD40基因的发夹状siRNA,通过化学合成的方法合成2对分别互补的寡核苷酸链,退火后将双链DNA片段连接至pSilencer4.1-CMV neo vector的多克隆位点,转化扩增提取质粒,对重组质粒进行BamHⅠ和HindⅢ双酶切电泳鉴定和DNA序列分析鉴定。结果:经酶切电泳鉴定和DNA序列分析鉴定,目的片段与pSilencer4.1-CMV neo vector连接正确,靶向大鼠CD40基因的siRNA重组表达质粒构建成功。结论:成功构建了大鼠CD40基因的RNA干扰真核表达载体pSilencer4.1-CMV-CD40.1和pSilencer4.1-CMV-CD40.2,为进一步研究CD40基因在同种器官移植排斥反应中的作用奠定基础。; 关键词 RNA干扰 CD40 重组载体; Keywords RNA interference CD40 recombinant vector; 分类号 Q782 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名靶向Akt2基因RNA干扰重组表达载体的构建和测序: 4; 作者曹婷婷张茂林赵国强卢滨王静; 机构郑州大学第五附属医院郑州大学郑州市第五人民医院郑州大学第一附属医院; 出处《山东医药》 CAS 北大核心 2008年第28期19-21,共3页; 基金河南省卫生厅科技攻关课题(20060035); 文摘目的利用RNA干扰技术,以Akt2为靶基因,设计并构建重组表达载体,并进行测序鉴定。方法利用GenBank中已知Akt2的mRNA基因序列设计具有短发夹结构的两条寡核甘酸序列,经退火形成互补双链,与pGEM-T Easy载体进行连接,经蓝白筛选后以T7和SP6为引物进行PCR鉴定,对表达载体pRNAT-U6.2及亚克隆产物进行双酶切,将得到的基因及线性化的表达载体再次连接,利用PCR方法进行重组体的筛选鉴定并进行测序分析。结果将合成的DNA序列克隆到表达载体上,经PCR扩增筛选鉴定和测序鉴定证实为所需序列。结论Akt2靶向RNA干扰重组表达载体构建成功。; 关键词 Akt2基因 RNA干扰重组表达载体; Keywords gene Ak2 RNA interference recombine expression vector; 分类号 Q813 [生物学—生物工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名小鼠NMNAT1基因的过表达和RNAi重组慢病毒的构建包装和检测: 5; 作者赵虹杨子超张惊宇; 机构哈尔滨医科大学附属第四医院神经内科; 出处《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期622-629,共8页; 基金黑龙江省自然科学基金资助项目(D200980); 文摘目的:针对小鼠烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1(NMNAT1)基因构建质粒并进行慢病毒包装,同时检测其表达水平和干扰效率,为进一步探讨该基因的功能提供研究工具和实验基础。方法:根据NMNAT1基因信息,用慢病毒载体pLenti6构建三种重组质粒,分别包含NMNAT1 cDNA全长、一个针对NMNAT1的小干扰序列和一个用于干扰对照的阴性序列。把这些质粒包装进慢病毒载体,并检测病毒滴度,再用慢病毒感染Hela细胞检测NMNAT1表达量和RNA干扰效率。结果:测序结果证明目的序列正确地插入到载体内。通过qPCR方法鉴定慢病毒包装成功,病毒滴度均为2×108 TU/ml以上。表达NMNAT1的重组慢病毒感染Hela细胞,该细胞能够高水平表达NMNAT1蛋白,而携带RNAi序列的慢病毒能够显著抑制其表达,干扰效率在70%以上。结论:针对NMNAT1的过表达和RNAi重组慢病毒制备成功,为进一步研究NMNAT1基因的功能和用慢病毒进行基因治疗提供了良好的研究工具。; 关键词慢病毒属重组遗传质粒遗传载体烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1 RNA干扰基因过表达; Keywords Lentivirus recombination,genetic Plasmides Genetic vectors NMNAT1 RNA interference Gene overexpression; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名CXCR4-shRNA重组腺病毒表达载体的构建及鉴定: 6; 作者陆航孙巨峰刘学政; 机构广西医科大学人体解剖学教研室辽宁医学院附属第一医院; 出处《山东医药》 CAS 北大核心 2011年第46期22-23,共2页; 基金辽宁省自然科学基金资助项目(201102124); 文摘目的选择性构建CXC趋化因子受体4(CXCR4)的特异RNA干扰载体。方法在GenBank中获取CXCR4基因的核苷酸序列,设计并合成3条短发夹RNA(shRNA)的DNA序列,并克隆到PL-Dest腺病毒骨架载体(shpAd/PL-Dest)中,组成人趋化因子受体重组腺病毒基因沉默子(shpAd-hCXCR4-eGFP),采用酶切、PCR和DNA测序方法验证。将验证后3种沉默子经酶切后转染至HEK293A细胞包装病毒,得到CXCR4的腺病毒表达载体。结果构建的shRNA-Ad-hCXCR4-eGFP 3种基因沉默子序列正确并成功克隆到腺病毒表达载体上。结论成功构建CXCR4-shRNA腺病毒表达载体。; 关键词 CXC趋化因子受体4 RNA干扰重组腺病毒载体人胚肾293A细胞; Keywords CXC chemokine receptor type 4 RNA interference recombinant adenovirus vector human embryo kidney 293A cell; 分类号 R656.6 [医药卫生—外科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名玉米陈化关键酶基因Zmlox-2的RNA干扰载体的构建% 被引量：3: 7; 作者韩颖赵寿经杨瑜孙尧王乐; 机构吉林大学生物与农业工程学院长春工业大学化学与生命科学学院; 出处《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第3期136-141,共6页; 基金吉林省科技发展计划项目(20130102041JC) 吉林省教育厅科学技术研究基金资助项目(吉教科合字[2012]376)~~; 文摘脂肪酸氧化酶(LOX)催化不饱和脂肪酸过氧化反应,导致玉米(Zea mays L.)种子储藏品质的下降.为抑制玉米陈化关键酶基因Zmlox-2的表达,依据RNA干扰原理,针对玉米Zmlox-2基因进行克隆,采用重组PCR及酶切连接技术成功构建了Zmlox-2基因的RNA干扰植物表达载体,并将重组载体pRI101-on-Zmlox-2-RNAi通过热激转化法转化到根癌农杆菌中.实验结果表明Zmlox-2基因的RNA干扰表达载体构建正确,这为下一步诱导遗传转化、探索陈化酶基因的干扰表达效果奠定了理论和实验基础.; 关键词生物工程陈化 RNA干扰表达载体重组PCR 脂肪酸氧化酶; Keywords bioengineering aging RNA interference expression vector recombinant PCR lipoxygenase; 分类号 Q81 [生物学—生物工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	鸡斑联蛋白基因的慢病毒干扰载体的构建及筛选	戴国俊孙大辉林雨鑫孙明明王翔王金玉张跟喜谢恺舟施会强侍苗苗	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2013	2	在线阅读下载PDF 职称材料
2	小鼠NR4A1基因小分子干扰RNA重组腺病毒载体的构建与鉴定	薛凯李梅刁飞扬凌静崔毓桂刘嘉茵	《医学研究生学报》 CAS	2009	3	在线阅读下载PDF 职称材料
3	大鼠CD40基因RNA干扰真核表达载体的构建及鉴定	王楠马庆久鲁建国何显力邹爱民李坤	《医学研究生学报》 CAS	2008	2	在线阅读下载PDF 职称材料
4	靶向Akt2基因RNA干扰重组表达载体的构建和测序	曹婷婷张茂林赵国强卢滨王静	《山东医药》 CAS 北大核心	2008	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	小鼠NMNAT1基因的过表达和RNAi重组慢病毒的构建包装和检测	赵虹杨子超张惊宇	《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2011	0	在线阅读下载PDF 职称材料
6	CXCR4-shRNA重组腺病毒表达载体的构建及鉴定	陆航孙巨峰刘学政	《山东医药》 CAS 北大核心	2011	0	在线阅读下载PDF 职称材料
7	玉米陈化关键酶基因Zmlox-2的RNA干扰载体的构建%	韩颖赵寿经杨瑜孙尧王乐	《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心	2016	3	在线阅读下载PDF 职称材料