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IPTG诱导浓度对重组人肝再生增强因子基因表达的影响 被引量:11
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作者 赵春丽 范秀军 +3 位作者 赵冰 于洋 李庆章 郝艳红 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2004年第4期441-445,共5页
以人肝再生增强因子(humanaugmenterofliverregeneration,hALR)基因与含有T7启动子的融合表达载体pET28a(+)相连的重组子(pET-A)作为研究对象,转化大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG作为诱导剂,分析比较不同IPTG诱导浓度对于表达产物的影响,... 以人肝再生增强因子(humanaugmenterofliverregeneration,hALR)基因与含有T7启动子的融合表达载体pET28a(+)相连的重组子(pET-A)作为研究对象,转化大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG作为诱导剂,分析比较不同IPTG诱导浓度对于表达产物的影响,以确定最佳的IPTG诱导浓度。结果表明,当IPTG终浓度为1.0mmol·L-1时,hALR表达量最大。这为IPTG作为诱导剂最终应用于重组基因工程药物的工业化生产提供了可靠的实验依据。 展开更多
关键词 人肝再生增强因子 诱导浓度 外源蛋白 表达
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重组人肝再生增强因子对肝纤维化大鼠基质分解素-1基因表达的影响 被引量:3
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作者 王爱民 和朝平 +3 位作者 杨晓明 李培建 陈惠鹏 贺福初 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第7期500-502,共3页
为了解重组人肝再生增强因子 (hALR)对肝纤维化大鼠基质分解素 1(MMP3 )基因表达的影响 ,建立CCl4 中毒性及人血白蛋白免疫损伤性两种大鼠肝纤维化模型 ,模型完成后予不同剂量hALR治疗 ,在不同的时间点留取大鼠肝组织标本 ,提取总RNA ... 为了解重组人肝再生增强因子 (hALR)对肝纤维化大鼠基质分解素 1(MMP3 )基因表达的影响 ,建立CCl4 中毒性及人血白蛋白免疫损伤性两种大鼠肝纤维化模型 ,模型完成后予不同剂量hALR治疗 ,在不同的时间点留取大鼠肝组织标本 ,提取总RNA ,用逆转录定量聚合酶链反应 (RT PCR)测定MMP3 的基因表达水平。结果在两种模型中hALR治疗组大鼠肝组织MMP3 的基因表达水平在治疗过程中的不同阶段均明显高于模型组 ;高剂量hALR组大鼠肝组织基质分解素 1的基因表达水平均明显高于低剂量组。提示hALR可增强肝纤维化大鼠MMP3 展开更多
关键词 重组人肝再生增强因子 基质分解素-1 基因表达 肝纤维化 大鼠
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重组人肝再生增强因子可抑制肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的基因表达 被引量:4
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作者 王爱民 和朝平 +3 位作者 韩涛 杨晓明 贺福初 王宝恩 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第12期893-895,共3页
在培养的肝星状细胞系中加入不同浓度的重组人肝再生增强因子 (hALR) ,于不同的时间点收集细胞 ,提取总RNA ,用逆转录定量PCR方法测定Ⅰ、Ⅲ型胶原的基因表达水平。结果表明 ,高 ( 0 2ng/L)、中( 0 0 2ng/L)、低 ( 0 0 0 2ng/L)浓度... 在培养的肝星状细胞系中加入不同浓度的重组人肝再生增强因子 (hALR) ,于不同的时间点收集细胞 ,提取总RNA ,用逆转录定量PCR方法测定Ⅰ、Ⅲ型胶原的基因表达水平。结果表明 ,高 ( 0 2ng/L)、中( 0 0 2ng/L)、低 ( 0 0 0 2ng/L)浓度的hALR 3组肝星状细胞Ⅰ型胶原基因表达水平在 8、2 4、48、72h 4个时间点均明显低于对照组 ;大剂量组较中、低剂量组Ⅰ型胶原基因表达水平亦明显为低。中、低剂量hALR组肝星状细胞Ⅲ型胶原基因表达水平在 2 4、48、72h 3个时间点明显低于对照组 ;大剂量hALR组肝星状细胞Ⅲ型胶原基因表达水平在 8、2 4、48、72h 4个时间点均明显低于对照组 ,较中、小剂量组亦显著降低。提示重组人肝再生增强因子对肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原基因表达有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 肝再生增强因子 肝星状细胞 I型胶原 Ⅲ型胶原 基因表达 肝疾病 I型胶原
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筛选hALR的相互作用蛋白基因(英) 被引量:3
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作者 陈思强 姚汝华 +1 位作者 佟明华 孔祥平 《华南理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第4期17-22,共6页
为筛选与人肝再生增强因子(hALR)相互作用蛋白的基因,探讨肝再生增强因子在肝再生过程中的分子生物学机制,将人肝再生增强因子基因的开放读码框片断,重组入载体pGBKT7构建成“诱饵”质粒pGBKT7-hALR,然后用酵母双杂交系统从预转化酵母菌... 为筛选与人肝再生增强因子(hALR)相互作用蛋白的基因,探讨肝再生增强因子在肝再生过程中的分子生物学机制,将人肝再生增强因子基因的开放读码框片断,重组入载体pGBKT7构建成“诱饵”质粒pGBKT7-hALR,然后用酵母双杂交系统从预转化酵母菌Y187的成人肝细胞cDNA文库中筛选与人肝再生增强因子相互作用蛋白的基因.筛出的阳性克隆基因序列被测出后,经GenBank查询,结果发现它们分别是血清白蛋白、金属硫蛋白、硒蛋白类似物、Na+/K+ ATPase和一个未知功能的蛋白的部分序列.这初步克隆了与hALR相互作用的蛋白基因,为进一步探讨ALR在肝再生过程中的作用机制奠定了基础. 展开更多
关键词 酵母双杂交系统 人肝再生增强因子 hALR 相互作用蛋白 基因筛选 分子生物学 作用机制
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重组肝再生增强因子、苦参素和丹参对肝脏星形细胞株IG12的作用 被引量:5
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作者 曹芝君 邱德凯 +1 位作者 沈敏 陈颖 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2002年第6期501-504,共4页
目的 通过观察重组肝再生增强因子(rALR)。苦参素和丹参对大鼠肝脏星形细胞(HSC)株IG12增殖及细胞外基质合成的影响,以研究其抗肝纤维化的疗效。方法 利用DNA重组、转导、诱导及纯化等一系列方法制备肝再生增强因子重组蛋白,利用胶... 目的 通过观察重组肝再生增强因子(rALR)。苦参素和丹参对大鼠肝脏星形细胞(HSC)株IG12增殖及细胞外基质合成的影响,以研究其抗肝纤维化的疗效。方法 利用DNA重组、转导、诱导及纯化等一系列方法制备肝再生增强因子重组蛋白,利用胶原酶灌注及密度梯度离心法分离肝星形细胞,用有限稀释法建立大鼠HSC株IG12;于体外观察rALR、苦参素和丹参作用于IG12后IG12酸性磷酸酶活力及细胞外基质合成的改变。结果rALR、苦参素和丹参均可显著抑制IG12的增殖,并选择性地抑制其细胞外基质的合成。结论rALR、苦参素和丹参均具有抗肝纤维化的作用;IG12对于抗肝纤维化药物的筛选具有很大的价值。 展开更多
关键词 肝纤维化 肝脏星形细胞株 苦参素 丹参 重组肝再生增强因子 疗效 抗肝纤维化药物
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线粒体转录因子A对梗阻性黄疸大鼠肝功能的保护作用 被引量:1
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作者 林恒 唐春 +3 位作者 吴乔 冯春林 张玉君 别平 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第22期2220-2224,共5页
目的初步探讨线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,TFAM)在重组人肝再生增强因子(rhALR)对梗阻性黄疸大鼠肝功能保护过程中的作用。方法首先体外合成靶向TFAM的有效慢病毒载体,然后建立梗阻性黄疸大鼠动物模型,并通... 目的初步探讨线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,TFAM)在重组人肝再生增强因子(rhALR)对梗阻性黄疸大鼠肝功能保护过程中的作用。方法首先体外合成靶向TFAM的有效慢病毒载体,然后建立梗阻性黄疸大鼠动物模型,并通过门静脉将慢病毒注入大鼠肝组织进行靶向TFAM活体RNA干扰实验。然后通过RT-PCR和Western blot检测目的基因表达量的改变并观察大鼠肝脏病理改变、肝脏功能改变及rhALR保护作用的变化情况。结果体外靶向TFAM慢病毒载体构建成功。通过门静脉注入后能特异、有效的感染肝组织细胞。RT-PCR和Western blot检测结果显示进行活体RNAi的大鼠肝组织中TFAM的表达明显减弱;且这一组大鼠肝脏病理改变最为明显,肝功能损害最严重,rhALR的肝功能保护作用也随着消失。结论阻断目的基因TFAM的表达使得rhALR对梗阻性黄疸大鼠肝功能的保护作用消失;TFAM在rhALR保护梗阻性黄疸大鼠肝功能过程中具有重要作用。 展开更多
关键词 线粒体转录因子A 体内 RNA干扰 重组人肝再生增强因子 梗阻性黄疸 慢病毒载体
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重组人肝再生增强因子对实验性肝纤维化血清透明质酸浓度的影响
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作者 王爱民 左凤亭 +3 位作者 王文犀 杨晓明 陈惠鹏 贺福初 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期411-412,共2页
为了解重组人肝再生增强因子 (hALR)对大鼠实验性肝纤维化形成过程中血清透明质酸浓度的影响 ,建立了四氯化碳中毒性及人血白蛋白免疫损伤性两种大鼠肝纤维化模型。在造模的同时给予不同剂量hALR治疗 ,并在不同的时间点留取大鼠血清标... 为了解重组人肝再生增强因子 (hALR)对大鼠实验性肝纤维化形成过程中血清透明质酸浓度的影响 ,建立了四氯化碳中毒性及人血白蛋白免疫损伤性两种大鼠肝纤维化模型。在造模的同时给予不同剂量hALR治疗 ,并在不同的时间点留取大鼠血清标本 ,测定透明质酸浓度。结果表明 ,在两种模型中hALR两组大鼠血清透明质酸浓度在造模过程中的不同阶段均明显低于模型组。高剂量hALR组大鼠血清透明质酸浓度均明显低于低剂量组。上述结果提示 。 展开更多
关键词 肝硬化 透明质酸 重组人肝再生增强因子 肝纤维化 血清
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肝再生增强因子促进HepG2细胞增殖对细胞Na^+,K^+ATP酶的影响(英文)
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作者 林莹 佟明华 +1 位作者 孔祥平 梁世中 《陕西科技大学学报(自然科学版)》 2006年第2期26-30,共5页
为了研究rhALR在促进HepG2细胞增殖过程中对细胞Na+,K+ATPase的影响,采用四甲基噻唑盐(MTT)法检验了重组人肝再生增强因子(rhALR)对HepG2细胞的增殖作用并用无机磷比色法测定了细胞Na+,K+ATPase的酶活力。结果显示:rhALR能以浓度依赖的... 为了研究rhALR在促进HepG2细胞增殖过程中对细胞Na+,K+ATPase的影响,采用四甲基噻唑盐(MTT)法检验了重组人肝再生增强因子(rhALR)对HepG2细胞的增殖作用并用无机磷比色法测定了细胞Na+,K+ATPase的酶活力。结果显示:rhALR能以浓度依赖的方式促进HepG2的细胞增殖,对细胞Na+,K+ATPase的酶活呈剂量时间依赖型影响;rhALR提高HepG2细胞Na+,K+ATPase的酶活符合MichaelisMenten方程作用机制,Vmax由0.84±0.11μmol·mg-1·min-1上升到1.68±0.07μmol·mg-1·min-1(p<0.01,差异有极显著性),而Km则由23.54±0.12mM变为20.86±0.13mM(p>0.05,差异无显著性),rhALR提高了细胞Na+,K+ATPase的转化效率;Na+,K+ATPase的专一性抑制剂(奎巴因)可以抑制rhALR促进HepG2细胞增殖的作用;ALR能以浓度时间依赖的方式激活细胞的Na+,K+ATPase,ALR引发的细胞增殖与了Na+,K+ATPase的活化有关。该为进一步研究rhALR的生物学功能提供了理论依据。 展开更多
关键词 重组人肝再生增强因子(rh- ALR) Na^+ K^+-ATPase 酶活 剂量-时间依赖
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人肝再生增强因子基因序列的优化、重组表达及功能研究
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作者 黄应峰 周飞国 +4 位作者 高春芳 王皓 高致远 王坤 陈捷 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1284-1287,共4页
目的:体外重组表达人肝再生增强因子(augmenter of liver regeneration,ALR)并进行功能研究。方法:全基因合成ALR序列并插入原核表达载体pET28a+,转化入BL21菌内进行诱导表达,表达产物经过纯化后利用MTT法观察表达产物对人肝细胞的刺激... 目的:体外重组表达人肝再生增强因子(augmenter of liver regeneration,ALR)并进行功能研究。方法:全基因合成ALR序列并插入原核表达载体pET28a+,转化入BL21菌内进行诱导表达,表达产物经过纯化后利用MTT法观察表达产物对人肝细胞的刺激增殖活性;利用小鼠急性四氯化碳损伤模型观察表达产物的肝功能保护作用。结果:酶切鉴定及测序结果提示表达产物正确;纯化后表达产物具有明确的促进肝细胞增殖作用,并在中、低剂量具有降低小鼠急性化学性损伤后转氨酶水平的作用。结论:重组表达的ALR结构正确,具有促进肝细胞再生的作用。 展开更多
关键词 肝再生增强因子 DNA 重组 肝细胞 细胞增殖 转氨酶类
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