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应用GPV VP3基因重组原核表达产物建立检测抗体的ELISA方法研究
被引量：
16
1
作者
布日额
李宝臣
+2 位作者
马波
王君伟
Ulrich Neumann
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期199-203,共5页
利用鹅细小病毒（GPV）VP3基因的原核表达蛋白作为包被抗原建立了检测GPV抗体的间接ELISA及Dot-ELISA方法。经确定两种方法的抗原包被浓度为125μg／mL，其中间接-ELISA 100μL／孔、Dot-ELISA 5μL／点。间接-ELISA中HRP标记的兔抗鹅Ig...
利用鹅细小病毒（GPV）VP3基因的原核表达蛋白作为包被抗原建立了检测GPV抗体的间接ELISA及Dot-ELISA方法。经确定两种方法的抗原包被浓度为125μg／mL，其中间接-ELISA 100μL／孔、Dot-ELISA 5μL／点。间接-ELISA中HRP标记的兔抗鹅IgG的工作浓度是1：200，检测血清的最适稀释度是1：400，阳性判定标准为OD492≥0．20，且P／N≥2．0。用此方法检测弱毒疫苗免疫血清，其抗体滴度在1：400～1：51200。Dot-ELISA的结果与间接-ELISA的结果一致。
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关键词
鹅细小病毒
vp3
基因重组原核表达产物
间接-ELISA
Dot—ELISA
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职称材料
鸭1型甲肝病毒亚型VP3基因的克隆与原核表达
2
作者
黄剑梅
傅秋玲
+7 位作者
傅光华
万春和
陈翠腾
陈珍
程龙飞
施少华
陈红梅
黄瑜
《福建农业学报》
CAS
北大核心
2015年第5期425-429,共5页
参照鸭1型甲肝病毒亚型(DHAV-1a)的基因组序列设计了1对VP3基因特异性扩增引物,通过RT-PCR方法扩增获得了DHAV-1a结构蛋白VP3基因,将纯化的VP3基因与pEASYTM-Blunt Zero Cloning Vector连接,构建DHAV-1aVP3基因克隆重组质粒,然后将VP3...
参照鸭1型甲肝病毒亚型(DHAV-1a)的基因组序列设计了1对VP3基因特异性扩增引物,通过RT-PCR方法扩增获得了DHAV-1a结构蛋白VP3基因,将纯化的VP3基因与pEASYTM-Blunt Zero Cloning Vector连接,构建DHAV-1aVP3基因克隆重组质粒,然后将VP3基因片段插入pET-32a(+)表达载体,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞。以1.0mmol·L-1 IPTG于37℃诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot分析表明VP3基因于大肠杆菌中成功表达,其分子量为47kDa,且表达的VP3蛋白能够与Anti-His Mouse mAb发生特异性反应,具有良好的生物活性,为进一步研究DHAV-1aVP3蛋白功能和以VP3蛋白为抗原研制DHAV-1a诊断试剂盒奠定基础。
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关键词
鸭1型甲肝病毒亚型
vp3
基因
克隆
原核表达
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职称材料
题名
应用GPV VP3基因重组原核表达产物建立检测抗体的ELISA方法研究
被引量：
16
1
作者
布日额
李宝臣
马波
王君伟
Ulrich Neumann
机构
东北农业大学动物医学院
农业部青岛动植物检疫局
汉诺威兽医学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期199-203,共5页
基金
黑龙江省教育厅科学技术研究项目(重大项目10541z004)
文摘
利用鹅细小病毒（GPV）VP3基因的原核表达蛋白作为包被抗原建立了检测GPV抗体的间接ELISA及Dot-ELISA方法。经确定两种方法的抗原包被浓度为125μg／mL，其中间接-ELISA 100μL／孔、Dot-ELISA 5μL／点。间接-ELISA中HRP标记的兔抗鹅IgG的工作浓度是1：200，检测血清的最适稀释度是1：400，阳性判定标准为OD492≥0．20，且P／N≥2．0。用此方法检测弱毒疫苗免疫血清，其抗体滴度在1：400～1：51200。Dot-ELISA的结果与间接-ELISA的结果一致。
关键词
鹅细小病毒
vp3
基因重组原核表达产物
间接-ELISA
Dot—ELISA
Keywords
goose parvovirus
recombinant vp3 gene prokaryotic expression product
indirect ELISA
Dot-ELISA
分类号
S854.43 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
鸭1型甲肝病毒亚型VP3基因的克隆与原核表达
2
作者
黄剑梅
傅秋玲
傅光华
万春和
陈翠腾
陈珍
程龙飞
施少华
陈红梅
黄瑜
机构
江西农业大学动物科学技术学院
福建省农业科学院畜牧兽医研究所
出处
《福建农业学报》
CAS
北大核心
2015年第5期425-429,共5页
基金
国家自然科学基金项目(31472222)
福建省科技计划项目--省属公益类科研院所基本科研专项(2014R1023-3)
+2 种基金
现代农业产业技术体系建设专项(CARS-43)
福建省自然科学基金项目(2015J01113)
新世纪"百千万人才工程"国家级人选科研补助资金(NCNCMTPC-2009)
文摘
参照鸭1型甲肝病毒亚型(DHAV-1a)的基因组序列设计了1对VP3基因特异性扩增引物,通过RT-PCR方法扩增获得了DHAV-1a结构蛋白VP3基因,将纯化的VP3基因与pEASYTM-Blunt Zero Cloning Vector连接,构建DHAV-1aVP3基因克隆重组质粒,然后将VP3基因片段插入pET-32a(+)表达载体,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞。以1.0mmol·L-1 IPTG于37℃诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot分析表明VP3基因于大肠杆菌中成功表达,其分子量为47kDa,且表达的VP3蛋白能够与Anti-His Mouse mAb发生特异性反应,具有良好的生物活性,为进一步研究DHAV-1aVP3蛋白功能和以VP3蛋白为抗原研制DHAV-1a诊断试剂盒奠定基础。
关键词
鸭1型甲肝病毒亚型
vp3
基因
克隆
原核表达
Keywords
duck hepatitis A virus type 1a
VP 3
gene
cloning
prokaryotic
expression
分类号
S852.6 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
应用GPV VP3基因重组原核表达产物建立检测抗体的ELISA方法研究
布日额
李宝臣
马波
王君伟
Ulrich Neumann
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
16
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
鸭1型甲肝病毒亚型VP3基因的克隆与原核表达
黄剑梅
傅秋玲
傅光华
万春和
陈翠腾
陈珍
程龙飞
施少华
陈红梅
黄瑜
《福建农业学报》
CAS
北大核心
2015
0
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职称材料
已选择
0
条
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参考文献
引证文献
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