通过采用匀浆、硫酸铵盐析、透析、DEAE-52阴离子交换层析、Sephacryl S-300凝胶层析等方法从海参体壁中分离纯化并得到了α-1,4淀粉酶。结果表明,该酶具有3条亚基链,分子质量约为420 k D;最适p H值为9.0,最适温度为80℃,90℃条件下保温...通过采用匀浆、硫酸铵盐析、透析、DEAE-52阴离子交换层析、Sephacryl S-300凝胶层析等方法从海参体壁中分离纯化并得到了α-1,4淀粉酶。结果表明,该酶具有3条亚基链,分子质量约为420 k D;最适p H值为9.0,最适温度为80℃,90℃条件下保温30 min后仍有38%以上的相对酶活性,因此,该酶是一种具有较高热稳定性的碱性高温淀粉酶。K+、Fe3+和Mn2+对其有较强的抑制作用,Cu2+和Ca2+对其有较强的激活作用。展开更多
采用Sepharose CL-6B凝胶柱纯化壶瓶枣多糖(polysaccharides from Zizyphus jujube Mill.cv.Hupingzao,简称ZJP)ZJP-2和ZJP-5组分,并对纯化后多糖的结构进行分析。结果表明:经纯化后得到ZJP-2b和ZJP-5a两种组分均一的壶瓶枣活性多糖,分...采用Sepharose CL-6B凝胶柱纯化壶瓶枣多糖(polysaccharides from Zizyphus jujube Mill.cv.Hupingzao,简称ZJP)ZJP-2和ZJP-5组分,并对纯化后多糖的结构进行分析。结果表明:经纯化后得到ZJP-2b和ZJP-5a两种组分均一的壶瓶枣活性多糖,分子质量分别为89.21、61.60 k D,均具备多糖的特征吸收峰,且均以β-构型的吡喃糖为主;ZJP-2b中单糖组成主要为鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖,其物质的量比为32.4∶9.5∶9.4∶14.7∶9.7,而ZJP-5a中单糖组成主要为鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖和半乳糖,其物质的量比为20.2∶42.9∶2.2∶7.5∶14.5;当质量浓度为3.5 mg/mL时,ZJP-2b和ZJP-5a的羟自由基清除率分别为30.51%和57.22%。展开更多
前期杂交优化后赤芝菌种经液体深层发酵后,提取灵芝菌丝体多糖,并过DEAE-Sepharose Fast Flow柱分离纯化,利用高效体积排阻色谱(HPSEC)检测多糖级分的纯度,采用完全酸水解PMP柱前衍生化RP—HPLC测定多糖级分的单糖组成,多角度光散射仪...前期杂交优化后赤芝菌种经液体深层发酵后,提取灵芝菌丝体多糖,并过DEAE-Sepharose Fast Flow柱分离纯化,利用高效体积排阻色谱(HPSEC)检测多糖级分的纯度,采用完全酸水解PMP柱前衍生化RP—HPLC测定多糖级分的单糖组成,多角度光散射仪联用装置(SEC—MALLS)测定其绝对重均分子量(Mw),并且根据分子旋转半径与分子摩尔数的关系曲线斜率初步推断其空间构象。结果显示:分离纯化得到3个多糖级分GLMP1、GLMP2和GLMP3,HPSEC检测其峰面积百分比分别为93.58%,97.64%,99.19%,单糖组成分析结果表明GLMP1、GLMP2和GLMP3均含有甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖,但单糖摩尔比各异。SEC—MALLS测试GLMP1、GLMP2和GLMP3的Mw分别为4.526×105,4.603×104,3.760×103 g/mol,3个多糖级分构象可能均为高度紧缩且具有分支结构的聚合物。展开更多
对来自新疆天山冻土的Rahnella sp．R3所产的胞内低温β-半乳糖苷酶进行纯化，并对其酶学性质进行研究。采用硫酸铵分级沉淀、Phenyl Sepharose CL-4B疏水层析、QSepharose High Performance阴离子交换层析、Sephacryl S-200 High Resol...对来自新疆天山冻土的Rahnella sp．R3所产的胞内低温β-半乳糖苷酶进行纯化，并对其酶学性质进行研究。采用硫酸铵分级沉淀、Phenyl Sepharose CL-4B疏水层析、QSepharose High Performance阴离子交换层析、Sephacryl S-200 High Resolution凝胶过滤层析，得到电泳纯酶。酶的活性回收率为21．3％，纯化倍数为35．6，比酶活由1．28U／mg提高到45．54U／mg。SDS—PAGE电泳显示其表观分子量为57．3kDa。酶学性质研究表明，该酶最适反应温度为45℃，在15℃时的酶活为最高酶活的40％，4℃时的酶活为最高酶活的23％。该酶对热敏感，45℃保温45min酶活全部丧失。纯酶的最适PH为7．0，在pH6．5～7．5时保持稳定。5mmol／LNa^＋、Ca^2＋、Cu^2＋、Al^3＋、Zn^2＋对酶活力有不同程度的抑制作用，其中Al^3＋抑制K^＋作用最强，Na^＋、Ca^2＋抑制作用不明显。5mmol／LMg^2＋、K^＋对酶活力具有促进作用，其中Mg^2＋促进作用较强，使酶活提高到1．19倍。25℃以ONPG为底物的Vmax，Km值分别为7．19mol／（min·mL）、4．64mmol／L。展开更多
文摘采用Sepharose CL-6B凝胶柱纯化壶瓶枣多糖(polysaccharides from Zizyphus jujube Mill.cv.Hupingzao,简称ZJP)ZJP-2和ZJP-5组分,并对纯化后多糖的结构进行分析。结果表明:经纯化后得到ZJP-2b和ZJP-5a两种组分均一的壶瓶枣活性多糖,分子质量分别为89.21、61.60 k D,均具备多糖的特征吸收峰,且均以β-构型的吡喃糖为主;ZJP-2b中单糖组成主要为鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖,其物质的量比为32.4∶9.5∶9.4∶14.7∶9.7,而ZJP-5a中单糖组成主要为鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖和半乳糖,其物质的量比为20.2∶42.9∶2.2∶7.5∶14.5;当质量浓度为3.5 mg/mL时,ZJP-2b和ZJP-5a的羟自由基清除率分别为30.51%和57.22%。
文摘前期杂交优化后赤芝菌种经液体深层发酵后,提取灵芝菌丝体多糖,并过DEAE-Sepharose Fast Flow柱分离纯化,利用高效体积排阻色谱(HPSEC)检测多糖级分的纯度,采用完全酸水解PMP柱前衍生化RP—HPLC测定多糖级分的单糖组成,多角度光散射仪联用装置(SEC—MALLS)测定其绝对重均分子量(Mw),并且根据分子旋转半径与分子摩尔数的关系曲线斜率初步推断其空间构象。结果显示:分离纯化得到3个多糖级分GLMP1、GLMP2和GLMP3,HPSEC检测其峰面积百分比分别为93.58%,97.64%,99.19%,单糖组成分析结果表明GLMP1、GLMP2和GLMP3均含有甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖,但单糖摩尔比各异。SEC—MALLS测试GLMP1、GLMP2和GLMP3的Mw分别为4.526×105,4.603×104,3.760×103 g/mol,3个多糖级分构象可能均为高度紧缩且具有分支结构的聚合物。
文摘对来自新疆天山冻土的Rahnella sp．R3所产的胞内低温β-半乳糖苷酶进行纯化，并对其酶学性质进行研究。采用硫酸铵分级沉淀、Phenyl Sepharose CL-4B疏水层析、QSepharose High Performance阴离子交换层析、Sephacryl S-200 High Resolution凝胶过滤层析，得到电泳纯酶。酶的活性回收率为21．3％，纯化倍数为35．6，比酶活由1．28U／mg提高到45．54U／mg。SDS—PAGE电泳显示其表观分子量为57．3kDa。酶学性质研究表明，该酶最适反应温度为45℃，在15℃时的酶活为最高酶活的40％，4℃时的酶活为最高酶活的23％。该酶对热敏感，45℃保温45min酶活全部丧失。纯酶的最适PH为7．0，在pH6．5～7．5时保持稳定。5mmol／LNa^＋、Ca^2＋、Cu^2＋、Al^3＋、Zn^2＋对酶活力有不同程度的抑制作用，其中Al^3＋抑制K^＋作用最强，Na^＋、Ca^2＋抑制作用不明显。5mmol／LMg^2＋、K^＋对酶活力具有促进作用，其中Mg^2＋促进作用较强，使酶活提高到1．19倍。25℃以ONPG为底物的Vmax，Km值分别为7．19mol／（min·mL）、4．64mmol／L。
