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题名香榧ISSR-PCR扩增条件的优化和引物筛选
被引量：6
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作者
叶生月
陈钢
张慧
刘建杰
曾燕如
吴慧敏
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机构
浙江林学院浙江省现代森林培育技术重点实验室
浙江省临安市林业局
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出处
《浙江林学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第1期87-92,共6页
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基金
"十一五"浙江省科技计划项目(2008C2200)
浙江省重中之重学科开放基金资助项目(200505
+1 种基金
200508
200602)
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文摘
以香榧Torreya grandis‘Merrillii’基因组DNA为材料,对影响简单序列重复区间扩增-聚合酶链式反应(ISSR-PCR)的Taq酶用量、Mg2+浓度、模板DNA用量、磷酸碱基脱氧核苷酸(dNTPs)浓度和引物浓度等进行了优化试验。优化后的香榧ISSR-PCR扩增体系为:总容积20μL,包括30 ng模板DNA,16.67 nkat Taq酶,0.350μmol.L-1引物,1.625 mmol.L-1 Mg2+,0.250 mmol.L-1 dNTPs,10×PCR buffer 2μL。PCR扩增程序:94℃变性5.0 min;35个循环:94℃变性30 s,退火45 s,退火温度视引物而定,72℃延伸1.5 min;最后72℃延伸7.0 min,4℃保温。在此基础上,从77个ISSR引物中筛选出34个适合香榧ISSR分析的引物,且通过梯度PCR确定了各自最适的退火温度。研究结果为香榧遗传图谱构建打下了基础。
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关键词
经济林学
香榧
issr—PCR
引物筛选
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Keywords
cash forestry
Torreya grandis ‘Merrillii＇
chain reaction（PCR）
primer screening inter simple sequence repeats （issr）-polymerase
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分类号
S664.5
[农业科学—果树学]
S722.3
[农业科学—林木遗传育种]
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