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分离富集磷酸化/糖基化蛋白质/肽的磁固相萃取新材料
1
作者 鲁艳 张森 +4 位作者 张锋 葛鸿延 庄琬月 乔俊琴 练鸿振 《分析测试学报》 CAS 北大核心 2025年第1期1-11,共11页
蛋白质磷酸化和糖基化是蛋白质两种主要的翻译后修饰过程。磷酸化和糖基化蛋白质在细胞的各个生命周期内起着关键的作用,对于临床疾病的早期诊断等也具有重要的意义。但由于它们在实际生物样品中含量低、基质干扰大,选择合适的方法对其... 蛋白质磷酸化和糖基化是蛋白质两种主要的翻译后修饰过程。磷酸化和糖基化蛋白质在细胞的各个生命周期内起着关键的作用,对于临床疾病的早期诊断等也具有重要的意义。但由于它们在实际生物样品中含量低、基质干扰大,选择合适的方法对其进行分离富集成为蛋白质组学研究中决定性的步骤之一。磁固相萃取(MSPE)是以磁性纳米颗粒为吸附剂的固相萃取技术(SPE),较之常规SPE具有操作简单、环境友好、材料易于回收利用等优势,因而被广泛应用于磷酸化和糖基化蛋白/肽段等分析前的分离富集。该文对近5年文献中用于磷酸化和糖基化蛋白质分离富集的MSPE材料进行系统的归纳和评述,并对此类分离富集材料的未来发展方向进行了展望和探讨。 展开更多
关键词 磷酸化蛋白质 糖基化蛋白质 磁固相萃取 磁性纳米颗粒
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单细胞联合转录组测序分析原发性开角型青光眼小梁网组织细胞通信变化 被引量：1
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作者 赵雅婷 赵春峰 +2 位作者 王文晶 蒋晓迪 姜雅琴 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2025年第1期39-45,共7页
目的探究原发性开角型青光眼(POAG)房角细胞类型和细胞通信模式变化。方法从基因表达综合(GEO)数据库中下载单细胞数据集GSE231749(包含POAG的食蟹猴房角组织样本3例和健康食蟹猴房角组织样本3例,数据更新时间为2023年),分别设为POAG组... 目的探究原发性开角型青光眼(POAG)房角细胞类型和细胞通信模式变化。方法从基因表达综合(GEO)数据库中下载单细胞数据集GSE231749(包含POAG的食蟹猴房角组织样本3例和健康食蟹猴房角组织样本3例,数据更新时间为2023年),分别设为POAG组与健康对照组。采用R包“Seurat”对数据进行降维、聚类、分群和可视化,并通过R包“CellChat”进行了细胞通信分析,确认POAG组和健康对照组细胞通信模式的差异。同时,联合GEO数据库中转录组测序(RNA-seq)数据集GSE27276(包含POAG的人类房角组织样本17例和健康人房角组织样本19例,数据更新时间为2023年)的差异基因分析,确定具体的细胞通信信号变化。结果健康对照组与POAG组细胞类型无明显差异,均可分为小梁网细胞、巨噬细胞、黑素细胞、周细胞、施莱姆氏管细胞、有髓施万细胞、无髓施万细胞、平滑肌细胞和血管内皮细胞。POAG组与健康对照组细胞间通信强度具有显著差异,其中,POAG组巨噬细胞移动抑制因子(MIF)-CD74、CX3C趋化因子配体1(CX3CL1)-CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)、HBB等通信概率显著上调,分泌型磷蛋白1(SPP1)-(ITGA8+ITGB1)、SPP1-(ITGA4+ITGB1)、IGF2-IGF2R、CCL8-CCR1、CCL8/26/24/2-ACKR2等信号明显下调;RNA-seq分析证实,POAG组HBB、HBD、HBA、CD74等基因表达水平均高于健康对照组。结论小梁网组织中通过MIF/CD74信号上调、SPP1-(ITGA8+ITGB1)、SPP1-(ITGA4+ITGB1)信号下调共同参与纤维化过程,这可能是POAG潜在的致病机制。 展开更多
关键词 开角型青光眼 RNA测序 单细胞分析 细胞间通信 巨噬细胞移动抑制因子 分泌型磷蛋白1
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SPP1在代谢相关性脂肪性肝炎中的诊断价值及调控机制
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作者 李沙 李锦忠 +3 位作者 谌宁 李敏然 戴二黑 齐亚娟 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 北大核心 2025年第4期505-517,共13页
目的:代谢相关性脂肪性肝炎(metabolic dysfunction-associated steatohepatitis,MASH)是代谢相关性脂肪性肝病(metabolic dysfunction-associated fatty liver disease,MAFLD)的进展阶段,目前主要依赖肝活检进行确诊,存在创伤性强、依... 目的:代谢相关性脂肪性肝炎(metabolic dysfunction-associated steatohepatitis,MASH)是代谢相关性脂肪性肝病(metabolic dysfunction-associated fatty liver disease,MAFLD)的进展阶段,目前主要依赖肝活检进行确诊,存在创伤性强、依从性差等问题。因此,亟需开发非侵入性生物标志物以辅助诊断。本研究旨在通过整合机器学习算法与肝脏转录组数据,筛选MASH关键诊断基因,并探讨分泌型磷蛋白1(secreted phosphoprotein 1,SPP1)在MASH中的调控机制及诊断价值。方法:从基因表达综合数据库(gene expression omnibus,GEO)获取MAFLD患者肝脏转录组数据集,通过差异表达分析筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)。结合随机森林、人工神经网络、Lasso回归和支持向量机递归特征消除算法筛选关键基因,构建Neural-MASH诊断模型,并通过受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估性能。进一步分析候选关键基因与免疫细胞浸润及临床指标的相关性,并进行功能富集分析。结果:共筛选出85个DEGs,功能富集显示其与p53信号通路和细胞外基质(extra cellular matrix,ECM)-受体相互作用密切相关。通过多算法交叉验证,确定SPP1、含Fc受体样及黏蛋白结构域蛋白(fc alpha and mu receptor,FCAMR)、含黄素单加氧酶1(flavin-containing monooxygenase 1,FMO1)为关键基因,其中SPP1在MASH中表达上调,且与B细胞、巨噬细胞M0浸润及临床指标呈正相关(均P<0.05)。Neural-MASH模型在训练集和验证集中的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为1.000和0.811。功能分析揭示SPP1主要参与ECM、细胞迁移调控、脂质定位及IL-18信号通路等生物学过程。结论:SPP1可作为MASH的潜在诊断标志物,其与免疫微环境的交互作用可能在疾病进展中发挥关键调控作用。基于机器学习所构建的Neural-MASH模型具有较高的诊断效能,可为MASH的无创诊断提供参考依据。 展开更多
关键词 代谢相关性脂肪性肝炎 分泌型磷蛋白1(SPP1) 人工神经网络 生物标志物
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可溶性鸟苷酸环化酶刺激剂sGC003改善小鼠高原肺水肿作用及机制
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作者 黄雨龙 李硕 +5 位作者 石英贤 苏贵新 张金水 郑志兵 邓云 张有志 《中国药理学与毒理学杂志》 北大核心 2025年第10期761-769,共9页
目的 探究可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)刺激剂sGC003改善小鼠高原肺水肿(HAPE)的作用及机制。方法 将小鼠随机分为正常对照组、模型组、模型+地塞米松4 mg·kg^(-1)组(前6 d ig给予生理盐水,第7和第8天ig给予地塞米松4 mg·kg^(-1)... 目的 探究可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)刺激剂sGC003改善小鼠高原肺水肿(HAPE)的作用及机制。方法 将小鼠随机分为正常对照组、模型组、模型+地塞米松4 mg·kg^(-1)组(前6 d ig给予生理盐水,第7和第8天ig给予地塞米松4 mg·kg^(-1))、模型+利奥西呱10 mg·kg^(-1)组(造模前ig给药,每天1次,连续7 d)、模型+sGC003 5和10 mg·kg^(-1)组(造模前ig给药,每天1次,连续7 d)。除正常对照组外,其余各组第7天给药1 h后,气管滴注脂多糖4 mg·kg^(-1),置于低氧环境诱导HAPE模型。造模24 h后,测定小鼠呼气时间、吸气末间隙,以及增强呼气间歇和呼吸频率;HE染色观察肺组织病理变化并计算肺组织湿/干重比(W/D);免疫荧光染色检测肺组织中白细胞介素1β(IL-1β)水平;Western印迹法检测肺组织中血管扩张刺激磷蛋白(VASP)磷酸化水平;ELISA检测血清中sGC、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、环磷酸鸟苷(cGMP)、IL-6和IL-1β含量。结果 与正常对照组相比,模型组肺组织W/D和IL-1β水平及呼气时间、吸气末间隙、增强呼气间歇,以及血清IL-1β、HIF-1α和IL-6水平均显著升高,呼吸频率、血清sGC和cGMP水平显著降低。与模型组相比,模型+地塞米松4 mg·kg^(-1)组和模型+sGC003 10 mg·kg^(-1)组呼气时间、吸气末间隙、增强呼气间歇、肺组织W/D和IL-1β水平及血清中IL-1β、HIF-1α和IL-6水平均显著降低;模型+地塞米松4 mg·kg^(-1)组呼吸频率和血清sGC水平显著升高;模型+sGC003 10 mg·kg^(-1)组呼吸频率、血清sGC和cGMP水平及肺组织VASP蛋白磷酸化水平显著升高;模型+利奥西呱10 mg·kg^(-1)组肺组织W/D、血清IL-1β和HIF-1α水平显著降低,血清sGC水平显著升高。结论 sGC003可改善HAPE小鼠模型肺功能,通过激活sGC/cGMP通路抑制肺组织炎症,降低肺水肿程度。 展开更多
关键词 可溶性鸟苷酸环化酶 sGC003 高原肺水肿 血管扩张刺激磷蛋白 肺损伤
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红芪参麦饮调控分泌型磷蛋白1改善气阴两虚兼血瘀型心肌梗死后心力衰竭的临床研究
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作者 薄浩浩 张丞波 +5 位作者 毛晨晗 殷睿 张蒙 孙雪梅 李岩松 王新东 《南京中医药大学学报》 北大核心 2025年第12期1734-1741,共8页
目的 研究红芪参麦饮对气阴两虚兼血瘀型急性心肌梗死(Acute myocardial infarction,AMI)后心力衰竭(Heart failure,HF)的治疗作用,及其对AMI后HF(AMI-HF)患者血清分泌型磷蛋白1(Secreted phosphoprotein 1,SPP1)的调控效应。方法 纳入... 目的 研究红芪参麦饮对气阴两虚兼血瘀型急性心肌梗死(Acute myocardial infarction,AMI)后心力衰竭(Heart failure,HF)的治疗作用,及其对AMI后HF(AMI-HF)患者血清分泌型磷蛋白1(Secreted phosphoprotein 1,SPP1)的调控效应。方法 纳入南京中医药大学附属中西医结合医院、杭州市萧山区中医院及常州市中医医院3家中心76例气阴两虚兼血瘀型AMI-HF患者为研究对象,随机分为中药组、对照组各38例。治疗期间中药组脱落4例,对照组脱落3例。对照组采取指南导向药物治疗(Guidelinedirected medical therapy,GDMT),中药组在GDMT治疗基础上加服红芪参麦饮,2组疗程均为12周。治疗前后比较2组患者中医证候积分并评估临床疗效与再入院率;采用超声心动图评估心脏结构和功能,ELISA法检测患者血清SPP1、N端脑型利钠肽前体蛋白(N-terminal pro-B-type natriuretic peptide,NT-proBNP)、白介素-1β(Interleukin-1 beta,IL-1β)、Ⅰ型胶原蛋白α1(Collagen typeⅠalpha 1 chain,COL1α1)、基质金属蛋白酶9(Matrix metallopeptidase 9,MMP9)水平变化,6 min步行试验距离(6 minute walking test,6MWT)评价运动耐量,明尼苏达心力衰竭生活质量问卷(Minnesota living with heart failure questionnaire,MLHFQ)评价患者生活质量。治疗期间监测2组患者不良反应发生情况。结果 治疗后,2组患者中医证候积分均明显降低(P<0.01),中药组显著低于对照组(P<0.01),中药组中医临床疗效总有效率优于对照组(P<0.05),中药组再入院率显著低于对照组(P<0.01);2组左心室舒张末期内径(Left ventricular end diastolic diameter,LVEDD)、收缩末期内径(Left ventricular end systolic diameter,LVESD)、左心室射血分数(Left ventricular ejection fraction,LVEF)、6MWT和MLHFQ评分均改善(P<0.01),中药组优于对照组(P<0.05,P<0.01);2组血清NT-proBNP、IL-1β、COL1α1和MMP9水平均下降(P<0.05,P<0.01),中药组血清SPP1水平显著下降(P<0.01),中药组血清NT-proBNP、IL-1β、COL1α1和MMP9水平均显著低于对照组(P<0.01)。治疗前后SPP1的变化水平(ΔSPP1)与心功能变化(ΔLVEF)呈负相关(r=-0.42,P<0.01),与心肌纤维化指标ΔCOL1α1(r=0.58,P<0.01)、基质降解指标ΔMMP9(r=0.51,P<0.01)呈正相关。治疗期间2组不良反应率未见明显差异(P>0.05)。结论 红芪参脉饮联合GDMT可有效改善气阴两虚兼血瘀型AMI-HF患者临床症状与心功能,安全性良好,其机制可能与抑制SPP1介导的炎症-纤维化通路,下调IL-1β、COL1α1及MMP9表达有关。 展开更多
关键词 益气养阴活血 心肌梗死 心力衰竭 分泌型磷蛋白-1 心肌纤维化 红芪参麦饮 气阴两虚
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基于新型3D-CuFC-C纳米材料的磷酸蛋白高灵敏电化学传感检测
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作者 郭建平 王婧雯 +1 位作者 岳乐乐 任梦梦 《食品工业科技》 北大核心 2025年第14期381-394,共14页
本研究开发了一种基于还原羧基化氧化石墨烯(rGO-COOH)和铜纳米粒子(CuNPs)合成的3D纳米复合物(CuFC-C)作为玻碳电极(GCE)的修饰基底,并在修饰层上制备氨基化二氧化钛(NH_(2)-TiO_(2))纳米识别层,构建了一种NH_(2)-TiO_(2)/CuFC-C/GCE... 本研究开发了一种基于还原羧基化氧化石墨烯(rGO-COOH)和铜纳米粒子(CuNPs)合成的3D纳米复合物(CuFC-C)作为玻碳电极(GCE)的修饰基底,并在修饰层上制备氨基化二氧化钛(NH_(2)-TiO_(2))纳米识别层,构建了一种NH_(2)-TiO_(2)/CuFC-C/GCE电化学传感器(TIECS),用于食品中痕量磷酸蛋白(β-casein)的高灵敏检测。rGO-COOH电聚合圈数5、CuNPs电沉积时间400 s、NH_(2)-TiO_(2)电聚合圈数9、缓冲溶液pH6.5、β-酪蛋白平衡吸附30 min、电压范围0.2~1.0 V的检测条件下,该传感器对β-casein在10^(−14)~10^(0) mg/mL浓度范围内具有良好的线性响应,检测限为3.82×10^(−17) mg/mL,决定系数R^(2)分别为0.9946,满足痕量磷酸蛋白检测的要求。TIECS传感器对干扰蛋白具有较好的选择性;以及良好的重现性和长期稳定性,RSD分别为2.42%和1.04%。与传统基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法(MALDI-TOF/MS)相比,该传感器具有成本低、操作方便等优势,适用于食品中痕量磷酸蛋白的快速检测。该TIECS传感平台在实际样品中的成功应用为评估不同食物的营养特性以及功能性食品的研究开发提供了一个潜在的平台。 展开更多
关键词 电化学传感 铜纳米粒子 氨基化二氧化钛 3D 纳米材料 磷酸蛋白
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网膜素-1、分泌型磷蛋白1、错配修复系统蛋白表达状态与子宫内膜癌患者临床病理特征及预后的关系
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作者 徐西凤 王侠 +1 位作者 吴健亮 程金龙 《实用医学杂志》 北大核心 2025年第16期2521-2527,共7页
目的通过免疫组化检测探讨网膜素-1(omentin-1)、分泌型磷蛋白1(SPP1)、错配修复系统(MMR)蛋白表达状态对子宫内膜癌(EC)临床病理特征的影响及预后变化。方法选取我院2019年12月至2021年12月收治的EC患者159例作为观察组,选取同时期因... 目的通过免疫组化检测探讨网膜素-1(omentin-1)、分泌型磷蛋白1(SPP1)、错配修复系统(MMR)蛋白表达状态对子宫内膜癌(EC)临床病理特征的影响及预后变化。方法选取我院2019年12月至2021年12月收治的EC患者159例作为观察组,选取同时期因子宫良性疾病切除子宫的患者的正常内膜组织152例作为对照组。比较观察组、对照组以及不同临床病理特征、预后EC患者子宫内膜组织omentin-1、SPP1、MMR蛋白表达情况,通过Spearman相关分析法分析各指标在EC组织中表达的相关性,通过多因素logistic回归分析EC预后的影响因素,绘制Kaplan-Meier生存曲线分析组织指标与EC预后的关系。结果观察组子宫内膜组织SPP1阳性、MMR缺失率高于对照组(P<0.05),子宫内膜组织omentin-1阳性率低于对照组(P<0.05)。肌层浸润≥1/2的EC患者omentin-1阴性比例低于Omentin-1阳性(P<0.05);分化程度为低分化的EC患者SPP1阳性、MMR缺失占比更高(P<0.05)。通过Spearman相关分析法结果显示,omentin-1蛋白阳性与MMR蛋白缺失、SPP1蛋白阳性表达呈负相关(P<0.05),MMR蛋白缺失与SPP1蛋白阳性表达呈正相关(P<0.05)。预后不良组子宫内膜组织SPP1阳性、MMR缺失率更高,子宫内膜组织omentin-1阳性率更低(P<0.05)。多因素logistic分析结果显示,omentin-1阴性、SPP1阳性、MMR缺失为EC患者预后不良的危险因素(P<0.05)。根据随访资料绘制Kaplan-Meier生存曲线,由生存曲线可知omentin-1蛋白阴性、SPP1蛋白阳性、MMR蛋白缺失患者预后较差,差异有统计学意义(P<0.05)。结论随着EC发生及临床病理特征进展,免疫组化检测omentin-1、SPP1、MMR蛋白表达存在异常,omentin-1蛋白阴性、SPP1蛋白阳性、MMR蛋白缺失与EC预后不良有关且为其独立危险因素。 展开更多
关键词 子宫内膜癌 免疫组化 网膜素-1 分泌型磷蛋白1 错配修复系统 临床病理特征 预后
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龙胆苦苷通过调节肝星状细胞中MIF-SPP1信号通路预防巨噬细胞介导的肝纤维化机制研究
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作者 王继绪 朱英斌 +1 位作者 陈茂丽 韩永峰 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第7期593-602,共10页
目的探究龙胆苦苷(GPS)通过调节肝星状细胞中巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)-分泌型磷蛋白1(SPP1)信号通路预防巨噬细胞介导的肝纤维化机制。方法将LX-2细胞分为对照组、转化生长因子β(TGF-β)组、TGF-β联合GPS(25、50、100、150)μmol/mL... 目的探究龙胆苦苷(GPS)通过调节肝星状细胞中巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)-分泌型磷蛋白1(SPP1)信号通路预防巨噬细胞介导的肝纤维化机制。方法将LX-2细胞分为对照组、转化生长因子β(TGF-β)组、TGF-β联合GPS(25、50、100、150)μmol/mL组,EDU检测细胞增殖、Transwell TM检测细胞侵袭、Western blot法检测平滑肌激动蛋白(α-SMA)与一型胶原蛋白(COL1A1)蛋白表达。分离M1型巨噬细胞条件培养基(M1-CM)用于处理TGF-β组、TGF-β联合GPS组LX-2细胞,同时检测细胞上清液中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg1)浓度,细胞增殖与侵袭能力,以及α-SMA与COL1A1蛋白表达。生物信息学分析GPS、肝纤维化与巨噬细胞相关基因的靶点交集,药物亲和反应的靶点稳定性(DARTS)实验和Western blot法验证GPS对MIF的调控作用。进一步将LX-2细胞分为对照组、TGF-β组、TGF-β联合M2-CM组、TGF-β和oe-NC联合M2-CM组、TGF-β和oe-MIF联合M2-CM组,分析细胞上清液iNOS、Arg1浓度及细胞增殖、侵袭、α-SMA与COL1A1蛋白表达变化。将LX-2细胞分为对照组、TGF-β组、TGF-β联合oe-NC组、TGF-β联合oe-MIF组、TGF-β和oe-MIF联合GPS组,Western blot法测定MIF与SPP1蛋白表达。构建大鼠肝纤维化模型,探究GPS对体内肝纤维化的潜在治疗作用。结果与对照组相比,TGF-β组LX-2细胞增殖与侵袭能力增加,α-SMA与COL1A1蛋白表达增强,而GPS干预能够抑制TGF-β条件LX-2细胞增殖与侵袭,并降低α-SMA与COL1A1蛋白表达。与对照组相比,TGF-β组细胞上清液中iNOS浓度上调、Arg1浓度下降,并且M1-CM处理在TGF-β干预的基础上,进一步增加了iNOS浓度、降低了Arg1浓度,同时促进了细胞增殖与侵袭,上调了α-SMA与COL1A1蛋白表达,而GPS能够逆转M1-CM干预的结果。生物信息学分析发现MIF为GPS、肝纤维化与巨噬细胞相关基因的靶点交集之一,且GPS能够靶向并抑制其表达。相比于TGF-β组,M2-CM干预后细胞上清液中iNOS浓度下降、Arg1浓度增加,LX-2细胞增殖与侵袭能力降低,α-SMA与COL1A1蛋白表达减弱,然而过表达MIF后,逆转了M2-CM的干预效果。Western blot结果显示,相比于对照组,TGF-β组MIF与SPP1蛋白表达增强,过表达MIF后MIF与SPP1蛋白表达进一步增强,而GPS干预则抑制了MIF与SPP1蛋白表达。动物实验中,GPS干预治疗能够减轻肝纤维化大鼠肝损伤,并抑制肝组织中MIF与SPP1、α-SMA与COL1A1蛋白表达。结论GPS可能通过抑制肝星状细胞中MIF-SPP1信号通路预防巨噬细胞介导的肝纤维化。 展开更多
关键词 巨噬细胞 龙胆苦苷(GPS) 肝星状细胞 肝纤维化 巨噬细胞迁移抑制因子(MIF) 分泌型磷蛋白1(SPP1)
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二苯乙烯苷对慢性脑缺血大鼠学习记忆的影响 被引量：19
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作者 刘丽 李林 +3 位作者 赵玲 张丽 李雅莉 叶翠飞 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期108-115,共8页
目的观察何首乌有效成分二苯乙烯苷(TSG)对慢性脑缺血大鼠学习记忆能力的影响,并探讨其可能机制。方法雄性SD大鼠双侧颈总动脉永久性结扎制备慢性脑缺血致痴呆模型。术前2周起,分别给TSG30,60及120mg·kg-1·d-1,ig,连续11周。... 目的观察何首乌有效成分二苯乙烯苷(TSG)对慢性脑缺血大鼠学习记忆能力的影响,并探讨其可能机制。方法雄性SD大鼠双侧颈总动脉永久性结扎制备慢性脑缺血致痴呆模型。术前2周起,分别给TSG30,60及120mg·kg-1·d-1,ig,连续11周。术后8周时,分别用Morris水迷宫实验和避暗实验检测大鼠的空间学习记忆能力和被动回避学习记忆能力。术后9周时,采用生化方法检测海马乙酰胆碱酯酶(AChE)活性,免疫组化方法检测海马蛋白磷酸酶2A(PP-2A)和微管相关蛋白2(MAP-2)的表达。结果慢性脑缺血模型组大鼠空间和被动回避学习记忆能力明显降低,海马AChE活性显著升高,PP-2A和MAP-2表达明显减少。TSG给药10周可显著改善慢性脑缺血引起的学习记忆能力降低;给药11周明显抑制海马AChE活性增高,并增加PP-2A和MAP-2的表达。结论TSG可改善慢性脑缺血大鼠的学习记忆能力,其机制可能与抑制海马AChE活性,增加海马PP-2A和MAP-2的表达有关。 展开更多
关键词 二苯乙烯苷 何首乌 脑缺血 学习 记忆 乙酰胆碱酯酶 磷蛋白磷酸酶 微管相关蛋白质类
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四种氯吡格雷抗血小板功能检测方法的比较 被引量：7
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作者 杨雅薇 李攀 +2 位作者 陈韬 刘宇 马丽萍 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1002-1006,共5页
目的分析血栓弹力图(thrombelastography,TEG)、血管扩张刺激磷酸蛋白(vasodilator-stimulated phosphoprotein,VASP)及国产血小板分仪PL-11与VerifyNow检测系统评估氯吡格雷对血小板聚集抑制效应的一致性,探讨其临床应用价值。方法连... 目的分析血栓弹力图(thrombelastography,TEG)、血管扩张刺激磷酸蛋白(vasodilator-stimulated phosphoprotein,VASP)及国产血小板分仪PL-11与VerifyNow检测系统评估氯吡格雷对血小板聚集抑制效应的一致性,探讨其临床应用价值。方法连续入选98例诊断为急性心肌梗死(ST-segment elevation myocardial infarction,STEMI/non ST-segment elevation myocardial infarction,NSTEMI)和经皮冠状动脉介入(percutaneous coronary intervention,PCI)术后支架内再狭窄的患者在负荷氯吡格雷600 mg 6h后、负荷氯吡格雷300 mg 24h后或者氯吡格雷75 mg/d>7d,采用VerifyNow、TEG、VASP与PL-11 4种血小板检测系统同时进行检测,以VerifyNow系统的测试结果 P2Y12反应单位(P2Y12reaction units,PRU)值≥208定义为血小板高反应性(high on-clopidogrel treatment platelet reactivity,HTPR)。对4种检测方法进行相关分析,采用ROC曲线下面积(AUC)评估检测手段对HTPR的诊断价值。结果 VerifyNow系统检测血小板抑制率与TEG系统检测的血小板抑制率结果呈正相关(r=0.234,P<0.05);与VASP磷酸化程度计算的血小板反应单位(platelet reactivity index,PRI)、PL-11系统检测的最大血小板聚集率、TEG系统检测二磷酸腺苷诱导的最大血块强度呈负相关(r=-0.299,P<0.01;r=-0.330,P<0.05;r=-0.237,P<0.05);PRU值与VerifyNow系统检测血小板抑制率呈负相关(r=-0.815,P<0.01)。在几种血小板检测系统中,PL-11用于诊断HTPR的AUC最大,为0.644。结论 TEG、VASP、PL-11 3种血小板功能检测系统与"金标准"VerifyNow检测系统具有一定的相关性,其中PL-11系统的敏感度和特异度最高。 展开更多
关键词 血小板功能试验 VerifyNow检测系统 血栓弹力图 PL-11血小板分析仪 血管扩张刺激磷酸蛋白 氯吡格雷
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流式细胞术检测VASP的磷酸化程度可监测氯吡格雷抵抗 被引量：8
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作者 李广华 罗燕飞 +5 位作者 罗盈 林婷 范小斌 梁玲 谢红东 黄锦维 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期434-437,共4页
目的评价流式细胞术检测血小板血管扩张剂刺激磷蛋白(VASP)的磷酸化程度对监测氯吡格雷抵抗的可行性。方法以17例健康人作为对照组,分别采用传统光学比浊法检测血小板聚集率(PAR)和流式细胞术检测血小板内VASP磷酸化程度(换算成血小板... 目的评价流式细胞术检测血小板血管扩张剂刺激磷蛋白(VASP)的磷酸化程度对监测氯吡格雷抵抗的可行性。方法以17例健康人作为对照组,分别采用传统光学比浊法检测血小板聚集率(PAR)和流式细胞术检测血小板内VASP磷酸化程度(换算成血小板反应指数PRI),再检测20例冠心病患者服药前及服药后(联合服用氯吡格雷和阿司匹林)的血小板聚集率及血小板反应指数(PRI),进行统计学分析。结果服药前病例组血小板反应指数PRI=(89.45±5.22)%与对照组PRI=(86.58±4.35)%相比无差异(P>0.05),服药后病例组血小板反应指数PRI=(67.66±19.77)%与服药前相比有差异(P<0.05)。经流式细胞术VASPP法检测共发现6例氯吡格雷抵抗,抵抗率为30%,比光学比浊法10%的抵抗率更敏感。结论﹣流式细胞术检测血小板VASP-P法是一种更特异的检测氯吡格雷抵抗的可靠方法;﹣冠心病患者联合服用氯吡格雷和阿司匹林治疗后氯吡格雷的抵抗率为30%。 展开更多
关键词 流式细胞术 冠状动脉综合征 氯吡格雷抵抗 血小板 血管扩张剂刺激磷蛋白
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分泌型磷蛋白24与维持性血液透析患者心脏瓣膜钙化及心血管事件的相关性研究 被引量：8
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作者 王雪荣 许雯婷 +4 位作者 包婷 李新玉 刘桂凌 袁亮 王德光 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第7期1156-1160,共5页
目的探讨维持性血液透析患者分泌型磷蛋白24(SPP24)水平变化及与心脏瓣膜钙化(CVC)、心血管事件(CVE)的相关性。方法研究对象包括88例维持性血液透析(MHD)患者,采用心脏彩超评估患者CVC情况,根据超声检查结果分为CVC组和无CVC组,采用酶... 目的探讨维持性血液透析患者分泌型磷蛋白24(SPP24)水平变化及与心脏瓣膜钙化(CVC)、心血管事件(CVE)的相关性。方法研究对象包括88例维持性血液透析(MHD)患者,采用心脏彩超评估患者CVC情况,根据超声检查结果分为CVC组和无CVC组,采用酶联免疫吸附方法测量SPP24水平,分析SPP24在两组病例中的水平变化,采用二分类logistic回归分析SPP24水平变化与CVC的相关性,并探讨二尖瓣和主动脉瓣联合CVC的影响因素。对病例进行随访,记录CVE发生情况,使用COX回归模型分析CVE的影响因素。结果CVC组47例(53.41%),CVC组SPP24水平低于无CVC组(P=0.040)。二尖瓣和主动脉瓣联合瓣膜钙化22例。二分类logistic回归分析发现,年龄增加(OR=1.055)、高磷血症(OR=8.234)是CVC的危险因素,高SPP24(OR=0.997)是CVC的保护因素。年龄增加(OR=1.086)、高磷血症(OR=7.393)均是联合心脏联合瓣膜钙化的危险因素,高SPP24(OR=0.964)是心脏二尖瓣和主动脉瓣联合瓣膜钙化的保护因素。对病例进行2~14月随访,发生CVE 24例,COX回归分析发现CVC(HR=4.156)增加患者CVE发生风险,高SPP24水平(HR=0.976)降低CVE发生风险。心脏联合瓣膜钙化(HR=3.071)是CVE的危险因素。结论维持性血液透析患者CVC的发生率高达53.41%,年龄增加、高磷血症是CVC的危险因素,高SPP24水平是CVC的保护因素。CVC是CVE的独立危险因素,高SPP24水平是CVE的保护因素。 展开更多
关键词 分泌型磷蛋白24 维持性血液透析 心脏瓣膜钙化 心血管事件
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EBP50通过Wnt3a/β-catenin信号通路抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移 被引量：9
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作者 孙志亮 张胜超 +1 位作者 李洪利 尹崇高 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1027-1032,共6页
EBP50通过抑制LIMK/cofilin信号通路和PI3K/Akt/m TOR/MMP信号通路抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移。然而,EBP50是否可以通过其他机制抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移尚未可知。本研究发现,EBP50能通过Wnt3a/β-catenin信号通路影响乳腺癌细胞... EBP50通过抑制LIMK/cofilin信号通路和PI3K/Akt/m TOR/MMP信号通路抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移。然而,EBP50是否可以通过其他机制抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移尚未可知。本研究发现,EBP50能通过Wnt3a/β-catenin信号通路影响乳腺癌细胞的侵袭和转移。Western印迹结果显示,EBP50在低转移细胞株MCF-7和正常乳腺细胞株MCF-10A中高表达,而在高转移细胞株MDA-MB-231低表达。采用RNAi技术将小RNA质粒瞬时转染乳腺癌细胞株MCF-7,同时将质粒pc DNA3.1-EBP50转入乳腺癌细胞株MDA-MB-231。Western印迹结果显示,Si EBP50/MCF-7细胞组的EBP50表达水平明显下调,MDA231/EBP50细胞组的EBP50表达水平明显上调。Transwell侵袭实验和划痕实验结果显示,用Wnt3a刺激后,Si EBP50/MCF-7细胞组体外迁移和侵袭能力明显增强,MDA231/EBP50细胞组体外迁移和侵袭能力明显减弱。Western印迹结果显示,与未用Wnt3a或同时用Wnt3a和抑制剂Dkk1刺激的相比,Si EBP50/MCF-7细胞组上皮-钙粘蛋白(Ecadherin)下调,波形蛋白(vimentin)上调,细胞核中β-联蛋白(β-catenin)的表达水平升高,而MDA231/EBP50细胞组上皮-钙粘蛋白上调,波形蛋白下调,细胞核中β-联蛋白表达下降。上述结果表明,EBP50通过Wnt3a/β-catenin信号通路影响β-联蛋白的转核,抑制EMT的发生,进而抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移。 展开更多
关键词 乳腺癌 EBP50 Wnt3a/β-catenin 侵袭 转移
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血管扩张刺激磷蛋白在细胞骨架调节中的作用 被引量：9
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作者 王婷婷 李柯 魏蕾 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期27-30,共4页
细胞骨架动力学的调节在细胞粘附、细胞变形、细胞移动等生理过程中是必需的。血管扩张刺激磷蛋白(vasod ilator-stimulated phosphoprotein,VASP)是一种肌动蛋白结合蛋白。该蛋白包含以下结构域:EVH1(Ena/VASP homolog 1)区、EVH2(Ena/... 细胞骨架动力学的调节在细胞粘附、细胞变形、细胞移动等生理过程中是必需的。血管扩张刺激磷蛋白(vasod ilator-stimulated phosphoprotein,VASP)是一种肌动蛋白结合蛋白。该蛋白包含以下结构域:EVH1(Ena/VASP homolog 1)区、EVH2(Ena/VASP homolog 2)区及PRR(proline-rich re-gions)区。近年来,研究发现VASP在与细胞骨架调节有关的各种细胞行为中起着重要作用,如神经细胞轴索的延伸、T细胞的移动、成纤维细胞的迁移等。VASP的磷酸化受PKG(cGMP-dependentprotein kinase)和PKA(cAMP-dependent protein kinase)的调控。在粘附斑的形成与脱落过程中,该磷酸化起着一个“开关”的作用。本文将就近20年来VASP的研究成果,特别是近年来的进展情况做一综述。 展开更多
关键词 血管扩张刺激磷蛋白 细胞骨架 细胞运动
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新城疫病毒P/V/W基因编码产物功能结构域的分析及定位 被引量：4
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作者 仇旭升 孟春春 +3 位作者 于洋 陈鸿军 于圣青 丁铲 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期191-196,207,共7页
NDV的P基因能够通过RNA编辑机制编码3种病毒蛋白P、V和W。为了初步确定新城疫病毒P、V和W的功能结构域及其在P基因中位置,对这3种具有相同N端不同C端的病毒蛋白进行生物信息学分析。分别设计针对基因Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅶ型以及class Ⅰ NDV毒... NDV的P基因能够通过RNA编辑机制编码3种病毒蛋白P、V和W。为了初步确定新城疫病毒P、V和W的功能结构域及其在P基因中位置,对这3种具有相同N端不同C端的病毒蛋白进行生物信息学分析。分别设计针对基因Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅶ型以及class Ⅰ NDV毒株P基因的引物。RT-PCR获得5种基因型NDV P基因的正确序列。通过核苷酸序列预测P基因表达产物的氨基酸序列,并进行二级结构预测和三级结构模拟。将SV5 V蛋白空间结构作为模板,从而分析获得了NDVP/V/W基因编码产物的二级结构以及部分空间结构。综合各种分析数据,预测P蛋白辅助N蛋白折叠的结构域位于N端前50 aa内;介导P蛋白四聚体形成的coiled-coil结构位于221-290 aa范围内;介导P蛋白与基因组的作用的X结构域位于291-392 aa范围内。V蛋白的C端结构域的编码区域位于P蛋白132-239 aa编码区域内。 展开更多
关键词 新城疫病毒 P蛋白 V蛋白 生物信息学 功能结构域
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博尔纳病毒P24转染后不同时期核酸和蛋白的表达及细胞定位 被引量：4
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作者 徐鸣明 张英英 +7 位作者 展群岭 何丰 张亮 金戈 宋哲 李亚军 李雷雷 谢鹏 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期533-536,共4页
目的通过观察博尔纳病毒(borna disease virus,BDV)磷蛋白(P24)及其编码核酸不同时期的表达和细胞定位,探索BDV潜伏感染的机制。方法构建包含BDV GFP-P24质粒的OL细胞模型,检测并比较不同时期P24核酸和蛋白的表达;对构建的OL细胞模型和... 目的通过观察博尔纳病毒(borna disease virus,BDV)磷蛋白(P24)及其编码核酸不同时期的表达和细胞定位,探索BDV潜伏感染的机制。方法构建包含BDV GFP-P24质粒的OL细胞模型,检测并比较不同时期P24核酸和蛋白的表达;对构建的OL细胞模型和各种阴性对照进行逆转录原位PCR的检测,观察P24蛋白编码核酸的细胞定位;使用倒置荧光显微镜观察OL细胞中P24蛋白的细胞定位。结果成功构建了含BDV GFP-P24质粒的OL细胞,发现转染后20代以内细胞P24核酸和蛋白的表达差异不显著(P>0.05);BDV的P24重组蛋白基因始终定位于细胞核,其蛋白早期在细胞核出现,反复传代约15次后可同时在细胞核和细胞质内出现。结论BDV的重组蛋白P24在病毒感染过程中起关键作用,其编码基因始终存在于宿主细胞核内,但表达的蛋白可以在一定时期通过核膜进入细胞质。 展开更多
关键词 博尔纳病 逆转录原位PCR 磷蛋白 感染
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多囊卵巢综合征合并胰岛素抵抗患者子宫内膜胰岛素受体底物1、2蛋白的表达及酪氨酸磷酸化 被引量：4
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作者 盛慧 刘义 +1 位作者 吕立群 刘向前 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期473-475,559,共4页
目的研究多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)患者子宫内膜胰岛素受体底物(insulin re-ceptor substrate IRS)1和2蛋白的表达及酪氨酸磷酸化的程度。探讨PCOS子宫内膜胰岛素抵抗的分子机制。方法于月经周期第1天刮取PCOS... 目的研究多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)患者子宫内膜胰岛素受体底物(insulin re-ceptor substrate IRS)1和2蛋白的表达及酪氨酸磷酸化的程度。探讨PCOS子宫内膜胰岛素抵抗的分子机制。方法于月经周期第1天刮取PCOS合并胰岛素抵抗患者(PCOS组,15例)和正常妇女(对照组,10例)子宫内膜,行病理切片观察及免疫组化染色,计算机图像分析系统分析子宫内膜IRS-1和IRS-2蛋白的表达及酪氨酸磷酸化程度。结果①PCOS组和对照组IRS-1蛋白表达的灰度值分别为(121.94±16.00)和(55.35±0.98),IRS-2蛋白分别为(169.35±13.00)和(111.65±8.02),两组比较差异有显著性意义(P<0.01,P<0.05),PCOS组子宫内膜IRS-1和IRS-2蛋白的表达明显降低;②PCOS组子宫内膜IRS酪氨酸磷酸化的程度明显低于对照组,其灰度值分别为(141.98±22.50)、(102.72±9.78),两组比较差异有显著性意义(P<0.05)。结论PCOS合并胰岛素抵抗患者子宫内膜组织的IRS-1和IRS-2蛋白表达及酪氨酸磷酸化的程度异常所导致的受体后信号传导障碍,可能是发生胰岛素抵抗机制之一。 展开更多
关键词 多囊卵巢综合征 胰岛素抵抗 子宫内膜 磷蛋白类 酪氨酸磷酸化
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人巨细胞病毒被膜磷蛋白pp65的检测及其在肾移植受者CMV病诊断中的临床应用 被引量：11
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作者 杨菁 王东 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期263-265,共3页
目的建立一种简便诊断肾移植受者人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染的方法。方法运用催化信号扩增法检测外周血白细胞中的人巨细胞病毒被膜磷蛋白pp65,并与抗HCMV-IgM检测法作比较。结果检测100例肾移植受者中,HCMVpp65抗原阳性47例,IgM抗... 目的建立一种简便诊断肾移植受者人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染的方法。方法运用催化信号扩增法检测外周血白细胞中的人巨细胞病毒被膜磷蛋白pp65,并与抗HCMV-IgM检测法作比较。结果检测100例肾移植受者中,HCMVpp65抗原阳性47例,IgM抗体检测阳性41例,pp65抗原阳性细胞数为(71±45)个/2×105个WBC,而有症状的CMV病29例,抗原阳性细胞指数为(83±46)个/2×105个WBC。对照组50名健康人,pp65抗原检测全为阴性。pp65的敏感性、特异性、阳性预测值与阴性预测值分别是100%、74.6%、61.7%和100%。结论该法敏感、简便,可作为肾移植术后HCMV病的早期诊断并可指导抗病毒治疗。 展开更多
关键词 巨细胞病毒 免疫组织化学 催化作用 肾移植 PP65
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蛋白丝/苏氨酸磷酸酶1和2A抑制药对大鼠三叉神经元电压依赖性钠通道的影响(英文) 被引量：4
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作者 曹雪红 明章银 +2 位作者 付晖 潘建萍 刘烈炬 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期248-253,共6页
目的通过研究蛋白丝/苏氨酸磷酸酶1和2A特异性抑制药冈田酸对大鼠三叉神经元电压依赖性钠电流的影响,探讨磷酸酶在细胞信号转导中的作用。方法在成年大鼠三叉神经元上进行全细胞膜片钳记录。结果1μmol·L-1冈田酸显著抑制总钠电流(... 目的通过研究蛋白丝/苏氨酸磷酸酶1和2A特异性抑制药冈田酸对大鼠三叉神经元电压依赖性钠电流的影响,探讨磷酸酶在细胞信号转导中的作用。方法在成年大鼠三叉神经元上进行全细胞膜片钳记录。结果1μmol·L-1冈田酸显著抑制总钠电流(INa-T) ,仅轻微抑制毒素不敏感型钠电流(INa-TTX-R) ,其抑制率分别为(20±13) %(n=9,P<0 .05)和(4±3) %(n=6, P<0 .05)。冈田酸对INa-T的激活曲线产生明显的超极化位移,半激活电压从给药前的-(13±8)mV升至给药后的-(16±7)mV(P<0 .05) ,但是对INa-TTX-R的激活曲线没有影响。结论①蛋白丝/苏氨酸磷酸酶参与了大鼠三叉神经元电压依赖性钠通道的调节。②大鼠三叉神经元存在多种电压依赖性钠通道,它们对冈田酸具有不同的敏感性。 展开更多
关键词 磷蛋白磷酸酶 钠通道 三叉神经节 膜片钳技术 全细胞 冈田酸
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一种适用于双向电泳的水稻磷酸化蛋白富集方法——酚提取法结合固相金属离子亲和层析法 被引量：2
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作者 邓湘雄 张晓勤 +6 位作者 胡江 徐祥彬 郭龙彪 陈慧男 应奇才 王慧中 薛大伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1057-1063,共7页
磷蛋白在植物信号传导和胁迫响应中有着非常重要的作用,磷蛋白质组学研究已经成为蛋白质组学研究领域中备受瞩目的一个部分.本研究用酚提取法以水稻日本晴苗期叶片为材料提取叶片总蛋白,提取率达3.5%;用固相金属离子亲和层析柱纯化富集... 磷蛋白在植物信号传导和胁迫响应中有着非常重要的作用,磷蛋白质组学研究已经成为蛋白质组学研究领域中备受瞩目的一个部分.本研究用酚提取法以水稻日本晴苗期叶片为材料提取叶片总蛋白,提取率达3.5%;用固相金属离子亲和层析柱纯化富集磷蛋白,得到磷蛋白占总蛋白约6.4%.对过柱洗涤液、不同阶段洗脱液等各个组分进行SDS-PAGE,粗略检测其蛋白含量,并根据单向SDS-PAGE结果对总蛋白、高峰段磷蛋白、非高峰段磷蛋白以及富集后再纯化的总磷蛋白进行双向电泳,比较其中的蛋白差异.本研究提出的方法和程序可在7 cm聚丙烯酰胺凝胶上检测到多达856个磷蛋白,是一种非常有效的磷蛋白富集、纯化和分离鉴定的方法. 展开更多
关键词 水稻 磷蛋白 磷蛋白富集纯化 蛋白质组学 磷蛋白质组学
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