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番木瓜畸型花叶病毒(PLDMV)调查鉴定 被引量：6
1
作者 贺国安 肖火根 +2 位作者 真冈哲夫 张曙光 范怀忠 《热带作物学报》 CSCD 2001年第2期38-42,共5页
对采自广州、景洪（云南）、海口（海南）的各１７，２４，１３个番木瓜样品进行ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ、ＲＴ－ＰＣＲ和生物测定等分析鉴定，发现来自广州和海口的样品中有２１个样品感染番木瓜环斑病毒（ＰＲＳＶ），而来自景洪的样品中... 对采自广州、景洪（云南）、海口（海南）的各１７，２４，１３个番木瓜样品进行ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ、ＲＴ－ＰＣＲ和生物测定等分析鉴定，发现来自广州和海口的样品中有２１个样品感染番木瓜环斑病毒（ＰＲＳＶ），而来自景洪的样品中未发现感染ＰＲＳＶ，在所有样品中都未发现感染有番木瓜畸型花叶病毒的。 展开更多
关键词 番木瓜 畸型花叶病毒 调查 鉴定 DAS-ELISA RT-PCR
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云南番木瓜花叶病病原鉴定 被引量：4
2
作者 孙健 李凡 +3 位作者 王钰丽 王海宁 王崇德 陈海如 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 2006年第6期838-841,共4页
西双版纳、保山、楚雄以及玉溪等地的感病番木瓜叶片表现为花叶或褪绿,叶片畸形,果实表面布满不规则线纹、环纹及环斑等症状。对感病番木瓜材料进行了电镜观察,在电子显微镜下观察到800 nm左右的病毒粒子;设计PRSV特异性引物对感病番木... 西双版纳、保山、楚雄以及玉溪等地的感病番木瓜叶片表现为花叶或褪绿,叶片畸形,果实表面布满不规则线纹、环纹及环斑等症状。对感病番木瓜材料进行了电镜观察,在电子显微镜下观察到800 nm左右的病毒粒子;设计PRSV特异性引物对感病番木瓜材料进行RT-PCR检测,获得的扩增产物和引物设计大小相符;利用双生病毒特异性引物没有检测到双生病毒。确定引起云南番木瓜花叶病的病原为番木瓜环斑病毒。 展开更多
关键词 番木瓜花叶病 番木瓜环斑病毒 RT—PCR 病原鉴定
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一种E.coli-Free的酵母同源重组系统稳定快速构建PLDMV侵染性克隆的新方法 被引量：3
3
作者 庹德财 沈文涛 +2 位作者 言普 黎小瑛 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2017年第8期1492-1500,共9页
侵染性克隆是研究病毒的重要工具,而偏大的病毒基因组及其在大肠杆菌中的不稳定给构建侵染性克隆造成很大困难。通常采用插入内含子和酵母同源重组等方式可以获得稳定克隆,但本实验最初利用酵母同源重组系统并未成功构建番木瓜畸形花叶... 侵染性克隆是研究病毒的重要工具,而偏大的病毒基因组及其在大肠杆菌中的不稳定给构建侵染性克隆造成很大困难。通常采用插入内含子和酵母同源重组等方式可以获得稳定克隆,但本实验最初利用酵母同源重组系统并未成功构建番木瓜畸形花叶病毒(PLDMV)的侵染性克隆。经研究证实,该不稳定现象确实存在于大肠杆菌中,而非酵母和农杆菌细胞。通过改良酵母同源重组方法,成功构建了有/无内含子intron 2的PLDMV侵染性克隆p35S-FL和p35S-FL-In2,农杆菌注射接种番木瓜均发病,侵染效率达64.7%~69.7%。本研究通过酵母同源重组质粒直接转化农杆菌,建立了一种10 d内即可稳定快速构建PLDMV侵染性克隆的E.coli-Free酵母同源重组新方法。该方法对其他在大肠杆菌中不稳定的植物病毒侵染性克隆的构建具有重要意义。 展开更多
关键词 酵母同源重组 番木瓜畸形花叶病毒 侵染性克隆 不稳定性
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原核表达dsRNA抗番木瓜畸形花叶病毒的研究 被引量：2
4
作者 张涛 沈文涛 +2 位作者 言普 黎小瑛 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2014年第7期1416-1423,共8页
番木瓜畸形花叶病毒（Papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV）是一种已对番木瓜种植业构成潜在威胁的新型病害,在转基因植物备受争议的背景下,利用原核表达的dsRNA来防控病毒的策略不失为一种新的选择.本文选取PLDMV CP基因全长（... 番木瓜畸形花叶病毒（Papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV）是一种已对番木瓜种植业构成潜在威胁的新型病害,在转基因植物备受争议的背景下,利用原核表达的dsRNA来防控病毒的策略不失为一种新的选择.本文选取PLDMV CP基因全长（879 bp）,运用OZ-LIC法构建了含有pdk内含子的ihpRNA结构,将其嵌入原核表达载体pSP73中,并转化RNaseⅢ缺陷型大肠杆菌M-Jm109LacY,构建了1种能高表达dsRNA的原核表达菌株M-Jm109LacY-CP879,以终浓度为0.4 mmol/LIPTG诱导后能够稳定高效的表达CP879-dsRNA.研究共设2个处理：保护性处理与治疗性处理.分别用含有CP879-dsRNA的粗提液对这2个处理的番木瓜植株进行喷施处理,通过统计发病率、观察病症变化以及ELISA分析结果表明,保护性处理能有效抑制番木瓜畸形花叶病毒的侵染,主要表现为发病时间推迟和相对较低的发病率;治疗性处理植株的病毒积累量会在喷施后第3～12天内出现暂时性的降低.结果表明,保护效果优于治疗效果,若每月喷施2～3次dsRNA粗提液,有望能够有效地预防PLDMV的侵染. 展开更多
关键词 番木瓜畸形花叶病毒 原核表达 DSRNA RNA沉默
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华南地区番木瓜环斑病毒和畸型花叶病毒调查鉴定研究 被引量：10
5
作者 肖火根 真冈哲夫 骆学海 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期52-53,共2页
调查鉴定了广州、南宁、厦门和福州市番木瓜病毒病病原种类，发现都是由番木瓜环斑病毒引起的，未发现番木瓜畸型花叶病毒。
关键词 番木瓜 环斑病毒 畸型花叶病毒 病毒病
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人工合成靶序列快速构建多靶标RNAi表达载体 被引量：1
6
作者 张秀春 吴坤鑫 +1 位作者 赵平娟 刘志昕 《广东农业科学》 CAS 2016年第7期81-86,共6页
番木瓜环斑病毒(PRSV)正引起番木瓜毁灭性严重病害,番木瓜叶扭曲花叶病毒(PLDMV)也在威胁着目前转基因番木瓜的推广和应用。通过人工合成包含PRSV和PLDMV两种病毒的NIb和HcPro基因多个保守区域的靶序列作为模板,扩增两条长短不同但大部... 番木瓜环斑病毒(PRSV)正引起番木瓜毁灭性严重病害,番木瓜叶扭曲花叶病毒(PLDMV)也在威胁着目前转基因番木瓜的推广和应用。通过人工合成包含PRSV和PLDMV两种病毒的NIb和HcPro基因多个保守区域的靶序列作为模板,扩增两条长短不同但大部分重叠的靶序列,并通过引物设计时添加的特定酶切位点两个靶序列反向连接,形成以长靶序列的5’一部分序列作为发夹结构的环,不需要另外插入内含子序列的反向重复发夹结构的RNAi表达载体pPTN-LS。该方法构建的RNAi表达载体,不仅具有快速、稳定性高等优点,还能同时靶标PRSV和PLDMV两种病毒的NIb和Hc-Pro基因多个保守区域的靶序列,能有效提高沉默效率,为利用RNAi技术培育广谱、高效、稳定且安全性高,同时抗PRSV和PLDMV病毒病的转基因番木瓜新种质的奠定基础。 展开更多
关键词 人工合成靶序列 番木瓜环斑病毒 番木瓜叶扭曲花叶病毒 RNAi表达载体
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番木瓜畸形花叶病毒hc-pro基因保守基序FRNK点突变对病症表现的影响 被引量：1
7
作者 谭东 庹德财 +3 位作者 沈文涛 言普 黎小瑛 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期948-954,共7页
为研究番木瓜畸形花叶病毒(PLDMV)hc-pro基因保守基序FRNK对病症表现的影响,本研究采用定点突变的方法,获得了PLDMV-DF的hc-pro基因保守基序FRNK的精氨酸(R)突变为异亮氨酸(I)的突变体克隆p35SPLDMV-GFP-R_(183)/I,该位点突变显著减轻了... 为研究番木瓜畸形花叶病毒(PLDMV)hc-pro基因保守基序FRNK对病症表现的影响,本研究采用定点突变的方法,获得了PLDMV-DF的hc-pro基因保守基序FRNK的精氨酸(R)突变为异亮氨酸(I)的突变体克隆p35SPLDMV-GFP-R_(183)/I,该位点突变显著减轻了PLDMV在番木瓜上的病症表现,表明是影响其致病性的关键位点。本研究结果为利用交叉保护防控番木瓜畸形花叶病毒病提供了重要参考和材料。 展开更多
关键词 番木瓜 木瓜畸形花叶病毒 突变 侵染性克隆 症状表现
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利用PLDMV/Twin-Strep侵染性克隆纯化HC-Pro病毒蛋白
8
作者 杨秀坤 沈文涛 +5 位作者 庹德财 王赫 言普 黎小瑛 朱国鹏 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2022年第4期684-692,共9页
番木瓜畸形花叶病毒(Papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV)是一种新的潜在威胁番木瓜种植业的病毒,其辅助成分蛋白酶(helper component-proteinase,HC-Pro)是PLDMV编码参与病毒复制、运动、寄主植物症状表现的多功能蛋白,因此纯... 番木瓜畸形花叶病毒(Papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV)是一种新的潜在威胁番木瓜种植业的病毒,其辅助成分蛋白酶(helper component-proteinase,HC-Pro)是PLDMV编码参与病毒复制、运动、寄主植物症状表现的多功能蛋白,因此纯化获得具有功能活性的HC-Pro蛋白,研究其多功能性具有重要意义。本研究利用In-Fusion拼接策略和E.coli Cell-Free快速构建植物病毒侵染性克隆法,一步快速地将28个氨基酸组成的蛋白标签Twin-Strep插入到PLDMV HC-Pro氨基端,成功获得了基于农杆菌的携带Twin-Strep标签的PLDMV侵染性克隆pPLDMV-Strep。通过农杆菌渗透注射接种番木瓜植株,从感染PLDMV-Strep的番木瓜叶片总蛋白中,利用Twin-Strep蛋白标签亲和层析分离纯化获得PLDMVHC-Pro蛋白,并通过LC/ESI-MS/MS(liquid chromatography electrospray ionization tandem mass spectrometric)对其进行蛋白N端和C端序列测序,证明了纯化获得完整的PLDMVHC-Pro蛋白。研究结果为后续解析PLDMV HC-Pro在病毒侵染过程中的功能及与寄主蛋白相互作用奠定了基础。 展开更多
关键词 番木瓜畸形花叶病毒 HC-PRO 马铃薯Y病毒 蛋白纯化
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番木瓜感染畸形花叶病毒后的生理变化及扫描电镜观察 被引量：6
9
作者 安娜 张荣萍 陈萍 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期714-720,共7页
【目的】阐明番木瓜畸形花叶病毒(Papaya leaf-distortion mosaic virus,PLDMV)的侵染机理及侵染后番木瓜自身防御体系对抗病毒的作用机制,为番木瓜病毒病防治提供参考。【方法】以台农二号番木瓜为材料,通过RTPCR检测接种PLDMV处理组(T... 【目的】阐明番木瓜畸形花叶病毒(Papaya leaf-distortion mosaic virus,PLDMV)的侵染机理及侵染后番木瓜自身防御体系对抗病毒的作用机制,为番木瓜病毒病防治提供参考。【方法】以台农二号番木瓜为材料,通过RTPCR检测接种PLDMV处理组(T)与健康空白对照组(CK)的病毒感染情况,采用分光光度法测定PLDMV侵染对番木瓜相关生理指标的影响,运用扫描电镜法观察两组番木瓜叶片的微观结构差异。【结果】通过RT-PCR检测,证明T番木瓜植株已感染PLDMV。T与CK番木瓜叶片在表征、微观解剖结构及生理指标等方面均存在明显差异,与CK番木瓜叶片相比,T番木瓜叶片纵切面栅海比及背部绒毛密度明显小于CK番木瓜,气孔密度大于CK番木瓜;T番木瓜的过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性和脯氨酸(Pro)、丙二醛(MDA)、超氧阴离子(O)含量均显著高于CK番木瓜(P<0.05,下同),过氧化氢酶(CAT)活性和叶绿素(Chl)含量显著低于CK番木瓜,而超氧化物歧化酶(SOD)和几丁质酶活性两组间无显著差异(P>0.05)。【结论】番木瓜受PLDMV侵染后,其叶片结构被破坏,细胞毒害损伤严重,体内代谢紊乱,多种代谢调节平衡被打破,番木瓜的正常生长发育受阻。 展开更多
关键词 番木瓜 番木瓜畸形花叶病毒(PLDMV) 扫描电镜
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番木瓜花叶病毒病综合控制技术研究初报
10
作者 赵志昆 岳增福 吴建明 《热带农业科技》 2006年第4期25-26,29,共3页
经2004～2005年的田间试验,所采用的选择抗病品种、壮苗定植、彻底清园、酵素菌肥、合理种植密度、合理间作、清除病株、设置粘虫板、蚜虫化学防治等综合措施,使试验区2.02hm2番木瓜花叶病毒发病率得到有效控制,发病率<3.0%;其中香... 经2004～2005年的田间试验,所采用的选择抗病品种、壮苗定植、彻底清园、酵素菌肥、合理种植密度、合理间作、清除病株、设置粘虫板、蚜虫化学防治等综合措施,使试验区2.02hm2番木瓜花叶病毒发病率得到有效控制,发病率<3.0%;其中香妃、香蜜品种表现抗病性较强。 展开更多
关键词 番木瓜 花叶病毒病 综合控制 河口
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