Pdx-1、Ngn3联合MafA诱导干细胞分化为胰岛素分泌细胞移植治疗1型糖尿病大鼠的效果

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作者 闫淑芳 袁慧娟 《河南医学研究》 CAS 2024年第9期1553-1557,共5页

目的通过胰十二指肠同源盒1(Pdx-1)、神经元素3(Ngn3)联合V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A(MafA)共转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)诱导分化为胰岛素分泌细胞(IPCs),移植治疗1型糖尿病大鼠并观察其疗效。方法Pdx-1、Ngn3和MafA共转染... 目的通过胰十二指肠同源盒1(Pdx-1)、神经元素3(Ngn3)联合V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A(MafA)共转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)诱导分化为胰岛素分泌细胞(IPCs),移植治疗1型糖尿病大鼠并观察其疗效。方法Pdx-1、Ngn3和MafA共转染BMSCs诱导为IPCs,链脲佐菌素(STZ)制备45只1型糖尿病SD大鼠模型,BMSCs组(15只)肾被膜下移植2×10^(6) BMSCs,IPCs组(15只)大鼠肾被膜下移植2×10^(6) IPCs,sham-operation组(15只)大鼠肾被膜下注入等量生理盐水,另取15只健康SD大鼠肾被膜下注入等量生理盐水作为normal组。监测各组大鼠移植第0、7、14、21、28 d空腹血糖及体重;第21天对各组大鼠均行葡萄糖耐量试验;第28天取各组大鼠肾脏组织进行免疫组化。结果BMSCs和IPCs组大鼠血糖随时间下降,移植第21天两组大鼠空腹血糖低于移植第0天,且均低于同期sham-operation组(P<0.05),移植第28天IPCs组大鼠空腹血糖低于BMSCs组(P<0.05)。糖尿病大鼠中IPCs组和BMSCs组腹腔葡萄糖耐量实验曲线下面积小于sham-operation组,且IPCs组曲线下面积最小(P<0.05)。BMSCs组和IPCs组大鼠肾脏组织可见棕色荧光的胰岛素表达,且IPCs组胰岛素荧光光密度高于BMSCs组(P<0.05)。结论Pdx-1-Ngn3联合MafA诱导BMSCs形成的IPCs移植后在糖尿病大鼠体内可降低糖尿病大鼠的空腹血糖。 展开更多

关键词 胰十二指肠同源盒1 神经元素3 V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A 大鼠骨髓间充质干细胞 胰岛素分泌细胞 1型糖尿病

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胰腺十二指肠同源框1基因在大鼠骨髓间充质干细胞向胰岛素分泌细胞定向分化过程中的作用 被引量：2

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作者 于丽 孙吉平 +2 位作者 陈燕春 岳炳德 管英俊 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期261-264,共4页

目的:探讨胰腺十二指肠同源框1基因(PDX-1)在大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向胰岛素分泌细胞定向分化过程中的作用。方法:新型纳米载体Superfect介导含有PDX-1基因的真核表达载体转染骨髓MSCs,G418筛选,分步法进行体外诱导;流式细胞仪检... 目的:探讨胰腺十二指肠同源框1基因(PDX-1)在大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向胰岛素分泌细胞定向分化过程中的作用。方法:新型纳米载体Superfect介导含有PDX-1基因的真核表达载体转染骨髓MSCs,G418筛选,分步法进行体外诱导;流式细胞仪检测诱导后胰岛素阳性细胞的比例,SABC免疫细胞化学染色和Western印迹法检测诱导后细胞胰岛素蛋白的表达;ELISA法检测诱导后细胞对葡萄糖刺激的反应能力。结果:Superfect可高效介导重组载体在骨髓MSCs表达,随着转染时间延长,表达逐渐增强PDX-1^+MSCs分化为胰岛素阳性细胞数较转染空白载体和PDX-1^-MSCs组明显增多;诱导后细胞表达胰岛素,转染PDX-1基因后表达明显增加;PDX-1^+MSCs对不同浓度的葡萄糖刺激表现出不同的胰岛素分泌反应。结论:骨髓MSCs体外能分化为胰岛素分泌细胞,PDX-1能显著提高其分化效率。 展开更多

关键词 胰腺十二指肠同源框1基因 骨髓间充质干细胞 胰岛素分泌细胞 细胞分化

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枸杞多糖对2型糖尿病大鼠胰腺β细胞PDX-1基因表达的实验研究 被引量：11

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作者 刘峰 黄国栋 +1 位作者 朱凌燕 汤佳珍 《中国医药科学》 2013年第1期34-36,45,共4页

目的探讨枸杞多糖对2型糖尿病大鼠β细胞分泌功能及PDX-1基因mRNA表达的影响。方法用高糖饲喂并结合链脲佐菌素诱导制备2型糖尿病大鼠模型,分组灌胃给予不同浓度的枸杞多糖及对照药物,50只实验动物随机分为5组:对照组、模型组、模型+30m... 目的探讨枸杞多糖对2型糖尿病大鼠β细胞分泌功能及PDX-1基因mRNA表达的影响。方法用高糖饲喂并结合链脲佐菌素诱导制备2型糖尿病大鼠模型,分组灌胃给予不同浓度的枸杞多糖及对照药物,50只实验动物随机分为5组:对照组、模型组、模型+30mg/kgLBP组、模型+60mg/kgLBP组、模型+90mg/kgLBP组。连续8周后检测空腹血糖、三酰甘油、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、血清胰岛素,处死大鼠取胰腺组织,RT-PCR检测β细胞内PDX-l及胰岛素mRNA的表达水平。结果 2型糖尿病大鼠胰腺β细胞PDX-l及胰岛素mRNA的表达水平显著下降(P<0.01);60mg/kg和90mg/kgLBP组能显著上调2型糖尿病大鼠胰腺β细胞PDX-l与胰岛素mRNA表达水平(P<0.05)。结论 LBP可以通过上调PDX-l和胰岛素mRNA表达,改善2型糖尿病大鼠β细胞胰岛素合成和分泌功能的损伤。 展开更多

关键词 枸杞多糖 2型糖尿病 Β细胞 PDX-1

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胰腺十二指肠同源框-1基因促进大鼠骨髓间充质干细胞体外横向分化为胰岛素分泌细胞 被引量：2

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作者 孙吉平 杨于嘉 贾延劼 《医学研究生学报》 CAS 2006年第11期980-983,I0008-I0009,共6页

目的:研究胰腺十二指肠同源框-1基因(Pdx-1)在骨髓间充质干细胞(MSC)体外分化中的作用。方法:构建含有Pdx-1基因的真核表达载体,转染介质Superfect介导重组载体转染MSC,G418筛选阳性细胞后对转染组(Pdx-1+MSC)和未转染组(Pdx-1-MSC)均... 目的:研究胰腺十二指肠同源框-1基因(Pdx-1)在骨髓间充质干细胞(MSC)体外分化中的作用。方法:构建含有Pdx-1基因的真核表达载体,转染介质Superfect介导重组载体转染MSC,G418筛选阳性细胞后对转染组(Pdx-1+MSC)和未转染组(Pdx-1-MSC)均体外进行诱导分化,细胞免疫组化染色鉴定诱导后胰岛素分泌阳性细胞。结果:限制性酶切分析和序列测定证实成功构建了含有Pdx-1基因的真核表达载体,荧光显微镜观察证实Superfect能高效介导重组载体转染MSC;细胞免疫组化染色显示Pdx-1+MSC分化为胰岛素分泌细胞的数量较Pdx-1-MSC明显增多,阳性率分别为(28.23±2.56)%和(7.08±2.69)%。结论:Pdx-1能增强大鼠MSC体外分化为功能性胰岛素分泌细胞的能力,为胰岛移植开辟新的思路,对1型糖尿病治疗有重要的应用价值。 展开更多

关键词 胰腺十二指肠同源框-1基因 骨髓间充质干细胞 胰岛 糖尿病

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PDX-1促进大鼠骨髓间质干细胞体外分化为胰岛素分泌细胞 被引量：1

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作者 卢克良 钟延美 +2 位作者 赵钧慧 申志新 孙吉平 《中国现代普通外科进展》 CAS 2009年第1期12-17,共6页

目的:研究胰腺十二指肠同源框-1(pancreatic duodenal homeobox-1,PDX-1)基因在骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外分化中的作用。方法:构建含有PDX-1基因的真核表达载体,转染介质Superfect介导重组载体转染MSCs,G418筛... 目的:研究胰腺十二指肠同源框-1(pancreatic duodenal homeobox-1,PDX-1)基因在骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外分化中的作用。方法:构建含有PDX-1基因的真核表达载体,转染介质Superfect介导重组载体转染MSCs,G418筛选阳性细胞后对转染组(PDX-1+MSCs)和未转染组(PDX-1-MSCs)均体外进行诱导分化,流式细胞仪检测胰岛素阳性细胞的比例,胰岛素ELISA试剂盒测定转染组诱导后细胞的胰岛素分泌功能。结果:限制性酶切分析和序列测定证实成功构建了含有PDX-1基因的真核表达载体,荧光显微镜观察证实Superfect高效介导重组载体转染MSCs;流式细胞仪发现PDX-1+MSCs分化为胰岛素分泌细胞的数量较PDX-1-MSCs明显增多(阳性率分别为28.23%±2.56%和7.08%±2.69%),25mmol高浓度葡萄糖刺激的胰岛素分泌量(115.29±2.56μU/mL)较5mmol低浓度葡萄糖刺激的分泌量明显增高(56.61±4.82μU/mL)。结论:PDX-1能增强大鼠MSCs体外分化为功能性胰岛素分泌细胞的能力,对开展胰岛移植治疗1型糖尿病有重要价值。 展开更多

关键词 间质干细胞 胰腺十二指肠同源框-1 干细胞移植 糖尿病 1型

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人TAT-PDX-1融合蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化

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作者 苗成 宋波 +3 位作者 王茜 张宁 韩志强 许予明 《山东医药》 CAS 北大核心 2011年第19期18-20,共3页

目的构建人TAT-PDX-1表达载体,并对其融合蛋白进行纯化。方法采用RT-PCR技术从人胰腺组织中获得目的基因hPDX-1,将TAT序列与PDX-1克隆到原核表达载体pET-28a;用IPTG诱导、表达融合蛋白;NiNTAagaros纯化融合蛋白,Western blot鉴定。结果... 目的构建人TAT-PDX-1表达载体,并对其融合蛋白进行纯化。方法采用RT-PCR技术从人胰腺组织中获得目的基因hPDX-1,将TAT序列与PDX-1克隆到原核表达载体pET-28a;用IPTG诱导、表达融合蛋白;NiNTAagaros纯化融合蛋白,Western blot鉴定。结果目的片段PDX-1被有效扩增,DNA序列测定表明所构建重组质粒pET28a-TAT-h PDX-1与设计相同;TAT-PDX-1融合蛋白在大肠杆菌中获得高效表达并成功纯化。结论成功地获得了TAT-hPDX-1融合基因的表达产物,为进一步研究及临床应用奠定了基础。 展开更多

关键词 原核表达 蛋白转导域 胰十二指肠同源盒基因-1

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Pdx1激活Ngn3和Pax6诱导iPS细胞向胰岛β细胞分化的实验研究 被引量：4

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作者 占小波 肖亮 +3 位作者 韩冬 蒋经柱 赵杭芬 周汉新 《中国现代普通外科进展》 CAS 2014年第8期589-593,共5页

目的:探讨胰十二指肠同源盒基因-1(Pdx1)在诱导多潜能干细胞(i PSCs)分化为胰岛β细胞中的作用及其机制。方法:体外培养人皮肤成纤维细胞来源的i PSCs,将该i PSCs定向诱导分化20 d;RT-PCR检测胰岛素相关基因的表达情况;比较诱导前后几... 目的:探讨胰十二指肠同源盒基因-1(Pdx1)在诱导多潜能干细胞(i PSCs)分化为胰岛β细胞中的作用及其机制。方法:体外培养人皮肤成纤维细胞来源的i PSCs,将该i PSCs定向诱导分化20 d;RT-PCR检测胰岛素相关基因的表达情况;比较诱导前后几个重要转录因子的表达情况;Ch IP检测胰岛β细胞发育过程中最重要的转录因子Pdx1结合启动子区域的具体位点。结果:体外成功培养人皮肤来源的i PSCs;胰岛素相关基因Maf A、insulin、Glut2、Nkx6.1、Glucokinase和Tcf1均呈现不同程度的表达增强,并在第20 d时表达基本达到高峰;实验组转录因子Pdx1、Ngn3与Pax6表达较对照组明显增强;Pdx1通过结合Insulin-P、Ngn3-P、Pax6-P区域激活下游基因Ngn3和Pax6。结论:Pdx1激活下游基因Ngn3和Pax6可能是其促进i PSCs定向诱导分化为胰岛β细胞的机制之一。 展开更多

关键词 诱导多潜能干细胞 胰岛Β细胞 胰腺十二指肠同源盒基因1 神经元素3 成对盒基因6 胰岛素

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LncRNA ZEB1-AS1调节miR-429/PDX-1轴对结肠癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

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作者 程广兴 郑发著 +2 位作者 唐金龙 张博 刘春辉 《中国现代普通外科进展》 CAS 2023年第10期757-761,766,共6页

目的:探究长链非编码RNA E盒锌指蛋白1反转录本1(LncRNA ZEB1-AS1)调节miR-429/胰腺十二指肠同源盒基因-1(PDX-1)轴对结肠癌细胞增殖、凋亡以及上皮间质转化(EMT)的影响。方法:q RT-PCR法测定细胞LncRNA ZEB1-AS1、miR-429、PDX-1 m RN... 目的:探究长链非编码RNA E盒锌指蛋白1反转录本1(LncRNA ZEB1-AS1)调节miR-429/胰腺十二指肠同源盒基因-1(PDX-1)轴对结肠癌细胞增殖、凋亡以及上皮间质转化(EMT)的影响。方法:q RT-PCR法测定细胞LncRNA ZEB1-AS1、miR-429、PDX-1 m RNA表达水平;将SW480细胞分为对照组、si-NC组、si-LncRNA ZEB1-AS1组、si-LncRNA ZEB1-AS1+inhibitor NC组、si-LncRNA ZEB1-AS1+miR-429 inhibitor组、si-LncRNA ZEB1-AS1+miR-429 inhibitor+sh NC组、si-LncRNA ZEB1-AS1+miR-429 inhibitor+sh PDX-1组,检测SW480细胞增殖、凋亡、EMT相关蛋白、紧密连接蛋白以及PDX-1表达;双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA ZEB1-AS1、PDX-1与miR-429关系。结果:与人正常结肠上皮细胞相比,NCM-460、HCT116、SW620、CT26、SW480中LncRNA ZEB1-AS1、PDX-1 m RNA表达升高,miR-429表达降低,其中SW480细胞升高或降低最为显著(P<0.05);与对照组相比,si-LncRNA ZEB1-AS1组SW480细胞增殖抑制率、凋亡率及E-cad、ZO-1、Claudin-1表达升高,N-cad、Vimentin表达降低(P<0.05);miR-429 inhibitor下调可逆转LncRNA ZEB1-AS1沉默对SW480细胞的作用;si-LncRNA ZEB1-AS1与miR-429 inhibitor基础上沉默PDX-1可恢复LncRNA ZEB1-AS1沉默对SW480细胞的作用;miR-429与LncRNA ZEB1-AS1以及PDX-1均有靶向关系。结论:沉默ZEB1-AS1可能通过促进miR-429表达,抑制PDX-1表达,进而抑制SW480细胞增殖与EMT,并促进细胞凋亡。 展开更多

关键词 结肠肿瘤 E盒锌指蛋白1反转录本1 miR-429 胰腺十二指肠同源盒基因-1

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PDX1在糖尿病中的研究进展

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作者 黄丽红 王凤 乔永超 《华夏医学》 CAS 2023年第1期178-182,共5页

胰-十二指肠同源盒1基因(PDX1)是胰腺发育和胰岛素调控的关键基因。PDX1缺陷会抑制胰腺发育,导致高血糖。本文就PDX1的结构及其在胰岛β细胞分化、胰岛素合成与分泌调控中的作用与机制进行探讨,并就其与新生儿糖尿病、成人发病型糖尿病... 胰-十二指肠同源盒1基因(PDX1)是胰腺发育和胰岛素调控的关键基因。PDX1缺陷会抑制胰腺发育,导致高血糖。本文就PDX1的结构及其在胰岛β细胞分化、胰岛素合成与分泌调控中的作用与机制进行探讨,并就其与新生儿糖尿病、成人发病型糖尿病和2型糖尿病之间的关联进行阐述,以便为糖尿病的治疗提供新思路。 展开更多

关键词 胰-十二指肠同源盒1基因 新生儿糖尿病 成人发病型糖尿病 2型糖尿病

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大鼠肝脏干细胞的胰十二指肠同源盒基因表达系的构建与初步鉴定

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作者 任吴超 李冬民 +6 位作者 王璇 高玉 韩燕 宁启兰 张富军 宋天保 吕社民 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期17-21,共5页

目的建立大鼠肝脏干细胞的Pdx-1基因表达系。方法逆行穿刺SD大鼠乳鼠肝脏门静脉,经胶原酶Ⅳ消化并分离肝脏干细胞;免疫组织化学鉴定大鼠肝脏干细胞标志物细胞角蛋白18/19、甲胎蛋白的表达;构建pEGFP-Pdx-1表达载体并酶切鉴定,用脂质体2... 目的建立大鼠肝脏干细胞的Pdx-1基因表达系。方法逆行穿刺SD大鼠乳鼠肝脏门静脉,经胶原酶Ⅳ消化并分离肝脏干细胞;免疫组织化学鉴定大鼠肝脏干细胞标志物细胞角蛋白18/19、甲胎蛋白的表达;构建pEGFP-Pdx-1表达载体并酶切鉴定,用脂质体2000介导表达载体转染大鼠肝脏干细胞后,荧光显微镜观察GFP表达,免疫组织化学鉴定Pdx-1的表达。结果肝脏门静脉逆行穿刺分离培养大鼠肝脏干细胞具有分裂增殖能力、角蛋白18/19、甲胎蛋白表达阳性;pEGFP-Pdx-1表达载体转染后的肝脏干细胞可表达绿色荧光蛋白报告基因和Pdx-1蛋白。结论成功建立了大鼠肝脏干细胞Pdx-1表达系。 展开更多

关键词 大鼠 肝脏干细胞 胰腺十二指肠同源盒 表达载体

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血清诱导乳鼠骨髓间充质干细胞表达胰岛样细胞基因效果观察

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作者 李远远 汪莲 +4 位作者 李相如 佘同辉 余良主 甘亚平 李敏才 《山东医药》 CAS 2014年第18期14-16,共3页

目的观察血清诱导乳鼠骨髓间充质干细胞(MSC)表达胰岛样细胞基因的效果。方法 SD乳鼠10只,手术分离胫骨和股骨,分离、培养MSC,分别采用5%(对照组)、10%(低浓度组)和20%(高浓度组)的胎牛血清(FBS)刺激。纯化至第4代时以MTT法检测MSC增殖... 目的观察血清诱导乳鼠骨髓间充质干细胞(MSC)表达胰岛样细胞基因的效果。方法 SD乳鼠10只,手术分离胫骨和股骨,分离、培养MSC,分别采用5%(对照组)、10%(低浓度组)和20%(高浓度组)的胎牛血清(FBS)刺激。纯化至第4代时以MTT法检测MSC增殖趋势;诱导14 d时用RT-PCR检测MSC细胞中的巢素蛋白(Nestin)、胰十二指肠同源性盒因子-1(PDX-1)、Insulin mRNA,用免疫荧光法检测Nestin、PDX-1、Insulin蛋白。结果随着血清浓度增高与刺激时间延长,MSC呈现明显的增殖趋势,细胞形态发生改变,形成胰岛β细胞轮廓。高浓度组MSC Nestin mRNA表达低于对照组,PDX-1、Insulin mRNA表达高于对照组(P均<0.05)。诱导14 d时Insulin、Nestin、PDX-1蛋白表达与7d时比较,P均<0.05。结论血清诱导下乳鼠MSC中胰岛相关基因PDX-1、Insulin表达上调,Nestin表达减少,显示MSC在一定条件下可被定向诱导分化成胰岛样细胞。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 巢素蛋白 胰十二指肠同源性盒因子-1 胰岛素 糖尿病

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