转基因表达有机磷水解酶(OPH)提高黄瓜降解蝇毒磷能力的初步研究 被引量：3

1

作者 赵杰宏 韩洁 赵德刚 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第1期182-186,共5页

为快速提高黄瓜降解有机磷农药残留的能力，选取能广泛降解有机磷农药的有机磷水解酶（OPH）为表达蛋白，构建CaMV35S启动子驱动有机磷水解酶基因（opd）的植物表达载体pSOP，经双酶切证明重组载体含有插入位置和方向皆正确的目的片段... 为快速提高黄瓜降解有机磷农药残留的能力，选取能广泛降解有机磷农药的有机磷水解酶（OPH）为表达蛋白，构建CaMV35S启动子驱动有机磷水解酶基因（opd）的植物表达载体pSOP，经双酶切证明重组载体含有插入位置和方向皆正确的目的片段。通过农杆菌介导遗传转化黄瓜子叶节，诱导和筛选出9株抗性苗，获得3株GUS染色和PCR阳性转化苗。酶活性分析表明，转基因黄瓜降解蝇毒磷能力是对照（非转基因株）的4．7～9．7倍，最高达到7．8μmol／（mg·min），有助于加快降解黄瓜中的有机磷农药残留，为食品安全研究提供借鉴。 展开更多

关键词 生物修复 遗传转化 有机磷水解酶(oph) 农药残留

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转基因表达OPH提高番茄果实降解有机磷农药能力的研究 被引量：2

2

作者 赵杰宏 赵德刚 韩洁 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期213-216,225,共5页

拟通过基因工程提高番茄果实降解有机磷农药残留的能力。构建了E8启动子基因驱动有机磷降解基因(OPD)的植物表达载体pSE8OP,经农杆菌介导遗传转化番茄子叶后,进行GUS染色、PCR和Southern blotting分析。证明OPD基因已整合进转基因植株... 拟通过基因工程提高番茄果实降解有机磷农药残留的能力。构建了E8启动子基因驱动有机磷降解基因(OPD)的植物表达载体pSE8OP,经农杆菌介导遗传转化番茄子叶后,进行GUS染色、PCR和Southern blotting分析。证明OPD基因已整合进转基因植株基因组中,为1个拷贝。HPLC比较分析发现,转基因番茄果实能显著提高降解毒死蜱和对硫磷的能力,大大减少了番茄中的农药残留。 展开更多

关键词 遗传转化 有机磷水解酶(oph)农药残留 毒死蜱 对硫磷

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有机磷农药降解菌YC-YH1中mpd和ophc2的克隆及酶学性质分析 被引量：2

3

作者 贾阳 史延华 +3 位作者 任磊 乔铖 王俊欢 闫艳春 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期228-235,共8页

从一株有机磷农药降解菌施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri YC-YH1中克隆到两个有机磷水解酶基因mpd和ophc2。将两个基因分别连接到表达载体p ET-32a并克隆到大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达;利用Ni亲和层析柱纯化甲基对硫磷水解酶(MPH)和... 从一株有机磷农药降解菌施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri YC-YH1中克隆到两个有机磷水解酶基因mpd和ophc2。将两个基因分别连接到表达载体p ET-32a并克隆到大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达;利用Ni亲和层析柱纯化甲基对硫磷水解酶(MPH)和有机磷水解酶(OPHC2),并进行了酶学性质分析。MPH最高活力的反应温度为40℃,在p H8-12范围内,酶表现出较高的活力。OPHC2酶的最适反应温度为30℃,在p H 8-12的范围内酶活力较高。两种酶按1?1比例混合组成的混合酶在30-40℃范围内酶活力很高,达95%以上,混合酶在p H范围为8-12内仍具有较高的活力。多种金属离子会对酶的活性产生一定影响,酶对SDS和EDTA都有很高的敏感度,混合酶能够降低对金属离子的敏感性。 展开更多

关键词 有机磷水解酶基因 MPH ophC2 纯化 酶学性质

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有机磷水解酶异源表达纯化及抗乙基对氧磷中毒能力初步评价

4

作者 马铭 翟亚楠 +3 位作者 王顺业 张中华 李前 高静 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2024年第9期672-680,共9页

目的异源表达纯化有机磷水解酶(OPH),初步评价其动物体内抗乙基对氧磷中毒能力。方法构建OPH的大肠杆菌表达菌株,采用镍柱亲和色谱及凝胶过滤色谱进行纯化,对纯化产物进行蛋白质谱鉴定;以乙基对氧磷为底物测定酶活力及其动力学常数K_(m)... 目的异源表达纯化有机磷水解酶(OPH),初步评价其动物体内抗乙基对氧磷中毒能力。方法构建OPH的大肠杆菌表达菌株,采用镍柱亲和色谱及凝胶过滤色谱进行纯化,对纯化产物进行蛋白质谱鉴定;以乙基对氧磷为底物测定酶活力及其动力学常数K_(m),V_(max),k_(cat)和k_(cat)/K_(m);12只SD大鼠随机分为OPH组和溶剂对照组,OPH组按1 mg·kg^(-1)剂量iv给予OPH溶液,对照组给予等体积生理盐水,给药后2组立刻sc给予2倍半数致死量(LD_(50))乙基对氧磷(0.86 mg·kg^(-1))染毒,观察大鼠状态,对中毒症状进行评分。对存活大鼠每隔24 h重复sc给予2倍LD_(50)乙基对氧磷,根据大鼠存活情况与中毒症状分别绘制生存曲线与症状评分图,评价OPH的抗有机磷中毒能力。结果成功构建了OPH的大肠杆菌表达菌株,经过两步纯化后由十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳表征得单一条带,OPH纯度较高,经蛋白质谱测定制备蛋白与目标蛋白序列一致;以乙基对氧磷为底物时,OPH的Km=7.5×10^(-5)mol·L^(-1),V_(max)=2.2×10^(-7)mol·L^(-1)·s^(-1),k_(cat)=158.4 s^(-1),k_(cat)/K_(m)=2.1×10^(6) L·mol^(-1)·s^(-1);对照组大鼠sc给予2倍LD_(50)乙基对氧磷后,出现严重中毒症状,15 min内全部死亡,实验组大鼠在首次染毒后均未出现中毒症状,连续染毒后中毒症状逐渐加重直至第4天全部死亡。结论成功制备高纯度OPH,且OPH在大鼠体内能有效对抗乙基对氧磷中毒。 展开更多

关键词 有机磷化合物 生物清除剂 有机磷水解酶 乙基对氧磷 酶动力学参数

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植物水解酶法快速测定环境水样中有机磷及氨基甲酸酯类农药 被引量：13

5

作者 钟树明 袁东星 +1 位作者 李权龙 王咏梅 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期75-78,共4页

应用植物水解酶抑制技术快速检测水样中有机磷及氨基甲酸酯类农药 ,对反应的温度、pH和时间进行优化 .常用的几种有机磷及氨基甲酸酯类农药的测定限在 0 .0 0 15～ 0 .33mg·L-1范围内 .

关键词 有机磷农药 氨基甲酸酯类农药 植物水解酶法 农药污染 水质监测 含量测定

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广谱降解有机磷农药的真菌酶解研究 被引量：14

6

作者 刘阳 刘玉焕 +5 位作者 李方 陈志仕 廉婕 罗维佳 黄晓 钟英长 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期76-80,共5页

从农药污染土壤中分离出的一株真菌具有广谱降解有机磷农药的能力。菌体培养物经硫酸铵分级沉淀、SephadexG＿100凝胶过滤、DEAE＿SephroseCL6B柱层析纯化广谱有机磷农药水解酶。研究结果表明该酶为胞内酶,主要定位在细胞膜上。酶的最... 从农药污染土壤中分离出的一株真菌具有广谱降解有机磷农药的能力。菌体培养物经硫酸铵分级沉淀、SephadexG＿100凝胶过滤、DEAE＿SephroseCL6B柱层析纯化广谱有机磷农药水解酶。研究结果表明该酶为胞内酶,主要定位在细胞膜上。酶的最适反应温度为45℃,最适pH7 5,在50℃以下以及在pH6～9 5范围内活性稳定。Hg2+、Fe3+、对氯高汞苯甲酸、碘乙酸和N＿乙基马来酰亚胺对该酶有强烈的抑制作用,而Cu2+、巯基乙醇、二硫苏糖醇、二硫赤藓糖醇、谷光甘肽和去污剂对酶有不同程度的激活作用。该酶不仅可以作用于含PO键的有机磷农药;而且也能水解含PS键的有机磷农药。以甲基对硫磷和内吸磷为底物的Km值分别为63μmol L,256μmol L;Vmax分别为306μmol·min-1,189μmol·min-1;Kcat分别为1102s-1,610s-1。 展开更多

关键词 广谱有机磷农药水解酶 真菌 降解 基本性质

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有机磷农药降解酶及其基因工程研究进展 被引量：29

7

作者 伍宁丰 梁果义 +2 位作者 邓敏捷 姚斌 范云六 《生物技术通报》 CAS CSCD 2003年第5期9-12,共4页

有机磷农药是国内外使用最广泛的农药之一 ,为农业丰收做出了很大贡献。但是 ,有机磷农药具有抑制人体乙酰胆碱酯酶的功能 ,对人存在着程度不同的毒性。有机磷农药降解酶可降解有机磷农药分子 ,破坏有机磷农药的磷酯键而使其脱毒。综述... 有机磷农药是国内外使用最广泛的农药之一 ,为农业丰收做出了很大贡献。但是 ,有机磷农药具有抑制人体乙酰胆碱酯酶的功能 ,对人存在着程度不同的毒性。有机磷农药降解酶可降解有机磷农药分子 ,破坏有机磷农药的磷酯键而使其脱毒。综述了有机磷农药降解酶及其特性 ,以及相关基因的分离克隆和基因工程研究进展。 展开更多

关键词 有机磷农药 降解酶 基因工程 磷酯键

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细胞表面展示有机磷水解酶的恶臭假单胞菌工程菌的构建及全细胞酶活性分析 被引量：9

8

作者 张红星 李茜茜 +2 位作者 叶婷 李维琳 李林 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期65-70,共6页

利用丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)冰核基因的N-末端(inpn)作为锚定单元(anchoring mo-tif),通过与来自黄杆菌属(Flavobacteriumsp.)的有机磷水解酶基因opd构建融合基因inpn-opd,并连接于假单胞菌表达载体pYMBP,然后导入恶臭假单... 利用丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)冰核基因的N-末端(inpn)作为锚定单元(anchoring mo-tif),通过与来自黄杆菌属(Flavobacteriumsp.)的有机磷水解酶基因opd构建融合基因inpn-opd,并连接于假单胞菌表达载体pYMBP,然后导入恶臭假单胞菌(P.putida)野生型菌株AB92019,获得了能在其细胞表面展示有机磷水解酶并具有全细胞酶催化活性的重组工程菌MMBL-opd。SDS-PAGE结果表明,融合基因能表达产生80 ku的蛋白质。重组菌MMBL-opd在无抗性LB固体培养基上能稳定生长,所携带的外源质粒的稳定性达到100%;在添加100μmol/L Co2+培养基上28℃培养48 h,表面展示的有机磷水解酶具有最高全细胞酶活性,为0.036 U/mg。用蛋白酶K消化处理重组菌表面蛋白可使其全细胞酶活降低92%。重组菌在PBS缓冲液中于4℃条件下保存30 d,仍能保持93%的全细胞酶活。 展开更多

关键词 有机磷水解酶 细胞表面展示 冰核蛋白 生物降解

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有机磷水解酶传感器及其应用研究进展 被引量：3

9

作者 陈帆 陈欢林 何奕 《传感器技术》 CSCD 北大核心 2004年第4期5-9,共5页

介绍了有机磷水解酶传感器的基本原理、组成和分类,分析了各个类型传感器的特点,重点介绍了近年来国外有机磷水解酶的固定化技术和有机磷水解酶传感器的进展情况,并分析了未来有机磷水解酶传感器的发展趋势。

关键词 有机磷水解酶 固定化 生物传感器 有机磷农药 应用

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有机磷水解酶及其在传感器应用中的研究进展 被引量：5

10

作者 全爽 李晔 +2 位作者 金丽华 任相浩 朱佳焘 《生态科学》 CSCD 2015年第1期198-204,共7页

有机磷农药的大规模使用对环境造成了严重污染,同时由于其残留严重威胁着人类健康。有机磷水解酶是一种广泛存在于生物体内的可以催化各种有机磷化合物水解的酶。利用有机磷水解酶制成的生物传感器能够有效检测有机磷农药的残留。文章... 有机磷农药的大规模使用对环境造成了严重污染,同时由于其残留严重威胁着人类健康。有机磷水解酶是一种广泛存在于生物体内的可以催化各种有机磷化合物水解的酶。利用有机磷水解酶制成的生物传感器能够有效检测有机磷农药的残留。文章分别从有机磷水解酶的结构、重组表达以及在生物传感器应用等方面进行了综述,旨在为有机磷农药的检测和降解提供参考。 展开更多

关键词 有机磷水解酶 重组 生物传感器

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pH型有机磷水解酶生物传感器的稳态模型 被引量：2

11

作者 王丽红 王伟 +2 位作者 姚亮 沈玉龙 杨振秀 《传感技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1968-1972,共5页

从分析pH型有机磷水解酶(OPH)生物传感器(简称OPH-pH型传感器)的工作原理出发,建立了描述稳态检测过程的扩散传质方程组,并根据方程组的特点将二阶微分方程组简化为二阶微分方程和非线性方程的求解,从而建立了OPH-pH型传感器的稳态模型... 从分析pH型有机磷水解酶(OPH)生物传感器(简称OPH-pH型传感器)的工作原理出发,建立了描述稳态检测过程的扩散传质方程组,并根据方程组的特点将二阶微分方程组简化为二阶微分方程和非线性方程的求解,从而建立了OPH-pH型传感器的稳态模型。模型的计算结果给出了传感器性能的影响因素,可对传感器的设计提供一定的理论指导,自行制备的传感器实验结果与模型的计算结果基本吻合,验证了模型的正确性。 展开更多

关键词 有机磷水解酶 生物传感器模型 稳态检测

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双表达解毒酶基因工程菌的酶活性分析及其应用 被引量：1

12

作者 郑玉芝 郭成君 +2 位作者 张建亮 郭新民 乔传令 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第12期33-37,共5页

羧酸酯酶和有机磷水解酶可以水解不同的底物,为了获得降解谱广的解毒酶系,将两种酶共表达在同一载体。采用正交法对有机磷水解酶酶活性的分析条件进行了优化,以对硫磷为底物,底物浓度2×10-4mol/L、反应温度25℃、反应时间10min、pH... 羧酸酯酶和有机磷水解酶可以水解不同的底物,为了获得降解谱广的解毒酶系,将两种酶共表达在同一载体。采用正交法对有机磷水解酶酶活性的分析条件进行了优化,以对硫磷为底物,底物浓度2×10-4mol/L、反应温度25℃、反应时间10min、pH8.0是测定酶活性最佳条件。在pH7.0～8.0的体系中存放一年活力可以保持50%以上。用于蚊子解毒实验,95%以上的对硫磷中毒蚊幼虫可以救活。在生物传感器等其它领域也都有应用。 展开更多

关键词 羧酸酯酶 有机磷水解酶 酶活性测定

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有机磷农药降解酶的研究进展 被引量：14

13

作者 刘建利 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期60-64,共5页

有机磷农药污染严重,利用有机磷农药降解酶是治理有机磷农药残留的新技术,综述了有机磷农药降解酶的作用机理、基因、应用等方面的研究现状。

关键词 有机磷农药 降解酶 研究进展

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有机磷水解酶的大肠杆菌细胞表面展示 被引量：3

14

作者 黎小军 林陈水 胡军民 《江西师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2010年第1期93-97,共5页

PCR扩增来自黄杆菌ATCC27551的有机磷水解酶基因opd,直接与XcmⅠ酶切去除Ampr基因片段的pZXL-T连接,将opd克隆于锚定单元Lpp-OmpA编码序列下游,转化E.coliBL21(DE3).经抗性筛选、PCR鉴定和测序证实,成功构建了具有全细胞催化效应的大肠... PCR扩增来自黄杆菌ATCC27551的有机磷水解酶基因opd,直接与XcmⅠ酶切去除Ampr基因片段的pZXL-T连接,将opd克隆于锚定单元Lpp-OmpA编码序列下游,转化E.coliBL21(DE3).经抗性筛选、PCR鉴定和测序证实,成功构建了具有全细胞催化效应的大肠杆菌细胞表面展示工程菌.SDS-PAGE结果表明,工程菌能表达产生51 kD的融合蛋白.细胞表面展示的有机磷水解酶具有较高全细胞酶活性,用蛋白酶K消化处理重组菌表面蛋白可使其全细胞酶活降低90%. 展开更多

关键词 有机鳞水解酶 细胞表面展示 T载体 大肠杆菌

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番茄果实特异性表达有机磷水解酶的农药降解活性分析 被引量：1

15

作者 赵杰宏 赵德刚 韩洁 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2010年第5期77-80,共4页

为研究番茄果实中表达有机磷水解酶(OPH)降解有机磷农药的活性,经农杆菌介导,将携带表达元件E8-OPD的植物表达载体pSE8OP遗传转化番茄子叶,通过抗性筛选和分子检测,获得6株GUS染色和PCR扩增阳性的转基因番茄植株。酶活分析发现,酶促反... 为研究番茄果实中表达有机磷水解酶(OPH)降解有机磷农药的活性,经农杆菌介导,将携带表达元件E8-OPD的植物表达载体pSE8OP遗传转化番茄子叶,通过抗性筛选和分子检测,获得6株GUS染色和PCR扩增阳性的转基因番茄植株。酶活分析发现,酶促反应最适温度为30℃,稳定性较高。酶的最适保存pH值为9,最适试验pH值为8.0。与1 mmol/L Zn2+条件下酶活相比,Co2+提高了酶活2.1倍,Ca2+、Cu2+、Fe2+、Mg2+、Mn2+、EDTA、SDS、TritonX-100、β-ME和DTT都不同程度地抑制了酶活。检测重组表达OPH降解蝇毒磷、毒死蜱和对硫磷的酶活。表明,降解蝇毒磷的Km最低,为4.04μmol/L。重组表达OPH有助于提高番茄果实降解有机磷农药残留的能力。 展开更多

关键词 遗传转化 有机磷水解酶(oph) 农药残留 有机磷农药降解基因(OPD)

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有机磷水解酶及其细胞表面展示研究进展 被引量：3

16

作者 廖上铁 黎小军 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第4期2165-2167,共3页

对有机磷水解酶在酶学特性、蛋白结构和细胞表面展示等方面的研究进行了综述,并且对该领域的研究趋势进行了展望。

关键词 有机磷水解酶 细胞表面展示 有机磷农药

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有机磷水解酶的表面显示技术研究进展

17

作者 方建军 柳华贵 钟卫鸿 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第2期97-100,共4页

有机磷化合物在农业中的广泛应用,给农作物带来增产的同时对环境造成污染,严重威胁着人类的健康,其生物解毒已受到高度重视。有机磷水解酶(OPH)是目前处理有机磷化合物最有效的水解酶类,而通过基因工程手段获得高表达、高降解效率的OPH... 有机磷化合物在农业中的广泛应用,给农作物带来增产的同时对环境造成污染,严重威胁着人类的健康,其生物解毒已受到高度重视。有机磷水解酶(OPH)是目前处理有机磷化合物最有效的水解酶类,而通过基因工程手段获得高表达、高降解效率的OPH,尤其是OPH的表面显示技术是近年来的研究热点。主要综述了大肠杆菌、假单胞菌、酿酒酵母的OPH表面显示技术研究及应用进展和发展趋势。 展开更多

关键词 有机磷化合物 生物解毒 有机磷水解酶 表面显示

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基于响应面分析方法的有机磷水解酶全细胞活性表达条件的优化

18

作者 黎小军 胡军民 林陈水 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2010年第10期83-87,共5页

为了提高有机磷水解酶(OPH)全细胞活性,对其表达条件进行了优化。首先采用Plackett-Burman试验设计对8个影响因素进行筛选,结果表明,诱导时间、IPTG浓度和诱导温度3个因素对OPH全细胞活性影响较大。在此基础上采用Box-Behnken设计,利用D... 为了提高有机磷水解酶(OPH)全细胞活性,对其表达条件进行了优化。首先采用Plackett-Burman试验设计对8个影响因素进行筛选,结果表明,诱导时间、IPTG浓度和诱导温度3个因素对OPH全细胞活性影响较大。在此基础上采用Box-Behnken设计,利用Design Expert软件进行二次回归分析,得到该基因工程菌的最佳表达条件为诱导温度18.86℃,IPTG浓度0.09mmol/L,诱导时间8.74h。OPH全细胞活性的最大预测值为27.829U/mL,试验验证值为27.8U/mL。 展开更多

关键词 有机磷水解酶 PLACKETT-BURMAN设计 BOX-BEHNKEN设计 响应面法 优化

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有机磷水解酶全细胞生物催化剂的特性

19

作者 黎小军 林陈水 《江西师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2010年第4期397-400,共4页

利用有机磷水解酶大肠杆菌细胞表面展示工程菌为全细胞催化剂,研究了其降解对氧磷的反应.确定了最适反应条件为:反应温度37℃、pH值8.0、底物浓度2.0 mmol/L、振荡速率120 r/min,在此条件下反应5 h,对氧磷降解率可达80%左右,且全细胞催... 利用有机磷水解酶大肠杆菌细胞表面展示工程菌为全细胞催化剂,研究了其降解对氧磷的反应.确定了最适反应条件为:反应温度37℃、pH值8.0、底物浓度2.0 mmol/L、振荡速率120 r/min,在此条件下反应5 h,对氧磷降解率可达80%左右,且全细胞催化剂具有较好的稳定性和可重复使用性,显示了良好的应用前景. 展开更多

关键词 有机磷水解酶 全细胞生物催化剂 降解 特性

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生物酶蔬果清洗剂对有机磷农药降解效果的评价 被引量：3

20

作者 屈昌龙 匡华 +3 位作者 胡拥明 宋珊珊 冀振野 胥传来 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第34期21065-21066,21087,共3页

[目的]对市售的生物酶蔬果清洗剂的农药去除效果进行评价。[方法]测定超声辅助和室温处理下,A品牌生物酶蔬果清洗剂对小白菜中有机磷农药的降解情况。并考察A、B 2种生物酶蔬果清洗剂对水生动物生存环境中的敌敌畏降解效果。[结果]生物... [目的]对市售的生物酶蔬果清洗剂的农药去除效果进行评价。[方法]测定超声辅助和室温处理下,A品牌生物酶蔬果清洗剂对小白菜中有机磷农药的降解情况。并考察A、B 2种生物酶蔬果清洗剂对水生动物生存环境中的敌敌畏降解效果。[结果]生物酶蔬果清洗剂可有效地降解小白菜中的有机磷农药,超声辅助可促进农药的降解。不同的水生生物对有机磷农药的敏感程度有差异,适当使用生物酶可降解水生环境中的有机磷农药。[结论]该研究为开发适合于家庭使用的蔬果清洗试剂和清洗设备提供了依据。 展开更多

关键词 蔬果清洗剂 有机磷农药 磷酸三酯水解酶 降解

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