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羊体细胞核移植技术研究进展及其应用
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作者 华再东 陈盈 +2 位作者 张年 郭帅 熊琪 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第1期119-126,共8页
体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)技术作为20世纪发育生物学领域的重大突破,其里程碑式成果是首例克隆哺乳动物多利羊的诞生,开创了哺乳动物克隆技术的新纪元。该技术通过将高度分化的体细胞核移植至去核卵母细胞,利... 体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)技术作为20世纪发育生物学领域的重大突破,其里程碑式成果是首例克隆哺乳动物多利羊的诞生,开创了哺乳动物克隆技术的新纪元。该技术通过将高度分化的体细胞核移植至去核卵母细胞,利用卵胞质重编程能力实现细胞核重编程,最终发育为遗传背景一致的完整个体。笔者系统综述了克隆羊研究的科学历程、关键技术优化及其重要应用价值,重点叙述了供体细胞选择与处理、核移植效率提升策略、表观遗传重编程分子机制及卵母细胞微环境调控等核心科学问题的研究进展,并探讨了该技术在畜牧品种快速扩繁、濒危物种保护、人类疾病模型构建以及治疗性克隆等生物医学领域的应用前景,进一步对未来技术发展方向进行展望,以期为SCNT技术的深入研究与产业化应用提供理论和实践参考。 展开更多
关键词 绵羊 体细胞核移植 核重编程 表观遗传调控
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猪体细胞克隆技术的发展与应用
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作者 田明 宁思雨 +3 位作者 何鑫淼 王文涛 吴赛辉 刘娣 《黑龙江动物繁殖》 2026年第1期12-18,共7页
体细胞克隆技术是指将体细胞的核植入去核卵细胞中,通过重编程使其发育成完整个体的技术。该技术在扩繁优良种畜、保护濒危动物、治疗人类疾病等方面有着广泛的应用前景,但存在克隆效率低等问题。文章阐述了猪体细胞克隆技术的发展历程... 体细胞克隆技术是指将体细胞的核植入去核卵细胞中,通过重编程使其发育成完整个体的技术。该技术在扩繁优良种畜、保护濒危动物、治疗人类疾病等方面有着广泛的应用前景,但存在克隆效率低等问题。文章阐述了猪体细胞克隆技术的发展历程,分析了影响克隆效率的因素及改进方法,综述了猪体细胞克隆在畜牧业和医学领域的应用价值,以期为提高猪体细胞克隆效率提供理论依据,并推动体细胞克隆技术在生猪生产中的应用。 展开更多
关键词 克隆 体细胞核移植 克隆效率 胚胎移植
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生殖性克隆技术:突破、应用与伦理审视
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作者 朱昀 闫路娜 孔德晶 《生物学教学》 北大核心 2025年第6期87-89,共3页
体细胞核移植,是生殖性克隆实现的核心技术。本文回顾了体细胞核移植技术3次突破:从格登的两栖动物克隆,到多莉羊的诞生与灵长类动物克隆成功。介绍了克隆在优良种畜繁育、医学治疗、濒危物种保护和非人灵长类疾病动物模型建立方面的重... 体细胞核移植,是生殖性克隆实现的核心技术。本文回顾了体细胞核移植技术3次突破:从格登的两栖动物克隆,到多莉羊的诞生与灵长类动物克隆成功。介绍了克隆在优良种畜繁育、医学治疗、濒危物种保护和非人灵长类疾病动物模型建立方面的重要应用。2024年非人灵长类生殖性克隆再次取得重大的进展。但是,人类生殖性克隆会涉及伦理的争议。 展开更多
关键词 生殖性克隆 体细胞核移植 伦理审视
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ERV1-2B_SSc-LTR-EGFP报告系统的建立及猪克隆胚胎ERVs转录活性的监测
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作者 付博 马红 +3 位作者 汪亮 郭镇华 王芳 刘娣 《黑龙江动物繁殖》 2025年第4期23-28,共6页
体细胞核移植(SCNT)技术是生产转基因猪模型的核心技术,但猪克隆胚胎的发育能力仍然较低,其早期胚胎的内源性逆转录病毒(ERVs)的表达规律尚待深入研究。研究拟构建以猪基因组内源性逆转录病毒调控元件ERV1-2B_SSc-LTR驱动增强型绿色荧... 体细胞核移植(SCNT)技术是生产转基因猪模型的核心技术,但猪克隆胚胎的发育能力仍然较低,其早期胚胎的内源性逆转录病毒(ERVs)的表达规律尚待深入研究。研究拟构建以猪基因组内源性逆转录病毒调控元件ERV1-2B_SSc-LTR驱动增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达的报告系统。通过脂质体转染获得阳性成纤维细胞株,进行体细胞核移植构建克隆胚胎,并在荧光显微镜下实时监测EGFP表达。结果表明:ERV1-2B_SSc-LTR-EGFP报告系统成功构建;48%的克隆胚胎在4细胞期表达EGFP,表明该元件具有启动子活性。EGFP阳性胚胎的囊胚形成率和细胞数显著高于阴性胚胎[(19.5±1.7)%vs.(14.8±0.5)%,(40.0±2.1)枚vs.(30.0±1.9)枚,P<0.05],提示该报告系统可用于实时监测ERVs活性并辅助评估克隆胚胎质量。 展开更多
关键词 体细胞核移植 长末端重复序列 绿色荧光蛋白报告系统 克隆 胚胎
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工业规模核用离心萃取器的水力学和传质性能 被引量:2
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作者 段五华 孙涛祥 郑强 《化工进展》 北大核心 2025年第7期3709-3717,共9页
离心萃取器是一种依靠离心力实现两相混合液分相的高效溶剂萃取设备,用于核燃料后处理具有许多优点,被公认是核用萃取设备的发展方向。为实现离心萃取器应用于我国将来核燃料后处理大厂,已研制出转筒直径为150mm且当转速为3000r/min时... 离心萃取器是一种依靠离心力实现两相混合液分相的高效溶剂萃取设备,用于核燃料后处理具有许多优点,被公认是核用萃取设备的发展方向。为实现离心萃取器应用于我国将来核燃料后处理大厂,已研制出转筒直径为150mm且当转速为3000r/min时分离因数为755的Φ150mm工业规模核用离心萃取器。采用30%TBP/煤油-硝酸溶液萃取体系系统开展了单级和五级串联Φ150mm工业规模核用离心萃取器的水力学和传质性能的实验研究。结果表明,在一定实验条件下,Φ150mm工业规模核用离心萃取器最大处理能力达到1532L/h,且萃取级效率>96%。因此,Φ150mm工业规模核用离心萃取器具有良好的水力学性能和传质性能。同时,其级存留体积为6.33~6.53L。结果表明,Φ150mm工业规模核用离心萃取器基本满足核燃料后处理厂对萃取设备的要求,有良好的应用前景。 展开更多
关键词 离心萃取器 核燃料后处理 水力学性能 传质性能
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GTKO猪的生产及猪-恒河猴肾脏异种移植 被引量:1
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作者 王艳 常悦 +15 位作者 杨畅 魏太云 霍晓颖 陈博威 王娇祥 赵恒 郭建雄 赵红芳 张雄 朱飞艳 成文敏 赵红业 徐凯祥 Muhammad Ameen Jamal 王振迪 魏红江 《器官移植》 北大核心 2025年第4期526-537,共12页
目的探讨α-1,3半乳糖基转移酶(GGTA1)基因敲除(GTKO)滇南小型猪的构建及猪到恒河猴的肾脏异种移植,评估GTKO猪的有效性。方法利用CRISPR/Cas9基因修饰系统和体细胞克隆技术构建GTKO滇南小型猪,通过聚合酶链反应、Sanger测序、免疫荧光... 目的探讨α-1,3半乳糖基转移酶(GGTA1)基因敲除(GTKO)滇南小型猪的构建及猪到恒河猴的肾脏异种移植,评估GTKO猪的有效性。方法利用CRISPR/Cas9基因修饰系统和体细胞克隆技术构建GTKO滇南小型猪,通过聚合酶链反应、Sanger测序、免疫荧光染色等验证GTKO猪的表型。流式细胞术检测抗原抗体(IgM)结合与补体依赖细胞毒性,并进行GTKO猪到恒河猴的肾脏异种移植,监测受体猴体液免疫、细胞免疫、凝血及生理指标,利用超声检查、苏木素-伊红染色、免疫组织化学染色和免疫荧光染色等分析移植肾功能和病理学改变。结果靶向滇南小型猪GGTA1基因第4外显子设计单向导RNA(sgRNA),将pGL3-GGTA1-sgRNA1-GFP载体转染到滇南小型猪胎儿成纤维细胞中,经嘌呤霉素筛选后,获得的C59#和C89#两个细胞克隆点均鉴定为GGTA1基因敲除克隆点,经扩大培养形成细胞系后用作供体细胞进行体细胞克隆,并将重构胚胎移植至三元杂代孕母猪输卵管中,获得13头胎儿猪,其中F04和F11胎儿的GGTA1基因发生双等位基因突变,且F04核型正常,利用此GTKO胎儿猪进行重克隆,并将重构胚胎移植至三元杂代孕母猪输卵管中,共获得7头存活仔猪,其均不表达α-Gal抗原表位。20#恒河猴血清IgM与GTKO猪PBMC结合数量减少,且GTKO猪PBMC在补体依赖细胞毒性实验中的存活率高于野生型猪。获取GTKO猪肾并进行灌注直至完全变白,切除受体猴左肾后进行猪肾异位移植,血管吻合完成后开放血流,猪肾迅速变为粉红色,未发生超急性排斥反应(HAR),6 min后输尿管出现尿液,表明肾移植术成功,再切除受体右肾。移植术后7 d移植肾血流供应良好,受体猴血清肌酐水平稳定,血清钾和胱抑素C水平得到有效控制,但在移植术后10 d均升高。移植术后7 d受体猴体内白细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞水平均升高,血小板计数和纤维蛋白原水平均降低,而活化部分凝血活酶时间、凝血酶时间和凝血酶原时间均较为稳定,之后呈上升趋势。受体猴存活10 d,尸检发现移植肾充血、肿胀和坏死,肾组织中少量IgG沉积,大量IgM、补体C3c和C4d沉积,CD68^(+)巨噬细胞浸润。结论GTKO滇南小型猪肾脏可在恒河猴体内维持一定时间的正常肾功能,并有效克服HAR,证实GTKO猪用于异种移植有效。 展开更多
关键词 GGTA1基因敲除猪 恒河猴 肾脏异种移植 基因修饰 超急性排斥反应 免疫抑制 外周血单个核细胞 体细胞核移植
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猪体细胞核移植效率的提高策略
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作者 吴兴萍 张海琳 +4 位作者 刘雪芹 丁玉春 丁川翔 罗林 吴梦 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第12期5829-5838,共10页
猪体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)是将猪的体细胞核移植到去核卵母细胞中,通过激活重构胚胎使其发育为新个体的无性繁殖技术,在生产克隆猪及推动畜牧育种与生物医学研究方面起着重要作用,但猪体细胞核移植的供体细... 猪体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)是将猪的体细胞核移植到去核卵母细胞中,通过激活重构胚胎使其发育为新个体的无性繁殖技术,在生产克隆猪及推动畜牧育种与生物医学研究方面起着重要作用,但猪体细胞核移植的供体细胞和受体卵母细胞选择与培养的复杂性、克隆效率低等原因导致其移植效率低下(<5%)。作者系统综述了提高猪体细胞核移植效率的策略:①精准去核技术,如通过激光辅助、偏振光显微术等提高去核率;②供体细胞与卵母细胞优化,如低传代胎儿成纤维细胞、细胞周期同步化、动态激素组合培养等;③融合与激活方法创新,如电融合参数优化、锌离子调控等;④表观遗传挽救,如过表达重编程因子MBD3、抑制H3K9 me3修饰等。未来需要通过多技术协同(如代谢调控联合表观修饰)进一步突破发育效率瓶颈,推动猪克隆技术在畜牧生产与异种器官移植中的产业化应用。 展开更多
关键词 体细胞核移植 供体细胞 卵母细胞 细胞周期 能量代谢
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猪卵母细胞形态及质量对体细胞核移植胚胎发育的影响
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作者 李卓 王培 +8 位作者 郭建雄 张雄 赵红芳 角德灵 贾宝瑜 卿玉波 成文敏 奎华 魏红江 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第12期5785-5796,共12页
【目的】试验旨在建立一套基于猪MⅡ期卵母细胞胞质颜色及第一极体形态的分级和评价标准,系统分析不同等级卵母细胞的形态学特征及其对胚胎发育能力的影响,从而提高成熟优质卵母细胞的筛选效率,提升体细胞核移植(SCNT)胚胎的发育潜力,... 【目的】试验旨在建立一套基于猪MⅡ期卵母细胞胞质颜色及第一极体形态的分级和评价标准,系统分析不同等级卵母细胞的形态学特征及其对胚胎发育能力的影响,从而提高成熟优质卵母细胞的筛选效率,提升体细胞核移植(SCNT)胚胎的发育潜力,为畜牧业中SCNT技术的应用提供科学依据。【方法】采集体外成熟的猪MⅡ期卵母细胞,根据胞质颜色(黑色致密或白色颗粒感)及第一极体形态(完整圆形或碎裂长条形)将卵母细胞分为A、B、C、D 4个等级。利用显微镜测量卵母细胞胞质直径,采用phalloidin-FITC染色检测微丝分布与表达,通过BODIPY染色评估脂滴大小与数量,并采用α-tubulin-TRITC染色观察纺锤体形态及异常率。通过电激活进行孤雌激活(PA)培养,计算卵裂率、囊胚率及凋亡率。采用近交系猪胎儿成纤维细胞作为供体,构建SCNT胚胎,评价各等级卵母细胞发育能力。【结果】A级猪卵母细胞占比最高(28.60%),胞质直径(117.57μm)显著大于C、D级卵母细胞(P<0.05);微丝表达适中(85.85 A.U.),纺锤体异常率最低(24.56%);PA和SCNT胚胎的囊胚率(52.37%和30.80%)最高,且囊胚细胞数量最多(63.73个),均显著优于D级卵母细胞(P<0.05)。B级猪卵母细胞的胞质直径最大(117.67μm),显著优于C、D级卵母细胞(P<0.05);微丝表达和小脂滴占比最高(88.72 A.U.和44.07%),但囊胚凋亡率最低(87.12 A.U.);PA胚胎的卵裂率和囊胚率显著低于A级卵母细胞(P<0.05)。C、D级猪卵母细胞的胞质颜色较浅,脂滴较大,纺锤体异常率较高,PA及SCNT胚胎的囊胚率明显降低。【结论】通过对猪MⅡ期卵母细胞进行形态学分级,结合多种细胞质量指标和发育能力评价,证实胞质颜色致密、第一极体完整的A级卵母细胞具备较高的发育潜力。该形态学质量分级体系为猪卵母细胞的筛选提供了可靠、非侵袭性的评价标准,有助于优化SCNT克隆技术的应用效果,推动猪克隆技术在畜牧生产中的发展。 展开更多
关键词 猪卵母细胞 形态学 胚胎发育 体细胞核移植 孤雌胚胎
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改变表观遗传修饰和供体细胞代谢状态可提高犬-猪异种克隆胚胎的发育效率
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作者 闫艳霞 张雨涵 +1 位作者 吴珍芳 李紫聪 《遗传》 北大核心 2025年第12期1365-1376,共12页
为了探索能提高犬体细胞克隆效率的新方法,本研究比较了糖酵解促进剂PS48和表观遗传修饰剂(DNA甲基化酶抑制剂RG108和组蛋白去乙酰化酶抑制剂Scriptaid)的不同处理浓度和时间对犬-猪异种体细胞核移植(interspecies somatic cell nuclear... 为了探索能提高犬体细胞克隆效率的新方法,本研究比较了糖酵解促进剂PS48和表观遗传修饰剂(DNA甲基化酶抑制剂RG108和组蛋白去乙酰化酶抑制剂Scriptaid)的不同处理浓度和时间对犬-猪异种体细胞核移植(interspecies somatic cell nuclear transfer,iSCNT)胚胎发育效率的影响。结果显示:(1) 5μmol/L PS48处理犬耳成纤维细胞(canine ear fibroblasts,cEFs)和犬脂肪间充质干细胞(canine adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,cAd-MSCs) 24 h显著增强了其后续iSCNT胚胎的发育能力,PS48处理cEFs组的iSCNT胚胎的卵裂率、4-细胞期率和8-细胞期率均显著高于对照组(46.90±1.64%vs 13.30±1.61%,32.30±1.55%vs 8.26±0.88%,10.62±1.68%vs 5.50±0.84%;P<0.05),PS48处理cAd-MSCs组的iSCNT胚胎的卵裂率和4-细胞期率显著高于对照组(49.51±3.00%vs 31.25±2.73%,26.21±2.08%vs 15.18±1.58%;P<0.05);(2) 20μmol/L RG108处理cEFs和cAd-MSCs 48 h对iSCNT胚胎发育效率无显著影响,0 nmol/L、400 nmol/L、500 nmol/L和600 nmol/L Scriptaid分别处理cEFs和cAd-MSCs 24 h对iSCNT胚胎发育效率无显著影响;(3) 20μmol/L RG108处理两种供体细胞来源iSCNT胚胎对其发育有显著促进作用(P<0.05),500 nmol/L Scriptaid处理cEFs来源的iSCNT胚胎16 h可显著提高其卵裂率和4-细胞期率(23.08±2.94%vs 9.47±1.70%,18.68±3.25%vs 6.32±1.07%;P<0.05)。本研究建立了能显著提高犬-猪iSCNT胚胎发育效率的新方法,有助于促进犬体细胞克隆技术的应用和发展。 展开更多
关键词 供体细胞代谢 表观遗传修饰 犬克隆 体细胞核移植 PS48 RG108 Scriptaid
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体细胞核移植克隆西藏濒危樟木牛
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作者 齐浩南 霍浩楠 +3 位作者 曹磊 张元庆 黄永业 余大为 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第12期5740-5748,共9页
【目的】西藏特有牛种樟木牛濒临灭绝,本研究旨在采用体细胞核移植技术开展抢救性保护,为高海拔地区濒危物种保护提供新的途径。【方法】采用酶消化法建立樟木牛耳缘成纤维细胞,通过体细胞核移植技术制备重构胚胎,并移植至代孕母牛进行... 【目的】西藏特有牛种樟木牛濒临灭绝,本研究旨在采用体细胞核移植技术开展抢救性保护,为高海拔地区濒危物种保护提供新的途径。【方法】采用酶消化法建立樟木牛耳缘成纤维细胞,通过体细胞核移植技术制备重构胚胎,并移植至代孕母牛进行体内发育。采集流产个体组织进行亚硫酸氢盐测序,对父系表达基因10-ε肌聚糖(paternally expressed gene 10-sarcoglycan epsilon,PEG10-SGCE)、胰岛素样生长因子2-H19印迹母源表达转录本(insulin-like growth factor 2-H19 imprinted maternally expressed transcript,IGF2-H19)和鸟苷酸结合蛋白α亚基(guanine nucleotide-binding protein alpha subunit,GNAS)印迹域开展甲基化分析。【结果】本研究成功制备核型正常的樟木牛耳缘成纤维细胞,作为体细胞核移植供体细胞。移植32枚体细胞核移植囊胚至21头代孕母牛子宫,其中12头受孕成功,5头发育到期并成功诞下克隆牛。短串联重复序列分析发现,克隆牛的核DNA与供体牛成纤维细胞的核DNA完全匹配。对妊娠270 d发生流产的2头胎儿进行分析发现,PEG10-SGCE、IGF2-H19和GNAS印迹域在流产胎儿胎盘中呈现高甲基化,且GNAS印迹域在流产胎儿不同的组织中则呈现或低或高甲基化的异常状况。【结论】体细胞核移植技术能够应用于濒危樟木牛的抢救性保护。 展开更多
关键词 樟木牛 濒危 物种保护 体细胞核移植 甲基化
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体细胞核移植技术在家畜上的应用
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作者 张天泽 范志乐 +3 位作者 崔慧 房义 郭晶 吕文发 《黑龙江动物繁殖》 2025年第3期65-71,共7页
文章简述了体细胞核移植的技术历史与发展脉络;系统讨论了核移植操作流程,涵盖细胞选择、显微操作、胚胎处理等多个步骤,分析了关键环节的技术要点与改进方法;评述了核移植在家畜上的应用,重点阐述该技术在良种选育、种质保存、转基因... 文章简述了体细胞核移植的技术历史与发展脉络;系统讨论了核移植操作流程,涵盖细胞选择、显微操作、胚胎处理等多个步骤,分析了关键环节的技术要点与改进方法;评述了核移植在家畜上的应用,重点阐述该技术在良种选育、种质保存、转基因动物生产等领域的具体应用与成果;探讨了核移植技术面临的主要障碍与应对策略,以期为核移植技术在家畜遗传改良、濒危资源保护和人类健康事业上的发展提供理论参考。 展开更多
关键词 体细胞核移植 技术优化 应用
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体细胞克隆胚胎发育效率影响因素及其改进措施
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作者 叶鸥颉 董亚铮 +1 位作者 洪林君 李紫聪 《中国畜禽种业》 2025年第10期16-26,共11页
动物体细胞克隆(体细胞核移植)技术克隆技术在复制扩繁优良种畜、保护濒危动物、制备基因修饰动物、治疗人类疾病等方面有着广泛的应用前景,但目前仍存在效率低、技术难度大等问题。该文简要回顾了动物体细胞克隆技术的主要发展历史,对... 动物体细胞克隆(体细胞核移植)技术克隆技术在复制扩繁优良种畜、保护濒危动物、制备基因修饰动物、治疗人类疾病等方面有着广泛的应用前景,但目前仍存在效率低、技术难度大等问题。该文简要回顾了动物体细胞克隆技术的主要发展历史,对动物体细胞克隆的总体操作流程做了简要介绍。随后通过总结现有科研成果,将影响动物体细胞克隆胚胎发育效率的主要因素分为“克隆操作技术复杂精细”、“卵母细胞质量有待提高”及“克隆胚胎表观遗传修饰和基因表达错误”三大层面,并归纳已研发出的解决方案,以使更多人了解该技术,并推动其创新发展与落地应用。 展开更多
关键词 动物 体细胞克隆 胚胎 发育效率
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克隆羊技术的发展与应用
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作者 马冰倩 王文凯 刘红波 《黑龙江动物繁殖》 2025年第2期60-64,共5页
自1996年多莉羊诞生以来,克隆技术在动物遗传育种和生物医学领域展现出巨大潜力。文章系统阐述了克隆羊技术的关键操作流程,剖析了影响克隆效率的主要因素,综述了克隆羊技术的研究进展。文章通过客观呈现克隆技术的发展现状,旨在增进公... 自1996年多莉羊诞生以来,克隆技术在动物遗传育种和生物医学领域展现出巨大潜力。文章系统阐述了克隆羊技术的关键操作流程,剖析了影响克隆效率的主要因素,综述了克隆羊技术的研究进展。文章通过客观呈现克隆技术的发展现状,旨在增进公众对这一前沿生物技术的科学认知,为相关领域的学术讨论和应用探索提供参考依据。 展开更多
关键词 克隆 体细胞核移植 克隆效率 畜牧业
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宠物犬和猫克隆技术的发展与应用
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作者 范昂乐 张鑫 《黑龙江动物繁殖》 2025年第1期57-62,共6页
文章通过介绍宠物犬和猫克隆的主要技术步骤,分析该技术成功率低的原因,包括技术本身的局限性和犬、猫生理结构的复杂性;讨论了犬、猫克隆的应用前景和社会影响及其在科学研究和实际应用中的重要意义,分析了犬、猫克隆技术的发展现状、... 文章通过介绍宠物犬和猫克隆的主要技术步骤,分析该技术成功率低的原因,包括技术本身的局限性和犬、猫生理结构的复杂性;讨论了犬、猫克隆的应用前景和社会影响及其在科学研究和实际应用中的重要意义,分析了犬、猫克隆技术的发展现状、面临问题,以期为今后该技术在实际生产中的应用、社会接受度的提升等方面提供有益参考。 展开更多
关键词 克隆效率 体细胞核移植 技术优化 应用前景
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体细胞核移植技术在蓝塘猪遗传资源保护中的应用
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作者 周荣 苏巧云 +8 位作者 罗绿花 麦然标 纪红美 余婉娴 梁涣连 石俊松 邹娴 孟繁明 蔡更元 《广东畜牧兽医科技》 2025年第4期17-21,66,共6页
该试验旨在通过体细胞核移植技术对蓝塘猪进行克隆,为我国优良地方猪种或濒危猪种的遗传资源保护提供新的有效途径。试验通过采集蓝塘猪耳组织进行体细胞克隆,比较了组织块法和胶原酶消化法对蓝塘猪体细胞建系的影响,并对比分析了不同... 该试验旨在通过体细胞核移植技术对蓝塘猪进行克隆,为我国优良地方猪种或濒危猪种的遗传资源保护提供新的有效途径。试验通过采集蓝塘猪耳组织进行体细胞克隆,比较了组织块法和胶原酶消化法对蓝塘猪体细胞建系的影响,并对比分析了不同性别的蓝塘猪供体细胞制备的克隆胚胎在体外培养的发育效果,最后进行了克隆胚胎的体内移植。结果表明,与组织块法相比胶原酶法能更快的获得细胞及更多的细胞总量。不同性别的克隆胚胎在体外培养的卵裂率和囊胚细胞总数之间无显著差异,但雄性胚胎的囊胚率显著高于雌性(P<0.05)。通过3个批次的蓝塘猪克隆胚胎体内移植,最终成功获得4头健康克隆仔猪。该研究利用体细胞核移植技术成功获得了国内首例体细胞克隆蓝塘猪,为蓝塘猪遗传资源保护提供了可靠的技术手段。 展开更多
关键词 地方猪 体细胞核移植 克隆 遗传资源保护
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克隆羊技术发展历程探析:从多莉到中国突破
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作者 郭鑫茹 蔡双双 +1 位作者 张滕 周扬 《黑龙江动物繁殖》 2025年第5期67-74,共8页
体细胞核移植技术(somatic cell nuclear transfer,SCNT)即体细胞克隆,近年来越来越多地应用于生殖克隆、转基因动物生产及医药领域。文章综述了体细胞核移植技术的发展历程,从克隆羊多莉(Dolly)的诞生到中国在该领域的重大突破。重点... 体细胞核移植技术(somatic cell nuclear transfer,SCNT)即体细胞克隆,近年来越来越多地应用于生殖克隆、转基因动物生产及医药领域。文章综述了体细胞核移植技术的发展历程,从克隆羊多莉(Dolly)的诞生到中国在该领域的重大突破。重点介绍了羊的体细胞克隆技术的关键步骤、应用领域,总结了中国在试管动物和体细胞克隆方面的探索和突出成就,并且对未来优化重编程过程、基因编辑技术和应用等方面进行了展望。 展开更多
关键词 克隆 体细胞核移植技术(SCNT) 试管绵羊 体外受精 种质资源
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融合环境标签平滑与核范数差异的领域自适应
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作者 丁美荣 卓金鑫 +2 位作者 陆玉武 刘庆龙 郎济聪 《计算机应用》 北大核心 2025年第4期1130-1138,共9页
现有的领域自适应方法过于关注源域的细粒度特征学习,从而削弱了相关方法有效推广到目标域的能力,导致这些方法容易在特定的环境中过度拟合,且缺乏对复杂环境的鲁棒性。为了解决上述问题,提出一个融合环境标签平滑与核范数差异(ELSND)... 现有的领域自适应方法过于关注源域的细粒度特征学习,从而削弱了相关方法有效推广到目标域的能力,导致这些方法容易在特定的环境中过度拟合,且缺乏对复杂环境的鲁棒性。为了解决上述问题,提出一个融合环境标签平滑与核范数差异(ELSND)的领域自适应模型。所提模型通过环境标签平滑模块,减小真实标签的概率,增大非真实标签的概率,进而增强模型对不同场景的适应性。同时,运用核范数差异模块度量源域与目标域的分布差异,从而提高决策边界处样本的分类确定性。在Office-31、Office-Home和MiniDomainNet这3个领域的自适应基准数据集上进行大量实验。结果表明,与先进的基线模型DomainAdaptor-Aug(DomainAdaptor with generalized entropy minimization-Augmentation)在MiniDomainNet数据集上相比,ELSND模型在图像分类领域自适应任务上的精确度提升了1.23个百分点。因此,所提模型在图像分类时具有更高的精确度和泛化性。 展开更多
关键词 领域自适应 迁移学习 图像分类 核范数 对抗学习
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液氮冻融过程无烟煤未冻水分布及温度-应力场演化规律
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作者 秦雷 张弦 +4 位作者 林海飞 王伟凯 李博涛 王裴 李树刚 《煤炭科学技术》 北大核心 2025年第S1期76-86,共11页
煤体在冻融过程中孔隙未冻水含量和分布直接影响煤体微观孔隙结构和宏观力学性能,决定煤层增透效果与煤层气抽采效率。以无烟煤为研究对象,基于二维核磁共振技术研究无烟煤在冻结及融化过程未冻水分布特征,综合测量T_(1)-T_(2)谱图、T_... 煤体在冻融过程中孔隙未冻水含量和分布直接影响煤体微观孔隙结构和宏观力学性能,决定煤层增透效果与煤层气抽采效率。以无烟煤为研究对象,基于二维核磁共振技术研究无烟煤在冻结及融化过程未冻水分布特征,综合测量T_(1)-T_(2)谱图、T_(2)曲线以及3D峰图,定量分析煤样冻融过程孔隙结构及未冻水分布空间演化规律。实验结果表明,液氮冻结煤体过程中,冻结时间对孔隙内不同流体分布空间演化过程作用不同。自由水分布空间随冻结时间呈指数下降关系,受冻结时间影响较大,束缚水次之;结构水和吸附水分布空间几乎不受冻结时间的影响,主要附着于煤基质表面,其分布空间仅取决于煤样孔隙结构特征。根据流体空间分布情况将冻结过程划分为2个阶段:加速冻结阶段(0~20 s)和稳定阶段(20~60 s)。冻结饱水煤样融化时,孔隙未冻水含量受温度与热应力2个因素影响。煤样的融化从小孔开始,直至温度升高到一定程度,大孔开始融化。针对上述分析,建立温度场改变引起热应力的产生及演化过程模型。总结基于液氮冻结煤样融化过程孔隙扩张收缩以及孔隙流体分析体系,涉及T_(2)图谱分析、3D峰图计算等问题,分析融化过程未冻水含量变化规律。计算得出,煤样融化过程,孔隙结构逐渐复杂,孔隙水含量随温度呈指函数上升关系。其中自由水含量从24%增长到44%,增幅最大,束缚水含量增加了11%,吸附水和结构水含量均增加了6%,孔隙水含量由孔隙大小及总孔隙体积决定。 展开更多
关键词 二维核磁共振 冻融过程 孔隙水传热 T1-T2谱图 热应力
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不同供体细胞及其处理对猪核移植重构胚体外发育的影响 被引量:21
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作者 张德福 刘东 +6 位作者 汤琳琳 王英 陈茵 王凯 王根林 KARL Schellander LIN Cailu 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期211-217,共7页
系统探讨了体细胞的组织来源及培养代数对猪核移植重构胚发育的影响。体外成熟培养40~44h的猪卵母细胞去核后,将经血清饥饿(0.5%FBS)培养2~9天、0.1mg/L Aphidicolin(APD)培养+0.5%FBS培养2~9天或一般培养法(10%FBS)... 系统探讨了体细胞的组织来源及培养代数对猪核移植重构胚发育的影响。体外成熟培养40~44h的猪卵母细胞去核后,将经血清饥饿(0.5%FBS)培养2~9天、0.1mg/L Aphidicolin(APD)培养+0.5%FBS培养2~9天或一般培养法(10%FBS)培养的卵丘细胞、颗粒细胞、输卵管上皮细胞和耳皮成纤维细胞,直接注射到去核的卵母细胞质中,或注射到卵周隙中,再经电融合(100V/mm,30μs,电脉冲1次)构建重构胚.重构胚以钙离子载体A23817或电脉冲结合6.DMAP激活处理,体外培养6天。耳皮成纤维细胞和颗粒细胞经0.1mg/LAPD+0.5%FBS培养处理后的重组胚卵裂率,均高于血清饥饿和一般培养处理的同种供体细胞(P〈0.01)。卵丘细胞、颗粒细胞经0.1mg/LAPD+0.5%FBS处理后进行核移植的分裂率和发育率均高于输卵管上皮细胞和耳皮成纤维细胞(P〈0.05)。以猪颗粒细胞为核供体时,电融合法的重构胚分裂率显著高于胞质内注入法(P〈0.05),但囊胚发育率无显著差异(P〉0.05)。培养3代和6代的猪颗粒细胞以及培养6代和10代的耳皮成纤维细胞,其具有正常二倍染色体的细胞比例均无显著差异(P〉0.05);以这2种细胞不同培养代数做供体进行核移植时,各代之间核移胚的体外分裂率、囊胚发育率无显著差异(P〉0.05)。这些结果表明:(1)猪耳皮成纤维细胞和颗粒细胞经培养传代所建立起来的细胞系相对比较稳定;(2)0.1mg/LAPD预培养处理供体细胞能提高猪体细胞核移植的效果,血清饥饿培养则无明显效果;(3)猪颗粒细胞和耳皮成纤维细胞等均可做供核细胞,核移植后都能得到体细胞克隆的囊胚,但前者的效果略优于后者,且其核移植效果不受供核细胞培养代数的影响;(4)电融合核移植胚胎的发育率高于胞质内直接注入法,但两者的总体效率相近。 展开更多
关键词 体细胞核移植 细胞周期
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完整的供体细胞膜及供体胞质对小鼠体细胞克隆胚发育的影响 被引量:7
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作者 王二耀 于洋 +3 位作者 李雪梅 焦丽红 周琪 王柳 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期218-224,共7页
利用显微注射和电融合的方法都可以成功地获得体细胞克隆小鼠,由于电融合法操作耗时,融合率低,因而大多数克隆小鼠是采用注射方法。而注射法需要将供体细胞核从细胞中分离出来,此分离操作有可能导致对DNA的损伤,曾有人使用直径较粗的注... 利用显微注射和电融合的方法都可以成功地获得体细胞克隆小鼠,由于电融合法操作耗时,融合率低,因而大多数克隆小鼠是采用注射方法。而注射法需要将供体细胞核从细胞中分离出来,此分离操作有可能导致对DNA的损伤,曾有人使用直径较粗的注射管进行完整的供体细胞注射,这种方法操作相对简单而且对供体核没有损伤。为了研究这种方法在小鼠核移植中是否适用,本实验使用完整的小鼠卵丘细胞作供体,进行显微注射,结果显示,完整的卵丘细胞注入卵母细胞后,无论在1小时或者6小时激活,大部分的重构胚在2细胞期碎裂,而去掉细胞膜的供体体细胞核注入卵母细胞后,重构胚可以卵裂并进一步发育。卵母细胞去核后不注射供体也发生碎裂,大部分的孤雌胚(不去核)在完整的卵丘细胞被注入后同样发生碎裂。在供体卵丘细胞刚破膜后即被注入卵胞质和供核被充分剥离后注入两种情况下获得的重构胚的体外发育中,前者发育各期的比率显著低于后者。这些结果说明完整的卵丘细胞膜阻碍了卵胞质对体细胞核的重编程作用,造成碎裂;注入卵胞质的供体质膜和胞质成分影响了克隆胚的体外发育。 展开更多
关键词 核移植 小鼠 胚胎发育 卵丘细胞 细胞质
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