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口蹄疫病毒非结构蛋白3D原核表达、纯化和反应原性分析
被引量：
3
1
作者
骆继怀
杨利恒
+3 位作者
高闪电
独军政
常惠芸
薛慧文
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期7-12,共6页
采用RT-PCR技术扩增获得口蹄疫病毒(FMDV)细胞毒O/Akesu/58的非结构蛋白3D(NSP 3D)基因编码区,并定向克隆到pProexHTb原核表达载体上,再将重组pProex-3D转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,表达产物用亲和层析法纯化,经SDS-PAGE鉴定和Wester...
采用RT-PCR技术扩增获得口蹄疫病毒(FMDV)细胞毒O/Akesu/58的非结构蛋白3D(NSP 3D)基因编码区,并定向克隆到pProexHTb原核表达载体上,再将重组pProex-3D转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,表达产物用亲和层析法纯化,经SDS-PAGE鉴定和Western-blot分析抗原性;以纯化的表达蛋白免疫豚鼠制备其多克隆抗体,ELISA测定抗体效价,间接免疫荧光法检测制备的豚鼠抗NSP 3D多克隆抗体与细胞毒天然抗原的反应原性.结果表明:表达的目的蛋白大小为53ku左右;ELISA结果表明,制备的多克隆抗体效价达1∶1 024以上;Western-blot分析表明,纯化后的蛋白能与FMDV感染动物血清发生特异性反应;间接免疫荧光检测发现,豚鼠抗3D蛋白多克隆抗体可与细胞毒天然抗原反应,与阴性对照未见反应.
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关键词
口蹄疫病毒
3D基因
非结构蛋白
反应原性分析
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职称材料
题名
口蹄疫病毒非结构蛋白3D原核表达、纯化和反应原性分析
被引量：
3
1
作者
骆继怀
杨利恒
高闪电
独军政
常惠芸
薛慧文
机构
甘肃农业大学动物医学院
中国农业科学院兰州兽医研究所
出处
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期7-12,共6页
基金
农业部转基因重大专项(2008ZX08011-004
2009ZX08007-008B
2009ZX08006-002B)
文摘
采用RT-PCR技术扩增获得口蹄疫病毒(FMDV)细胞毒O/Akesu/58的非结构蛋白3D(NSP 3D)基因编码区,并定向克隆到pProexHTb原核表达载体上,再将重组pProex-3D转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,表达产物用亲和层析法纯化,经SDS-PAGE鉴定和Western-blot分析抗原性;以纯化的表达蛋白免疫豚鼠制备其多克隆抗体,ELISA测定抗体效价,间接免疫荧光法检测制备的豚鼠抗NSP 3D多克隆抗体与细胞毒天然抗原的反应原性.结果表明:表达的目的蛋白大小为53ku左右;ELISA结果表明,制备的多克隆抗体效价达1∶1 024以上;Western-blot分析表明,纯化后的蛋白能与FMDV感染动物血清发生特异性反应;间接免疫荧光检测发现,豚鼠抗3D蛋白多克隆抗体可与细胞毒天然抗原反应,与阴性对照未见反应.
关键词
口蹄疫病毒
3D基因
非结构蛋白
反应原性分析
Keywords
foot-and-mouth disease virus （FMDV）
3D gene
non-structural proteim reactivity analysis
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
口蹄疫病毒非结构蛋白3D原核表达、纯化和反应原性分析
骆继怀
杨利恒
高闪电
独军政
常惠芸
薛慧文
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
3
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