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进口锦鲤暴发病病原的nested-PCR鉴定 被引量:61
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作者 刘荭 史秀杰 +1 位作者 高隆英 江育林 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期414-418,共5页
为了查明锦鲤暴发性疾病的病因 ,将患病锦鲤的脑、肝、脾和肾等组织悬液接种到CO、CK和EPC等鱼类细胞系中培养 ,均未发现细胞病变 ;从病灶中取样进行病原菌的分离和培养 ,证明锦鲤有副溶血弧菌和嗜水气单胞菌的感染。制备锦鲤疱疹病毒 (... 为了查明锦鲤暴发性疾病的病因 ,将患病锦鲤的脑、肝、脾和肾等组织悬液接种到CO、CK和EPC等鱼类细胞系中培养 ,均未发现细胞病变 ;从病灶中取样进行病原菌的分离和培养 ,证明锦鲤有副溶血弧菌和嗜水气单胞菌的感染。制备锦鲤疱疹病毒 (KHV)的 2对引物KHV9/ 5F和KHV9/ 5R ,KHV1和KHV2 ,用嵌套式聚合酶链式反应 (nested -PCR)在脑和脾脏组织的抽提物中扩增出长度为 4 12bp的特异性的DNA片段。将该片段的nested -PCR扩增产物纯化后 ,克隆、测序。用NCBI -Blast软件将测序结果在Genebank中进行搜寻、比较 ,结果发现与注册号为AF4 1180 3的KHV基因序列的一部分片段有 99%的同源性。因此初步判断这次锦鲤暴发性疾病是由KHV引起的 。 展开更多
关键词 锦鲤 暴发病 病原 nested-PCR鉴定 嵌套式聚合酶链式反应
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云南省清华洞蝙蝠携带的冠状病毒调查与病毒定量检测方法的建立
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作者 孔玮 韩培钰 +6 位作者 杨泽 赵俊颖 汤燚 田佳伟 徐粉慧 宗利东 张云智 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第7期704-711,共8页
目的对云南省清华洞蝙蝠粪便中冠状病毒(coronavirus,CoV)进行定性和定量检测。方法用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对CoV进行定性检测,用生物信息学软件进行同源性与遗传进化分析。建立逆转录实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法,对CoV进行... 目的对云南省清华洞蝙蝠粪便中冠状病毒(coronavirus,CoV)进行定性和定量检测。方法用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对CoV进行定性检测,用生物信息学软件进行同源性与遗传进化分析。建立逆转录实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法,对CoV进行定量检测。结果共采集棕果蝠粪便样本306份,RT-PCR检测CoV阳性率为7.8%(24/306),检测到的24株CoV均为β-CoV,与NCBI中其它β-CoV核苷酸相似性为86.8%~100.0%;氨基酸相似性为95.2%~100.0%;qRTPCR检测CoV阳性率为18.6%(57/306),比RT-PCR检出率高(χ^(2)=25.3,P˂0.05);β-CoV平均病毒载量为1.3×10^(3)拷贝数/μL。结论云南省清华洞蝙蝠携带β-CoV,建立的qRT-PCR方法具有很好的敏感性、准确性和重复性,qRT-PCR检出率高于RTPCR,可对蝙蝠β-CoV进行快速检测。 展开更多
关键词 蝙蝠 β冠状病毒 RT-PCR QRT-PCR
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玉溪市鸡新城疫抗原、抗体调查研究
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作者 何帅 《现代畜牧兽医》 2025年第7期69-72,共4页
研究旨在调查玉溪市鸡新城疫病毒(NDV)免疫抗体水平及感染情况,从玉溪市辖区内采集鸡血清样品1 600份和咽喉拭子样品800份,采用血凝-血凝抑制试验(HA-HI)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测技术对样品进行血清学和病原学检测。结果显示,... 研究旨在调查玉溪市鸡新城疫病毒(NDV)免疫抗体水平及感染情况,从玉溪市辖区内采集鸡血清样品1 600份和咽喉拭子样品800份,采用血凝-血凝抑制试验(HA-HI)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测技术对样品进行血清学和病原学检测。结果显示,玉溪市鸡NDV抗体检测阳性率87.81%(1 405/1 600),其中规模场阳性率91.92%(1 103/1 200),散养场阳性率75.50%(302/400);NDV秋季抗体阳性率(89.75%,359/400)最高,春季抗体阳性率(86.25%,345/400)最低。玉溪市鸡NDV抗原检测阳性率0.38%(3/800),其中规模场阳性率0.25%(1/400),散养场阳性率0.50%(2/400);NDV冬季抗原检测阳性率(1.00%,2/200)最高,春、夏季抗原检测阳性率(0,0/200)最低。研究表明,玉溪市鸡NDV抗体合格率超过国家规定的群体免疫合格率大于70%的标准,玉溪市NDV群体免疫合格。调查结果明确了玉溪市鸡NDV免疫抗体水平及感染情况,可为玉溪市鸡新城疫的防控提供一定参考。 展开更多
关键词 新城疫 新城疫病毒 血凝-血凝抑制试验(HA-HI) 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)
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帕利亚姆病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量:2
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作者 杨恒 李占鸿 +5 位作者 宋子昂 高林 李卓然 廖德芳 肖雷 李华春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期395-400,共6页
本研究拟建立帕利亚姆病毒(Palyam virus,PALV)血清型特异性实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法用于临床样本或媒介中PALV血清型鉴定。根据我国流行PALV毒株的基因节段2序列,设计扩增引物和TaqMan探针,建立PALV血清型特异型qRT-PCR方法,... 本研究拟建立帕利亚姆病毒(Palyam virus,PALV)血清型特异性实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法用于临床样本或媒介中PALV血清型鉴定。根据我国流行PALV毒株的基因节段2序列,设计扩增引物和TaqMan探针,建立PALV血清型特异型qRT-PCR方法,对方法的特异性、灵敏性与重复性进行评估;以我国分离的28株PALV和90份核酸阳性血液样本评估检测方法的可靠性;利用建立的方法对采集库蠓样本中携带的PALV进行血清型鉴定。结果显示,建立的PALV血清型qRT-PCR检测方法具有良好的特异性与灵敏性,可检出核酸拷贝数下限在22至28 copies·μL^(-1)。对28株PALV的qRT-PCR检测结果与病毒测序鉴定结果一致;对PALV不同感染阶段哨兵动物血液(90份)中的qRT-PCR鉴定结果与分离病毒的血清型鉴定结果一致;建立的方法可准确鉴定库蠓中携带PALV的血清型。本研究建立的PALV血清型qRT-PCR定型方法具有良好的特异强、敏感性与重复性,可用于PALV感染动物与媒介中PALV血清型的鉴定,具有良好的应用价值。 展开更多
关键词 帕利亚姆病毒 血清型鉴定 实时荧光定量RT-PCR 检测方法
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新型冠状病毒亚基因组RNA检测方法的建立及性能评估
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作者 赵祉薇 陈茶 黄彬 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第12期1737-1743,共7页
目的建立检测新型冠状病毒(新冠病毒)亚基因组RNA(subgenomic RNA,sgRNA)的方法,并对所建立的方法进行性能评估。方法根据新型冠状病毒sgRNA序列设计引物和探针,建立检测sgRNA的实时荧光逆转录PCR(reverse transcription polymerase cha... 目的建立检测新型冠状病毒(新冠病毒)亚基因组RNA(subgenomic RNA,sgRNA)的方法,并对所建立的方法进行性能评估。方法根据新型冠状病毒sgRNA序列设计引物和探针,建立检测sgRNA的实时荧光逆转录PCR(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法,对所建立的方法进行优化,包括引物、探针的浓度及比例、延伸温度、反应体积和模板量。并对所建立的方法进行性能评估,包括最低检测限、灵敏度、特异性和重复性。对临床样本进行新冠病毒sgRNA和基因组RNA(genomic RNA,gRNA)检测,并对检测结果进行分析。结果建立了检测新冠病毒sgRNA的RT-PCR方法。所建方法的最低检测限为100 copies/mL,对常见病原体的检测结果均为阴性。对高、中、低浓度样本sgRNA进行检测,CV均<5%。115例疑似新冠病毒感染者的咽拭子样本sgRNA为阳性(115/330,阳性率为34.85%)。gRNA-N Ct值<30时,sgRNA-N的阳性率为100.00%;gRNA-N的Ct值介于30~32时,sgRNA-N的阳性率为68.75%;gRNA-N的Ct值介于32~35时,sgRNA-N的阳性率为44.44%;gRNA-N的Ct值>35时,sgRNA-N均为阴性。结论建立了新冠病毒sgRNA的RT-PCR检测方法,方法灵敏、特异、重复性好。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 亚基因组RNA 聚合酶链反应 逆转录
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蟾酥醇提物对多重耐药铜绿假单胞菌头孢他啶敏感性的影响
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作者 周鸿威 王成祥 +8 位作者 吕思缘 林英 张悦 刘国星 李磊 王玉婷 郭雨菲 薛贝 于会勇 《世界中医药》 北大核心 2024年第23期3592-3596,共5页
目的:探讨蟾酥醇提物通过铜绿假单胞菌主动外排系统(MexABOprM)对多重耐药铜绿假单胞菌(MDRPA)头孢他啶敏感性的影响。方法:筛选MexAB-OprM阳性的铜绿假单胞菌菌株,通过肉汤稀释法建立MDRPA体外抑菌实验模型,测定蟾酥醇提物及其联合头... 目的:探讨蟾酥醇提物通过铜绿假单胞菌主动外排系统(MexABOprM)对多重耐药铜绿假单胞菌(MDRPA)头孢他啶敏感性的影响。方法:筛选MexAB-OprM阳性的铜绿假单胞菌菌株,通过肉汤稀释法建立MDRPA体外抑菌实验模型,测定蟾酥醇提物及其联合头孢他啶时的最小抑菌浓度;蟾酥醇提物干预前后用实时荧光反转录PCR检测MDRPA铜绿假单胞菌主动外排系统MexAB-OprM中mexB、mexR、oprM基因mRNA表达量。结果:蟾酥醇提物对MDRPA的最小抑菌浓度值是6.25 mg/mL。蟾酥醇提物联合头孢他啶的联合指数低于1,两药联合应用时存在相加作用。随蟾酥醇提物浓度升高,MDRPA外排泵MexAB-OprM的mexB、oprM相对表达量降低(P<0.05),mexR相对表达量升高(P<0.05)。结论:蟾酥醇提物通过抑制MexABOprM外排泵的表达提高MDRPA对头孢他啶的敏感性。 展开更多
关键词 蟾酥醇提物 多重耐药铜绿假单胞菌 体外抑菌 肉汤稀释法 实时荧光反转录聚合酶链反应 铜绿假单胞菌主动外排系统 抗耐药作用 逆转外排泵机制
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酒泉市猪繁殖与呼吸综合征的流行病学监测和分析 被引量:1
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作者 张翠花 张溪 +1 位作者 赵燕 张若玉 《畜牧兽医杂志》 2024年第2期121-124,共4页
为掌握酒泉市猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的流行情况,本试验在酒泉市五个农业县市采集638份样品,采用反转录-聚合酶链式反应(荧光RT-PCR)方法进行核酸检测,对不同地域、不同生长期、不同饲养模式的流行情况进行分析。结果显示,638份样品... 为掌握酒泉市猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的流行情况,本试验在酒泉市五个农业县市采集638份样品,采用反转录-聚合酶链式反应(荧光RT-PCR)方法进行核酸检测,对不同地域、不同生长期、不同饲养模式的流行情况进行分析。结果显示,638份样品共检测出PRRS核酸阳性样品29份,PRRS阳性感染率为4.55%。不同地域PRRS阳性感染率介于0-7.95%;屠宰场、规模场、散养户PRRS阳性感染率分别为0、2.96、6.82%;种公猪、育肥猪、仔猪、母猪PRRS阳性感染率分别为0、3.1、5.38、6.36%。结果表明,酒泉市PRRS呈散发流行,规模养殖场标准化高,饲养管理模式先进PRRS阳性感染率低,此病仔猪和母猪更容易感染,本试验将对我市PRRS综合防控提供技术支撑。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 酒泉市 反转录-聚合酶链反应 流行病学监测 分析
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猪轮状病毒OSU株对乳鼠的致病性
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作者 桑卡娜 杨绒娟 +4 位作者 胡惠君 卞愧 徐倩 褚何红 周德刚 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第6期47-53,共7页
为建立猪轮状病毒(PoRV)OSU株感染乳鼠致腹泻模型,研究PoRV对乳鼠的致病性,本试验选用40只4日龄昆明乳鼠,将其随机分为3个攻毒组和1个空白对照组,攻毒组乳鼠经口灌胃不同剂量的PoRV培养液,分别为攻毒组1(50μL)、攻毒组2(100μL)和攻毒... 为建立猪轮状病毒(PoRV)OSU株感染乳鼠致腹泻模型,研究PoRV对乳鼠的致病性,本试验选用40只4日龄昆明乳鼠,将其随机分为3个攻毒组和1个空白对照组,攻毒组乳鼠经口灌胃不同剂量的PoRV培养液,分别为攻毒组1(50μL)、攻毒组2(100μL)和攻毒组3(150μL),病毒滴度为10~(5.2)TCID_(50)/100μL,空白对照组按同样的方法灌服细胞培养液。在感染后不同时间点观察乳鼠的临床症状、腹泻和死亡情况、解剖症状,采用苏木精-伊红(H.E.)染色进行肠道组织病理学检查,反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测乳鼠肠内容物中PoRV含量。结果显示,乳鼠在接种PoRV后24 h出现明显腹泻症状,攻毒后3~4 d时发病最严重,4 d时乳鼠的腹泻率介于62.5%~100%,7 d时恢复正常,乳鼠的死亡率介于44.4%~90.0%。与空白对照组比,攻毒组小鼠在给予PoRV后,肠道出现明显的病理变化,主要表现为水肿和充血、肠上皮完整性破坏。RT-PCR检测结果显示,攻毒组部分乳鼠的肠内容物中检出PoRV。本试验利用PoRV OSU株成功建立了乳鼠腹泻模型,阐明了其致病特征。 展开更多
关键词 猪轮状病毒 乳鼠 腹泻 动物模型 反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)
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常见白血病融合基因筛查在白血病诊断与分型中的意义 被引量:11
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作者 祝毓琳 张英 +3 位作者 朱平 杨英 杜金伟 刘静 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期236-239,共4页
目的: 分析病人白血病细胞染色体畸变涉及的86种融合基因和临床白血病类型的相关性,探讨常见融合基因筛查法在临床诊断和分型中的应用价值。方法: 收集161例初发或者复发的白血病患者及8例骨髓增生异常综合征(MDS)患者的骨髓细胞,提取R... 目的: 分析病人白血病细胞染色体畸变涉及的86种融合基因和临床白血病类型的相关性,探讨常见融合基因筛查法在临床诊断和分型中的应用价值。方法: 收集161例初发或者复发的白血病患者及8例骨髓增生异常综合征(MDS)患者的骨髓细胞,提取RNA,用32条特异性引物逆转录为cDNA,利用白血病29种染色体畸变形成的融合基因的86种mRNA剪接变异体引物,分8管进行多重RT PCR,筛查白血病融合基因。结合临床状态和形态学观察了解融合基因与白血病类型的关系。结果: 白血病中115例(71% )分别检测出10种白血病常见融合基因,包括AML1 /ETO、PML/RARα、PLZF/RARα、dupMLL、MLL/AF6、MLL/AF10、CBFβ/MYH11、BCR/ABL、Hox11、Evi1。其中52例慢性粒细胞白血病(CML)100%检出BCR/ABL; 25例急性早幼粒细胞白血病(APL)中88%检出融合基因,其中21例APL检测出PML/RARα, 1例APL检测出PLZF/RARα; AML1 /ETO阳性的17例急性白血病(AL)16例为FAB M2亚型, 1例为混合型白血病; CBFβ/MYH11阳性的4例AL3例为FAB分型的M4, 1例为M5,属于向粒单细胞系统分化的白血病。16例AL检测出MLL基因异常,其中MLL/AF6白血病均为FAB分型的M5,具有典型的原始单核细胞白血病的特征。17例急性淋巴细胞白血病(ALL) 5例检测出BCR/ABL。8例MDS病人中2例检测出融? 展开更多
关键词 白血病诊断 骨髓增生异常综合征(MDS) PML/RARΑ BCR/ABL 急性早幼粒细胞白血病 急性淋巴细胞白血病 慢性粒细胞白血病 融合基因 单核细胞白血病 基因筛查法 FAB分型 人白血病细胞 RT-PCR PLZF 染色体畸变 白血病患者
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大豆异黄酮对胰岛素抵抗大鼠胰岛素敏感性及瘦素基因表达的影响 被引量:16
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作者 陈世伟 张立实 +2 位作者 张红敏 冯晓凡 彭晓莉 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期197-200,共4页
目的:观察大豆异黄酮(SIF)对高脂膳食诱导的胰岛素抵抗(IR)大鼠血清瘦素水平及白色脂肪组织瘦素mRNA表达的影响,并探讨SIF提高胰岛素敏感性的可能机制。方法:选用高脂饲料诱导的IR雄性SD大鼠,根据其胰岛素抵抗指数(IRI)随机分为模型对照... 目的:观察大豆异黄酮(SIF)对高脂膳食诱导的胰岛素抵抗(IR)大鼠血清瘦素水平及白色脂肪组织瘦素mRNA表达的影响,并探讨SIF提高胰岛素敏感性的可能机制。方法:选用高脂饲料诱导的IR雄性SD大鼠,根据其胰岛素抵抗指数(IRI)随机分为模型对照组(水)和3个SIF组(50 mg/kg,150 mg/kg及450 mg/kg)。各组经口灌胃给予相应受试物1个月,空腹过夜后取材,用酶法检测各组动物空腹血糖、用放射免疫法检测空腹血胰岛素、用酶联免疫法检测血清瘦素含量,以实时定量RT-PCR法检测肾周脂肪组织瘦素基因的mRNA水平。结果:与模型对照组比较,SIF 150 mg/kg和450 mg/kg组能显著降低空腹血胰岛素水平及IRI,SIF450 mg/kg组能明显降低大鼠体重及肾周脂肪组织瘦素基因mRNA的表达、提高血清瘦素的含量。结论:SIF可能具有改善瘦素抵抗的作用,并进而提高胰岛素的敏感性。 展开更多
关键词 异黄酮类 胰岛素抗药性 瘦素 逆转录聚合酶链反应
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RT-PCR技术检测猪瘟病毒的应用研究 被引量:34
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作者 罗廷荣 莫扬 +7 位作者 吴文德 黄玉华 黄伟坚 秦爱珍 刘芳 温荣辉 陆芹章 余克伦 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期307-309,312,共4页
本试验应用反转录_聚合酶链式反应 (RT_PCR)对猪瘟进行诊断应用研究。应用RT_PCR对来自广西不同地区的 135份疑似猪瘟病料进行检测 ,84份诊断为阳性 ,阳性率 6 2 2 %。从百色、柳州地区等采集的健康猪扁桃体和淋巴结共 2 76份 ,经RT_PC... 本试验应用反转录_聚合酶链式反应 (RT_PCR)对猪瘟进行诊断应用研究。应用RT_PCR对来自广西不同地区的 135份疑似猪瘟病料进行检测 ,84份诊断为阳性 ,阳性率 6 2 2 %。从百色、柳州地区等采集的健康猪扁桃体和淋巴结共 2 76份 ,经RT_PCR检测 ,37份为阳性 ,阳性率为 13 4 %。其中健康猪扁桃体带毒较高 ,2 4 6份扁桃体中有 35份阳性 ,占 14 2 %。采自柳州健康猪的 2 6份淋巴结材料全为阴性 ,只有邕宁县的 1份健猪淋巴结阳性。结果表明 ,RT_PCR技术可应用于猪瘟的临床诊断。 展开更多
关键词 猪瘟 反转录-聚合酶链式反应 诊断
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RT-PCR技术诊断猪瘟的应用研究 被引量:26
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作者 罗廷荣 莫扬 +7 位作者 吴文德 黄玉华 黄伟坚 秦爱珍 刘芳 温荣辉 陆芹章 余克伦 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期219-222,共4页
应用反转录_聚合酶链反应 (RT_PCR)对猪瘟进行诊断应用研究。应用RT_PCR对来自广西不同地区的 135份疑似猪瘟病料进行检测 ,84份诊断为阳性 ,阳性率 6 2 .2 %。从百色、柳州地区等采集的健康猪扁桃体和淋巴结共 2 76份 ,经RT_PCR检测 ,3... 应用反转录_聚合酶链反应 (RT_PCR)对猪瘟进行诊断应用研究。应用RT_PCR对来自广西不同地区的 135份疑似猪瘟病料进行检测 ,84份诊断为阳性 ,阳性率 6 2 .2 %。从百色、柳州地区等采集的健康猪扁桃体和淋巴结共 2 76份 ,经RT_PCR检测 ,37份为阳性 ,阳性率为 13.4 %。其中健康猪扁桃体带毒较高 ,2 4 6份扁桃体中有 35份阳性 ,占 14 .2%。采自柳州健康猪的 2 6份淋巴结材料全为阴性 ,只有邕宁县的 1份健猪淋巴结阳性。结果表明 。 展开更多
关键词 猪瘟 反转录-聚合酶链式反应 诊断
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大鼠关节软骨酸敏感离子通道的表达 被引量:18
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作者 袁凤来 陈飞虎 +6 位作者 李霞 雄志刚 黄学应 刘永靖 吴繁荣 姚莹 张晓明 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2007年第5期513-516,共4页
目的探讨大鼠关节软骨酸敏感离子通道(ASICs)的表达及其意义。方法利用RT-PCR和Western blot检测ASICs在大鼠关节软骨的表达。结果大鼠关节软骨存在ASIC1a、ASIC2a和ASIC3 mRNA及其蛋白的表达。结论ASICs在大鼠关节软骨组织的表达,其有... 目的探讨大鼠关节软骨酸敏感离子通道(ASICs)的表达及其意义。方法利用RT-PCR和Western blot检测ASICs在大鼠关节软骨的表达。结果大鼠关节软骨存在ASIC1a、ASIC2a和ASIC3 mRNA及其蛋白的表达。结论ASICs在大鼠关节软骨组织的表达,其有望成为关节炎治疗的新靶点。 展开更多
关键词 离子通道 逆转录聚合酶链反应 软骨 关节 印迹法 蛋白质 大鼠
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雌激素受体在原发性肝癌中的表达与变异 被引量:6
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作者 邢宝才 王家宏 +3 位作者 王怡 郝纯毅 黄信孚 王歈 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期620-622,共3页
目的:通过研究原发性肝癌组织中野生型雌激素受体(wild type Estrogen receptor,wER)以及第5外显子缺失而变异的雌激素受体(variant estrogen receptor,vER)的表达情况,期望对原发性肝癌进行内分泌治疗的可能性进行分析。方法:收... 目的:通过研究原发性肝癌组织中野生型雌激素受体(wild type Estrogen receptor,wER)以及第5外显子缺失而变异的雌激素受体(variant estrogen receptor,vER)的表达情况,期望对原发性肝癌进行内分泌治疗的可能性进行分析。方法:收集我院原发性肝癌手术切除的标本28例,应用 RT-PCR 的方法分析 wER 与 vER 在 mRNA 水平的表达,同时通过免疫组织化学分析对 ER 在蛋白水平的表达进行检测。结果:免疫组织化学显示原发性肝癌组织中 ER 的表达率为39.3%(11/28);RT-PCR 显示所有标本中均检测到雌激素受体的表达,89.3%(25/28)的原发性肝癌病人表达 wER,96.4%(27/28)的肝癌表达 vER,其中 wER 和 vER 联合表达的病人为85.7%(24/28),仅表达wER 的病人为3.5%(1/28),而仅表达 vER 的为10.7%(3/28)。结论:在原发性肝癌的形成过程中,96.4%(27/28)的肝癌出现 ER 的变异,提示 ER 的变异与原发性肝癌的形成有密切的关系。 展开更多
关键词 ER 原发性肝癌 表达 雌激素受体 病人 癌组织中 免疫组织化学 MRNA水平 变异 外显子
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SFRP4和DKK1在宫颈鳞癌中的表达及临床病理意义 被引量:8
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作者 李秀芬 侯安丽 +3 位作者 李振环 方淑芹 张雅丽 徐亚威 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1063-1067,共5页
目的研究分泌型卷曲相关蛋白(SFRP4)及Wnt信号通路抑制因子DKK1(Dickkopf-1)在宫颈鳞癌中的表达及临床病理意义。方法采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测66例宫颈鳞癌组织中及26例正常宫颈组织中DKK1和SFRP4 mRNA的表达水平;采用免... 目的研究分泌型卷曲相关蛋白(SFRP4)及Wnt信号通路抑制因子DKK1(Dickkopf-1)在宫颈鳞癌中的表达及临床病理意义。方法采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测66例宫颈鳞癌组织中及26例正常宫颈组织中DKK1和SFRP4 mRNA的表达水平;采用免疫组织化学法检测66例宫颈鳞癌组织中及26例正常宫颈组织中DKK1和SFRP4蛋白的表达水平。应用SPSS17.0统计学软件进行统计学分析,研究DKK1和SFRP4的表达与宫颈鳞癌患者主要临床病理指标的关系。结果宫颈鳞癌SFRP4表达高于正常宫颈(P<0.01)。宫颈鳞癌DKK1表达低于正常宫颈(P<0.05)。DKK1和SFRP4在宫颈鳞癌中的表达与临床病理分期、组织分化程度、有无淋巴转移及浸润深度有关(P均<0.05)。DKK1与SFRP4在宫颈鳞癌中的表达呈负相关(P<0.01)。结论 Wnt信号通路上游因子SFRP4和DKK1在宫颈鳞癌发生中起关键作用,并且与宫颈鳞癌的临床病理指标密切相关。 展开更多
关键词 宫颈鳞癌 DKK1 SFRP4 免疫组织化学法 逆转录聚合酶链式反应
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盐酸小檗碱及其与环孢素A合用对大鼠肝脏和小肠CYP3A1的影响 被引量:10
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作者 辛华雯 吴笑春 +4 位作者 李罄 余爱荣 仲明远 朱敏 刘幼英 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2004年第5期565-568,共4页
目的 :阐明盐酸小檗碱 (berberinechloride ,Ber)及其与环孢素A (cyclosporin ,CsA)合用对大鼠肝脏和小肠CYP3A1的影响。方法 :实验分 7组 :溶媒对照组、15 0mg·kg-1酮康唑组、10 0mg·kg-1Ber组、2 0 0mg·kg-1Ber组、4 5... 目的 :阐明盐酸小檗碱 (berberinechloride ,Ber)及其与环孢素A (cyclosporin ,CsA)合用对大鼠肝脏和小肠CYP3A1的影响。方法 :实验分 7组 :溶媒对照组、15 0mg·kg-1酮康唑组、10 0mg·kg-1Ber组、2 0 0mg·kg-1Ber组、4 5mg·kg-1CsA组、10 0mg·kg-1Ber +45mg·kg-1CsA组、2 0 0mg·kg-1Ber +45mg·kg-1CsA组 ,采用RT PCR和Westernblot等方法测定大鼠肝脏和小肠CYP3A1的表达水平。结果 :RT PCR结果显示 :灌胃给药 12d后 ,除了 10 0mg·kg-1Ber组外 ,其余各用药组对大鼠肝脏CYP3A1基因表达均有明显的抑制作用。Westernblot结果显示 :给药 6d后 ,2 0 0mg·kg-1Ber +45mg·kg-1CsA组对大鼠肝脏CYP3A1的表达有明显抑制作用 ;给药 12d后 ,10 0mg·kg-1Ber +45mg·kg-1CsA ,2 0 0mg·kg-1Ber +45mg·kg-1CsA组对大鼠肝脏和小肠CYP3A1的表达均有明显抑制作用。结论 :通过增强CsA对肝脏和小肠CYP3A1基因表达的抑制作用 ,从而减少CsA在肝脏和小肠的代谢及消除 ,可能是Ber增加CsA血浓度的重要机制。 展开更多
关键词 盐酸小檗碱 环孢素A 细胞色素P450酶 逆转录聚合酶链反应 WESTEM BLOT
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兜兰DEFICIENS(DEF)-和GLOBOSA(GLO)-like基因的克隆及表达分析 被引量:11
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作者 李冬梅 吕复兵 +3 位作者 朱根发 操君喜 李伟锋 孙映波 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期215-224,共10页
以‘同色兜兰’品种为材料,采用RT-PCR和RACE技术获得了DEFICIENS(DEF)-和GLOBOSA(GLO)-like基因的cDNA全长,命名为PcDEF和PcGLO,并用半定量RT-PCR和实时PCR研究了PcDEF和PcGLO在花芽发育过程和不同组织部位的表达特性。结果表明,PcDEF... 以‘同色兜兰’品种为材料,采用RT-PCR和RACE技术获得了DEFICIENS(DEF)-和GLOBOSA(GLO)-like基因的cDNA全长,命名为PcDEF和PcGLO,并用半定量RT-PCR和实时PCR研究了PcDEF和PcGLO在花芽发育过程和不同组织部位的表达特性。结果表明,PcDEF和PcGLO的全长cDNA分别为1 039bp和934bp,分别编码224和210个氨基酸;蛋白比对表明,PcDEF和PcGLO蛋白都具有典型MADS-box蛋白的MADS和K结构域;蛋白同源性分析显示,PcDEF和PcGLO与已登录的其它兰科植物的DEF/AP3和GLO/PI蛋白的相似性分别在75%~96%和87%~98%;系统进化树分析表明,PcDEF和PcGLO分别属于B类MADS-box蛋白家族的AP3和PI亚家族。表达分析显示,PcDEF和PcGLO在花芽发育中均有表达,PcDEF在成熟花、唇瓣和花瓣中的表达量高,在蕊柱、萼片、苞叶和根中次之,在花茎和叶中较低,在子房中几乎不表达;PcGLO在各组织中均有不同丰度的表达。 展开更多
关键词 兜兰 MADS-BOX基因 DEFICIENS基因 GLOBOSA基因 RACE 进化分析 RT-PCR
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用反转录聚合酶链反应检测禽呼肠孤病毒的研究 被引量:14
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作者 谢芝勋 庞耀珊 +2 位作者 刘加波 邓显文 谢志勤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第5期365-367,共3页
本文报告了建立反转录聚合酶链反应( R T P C R)检测禽呼肠孤病毒( A R V)的方法,根据禽呼肠孤病毒 S1133 毒株 S1 基因序列,设计合成两对引物,用 R T P C R 技术对 6 株禽呼肠孤病毒国际标准株进进... 本文报告了建立反转录聚合酶链反应( R T P C R)检测禽呼肠孤病毒( A R V)的方法,根据禽呼肠孤病毒 S1133 毒株 S1 基因序列,设计合成两对引物,用 R T P C R 技术对 6 株禽呼肠孤病毒国际标准株进进行了检测。结果两对引物对 6 株 A R V 均可扩增出与预期大小相符 532bp 和 435bp 的 R T P C R 产物,而对其它 6 种禽病病原核酸的扩增结果均为阴性;该 R T P C R 可以检测出 1pg 的 A R V R N A 模板。 展开更多
关键词 禽呼肠孤病毒 引物 ARV RT-PCR
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胃泌素和生长抑素在糖尿病胃轻瘫中作用的研究 被引量:32
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作者 吴波 杜强 +1 位作者 郑长青 李倩 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期783-785,共3页
目的探讨胃泌素(GAS)、生长抑素(SS)在糖尿病胃轻瘫(DGP)发生中的作用。方法选患者103例,分为正常对照(CO)组17例、单纯胃轻瘫(GP)组30例、单纯糖尿病(DM)组23例和DGP组33例,应用放免法及RT-PCR方法测定血清中GAS、SS蛋白水平及其组织中... 目的探讨胃泌素(GAS)、生长抑素(SS)在糖尿病胃轻瘫(DGP)发生中的作用。方法选患者103例,分为正常对照(CO)组17例、单纯胃轻瘫(GP)组30例、单纯糖尿病(DM)组23例和DGP组33例,应用放免法及RT-PCR方法测定血清中GAS、SS蛋白水平及其组织中mRNA的表达。结果GP组、DM组血清GAS、SS蛋白水平及其组织中mRNA的表达均与CO组存在显著性差异(P<0.05)。GAS及SS在DGP组中的血清蛋白水平及其组织mRNA的表达与CO组比较差异非常显著(P<0.01);与GP组、DM组比较差异显著(P<0.05)。结论GAS的升高、SS的降低是DGP发生、发展的重要因素。 展开更多
关键词 糖尿病胃轻瘫 胃泌素 生长抑素 反转录聚合酶链式反应
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mTOR和PTEN在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义 被引量:9
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作者 王亮 许绍发 +3 位作者 岳文涛 赵晓婷 张丽娜 王玥 《中国肺癌杂志》 CAS 2010年第7期717-721,共5页
背景与目的mTOR是调节细胞生长和增殖的重要信号转导分子,也是一种蛋白激酶。它通过活化下游的相关的效应蛋白发挥作用。在信号转导通路中PTEN基因可通过对该信号途径的负调控而抑制mTOR的活化。本研究通过分析mTOR信号转导途径中mTOR和... 背景与目的mTOR是调节细胞生长和增殖的重要信号转导分子,也是一种蛋白激酶。它通过活化下游的相关的效应蛋白发挥作用。在信号转导通路中PTEN基因可通过对该信号途径的负调控而抑制mTOR的活化。本研究通过分析mTOR信号转导途径中mTOR和PTEN基因在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达和临床意义。方法外科手术中获取65例NSCLC组织及30例癌旁组织,RT-PCR技术检测NSCLC组织及癌旁组织中mTOR和PTEN基因的表达水平。结果mTOR在NSCLC组织中表达量(0.23±0.16)显著高于癌旁组(0.12±0.09)(P<0.01),PTEN在NSCLC组织中表达量(0.19±0.28)显著低于癌旁组(0.53±0.28)(P<0.01)。mTOR和PTEN与病人的性别、年龄、病理类型、淋巴结转移情况无关,与病人的肿瘤大小有关。结论mTOR在NSCLC中被激活,PTEN在NSCLC组织表达缺失或减少,mTOR通路的激活和PTEN表达缺失在NSCLC发生发展中起到一定的作用。 展开更多
关键词 MTOR PTEN 逆转录聚合酶链反应 肺肿瘤
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