野生型非洲猪瘟病毒多重数字PCR方法的建立

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作者 李松达 蒋亚君 +5 位作者 庞忠宝 黄颖 翟文竹 朱鸿飞 赵晓民 贾红 《动物医学进展》 北大核心 2024年第4期32-39,共8页

为建立一种鉴别诊断野生株和基因缺失株非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的方法,针对ASFV的B646L、EP402R、DP96R基因保守序列设计3套引物和探针,优化三重荧光定量PCR体系作为基础建立微滴式数字PCR(droplet digital PCR,d... 为建立一种鉴别诊断野生株和基因缺失株非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的方法,针对ASFV的B646L、EP402R、DP96R基因保守序列设计3套引物和探针,优化三重荧光定量PCR体系作为基础建立微滴式数字PCR(droplet digital PCR,dd PCR)检测方法,并对方法的特异性、灵敏性及重复性进行评估。结果显示,优化后的多重荧光定量PCR检测方法的标准曲线线性关系良好,对PRRSV、PEDV、PRV、VSV、PCV、RNase-free水、重组质粒标准品进行特异性检测,特异性良好;重复性试验结果显示,变异系数均小于2%;对3种重组质粒的最低检测下限均为102 copies/μL。参照上述多重荧光定量PCR方法优化后的条件,进行多重ddPCR检测方法的建立,并且对该方法进行评价。结果显示,ddPCR检测方法标准曲线的线性关系良好;特异性及重复性良好;最低检测下限B646L为11.6 copies/μL、EP402R为13.3 copies/μL、DP96R为16.9 copies/μL;ddPCR的检测灵敏度比荧光定量PCR有优势。使用建立的多重ddPCR方法对14份P3实验室中的样品进行实验室样品检测,样品检测符合率达到100%。成功建立了能够同时检测用于鉴别野毒株感染与疫苗株的荧光定量PCR和微滴式ddPCR方法。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 多重荧光定量pcr 微滴式数字pcr

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PCR技术在食品微生物检测中的应用研究 被引量：1

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作者 王迪 《食品安全导刊》 2024年第13期187-189,共3页

PCR技术因具有高灵敏度、高特异性和快速性的特点,在食品微生物检测领域广泛使用。本文阐述食品中常见的致病微生物、PCR技术的基本原理、食品中常见致病微生物的PCR检测方法,探讨PCR技术在食品微生物检测中的应用,并介绍PCR技术在食品... PCR技术因具有高灵敏度、高特异性和快速性的特点,在食品微生物检测领域广泛使用。本文阐述食品中常见的致病微生物、PCR技术的基本原理、食品中常见致病微生物的PCR检测方法,探讨PCR技术在食品微生物检测中的应用,并介绍PCR技术在食品微生物检测中的发展趋势。 展开更多

关键词 pcr技术 食品微生物 致病微生物 实时荧光定量pcr 多重pcr

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蜂蜜中转基因成分启动子和终止子的多重实时荧光PCR法检测

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作者 林碧莲 张雅薇 +8 位作者 高宇 何孟杭 邱秀玉 韩涛 张芳 傅德江 陈思琪 宋帆 柯振华 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期69-77,共9页

为能高效率定位蜂蜜中的转基因可疑阳性样品,以10种转基因启动子和终止子(花椰菜花叶病毒35S启动子(pCaMV35S)、农杆菌的胭脂碱合成酶基因终止子(tNOS)、玄参花叶病毒的35S启动子(p FMV35S)、农杆菌的胭脂碱合成酶基因启动子(pNOS)、玉... 为能高效率定位蜂蜜中的转基因可疑阳性样品,以10种转基因启动子和终止子(花椰菜花叶病毒35S启动子(pCaMV35S)、农杆菌的胭脂碱合成酶基因终止子(tNOS)、玄参花叶病毒的35S启动子(p FMV35S)、农杆菌的胭脂碱合成酶基因启动子(pNOS)、玉米泛素基因的启动子(pUbi)、烟草的花蕊特异性TA29的基因发育调节启动子(pTA29)、豌豆二磷酸核酮糖羧化酶基因的终止子(tE9)、章鱼碱合成酶终止子(t OCS)、谷氨酰胺转移酶7终止子(tg7)、花椰菜花叶病毒终止子(tCaMV35S))为研究靶标,进行10种启动子和终止子的引物和探针组合筛选、反应条件优化、灵敏度测定、质控品测试比对等实验,建立3组多重实时荧光PCR反应体系,并将其应用于市售蜂蜜的检测。结果表明:建立的3组多重实时荧光PCR反应体系能精准检出目的基因,其灵敏度分别为0.01、0.04、0.04 ng/μL;14种转基因质控品的测试显示多重实时荧光PCR和单重实时荧光PCR的检测结果一致;40份市售蜂蜜的筛查中,有两份蜂蜜检出pCaMV35S和tNOS,其余未检出,该方法大大提高了检测效率。该方法为蜂蜜中转基因成分的检测提供了快筛快检技术,同时也适用其它产品转基因成分的检测。 展开更多

关键词 蜂蜜 转基因 启动子 终止子 多重实时荧光pcr

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肉串制品中猪牛羊源性成分多重荧光PCR检测方法研究

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作者 姚艳玲 周宇东 +4 位作者 王文宇 朱洪亮 陈婷 翁光灿 孙世元 《安徽农业科学》 CAS 2024年第18期184-187,共4页

[目的]建立畜类肉串产品中常见的黄牛、绵羊和猪源性成分的多重荧光PCR检测方法,实现肉串制品中动物源性成分的快速鉴别。[方法]比较磁珠法和柱膜法对肉糜组织中DNA的提取效果,优化实时荧光PCR多重检测方法,比较58、60℃2个退火温度下... [目的]建立畜类肉串产品中常见的黄牛、绵羊和猪源性成分的多重荧光PCR检测方法,实现肉串制品中动物源性成分的快速鉴别。[方法]比较磁珠法和柱膜法对肉糜组织中DNA的提取效果,优化实时荧光PCR多重检测方法,比较58、60℃2个退火温度下黄牛、绵羊、猪源性成分扩增效果。[结果]试验采用的2种DNA提取方法效果相似,DNA溶液的A_(260)/A_(280)值均能满足PCR检测要求;58℃为最优退火温度,此时黄牛、绵羊、猪源性成分均能有效扩增,且最低检出的DNA浓度均为10^(-3) ng/μL。方法中用到的引物和探针特异性较好,均未产生非特异性扩增。[结论]试验建立的黄牛、绵羊和猪源性成分的多重PCR检测方法能为肉制品中动物源性成分的快速定性分析提供方法参考。 展开更多

关键词 黄牛 绵羊 猪 源性成分 实时荧光多重pcr

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多重荧光PCR鉴别羊肉掺假 被引量：19

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作者 杨冬燕 韦梅霞 +2 位作者 杨永存 李浩 邓平建 《食品安全质量检测学报》 CAS 2015年第2期555-562,共8页

目的建立可同时检测掺入羊肉中的猪、马、牛、鸭成分的多重荧光PCR检测体系。方法配制掺入猪、马、牛、鸭源性成分的模拟羊肉掺假样品,掺假比例17%~45%。筛选特异性强、敏感度高的猪、马、牛、鸭物种特异性基因,优化反应体系,建立了针... 目的建立可同时检测掺入羊肉中的猪、马、牛、鸭成分的多重荧光PCR检测体系。方法配制掺入猪、马、牛、鸭源性成分的模拟羊肉掺假样品,掺假比例17%~45%。筛选特异性强、敏感度高的猪、马、牛、鸭物种特异性基因,优化反应体系,建立了针对猪、牛、马、鸭两两配对的两重荧光PCR检测体系和其中3个任意组合的三重荧光PCR检测体系。结果模拟羊肉掺假样品两重荧光PCR检测结果显示,包括单个成分掺入比例低至7%的样品,其检测准确率为100%。而三重荧光PCR检测同时检测猪、牛、马、鸭四种肉品中的3种,其中猪肉、牛肉和马肉的掺假比例均为8%~15%;鸭牛肉掺假比例为5%~10%。三重荧光PCR检测结果显示,所有掺假样品中的各种掺假组分都被准确检出。结论本研究建立的多重荧光PCR检测体系能准确检出配制的模拟掺假羊肉制品中的猪、马、牛、鸭成分,可进一步研究以应用于市场肉制品及加工肉制品掺假的检测。 展开更多

关键词 羊肉 掺假 多重荧光pcr

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多重PCR方法检测食品中转基因成分 被引量：16

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作者 刘光明 苏文金 +3 位作者 梁基选 高榕 宋思扬 陈伟铃 《无锡轻工大学学报（食品与生物技术）》 CSCD 北大核心 2002年第4期379-383,共5页

根据转基因农作物中最常用的花椰菜花叶病毒启动子 (CaMV 3 5S)和根癌农杆菌终止子(NOS)的序列 ,设计合成了两对不同的引物和相对应的两种荧光双链探针 (FDCP) ,分别建立了多重PCR、应用FDCP的实时荧光PCR同时检测转基因成分 3 5S启动子... 根据转基因农作物中最常用的花椰菜花叶病毒启动子 (CaMV 3 5S)和根癌农杆菌终止子(NOS)的序列 ,设计合成了两对不同的引物和相对应的两种荧光双链探针 (FDCP) ,分别建立了多重PCR、应用FDCP的实时荧光PCR同时检测转基因成分 3 5S启动子和NOS终止子的方法 .并利用该套方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等实物样品进行了检测 ,发现 1 3份样品中有 6份检出3 5S启动子、NOS终止子 ,其余 7份样品的检测结果为阴性 .表明作者建立的多重PCR方法能有效检测出 3 5S和NOS成分 ,其中多重PCR法具有灵敏度高、特异性好的特点 ,多重荧光PCR法则更为简便、快速。 展开更多

关键词 多重pcr方法 检测 食品 转基因成分

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多重荧光PCR快速检测食源性致病菌的研究进展 被引量：15

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作者 刘占鳌 裴艳琴 叶华 《食品安全质量检测学报》 CAS 2020年第24期9308-9313,共6页

食源性疾病多由食源性致病菌引发,威胁个人健康及全球食品安全,而传统细菌分离、培养与鉴定由于需时较长,尤其是有的细茵难以培养,难以适应食源性疾病预防控制的需要,因此寻找有效、可靠的食源性致病菌高通量检测方法对于确保食品安全... 食源性疾病多由食源性致病菌引发,威胁个人健康及全球食品安全,而传统细菌分离、培养与鉴定由于需时较长,尤其是有的细茵难以培养,难以适应食源性疾病预防控制的需要,因此寻找有效、可靠的食源性致病菌高通量检测方法对于确保食品安全具有重要意义。近年来,食源性致病菌的核酸检测技术具有简便、耗时短、特异性强、灵敏度高等优点,已被广泛应用于食源性致病菌的检测,本文在总结食源性致病菌知识的基础上,着重对多重荧光PCR技术原理及在食源性致病菌检测的应用进展进行综述,以期为控制由食源性致病菌引发的食品安全隐患提供理论参考。 展开更多

关键词 食源性致病菌 多重荧光pcr 快速检测

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应用多重实时荧光PCR检测蜡样芽胞杆菌毒力基因 被引量：4

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作者 刘芳 陈国培 +4 位作者 王远洋 郭正洋 陈晶 刘钟栋 兰全学 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期255-260,共6页

目的:建立一种快速、准确、简便的蜡样芽胞杆菌毒力基因检测方法,为蜡样芽胞杆菌更深入的研究提供依据和便利。方法:采用Taq Man探针法设计了三重hbl A,hbl C,hbl D基因,三重nhe A,nhe B,nhe C基因,三重ces,ent FM,bce T基因的多重实时... 目的:建立一种快速、准确、简便的蜡样芽胞杆菌毒力基因检测方法,为蜡样芽胞杆菌更深入的研究提供依据和便利。方法:采用Taq Man探针法设计了三重hbl A,hbl C,hbl D基因,三重nhe A,nhe B,nhe C基因,三重ces,ent FM,bce T基因的多重实时荧光PCR体系检测蜡样芽胞杆菌毒力基因。结果:多重体系对蜡样芽胞杆菌毒力基因的检测具有良好的特异性和灵敏性,其最低检出限为63 CFU/m L。结论:利用上述体系对蜡样芽胞杆菌的毒力基因进行检测能够省时省力,特异性、灵敏性良好,具有实际应用价值。 展开更多

关键词 蜡样芽胞杆菌 多重Taq Man实时荧光pcr 毒力基因

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四重荧光定量RT-PCR检测人感染新型甲型禽流感H7N9病毒 被引量：6

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作者 王国政 崔大伟 +8 位作者 谢国良 成军 孙长贵 李静云 金美彤 沈雄文 杨先知 楼剑洲 陈瑜 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期801-805,共5页

目的建立检测人感染新型甲型禽流感H7N9病毒的四重荧光定量RT-PCR方法。方法以人细胞RNA酶P(RNase P)基因为内参,用Primer Express3.0软件设计PCR特异性引物和探针。通过不同来源的呼吸道病毒进行特异性分析,构建质粒标准品用于分析该... 目的建立检测人感染新型甲型禽流感H7N9病毒的四重荧光定量RT-PCR方法。方法以人细胞RNA酶P(RNase P)基因为内参,用Primer Express3.0软件设计PCR特异性引物和探针。通过不同来源的呼吸道病毒进行特异性分析,构建质粒标准品用于分析该方法的灵敏度和重复性,并对1 896例临床标本进行回顾性检测。结果该方法检测甲型流感病毒(Flu A)、H7、N9与RNase P灵敏度均达102copies/m L,特异性达100%,每对引物和探针只检测出相应的病毒,无交叉反应,检测变异系数(CV)均低于1.55%。用该法检测1 896例临床标本,结果 Flu A 235例,H7N9 127例,与其他试剂报告结果完全一致。结论建立的四重荧光定量RT-PCR法可快速检测H7N9病毒,灵敏度与特异性好,可用于H7N9病毒感染患者的早期诊断。 展开更多

关键词 甲型禽流感 H7N9 检测 RNA酶P 四重荧光定量pcr

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利用多重荧光PCR分析秦川牛遗传多样性 被引量：4

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作者 王均辉 昝林森 +3 位作者 张桂香 王志刚 齐国强 韩旭 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第20期6051-6053,共3页

[目的]分析秦川牛的遗传多样性,加强对该品种资源的保护。[方法]利用15个微卫星座位,运用多重荧光PCR技术对59头秦川牛个体的基因组DNA进行扩增,通过等位基因频率、多态信息含量、基因杂合度和有效等位基因数分析秦川牛品种的遗传多样性... [目的]分析秦川牛的遗传多样性,加强对该品种资源的保护。[方法]利用15个微卫星座位,运用多重荧光PCR技术对59头秦川牛个体的基因组DNA进行扩增,通过等位基因频率、多态信息含量、基因杂合度和有效等位基因数分析秦川牛品种的遗传多样性。[结果]结果表明:在15个座位的等位基因数为5～18个,平均等位基因数为10.3个;各座位上的杂合度都较高,平均杂合度为0.7959;平均有效等位基因数为5.3066;15个座位中多态信息含量为0.6441～0.8649,均为高度多态。[结论]通过荧光标记可用于牛品种遗传多样性的分析,并可为进一步QTL定位和标记辅助选择研究提供参考。 展开更多

关键词 多重荧光pcr 奏川牛 遗传多样性

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一种从羊奶中检测牛奶和大豆成分多重实时荧光定量PCR方法的建立 被引量：10

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作者 范阳阳 张荦嘉 +5 位作者 刘艳艳 卞如如 霍胜楠 张卉 张全芳 步迅 《山东农业科学》 2016年第6期118-123,共6页

羊奶制品因其良好的营养功效备受消费者的青睐,也是乳制品主要掺假对象。本研究参考市场可能掺假现状,分别根据羊和牛线粒体基因组16S rRNA基因序列和大豆的KTi-S基因(GI:510514)序列,设计一对牛和羊特异性引物、一对大豆特异性引物以... 羊奶制品因其良好的营养功效备受消费者的青睐,也是乳制品主要掺假对象。本研究参考市场可能掺假现状,分别根据羊和牛线粒体基因组16S rRNA基因序列和大豆的KTi-S基因(GI:510514)序列,设计一对牛和羊特异性引物、一对大豆特异性引物以及相应的Taq Man-MGB探针,建立羊奶中牛奶和大豆成分多重实时荧光定量PCR检测方法,并引入内标质控有效保证检测体系的准确性。本检测体系对羊奶、牛奶及豆浆的基因组DNA检测敏感度为0.01 ng;对羊奶中掺入牛奶和豆浆的体积掺假检测灵敏度均为0.1%。因此,本研究建立的羊奶中牛奶和大豆成分多重实时荧光定量PCR检测体系具有通量大、灵敏度高、特异性好等优点,实现了对羊奶中其他源性成分快速、准确的检测,对保障相关产品市场安全具有重要意义。 展开更多

关键词 羊奶 牛奶 豆浆 多重实时荧光定量pcr

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多重实时荧光PCR鉴别金钱白花蛇源性方法研究 被引量：4

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作者 李燕 刘艳艳 +3 位作者 卞如如 张旭童 张全芳 步迅 《食品与药品》 CAS 2016年第4期246-251,共6页

目的用多重实时荧光聚合酶链式反应(多重实时荧光PCR)快速鉴别金钱白花蛇源性。方法以线粒体细胞色素C基因为目标靶基因,根据其特异性核酸序列设计引物和探针,通过优化引物及探针浓度、退火温度等PCR体系和条件,建立从活体材料和粉末制... 目的用多重实时荧光聚合酶链式反应(多重实时荧光PCR)快速鉴别金钱白花蛇源性。方法以线粒体细胞色素C基因为目标靶基因,根据其特异性核酸序列设计引物和探针,通过优化引物及探针浓度、退火温度等PCR体系和条件,建立从活体材料和粉末制剂等中药材中检测金钱白花蛇源性的二重二色实时荧光PCR检测体系。结果通过检测市售15块金钱白花蛇药材,发现其中5块不含金钱白花蛇源性成分;10份金钱白花蛇粉末制剂中3份未检出金钱白花蛇成分;5份活体样本均为金钱白花蛇。检测结果与DNA测序结果一致。结论本研究建立的方法可用于金钱白花蛇源性的检测,能有效保障金钱白花蛇相关名贵中药及制品的安全性。 展开更多

关键词 金钱白花蛇 多重实时荧光pcr 线粒体细胞色素C基因

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检测EV71和EV-U的TaqMan-LNA探针多重荧光RT-PCR的建立 被引量：6

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作者 茅凌翔 徐岚 +7 位作者 葛琴娟 鲍务新 杨静 吴斌 陈建国 徐顺高 黄新祥 许化溪 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期327-329,共3页

目的建立一种针对手足口病病原体的快速准确检测方法。方法利用TaqMan-LNA探针建立多重荧光定量RT-PCR方法,同时检测肠道病毒71型(EV71)和肠道病毒通用型(EV-U),用含有目的序列RNA的标准品制备标准曲线,对病毒进行准确定量,同时对该方... 目的建立一种针对手足口病病原体的快速准确检测方法。方法利用TaqMan-LNA探针建立多重荧光定量RT-PCR方法,同时检测肠道病毒71型(EV71)和肠道病毒通用型(EV-U),用含有目的序列RNA的标准品制备标准曲线,对病毒进行准确定量,同时对该方法的特异性、灵敏度、重复性进行评估。结果用TaqMan-LNA探针多重荧光RT-PCR法检测CoxA16、CoxB2、EV71病毒和其他人类病毒RNA,证实其特异性为100%;对EV71和EV-U的检测灵敏度均达到102拷贝/μl;将EV71和EV-U的RNA标准品进行重复性实验,其批内、批间变异系数分别为0.97%～2.02%和0.89%～2.13%。结论本方法灵敏度较高,特异性强,重复性好,适用于手足口病的临床检测。 展开更多

关键词 TaqMan-LNA探针 多重荧光定量RT-pcr 肠道病毒71型(EV71) 肠道病毒通用型(EV-U) 手足口病

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呼吸道合胞病毒A与B亚型多重荧光PCR检测方法的建立及应用 被引量：3

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作者 刘文宽 周荣 +4 位作者 陈德晖 檀卫平 邱淑燕 许多 李潇 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2016年第10期751-754,共4页

目的建立一种新的呼吸道合胞病毒(RSV)分型检测方法,用于快速检测和监测。方法针对RSV G基因设计引物、探针,并引入人β-actin基因(ACTB)作为内参质控,建立RSV-A、RSV-B多重荧光PCR检测方法。使用多种常用呼吸道病原体及体外转录RNA产... 目的建立一种新的呼吸道合胞病毒(RSV)分型检测方法,用于快速检测和监测。方法针对RSV G基因设计引物、探针,并引入人β-actin基因(ACTB)作为内参质控,建立RSV-A、RSV-B多重荧光PCR检测方法。使用多种常用呼吸道病原体及体外转录RNA产物考核其特异性和灵敏度。并对2015年1月至12月广州两家医院的儿童急性呼吸道感染患者进行检测。结果所建立的多重检测方法未见非特异性反应。RSV-A、RSV-B和ACTB分别可检测低至4、8和12 copies/μL的RNA模板,且分别在10~1×10^(10)copies/μL、100~1×10^(10)copies/μL和100~1×10^(10)copies/μL时具备良好的线性关系,线性相关系数r2均大于0.99。儿童急性呼吸道感染患者监测中,RSV-A为期间优势亚型。结论本研究所建立的RSV-A、RSV-B多重荧光PCR检测方法,具有较好的特异性、灵敏度、可操作性,可用于相关研究。 展开更多

关键词 呼吸道合胞病毒 呼吸道合胞病毒A亚型 呼吸道合胞病毒B亚型 荧光定量pcr 多重检测

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诺如病毒和轮状病毒多重荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：3

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作者 蒋立立 吴永彬 +5 位作者 刘志冰 何黎莹 黄杨 林晓燕 杨海英 王兴叶 《动物医学进展》 北大核心 2023年第3期43-48,共6页

诺如病毒和轮状病毒感染可引起临床高发且症状相似的胃肠炎,急需能够快速准确鉴定两种病毒的方法。用基因保守区域设计特异性引物和探针,通过引物优化、温度调整、性能评估等建立从粪便中特异性检出诺如病毒(GⅠ、GⅡ型)和A组轮状病毒... 诺如病毒和轮状病毒感染可引起临床高发且症状相似的胃肠炎,急需能够快速准确鉴定两种病毒的方法。用基因保守区域设计特异性引物和探针,通过引物优化、温度调整、性能评估等建立从粪便中特异性检出诺如病毒(GⅠ、GⅡ型)和A组轮状病毒试剂盒。结果显示,最低检测下限为1.0×10^(3)copies/mL,与当前交叉流行的其他16种病原均不发生特异性反应;组内及组间重复性良好,预混液在不同储存条件下,其检测能力与未处理组无差异。临床收集的276份腹泻样品,共检出诺如病毒GⅠ型15份,GⅡ型74份,A组轮状病毒45份,其检测结果与单一PCR检测结果一致。以上结果表明建立的三重荧光定量PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强、性能稳定等特点,将为2种3个型病毒的特异性检测和疫情防控提供技术支持。 展开更多

关键词 诺如病毒 轮状病毒 三重荧光定量pcr

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荧光多重PCR与血清型特异性抗体检测HSV感染的比较 被引量：2

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作者 赖维 苏向阳 +4 位作者 黄怀球 张玉清 万苗坚 陈荣章 C.Y.Cheng 《岭南皮肤性病科杂志》 2003年第1期1-4,共4页

目的 :比较荧光多重PCR和血清型特异性抗体测定在生殖器疱疹临床诊断中的应用价值及评价各自的优缺点。方法 :以细胞培养法作为“金标准”对照 ,分别用荧光多重PCR和血清型特异性抗体检测法对 1 2 1例临床诊断为生殖器疱疹的标本进行检... 目的 :比较荧光多重PCR和血清型特异性抗体测定在生殖器疱疹临床诊断中的应用价值及评价各自的优缺点。方法 :以细胞培养法作为“金标准”对照 ,分别用荧光多重PCR和血清型特异性抗体检测法对 1 2 1例临床诊断为生殖器疱疹的标本进行检测。结果 :以培养法作标准 ,并通过结果的差异性分析 ,荧光多重PCR的敏感性为 1 0 0 % ,特异性为 88 89% ;血清型特异性抗体测定则分别为77 68%和 77 78% ,荧光多重PCR的敏感性和特异性均显著高于血清型特异性抗体测 (P <0 0 5 ) ,但前者不能检测出无皮损患者HSV的DNA ,而后者可检测出无皮损患者中的HSV抗体。结论 :荧光多重PCR和血清型特异性抗体检测各有其自身的优缺点 ,单独用PCR和其它病毒分离的方法或单独使用血清特异性抗体检测的方法来诊断生殖器疱疹都是不完整的 ,均可造成漏诊。临床上将两种方法有机的结合起来应用能发挥各自的优势 ,取长补短 ,对早期、准确。 展开更多

关键词 荧光多重pcr 型特异性抗体 生死器疱疹 诊断

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参照多重PCR片段分析法进行实时荧光PCR法对ABCB1三等位基因测定结果读取方法的确定

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作者 张燕 蒙卓成 +4 位作者 邢欢 崔小花 杨柳 郑璇 戴尊孝 《四川精神卫生》 2022年第2期137-143,共7页

目的为解决实时荧光PCR法对三等位基因测定结果无法正常读取的问题,通过参照多重PCR片段分析法,确定实时荧光PCR法读取方法,实现临床对ABCB1三等位基因准确、简便且价格低廉的检测。方法收集西安市精神卫生中心2020年3月-2021年3月DNA样... 目的为解决实时荧光PCR法对三等位基因测定结果无法正常读取的问题,通过参照多重PCR片段分析法,确定实时荧光PCR法读取方法,实现临床对ABCB1三等位基因准确、简便且价格低廉的检测。方法收集西安市精神卫生中心2020年3月-2021年3月DNA样本2794例,抽取5%作为实验样本,分别进行实时荧光PCR法和多重PCR片段分析法测定。根据PCR曲线Ct值的比较以及多重PCR片段分析法碱基峰位强度的比较,对比分析两种方法的判读结果,对其中报告结果不相同的样本进行数据核查并确定PCR读取方法。结果共抽取139例样本,其中存在120例等位基因及19例三等位基因,实时荧光PCR法和多重PCR片段分析法对等位基因的检测结果完全一致。根据多重PCR片段分析结果,对19例三等位基因制定了实时荧光PCR法的读取方法:扩增曲线图中,当∣∣Ct._(G)-Ct._(T)∣-∣Ct._(G)-Ct._(A)∣∣<3,分别读取两组碱基Ct值小的碱基,将其组合形成判读结果;当∣∣Ct._(G)-Ct._(T)∣-∣Ct._(G)-Ct._(A)∣∣≥3,读取两组碱基Ct值最小的碱基,其纯合型即为判读结果。根据读取方法,修正实时荧光PCR法的测定结果为:1例G/G,1例A/A,4例T/G,5例T/A,8例T/T,与多重PCR片段分析法结果一致。结论通过多重PCR片段分析法制定实时荧光PCR法对ABCB1三等位基因的读取方法,两者判读结果一致性良好。 展开更多

关键词 实时荧光pcr法 多重pcr片段分析 三等位基因 ABCB1

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多重实时荧光PCR快速检测转基因大豆及其加工产品 被引量：20

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作者 王凤军 叶素丹 +2 位作者 包永华 周晓红 凌云 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第9期135-141,共7页

本研究运用多重实时荧光聚合酶链式反应技术(polymerase chain reaction,PCR)对转基因大豆及其深加工制品进行筛选检测。通过设计大豆内源基因植物凝集素(Lectin)和常用的外源基因花椰菜花叶病毒35S启动子(CaMV35S)、根癌农杆菌胭脂碱... 本研究运用多重实时荧光聚合酶链式反应技术(polymerase chain reaction,PCR)对转基因大豆及其深加工制品进行筛选检测。通过设计大豆内源基因植物凝集素(Lectin)和常用的外源基因花椰菜花叶病毒35S启动子(CaMV35S)、根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因终止(nos)的特异性引物和探针,反应条件和反应体系的优化,特异性、重复性和灵敏性的实验比对分析等开发建立了多重荧光定量PCR检测技术。以10%Roundup Ready转基因大豆标准品为材料,建立并优化转基因大豆的定量检测体系,对大豆中的转基因成分进行定量分析。结果表明:该方法重复性好,检测特异性强,扩增效率在90%～110%,标准曲线相关系数R2≥0. 98,确定了最低检测限为每20μL反应2. 4个拷贝。结论:由于使用多重实时荧光PCR技术,可实现一管多检的实际需要,降低试剂成本,缩短检测时间,为大豆及其深加工产品转基因成分的快速检测提供了有效方法,为促进农产品和食品进出口提供技术保障。 展开更多

关键词 转基因大豆 多重实时荧光pcr 快速检测 加工产品

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BHV-1、BRSV、BPIV-3和BVDV四重荧光PCR检测方法的建立与应用 被引量：6

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作者 姜利霞 王玉海 +6 位作者 何世成 胡巧云 王卫国 鲁杏华 武维保 谢怡灵 王昌建 《中国动物检疫》 CAS 2021年第10期98-106,共9页

为建立检测牛疱疹病毒(BHV-1)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)单一或混合感染的荧光PCR检测方法,根据BHV-1gB基因、BRSVF基因、BPIV-3 M基因和BVDV 5’UTR基因保守区序列分别设计特异性... 为建立检测牛疱疹病毒(BHV-1)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)单一或混合感染的荧光PCR检测方法,根据BHV-1gB基因、BRSVF基因、BPIV-3 M基因和BVDV 5’UTR基因保守区序列分别设计特异性引物和TaqMan荧光探针,经条件优化,成功建立了BHV-1、BRSV、BPIV-3和BVDV的四重荧光PCR检测方法。该方法对牛布鲁氏菌、猪瘟病毒、小反刍兽疫病毒、羊多杀性巴氏杆菌无特异性扩增;对BHV-1、BPIV-3和BVDV的最低检测量均为8.268 copies/μL,对BRSV的最低检测量为82.680 copies/μL;该方法重复性好,CV值为1%~2%。应用本方法检测采自湖南省内某屠宰场的865份样品,结果BHV-1、BRSV、BPIV-3和BVDV等4种病原均有检出,其阳性率分别为0.58%,0.81%,0.23%和0.81%。本研究建立的多重荧光PCR检测方法可同时对BHV-1、BRSV、BPIV-3和BVDV进行检测,为这4种病原的快速诊断和鉴别提供了技术支撑。 展开更多

关键词 多重荧光pcr 牛疱疹病毒1型 牛呼吸道合胞体病毒 牛副流感3型病毒 牛病毒性腹泻病毒

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猪肺炎支原体、猪圆环病毒2型和3型多重荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用 被引量：4

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作者 肖婷 何颖 +14 位作者 赵硕 蒋家霞 陈忠伟 郭旋 卢冰霞 林昌华 赵武 秦毅斌 段群棚 全琛宇 许心婷 陈婷婷 许艺兰 胡庭俊 张宁 《动物医学进展》 北大核心 2023年第2期8-14,共7页

为建立一种快速、特异的猪肺炎支原体(Mhp)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的多重荧光定量PCR鉴别检测方法,根据Mhp、PCV2和PCV3及β-actin基因保守区域序列,设计合成4对特异性引物及4种荧光基团标记的Taq Man探针。构建含... 为建立一种快速、特异的猪肺炎支原体(Mhp)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的多重荧光定量PCR鉴别检测方法,根据Mhp、PCV2和PCV3及β-actin基因保守区域序列,设计合成4对特异性引物及4种荧光基团标记的Taq Man探针。构建含有各目的基因的重组质粒标准品,筛选引物,优化反应条件,成功建立多重荧光定量PCR后评价该方法的特异性、敏感性、重复性并将该方法初步应用于临床样品检测。结果显示,该方法能同时特异性地鉴别检测Mhp、PCV2和PCV3,检测PRRSV、CSFV、PRV、JEV、PPV、PEDV、TGEV、FMDV病毒核酸无交叉反应;对Mhp、PCV2、PCV3和β-actin标准质粒的最小检出量分别为26.4、66.7、25.6、5990 copies/μL;该方法重复性好,组间和组内试验变异系数低于1.5%;用该方法检测101份临床样本,Mhp、PCV2和PCV3阳性率分别为20.8%、36.6%和33.7%。建立的多重荧光定量PCR方法能同时快速和定量检测Mhp、PCV2和PCV3,较普通PCR更敏感,实用性强,有效避免了多次检测耗时长、费用高的问题,为Mhp、PCV2和PCV3的监测和防控提供了可靠的检测技术。 展开更多

关键词 猪肺炎支原体 猪圆环病毒2型 猪圆环病毒3型 多重荧光定量pcr

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