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“一带一路”与区域经济发展——“交通7+1论坛”第六十一次会议
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作者 杜鹏 《交通运输系统工程与信息》 北大核心 2025年第3期1-4,共4页
甘肃省充分发挥“一带一路”核心通道区位优势,正经历从通道到新亚欧大陆桥枢纽的转变。在服务国家战略同时,围绕通道打造特色产业集群,将交通优势转化为产业优势。本次论坛以“‘一带一路’与区域经济发展”为主题,探讨甘肃省如何积极... 甘肃省充分发挥“一带一路”核心通道区位优势,正经历从通道到新亚欧大陆桥枢纽的转变。在服务国家战略同时,围绕通道打造特色产业集群,将交通优势转化为产业优势。本次论坛以“‘一带一路’与区域经济发展”为主题,探讨甘肃省如何积极服务、深度融入国家战略,推动战略通道互联互通和强链、补链,促进通道资源向多式联运集疏运体系的高效转换,不断促进区域经济发展。 展开更多
关键词 综合运输 一带一路 区域经济 运输通道 中欧班列
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甜瓜CmPIPs基因家族鉴定和表达模式分析
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作者 贺姜姜 金兰 +3 位作者 金苏日古嘎 李永 红雨 高峰 《华北农学报》 北大核心 2025年第1期53-62,共10页
对甜瓜CmPIPs基因家族鉴定和表达模式分析,为进一步探究甜瓜CmPIPs基因家族功能及甜瓜遗传改良提供理论依据和支持。利用TBtools、MEME、MEGA X、Plant-CARE工具对CmPIPs进行生物信息学分析,利用GraphPad Prism 10软件对CmPIP2;7在甜瓜... 对甜瓜CmPIPs基因家族鉴定和表达模式分析,为进一步探究甜瓜CmPIPs基因家族功能及甜瓜遗传改良提供理论依据和支持。利用TBtools、MEME、MEGA X、Plant-CARE工具对CmPIPs进行生物信息学分析,利用GraphPad Prism 10软件对CmPIP2;7在甜瓜授粉后不同时期中果皮中的表达量以及CmPIPs各成员在不同组织和不同浓度的植物激素处理幼叶中的表达量进行可视化解析。结果显示,CmPIP2;7与CsPIP2;8亲缘关系最近;12个CmPIPs家族成员主要分布在1,3,4,5,9,10,11号染色体上;除CmPIP2;8有3个外显子区,其余成员均有4个外显子区;CmPIPs各成员的启动子区域有多个顺式作用元件,如生长素、赤霉素、脱落酸等激素应答元件;CmPIP2;7在甜瓜的快速生长期以及成熟期的表达量显著上调;CmPIPs各家族成员在甜瓜的不同组织中均有表达;生长素浓度为40.0μmol/L时,CmPIP2;4表达量显著上调,CmPIP1;1、CmPIP2;1、CmPIP2;2和CmPIP2;3的表达量极显著下调;脱落酸浓度为0.4,4.0,40.0μmol/L时,CmPIP1;1、CmPIP2;1、CmPIP2;3、CmPIP2;9表达量均显著下调;茉莉酸甲酯浓度为44.640μmol/L时,CmPIP2;1和CmPIP2;5表达量显著下调,CmPIP2;2、CmPIP2;3、CmPIP2;7、CmPIP2;9表达量显著上调;乙烯利浓度为4.0 mmol/L时,CmPIPs各成员表达量均显著上调。明确了CmPIPs基因家族成员的基因结构、序列特征、进化关系以及共线性关系,对其表达模式进行了解析。 展开更多
关键词 甜瓜 基因家族 质膜内在蛋白 植物激素 表达特性
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CHO细胞基因组内稳定表达位点NW_003624203.1的鉴定
3
作者 谢润锋 朱梦娟 +2 位作者 石宇 陈东锋 徐庆刚 《四川动物》 北大核心 2025年第4期384-394,共11页
通过慢病毒感染CHO-K1细胞,以随机整合方法将ZsGreen1报告基因整合到CHO-K1基因组。经过连续多代的筛选,获得稳定表达ZsGreen1蛋白的重组CHO-K1细胞株。利用TAIL-PCR技术分离ZsGreen1报告基因在CHO-K1基因组内的整合位点,并利用CRISPR/C... 通过慢病毒感染CHO-K1细胞,以随机整合方法将ZsGreen1报告基因整合到CHO-K1基因组。经过连续多代的筛选,获得稳定表达ZsGreen1蛋白的重组CHO-K1细胞株。利用TAIL-PCR技术分离ZsGreen1报告基因在CHO-K1基因组内的整合位点,并利用CRISPR/Cas9技术和Bxb1整合酶系统在该位点定点整合了橙色荧光蛋白mOrange2基因和抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体基因,以验证该位点稳定表达外源蛋白的能力。结果表明,分离的稳定表达位点在CHO-K1细胞基因组NW_003624203.1上,位于616 bp处。定点整合构建的重组细胞在连续60代无血清悬浮培养过程中,能够稳定表达橙色荧光蛋白,并能稳定分泌表达单克隆抗体,培养上清中单克隆抗体含量可达14.9~21.6 mg·L-1。证实NW_003624203.1位点是CHO细胞基因组内的稳定表达位点,为使用位点特异性整合技术构建重组CHO细胞株提供了一种可行的方法。 展开更多
关键词 中国仓鼠卵巢(CHO) 稳定表达位点 位点特异性整合 CRISPR/Cas9 Bxb1整合酶
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茶文旅融合的场景表达及实现路径——以江苏茶博园为例
4
作者 姚培君 李萍萍 +1 位作者 史德林 诸雯静 《安徽农业科学》 2025年第15期101-105,共5页
为解决当前茶文旅项目开发浅表化、内容同质化、价值低端化等现实问题,引入场景理论构建茶文旅融合分析框架,深入探析茶文旅融合文化消费空间及其价值表达。研究发现,茶文旅融合场景包括茶文化、旅游者与服务者、茶文旅舒适物和茶文旅活... 为解决当前茶文旅项目开发浅表化、内容同质化、价值低端化等现实问题,引入场景理论构建茶文旅融合分析框架,深入探析茶文旅融合文化消费空间及其价值表达。研究发现,茶文旅融合场景包括茶文化、旅游者与服务者、茶文旅舒适物和茶文旅活动4类要素,茶文旅融合场景分析维度由地方原生性、符号感知性、价值表达性3个一级维度以及15个二级维度构成,并以江苏茶博园为例证实了该框架的可行性。探索了茶文旅融合场景表达的实践路径:一是优化舒适物布局,彰显场景地域属性;二是拓展茶文化功能,凝练场景符号体系;三是提升人本化理念,增强场景价值表达,以期促进茶文旅融合场景优化与创新,为茶文旅目的地非均质化和可持续性发展提供理论参考。 展开更多
关键词 茶文旅融合 场景理论 价值表达 江苏茶博园
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集成Kano-AHP-FCE方法的快递配送车设计
5
作者 唐茜 吴晓迪 +1 位作者 彭魏 罗英文 《机械设计与制造》 北大核心 2025年第8期372-376,384,共6页
为更好的挖掘用户对快递配送设备的相关需求,提升用户的满意度,采用Kano-AHP-FCE集成的方法进行快递配送车设计。首先,调研得出用户使用快递配送设备的需求种类,运用Kano模型对这些需求进行属性归类;其次,使用AHP层次分析法构建归类需... 为更好的挖掘用户对快递配送设备的相关需求,提升用户的满意度,采用Kano-AHP-FCE集成的方法进行快递配送车设计。首先,调研得出用户使用快递配送设备的需求种类,运用Kano模型对这些需求进行属性归类;其次,使用AHP层次分析法构建归类需求的评价体系,计算归类的需求权重,确定优先级后进行多款方案设计;最后,采用FCE模糊综合评价法对设计方案进行评价验证,选出最优设计方案并对其进行优化。评价结果显示方案贴切用户所需,提高了用户满意程度。在快递配送车设计中,Kano-AHP-FCE集成方法能够较好的分析用户需求,确定需求重点,准确定位用户与产品之间的矛盾,为相关快递配送方式提供了新的参考。 展开更多
关键词 快递配送车设计 KANO模型 层次分析法 模糊综合评价
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轨道交通成网背景下公交网络体系重构及线路优化关键技术分析
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作者 颜建新 王涛 +2 位作者 胡欣媛 马洪生 吕楠 《都市快轨交通》 北大核心 2025年第4期10-21,共12页
针对大城市轨道交通成网后各层次公交线路功能不明确、定位不清晰,且与轨道交通融合不足等问题,从“3维体系、2维线网、1维线路”等多维度出发,重构“以轨道交通为主导”的一体化公共交通网络体系,详细解析轨道交通-公交“双网”融合实... 针对大城市轨道交通成网后各层次公交线路功能不明确、定位不清晰,且与轨道交通融合不足等问题,从“3维体系、2维线网、1维线路”等多维度出发,重构“以轨道交通为主导”的一体化公共交通网络体系,详细解析轨道交通-公交“双网”融合实施策略,分层次、分步骤地提出“快-干-支”公交线网优化方法及实施路径,并将理论方法应用于成都市公交线网体系改革。研究结果表明:成都市公共交通线网一体化统筹与轨道交通-公交“双网”融合得到大幅改善,对于其他大城市系统性开展公共交通网络构建与分层次公交线网优化提供良好的参考。 展开更多
关键词 城市轨道交通规划 双网融合 分层次公交线网 公交快线 公交干线 公交支线
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Ophiostoma piceae胆固醇酯酶在毕赤酵母中的高效表达
7
作者 郭子妍 毛文刚 +3 位作者 林红 高文欣 王月峰 舒正玉 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第16期36-42,共7页
微生物源甾醇酯酶资源的匮乏,制约了甾醇绿色加工技术的普及推广。Ophiostoma piceae胆固醇酯酶(Ophistoma picae steryl esterase,OPE)是到目前为止,第一个报道的真正微生物源胆固醇酯酶。实现OPE的工业化生产,将有效解决该技术瓶颈。... 微生物源甾醇酯酶资源的匮乏,制约了甾醇绿色加工技术的普及推广。Ophiostoma piceae胆固醇酯酶(Ophistoma picae steryl esterase,OPE)是到目前为止,第一个报道的真正微生物源胆固醇酯酶。实现OPE的工业化生产,将有效解决该技术瓶颈。为提高其在毕赤酵母中的表达水平,该研究分别考察了基因拷贝数、分泌信号类型和共表达二硫键异构酶对ope基因在P.pastoris中高效表达的影响。结果表明,上述3种因素均可在一定程度上提高重组OPE产量,其中共表达二硫键异构酶的作用最为显著。筛选到的最高表达量的重组P.pastoris菌株,其胞外OPE产量为(27.4±0.8)U/mL,较优化前提高了161.18倍。高效表达ope基因的重组P.pastoris菌株的构建与筛选,将为后续重组OPE的应用奠定基础。 展开更多
关键词 Ophiostoma piceae胆固醇酯酶 毕赤酵母 基因多拷贝重组 信号肽 蛋白质二硫键异构酶 异源高效表达
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农村婚礼仪式品味的变迁与“城里人”想象——以豫东P村为例
8
作者 张敦福 高夏丽 《上海大学学报(社会科学版)》 CSSCI 北大核心 2024年第6期95-109,共15页
在城乡一体化进程中,农村婚礼仪式无论在形式还是内容上都发生了巨大变化。基于对豫东P村村民的半结构访谈和参与观察所获得的经验材料,通过对农村婚礼仪式品味变迁的研究可以发现:传统农村婚礼仪式的品味旨在形式与意义一体化的文化表... 在城乡一体化进程中,农村婚礼仪式无论在形式还是内容上都发生了巨大变化。基于对豫东P村村民的半结构访谈和参与观察所获得的经验材料,通过对农村婚礼仪式品味变迁的研究可以发现:传统农村婚礼仪式的品味旨在形式与意义一体化的文化表达;而在城乡社会流动、文化融合及消费模式的转变过程中,婚庆公司的介入为农村青年期望通过“城里人”想象的构建提升审美水平进而实现自我认同与社会认同提供了可能。在农村婚礼仪式的现代化演化过程中,视觉消费与体验成为婚礼举办者与参与者共同关注的核心,农村青年通过对时尚婚礼的模仿,在一定程度上实现了品味提升需求的虚假满足。然而,因文化资本获得性差异,“城里人”想象处于一种未竟状态,以婚礼仪式为代表的城乡间青年审美品味区隔仍难破除。 展开更多
关键词 城乡一体化 婚礼仪式 品味变迁 文化表达
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基于规则判别的末端配送停留点识别与出行链特征
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作者 姜晓红 陈庆炜 +2 位作者 严亚丹 韩兵 李家伟 《交通运输系统工程与信息》 EI CSCD 北大核心 2024年第6期232-241,共10页
响应需求的末端配送方案可显著提升顾客满意度,识别并提取末端配送快递三轮车配送停留点特征是分析配送时空分布和动态需求的基础。因此,本文提出结合兴趣点(POI)与停留时长规则的停留点识别方法。首先,利用POI信息和瞬时速度初步筛选... 响应需求的末端配送方案可显著提升顾客满意度,识别并提取末端配送快递三轮车配送停留点特征是分析配送时空分布和动态需求的基础。因此,本文提出结合兴趣点(POI)与停留时长规则的停留点识别方法。首先,利用POI信息和瞬时速度初步筛选快递三轮车轨迹数据;然后,引入停留时长阈值作为二次筛选条件;最后,合并临近的聚集点,形成完整的停留点集。采用人工校验识别结果的准确性,并借助熵率法计算停留链的熵率,量化评估不同识别方法的精确度。以苏州市顺丰速运快递网点的快递三轮车配送轨迹数据为实证对象,将所提出的方法与货运卡车停留点识别中常用的基于密度的聚类算法(Density-Based Spatial Clustering of Applications with Noise,DBSCAN)进行对比分析。结果表明,DBSCAN算法易将交通信号灯等待误判为配送停留点,而本文所提出的方法则有效规避了该问题,实现高达98%的精确率和召回率;同时,熵率法的应用进一步验证了所提方法在准确率上的有效性。在此基础上,扩大研究范围并识别配送停留点后,分析快递三轮车的出行链与配送时空分布特征。结果表明,8:00左右的高峰期配送车辆数显著多于16:00左右的高峰期;住宅区为配送热点,车辆数最多,且出行距离和工作时长最长;酒店类配送呈现停留时长较短的特点;此外,停留点空间分布亦揭示了部分配送距离偏远的情况。 展开更多
关键词 综合运输 货物运输组织 停留点识别 规则判别 快递三轮车 末端配送 出行链特征
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面向客流的市域与城轨贯通运营下快慢车开行方案优化 被引量:2
10
作者 任艾 孟令云 +2 位作者 王义惠 黄雯铮 任苒 《北京交通大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期153-163,共11页
为顺应当前市域铁路与城轨线路贯通运营的发展趋势,基于市域与城市轨道交通线路终点对接的衔接形式,市域铁路开行快慢车,城轨开行站站停列车的运营模式,通过路径客流分配,对贯通运营条件下列车开行方案进行优化.以乘客出行成本及企业运... 为顺应当前市域铁路与城轨线路贯通运营的发展趋势,基于市域与城市轨道交通线路终点对接的衔接形式,市域铁路开行快慢车,城轨开行站站停列车的运营模式,通过路径客流分配,对贯通运营条件下列车开行方案进行优化.以乘客出行成本及企业运营成本最小化为目标,考虑客流出行需求、线路通过能力等约束构建双目标非线性整数规划模型,并设计遗传算法进行求解.结合重庆轨道交通5号线与江跳线,从市域与城轨本线及跨线客流出行时间、列车停站及运行成本两方面,对换乘、贯通运营及快慢车等不同运营模式组合下列车开行方案进行对比分析,验证模型的有效性.研究结果表明:较换乘衔接模式,市域铁路与城市轨道交通贯通运营条件下开行快慢车的运营模式下的乘客出行时间降低了2.92%,企业总运营成本降低了4.88%;该模式适用于跨线出行需求较大的线路,满足跨线乘客从郊区至中心城区的快速出行需求.研究成果可以从运输组织层面为市域铁路与城市轨道交通的高效融合提供理论支持. 展开更多
关键词 列车开行方案 市域铁路 城市轨道交通 贯通运营 快慢车
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客观赋权对快捷货运各方式间临界运距影响分析 被引量:3
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作者 孙宗胜 帅斌 +1 位作者 杨俊杰 许旻昊 《交通运输系统工程与信息》 EI CSCD 北大核心 2024年第2期45-52,共8页
我国交通运输已由各方式间独立发展向一体化融合发展转变,快捷货物运输是综合交通运输融合发展的新兴关键领域,其各运输方式间临界运距的研究对合理运输结构的确定具有重要意义。针对既有研究对于临界运距问题主观赋权的不足,本文首先... 我国交通运输已由各方式间独立发展向一体化融合发展转变,快捷货物运输是综合交通运输融合发展的新兴关键领域,其各运输方式间临界运距的研究对合理运输结构的确定具有重要意义。针对既有研究对于临界运距问题主观赋权的不足,本文首先基于快捷货运分担率模型建立临界运距与服务属性及权重系数表达式,然后基于CRITIC(Criteria Importance Though Intercriteria Correlation)法对权重系数进行客观测算,最后通过实例进行模型分析验证及结果对比。实例结果表明:客观赋权法可以使各服务属性权重系数随运距增加而产生异质性;经济性在300~400 km和900~1100 km内波动幅度最大;便捷性与经济性的运距临界点为327 km,其重要程度随运距增加会高于经济性;客观赋权对快捷货运各方式间临界运距的影响主要体现在高铁快运绝对优势运距区间的扩大,由主观赋权下700~1500 km转变为400~2000 km。 展开更多
关键词 综合运输 临界运距 客观赋权 快捷货物 CRITIC法
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基于药理学分析巴戟天治疗阿尔茨海默病的机制 被引量:2
12
作者 丁其莹 刘鑫源 +4 位作者 覃佳运 吴永雷 肖连臣 周兰庭 李珍珍 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2024年第16期36-46,共11页
目的:基于网络药理学、分子对接和GEO数据分析巴戟天治疗阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的潜在靶点和作用机制。方法:利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP),获取巴戟天的主要活性成分,用SwissTargetPrediction获取巴... 目的:基于网络药理学、分子对接和GEO数据分析巴戟天治疗阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的潜在靶点和作用机制。方法:利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP),获取巴戟天的主要活性成分,用SwissTargetPrediction获取巴戟天全部作用靶点。从DrugBank、PathCard、Chemogenomic Database和PubChem数据库获得AD相关靶点。使用韦恩图取交集,得到巴戟天治疗AD的共同作用靶点。利用Cytoscape3.8.0构建靶点的“成分-靶点”网络图,并分析靶点的相互作用PPI网络图、基因本体论(GO)和KEGG信号通路等。使用Autodock对关键成分和靶点进行分子对接,并用Pymol和Discovery Studio展示对接结果。最后利用GEO数据库Alzdata分析关键靶点基因在AD中的表达。结果:预测得到巴戟天的50种主要活性成分,636个作用靶点,674个AD相关靶点,其中巴戟天治疗AD共同靶点124个。GO富集分析得到蛋白质磷酸化、磷酸化的正调控、细胞对氮化合物的反应、水解酶活性的调节、细胞对化学刺激的反应。KEGG富集分析显示阿尔茨海默病为最显著的通路。分子对接显示,巴戟天的5个核心成分2-羟基-1,5-二甲氧基-6-(甲氧基甲基)-9,10-蒽醌、1-羟基-3-甲氧基-9,10-蒽醌、大黄素-A、甲基异茜草素、甲基异茜草素-1-甲醚和3个核心靶点EGFR、PARP1、FTO的结合较好,并且Egfr在AD病人中显著(P<0.05)上调表达,Parp1和Fto在AD病人中显著(P<0.05)下调表达。结论:巴戟天可能通过多个成分、多个靶点、多个通路,参与调控AD疾病进程。 展开更多
关键词 巴戟天 阿尔茨海默病 整合药理学 分子对接 基因表达数据分析
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西夏钱币中的中华文化视觉表达
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作者 刘宇心 陈刚 《西北民族大学学报(哲学社会科学版)》 CSSCI 北大核心 2024年第3期166-176,共11页
辽宋夏金货币经济的一体化促进了这一时期各民族间的交往,货币成为经济交往的重要纽带。在民族融合与商品经济发展的背景下,西夏钱币成为民族交往交流交融的重要纪录之一。西夏钱币效仿中原货币制度,宋夏文化的交融推动了西夏货币经济... 辽宋夏金货币经济的一体化促进了这一时期各民族间的交往,货币成为经济交往的重要纽带。在民族融合与商品经济发展的背景下,西夏钱币成为民族交往交流交融的重要纪录之一。西夏钱币效仿中原货币制度,宋夏文化的交融推动了西夏货币经济制度走向成熟。西夏钱币的艺术设计,借鉴吸收了中原货币的文化观念及其形式,实现了货币在经济制度和视觉形象层面的有效融合。西夏钱币艺术所表征的中华民族共有的精神信仰、价值观念与审美情感,使宋夏文化在钱币铸造中实现了文化与艺术交融,见证了少数民族吸收中原文化,共同促进中华文化多元一体的发展进程。 展开更多
关键词 西夏钱币 中华文化 交往交流交融 视觉表达
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枯草芽孢杆菌的研究与应用 被引量:87
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作者 李明 双宝 +2 位作者 李海涛 王晴 高继国 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期111-114,共4页
枯草芽孢杆菌是革兰氏阳性细菌,能形成芽孢,是一些重要工业酶制剂的生产菌。由于其具有非致病性、分泌蛋白能力强的特性和良好的发酵基础,所以应用十分广泛。文章通过总结归纳其在医药、农业和其他研究领域的应用现状,分析其应用中存在... 枯草芽孢杆菌是革兰氏阳性细菌,能形成芽孢,是一些重要工业酶制剂的生产菌。由于其具有非致病性、分泌蛋白能力强的特性和良好的发酵基础,所以应用十分广泛。文章通过总结归纳其在医药、农业和其他研究领域的应用现状,分析其应用中存在的问题和产生问题的原因,希望能够为从事此领域研究的人员提供参考。 展开更多
关键词 枯草杆菌 应用 表达系统 细胞质融合
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湖北白猪导入OMT/PGH基因的整合、表达和遗传 被引量:27
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作者 魏庆信 樊俊华 +4 位作者 陈东宝 李绍章 胡宏宇 华文君 王翀 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第6期606-611,共6页
以湖北白猪为实验材料,显微注射OMT/PGH基因(绵羊启动子和猪生长激素的融合基因)于1125枚1~4细胞期的早期胚胎核内,共产仔167头,产仔率14.8%。Dot(斑点杂交)和Southern blot(印迹转膜杂交)检测,29头阳性,阳性率17.9%。通过传代进行转... 以湖北白猪为实验材料,显微注射OMT/PGH基因(绵羊启动子和猪生长激素的融合基因)于1125枚1~4细胞期的早期胚胎核内,共产仔167头,产仔率14.8%。Dot(斑点杂交)和Southern blot(印迹转膜杂交)检测,29头阳性,阳性率17.9%。通过传代进行转基因的遗传分析。G_0×G_0的配种组合,产仔63头,其中阳性20头,阳性率31.7%;G_0×非转基因猪的组合,产仔66头,其中阳性10头,阳性率15.2%。对11头G_0猪血清用放射免疫法测定的结果,其生长激素的浓度相当于对照组的2.03~6.70倍。16头G_0猪180日龄的生长速度比同窝对照提高11.8%;11头G_1猪比同窝对照提高14.8%,饲料转化率提高10%,瘦肉率有提高的趋势。 展开更多
关键词 OMT/PGH 基因 表达 遗传
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整合型诱导表达猪生长激素(pGH)载体的构建及表达研究 被引量:8
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作者 鞠辉明 白立景 +1 位作者 姜星 李奎 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1008-1013,共6页
旨在构建整合型诱导表达猪生长激素(Porcine growth hormone,pGH)载体,在细胞水平验证其诱导效率及表达效率。从pTRE-GH12载体上扩增TRE-GH片段,通过Sal I酶切位点连接到pCAGGS-rtTA载体中,构建重组载体pCAGGS-rtTA-TRE-GH12(下称pTTGH)... 旨在构建整合型诱导表达猪生长激素(Porcine growth hormone,pGH)载体,在细胞水平验证其诱导效率及表达效率。从pTRE-GH12载体上扩增TRE-GH片段,通过Sal I酶切位点连接到pCAGGS-rtTA载体中,构建重组载体pCAGGS-rtTA-TRE-GH12(下称pTTGH),将pTTGH质粒转染猪PK15细胞,经G418筛选后,在培养液中添加诱导底物强力霉素(Doxycycline,DOX)后不同时间段通过实时荧光定量PCR(QRT-PCR)测定细胞内pGH mRNA的表达;在培养液中添加不同浓度的的DOX,通过QRT-PCR及Western blot测定细胞内pGH的表达变化。酶切及测序结果表明成功构建了pTTGH载体;QRT-PCR结果表明,和对照组相比,试验组细胞培养液中添加诱导底物后外源GH基因表达在36h时最高;在一定浓度范围内,外源GH表达水平和添加DOX的浓度呈现出正相关性,而正常细胞组中GH的表达水平不受DOX添加与否及量的影响。通过条带灰度分析Western杂交结果验证了培养基中一定范围内DOX浓度和pGH表达量呈现出正相关。试验结果表明,本研究成功构建了整合型诱导表达GH载体并能实现GH的可控表达,本研究为以后制备可控表达GH转基因动物、进一步研究GH对机体影响奠定基础。 展开更多
关键词 诱导表达 猪生长激素 整合型 真核表达载体
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利用同源重组质粒pUTK转化蓝藻Synechococc us sp.PCC7942及胸腺素α_1的表达 被引量:10
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作者 章军 宋新强 +2 位作者 徐虹 陈天圣 楼士林 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期1-3,34,共4页
采用本实验室构建的丝状蓝藻Calothrixsp.PCC7601基因整合平台系统供体质粒pUTK转化单胞蓝藻Synechococcussp.PCC7942,通过抗性筛选获得了具卡那霉素抗性的转化藻株。经Southern杂交证实 pUTK部分序列已整合到Synechococcussp.7942染色... 采用本实验室构建的丝状蓝藻Calothrixsp.PCC7601基因整合平台系统供体质粒pUTK转化单胞蓝藻Synechococcussp.PCC7942,通过抗性筛选获得了具卡那霉素抗性的转化藻株。经Southern杂交证实 pUTK部分序列已整合到Synechococcussp.7942染色体DNA上 ;红光诱导后通过蛋白质SDS PAGE电泳 ,Westernblot证实 pUTK的胸腺素α1 基因得以有效表达,表达量达到总蛋白的4.8 %。结果表明,基因整合平台系统供体质粒 pUTK不仅可转化丝状蓝藻Calothrixsp.PCC7601,还可转化单胞蓝藻Synechococcussp.PCC7942。 展开更多
关键词 蓝藻Wynechococcus sp.PCC9742 同源重组 胸腺素α 转基因 抗性筛 卡那霉素抗性
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稳定高效表达木糖还原酶基因工业酿酒酵母的构建及木糖醇发酵的初步研究 被引量:13
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作者 李敏 马涛 +2 位作者 生举正 郭亭 鲍晓明 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期1-5,共5页
将树干毕赤氏酵母(Pichia stipitis)木糖还原酶基因XYL1连接到适用于酿酒酵母工业菌株的多拷贝整合载体pYMIKP中,构建得到表达质粒pYMIKP-XYL1,转化酿酒酵母工业菌株Saccharomyces cerevisiae6508。在G418平板上筛选转化子,得到含高拷... 将树干毕赤氏酵母(Pichia stipitis)木糖还原酶基因XYL1连接到适用于酿酒酵母工业菌株的多拷贝整合载体pYMIKP中,构建得到表达质粒pYMIKP-XYL1,转化酿酒酵母工业菌株Saccharomyces cerevisiae6508。在G418平板上筛选转化子,得到含高拷贝木糖还原酶基因的酿酒酵母重组菌株XGH2,,该菌株的木糖还原酶比活力为0.8 U/mg(蛋白),比出发菌株提高了80倍以上,表明外源基因在工业菌株中实现了高效表达。摇瓶发酵结果显示,重组菌株XGH2木糖消耗为27.9 g/L,木糖消耗率为51%;木糖醇产量为30.2 g/L,木糖醇的转化率大于1.0 g/g木糖。 展开更多
关键词 木糖还原酶 木糖酵 整合表达 酿酒酵母 工业菌株
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基于STEP应用协议开发方法的产品建模与实现 被引量:9
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作者 周受钦 谢友柏 《计算机集成制造系统-CIMS》 EI CSCD 北大核心 2001年第1期29-34,共6页
分析了集成信息CAD系统中要解决的产品模型信息描述问题。基于STEP标准和IDEF产品建模方法 ,提出了基于功能层的产品信息建模和产品信息模型的三层结构 :功能层、广义零件层和广义结构层。以工程中业已标准化的滚动轴承为对象 ,建立了基... 分析了集成信息CAD系统中要解决的产品模型信息描述问题。基于STEP标准和IDEF产品建模方法 ,提出了基于功能层的产品信息建模和产品信息模型的三层结构 :功能层、广义零件层和广义结构层。以工程中业已标准化的滚动轴承为对象 ,建立了基于STEP标准的产品功能信息EXPRESS描述模型 ,提出了信息模型组织、传递和实现的原型框架 ,为集成信息CAD系统的信息集成中性环境的建立与实现提供了基础。 展开更多
关键词 STEP 功能模型 滚动轴承 产品建模 CAD 应用协议
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一株产朊假丝酵母菌表达体系的研究初报 被引量:6
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作者 杨红兰 王炜 +3 位作者 包慧芳 崔春生 山其木格 胡爽 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2008年第3期462-466,共5页
产朊假丝酵母是一种GRAS生物,已经作为添加剂广泛应用于食品和化妆品行业。它在作为宿主菌的表达系统方面的研究也有报道。但目前国内尚无产朊假丝酵母通用的高效表达体系的报道。简单介绍了其在国内外的研究进展。并以青贮饲料中的一... 产朊假丝酵母是一种GRAS生物,已经作为添加剂广泛应用于食品和化妆品行业。它在作为宿主菌的表达系统方面的研究也有报道。但目前国内尚无产朊假丝酵母通用的高效表达体系的报道。简单介绍了其在国内外的研究进展。并以青贮饲料中的一株产朊假丝酵母为出发菌株,结合项目研究,就构建产朊假丝酵母表达载体的几个元件进行重点评述。研究结果表明:初步构建了一种产朊假丝酵母通用的整合表达载体,对其表达体系的应用进行了初步探索。为微生物青黄贮菌剂的分子改良及应用提供一定的理论基础。 展开更多
关键词 产朊假丝酵母 表达体系 整合表达 同源序列
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