血管性痴呆大鼠海马CA1区自噬及微管相关蛋白1轻链3的表达 被引量：11

1

作者 刘斌 唐静 +1 位作者 袁敏 李世英 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期940-945,共6页

目的观察血管性痴呆(vascular dementia,VD)模型大鼠海马CA1区自噬及微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1light chain 3,MAP1LC3,LC3)的表达,探讨自噬在血管性痴呆发病中的可能作用。方法大鼠随机分为假手术组(sham组... 目的观察血管性痴呆(vascular dementia,VD)模型大鼠海马CA1区自噬及微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1light chain 3,MAP1LC3,LC3)的表达,探讨自噬在血管性痴呆发病中的可能作用。方法大鼠随机分为假手术组(sham组)、血管性痴呆模型组(VD组)和Wortmannin自噬抑制剂组(WM组),每组又随机分为模型制备后1、2、4、8、12周5个亚组。采用四血管阻断法制作血管性痴呆模型,Morris水迷宫法检测学习记忆能力,透射电镜观察自噬体的形成,蛋白质印迹法检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值作为自噬活性的指标。结果与假手术组相比,VD组大鼠平均逃避潜伏期延长(P<0.05或0.01),穿越平台次数减少(P<0.05或0.01);与VD组比较,WM组大鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05或0.01),穿越平台次数增加(P<0.05或0.01)。VD组大鼠海马CA1区1周时神经细胞核膜凹陷,胞核浓缩,线粒体肿胀,可见自噬体、溶酶体;4周时自噬体、溶酶体数量显著增多;12周时仍可见自噬体。WM组神经元损伤较VD组减轻,自噬体数量减少。VD组大鼠海马CA1区LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值在1周时升高,4周时达到高峰,8周时开始下降,12周时仍较高。WM组各时间点LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值较VD组低,差异有统计学意义(P<0.05或0.01)。结论血管性痴呆大鼠海马CA1区自噬活性被激活,可能参与了血管性痴呆的发生发展。 展开更多

关键词 血管性痴呆 海马 自噬 微管相关蛋白1轻链3

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Beclin 1与LC3蛋白在腮腺多形性腺瘤及腮腺癌在多形性腺瘤中的表达和意义 被引量：8

2

作者 李冉 李磊 +2 位作者 刘江 杨国海 姚雅琳 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第13期1293-1296,共4页

目的探讨自体吞噬相关基因Beclin 1和微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain3,LC3)表达和腮腺肿瘤之间的关系。方法所用组织取自本院2001-2009年手术标本,用免疫组化法和免疫印迹法检测20例正常腮腺组织,37... 目的探讨自体吞噬相关基因Beclin 1和微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain3,LC3)表达和腮腺肿瘤之间的关系。方法所用组织取自本院2001-2009年手术标本,用免疫组化法和免疫印迹法检测20例正常腮腺组织,37例腮腺多形性腺瘤,41例癌在多形性腺瘤中Beclin 1和LC3的表达,并结合临床病理因素进行分析。结果 Beclin 1、LC3在正常腮腺组织表达为(1.045±0.002)、(0.779±0.047),在腮腺多形性腺瘤中表达下降[(0.419±0.051)、(0.243±0.023),P<0.05],在癌在多形性腺瘤中二者阳性表达显著下降[(0.173±0.008)、(0.051±0.010),P<0.05]。淋巴结转移及TNM分期与Beclin 1的表达间有明显差异(P<0.05),不同侵袭性,不同淋巴结转移组与LC3的表达间有明显差异(P<0.05)。结论 Beclin 1和LC3在腮腺多形性腺瘤及癌在多形性腺瘤中表达下调,自体吞噬功能改变可能在腮腺肿瘤形成过程中具有一定作用。 展开更多

关键词 多形性腺瘤 癌在多形性腺瘤中 自体吞噬 BECLIN 1 微管相关蛋白1轻链3

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免疫抑制剂治疗对阿尔茨海默病大鼠海马自噬蛋白Beclin-1和LC3表达的影响 被引量：8

3

作者 王晓平 黄斌 +2 位作者 马帅 黄睿 李晓佳 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期450-454,共5页

目的分析免疫抑制剂治疗对阿尔茨海默病大鼠海马自噬蛋白Beclin-1与微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)表达的影响。方法将雄性SD大鼠采用Aβ25-35侧脑室注射法制备阿尔茨海默病模型大鼠,将制备... 目的分析免疫抑制剂治疗对阿尔茨海默病大鼠海马自噬蛋白Beclin-1与微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)表达的影响。方法将雄性SD大鼠采用Aβ25-35侧脑室注射法制备阿尔茨海默病模型大鼠,将制备的阿尔茨海默病大鼠随机分为4组:模型组、吗替麦考酚酯高剂量组(0.8 g/kg)、吗替麦考酚酯低剂量组(0.4 g/kg)和阳性药多奈哌齐组(0.5 g/kg)。对照组与模型组给予生理盐水,吗替麦考酚酯高剂量组、吗替麦考酚酯低剂量组和阳性药多奈哌齐组均给予对应药物灌胃处理,所有大鼠连续给药4周,检测所有大鼠的识别指数、水迷宫实验、小脑Tunel染色及采用Western blot实验分析海马组织的Beclin-1与LC3蛋白表达。结果与对照组比较,模型组的识别指数和穿环次数明显降低(均P<0.05),潜伏期和游泳距离明显增加(均P<0.05);与模型组比,吗替麦考酚酯低剂量组、高剂量组和阳性药组的识别指数和穿环次数明显增加(均P<0.05),潜伏期和游泳距离明显降低(均P<0.05)。镜下显示,凋亡的小脑神经细胞呈棕色,与对照组比较,模型组凋亡的小脑神经细胞明显增多;与模型组比较,吗替麦考酚酯低剂量组、高剂量组和阳性药组凋亡的小脑神经细胞明显减少。与对照组比较,模型组大鼠海马的Beclin-1和LC3表达明显降低(均P<0.05);与模型组比较,吗替麦考酚酯低剂量组、高剂量组和阳性药组Beclin-1和LC3表达明显增加(均P<0.05),且吗替麦考酚酯组中,凋亡的小脑神经细胞减少及Beclin-1和LC3表达增高均呈剂量依赖性趋势。结论吗替麦考酚酯可以改善阿尔茨海默病大鼠的学习认知能力,其机制可能与增强自噬水平和提高自噬蛋白Beclin-1和LC3表达相关。 展开更多

关键词 免疫抑制剂 吗替麦考酚酯 阿尔茨海默病 海马 自噬 BECLIN-1 微管相关蛋白1轻链3

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Beclin 1和LC3在腮腺多形性腺瘤及癌在多形性腺瘤中的表达和意义 被引量：3

4

作者 李磊 李冉 +2 位作者 刘江 杨国海 姚雅琳 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期585-588,共4页

目的:探讨自噬相关基因Beclin1和微管相关蛋白LC3表达和腮腺肿瘤之间的关系。方法:用免疫组化方法检测20例正常腮腺组织、37例腮腺多形性腺瘤、41例癌在多形性腺瘤中Beclin1和LC3的表达,并结合临床病理因素进行分析。结果:Beclin1在正... 目的:探讨自噬相关基因Beclin1和微管相关蛋白LC3表达和腮腺肿瘤之间的关系。方法:用免疫组化方法检测20例正常腮腺组织、37例腮腺多形性腺瘤、41例癌在多形性腺瘤中Beclin1和LC3的表达,并结合临床病理因素进行分析。结果:Beclin1在正常腮腺组织、腮腺多形性腺瘤、癌在多形性腺瘤中的阳性率分别为100%、92%、63%;LC3在这3种组织的阳性表达率分别为100%、86%、56%。淋巴结转移及TNM分期与Beclin1的表达间有显著性关系(P<0.05),不同侵袭性、有无淋巴结转移与LC3的表达间有显著性关系(P<0.05)。结论:Beclin1和LC3在腮腺多形性腺瘤及癌在多形性腺瘤中表达下调,自噬功能改变可能在腮腺肿瘤形成中具有一定作用。 展开更多

关键词 自噬 BECLIN1 微管相关蛋白1轻链3

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微管相关蛋白1轻链3和雷帕霉素靶蛋白在吸烟与不吸烟口腔白斑患者中的表达及临床意义 被引量：4

5

作者 董小琳 柳志文 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期19-24,共6页

目的研究自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3(LC3B)和雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在吸烟与不吸烟口腔白斑(OLK)患者中的表达情况及相互关系,探讨吸烟与OLK恶变潜能的关系。方法采用免疫组织化学法检测LC3B和mTOR在120例OLK组织中的表达,回顾性分... 目的研究自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3(LC3B)和雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在吸烟与不吸烟口腔白斑(OLK)患者中的表达情况及相互关系,探讨吸烟与OLK恶变潜能的关系。方法采用免疫组织化学法检测LC3B和mTOR在120例OLK组织中的表达,回顾性分析吸烟者与不吸烟者的临床资料,探讨吸烟与LC3B和mTOR表达及其与各临床因素之间的关系。结果吸烟与不吸烟OLK患者在性别、年龄、病变部位、病理分型及恶变情况均存在差异,LC3B在不吸烟组中的阳性率高于相应的吸烟组,而mTOR在吸烟组中的阳性率则高于相应的不吸烟组,差异均有统计学意义(P<0.05),吸烟情况与mTOR阳性率呈正相关(P<0.05),与LC3B的表达无明显相关性,LC3B与mTOR阳性表达率随吸烟情况的加重呈负相关(P<0.05)。结论吸烟对OLK的影响可能与自噬相关蛋白的表达有关。 展开更多

关键词 微管相关蛋白1轻链3 雷帕霉素靶蛋白 吸烟 口腔 白斑

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A型主动脉夹层组织Beclin1及微管相关蛋白1轻链3的表达及意义 被引量：1

6

作者 唐杨烽 韩林 +4 位作者 徐激斌 宋智钢 陆方林 邹良建 徐志云 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期946-948,共3页

目的探讨自噬相关蛋白Beclin1及微管相关蛋白1轻链3(LC3)在A型主动脉夹层组织中的表达及意义。方法选取因A型主动脉夹层(AD)而于我院行手术治疗患者术中切除的主动脉壁组织标本20例作为AD组,以尸检者的正常胸主动脉(NA)壁组织标本10例... 目的探讨自噬相关蛋白Beclin1及微管相关蛋白1轻链3(LC3)在A型主动脉夹层组织中的表达及意义。方法选取因A型主动脉夹层(AD)而于我院行手术治疗患者术中切除的主动脉壁组织标本20例作为AD组,以尸检者的正常胸主动脉(NA)壁组织标本10例作为对照。采用免疫组化染色及蛋白质印迹技术检测血管组织中Beclin1及LC3蛋白的定位及表达差异。结果 A型主动脉夹层主动脉壁组织中Beclin1及LC3蛋白主要定位表达于血管平滑肌细胞,且含量高于正常对照组织(P<0.05)。结论 A型主动脉夹层主动脉壁中血管平滑肌细胞的自噬活性明显增强,可能与疾病的发生发展相关。 展开更多

关键词 自噬 夹层动脉瘤 主动脉 血管平滑肌细胞 BECLINL 微管相关蛋白1轻链3

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新生期大鼠反复惊厥后皮层微管相关蛋白1轻链3的表达及干预

7

作者 巩勇 倪宏 陶陆阳 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期584-588,共5页

目的研究新生期大鼠反复惊厥后皮层中微管相关蛋白1轻链3(LC-3)的表达及3甲基腺嘌呤(3-MA)对表达的调控作用。方法生后6 d的SD大鼠随机分成3组,每组24只,惊厥组每日吸入三氟乙醚诱导惊厥发作5次,每次间隔30 min,连续9 d;对照组同样操作... 目的研究新生期大鼠反复惊厥后皮层中微管相关蛋白1轻链3(LC-3)的表达及3甲基腺嘌呤(3-MA)对表达的调控作用。方法生后6 d的SD大鼠随机分成3组,每组24只,惊厥组每日吸入三氟乙醚诱导惊厥发作5次,每次间隔30 min,连续9 d;对照组同样操作但不吸入三氟乙醚;3-MA组惊厥前腹腔注射3-MA(总量2μl),同样方法吸入三氟乙醚诱导惊厥,方法同惊厥组。3组大鼠于最后一次惊厥后分别按1.5、3、6、24 h后断头取脑,采用蛋白质免疫印迹技术(Western blot)分别检测3组大鼠大脑皮层中LC-3的表达。结果惊厥组(1.5、3、6 h)LC-3的表达明显高于对照组(t=2.483,2.599,6.937,1.280均P<0.05),3-MA组LC-3的表达明显低于惊厥组(t=2.243,7.775,5.887,4.245均P<0.05)。而24 h惊厥组LC-3的表达并不明显高于对照组(t=1.280,P>0.05)。结论惊厥后自噬途径被激活;3-MA参与了自噬途径的调控。 展开更多

关键词 惊厥 新生大鼠 微管相关蛋白1轻链3 自噬 3甲基腺嘌呤

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微管相关蛋白1轻链3Ⅱ与微管相关蛋白2在血管性痴呆大鼠海马CA1区的表达 被引量：7

8

作者 刘金霞 马原源 +2 位作者 刘斌 邓春颖 李世英 《中国康复理论与实践》 CSCD 北大核心 2015年第5期497-500,共4页

目的观察微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)与微管相关蛋白2(MAP-2)在血管性痴呆大鼠海马CA1区的表达及变化情况。方法 48只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组和模型组(血管性痴呆模型),每组大鼠又随机分为模型制备成功后1、2、4和8周4个亚... 目的观察微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)与微管相关蛋白2(MAP-2)在血管性痴呆大鼠海马CA1区的表达及变化情况。方法 48只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组和模型组(血管性痴呆模型),每组大鼠又随机分为模型制备成功后1、2、4和8周4个亚组,每个亚组6只。采用四血管阻断法制备大鼠血管性痴呆模型。免疫组化法检测LC3Ⅱ与MAP-2的表达。结果与假手术组比较,模型组各时间点LC3Ⅱ表达均显著增高(P<0.001),MAP-2表达均显著减少(P<0.001)。模型组各时间点大鼠海马CA1区LC3Ⅱ与MAP-2的蛋白表达呈负相关(r=-0.723,P<0.001)。结论 LC3Ⅱ蛋白在海马CA1区过度表达,MAP-2蛋白表达减少,这可能是血管性痴呆发生、发展的重要机制之一。 展开更多

关键词 血管性痴呆 微管相关蛋白1轻链3 微管相关蛋白2 海马 自噬 大鼠

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推拿对失神经骨骼肌萎缩大鼠自噬相关因子Beclin-1、液泡分选蛋白34和微管相关蛋白轻链3的mRNA表达的影响 被引量：6

9

作者 安荟羽 唐成林 +7 位作者 黄思琴 赵丹丹 罗翱 吴梦佳 谭程方 邱丽 万小凤 马翔 《中国康复理论与实践》 CSCD 北大核心 2019年第2期184-191,共8页

目的探讨推拿延缓失神经骨骼肌萎缩的相关机制。方法 77只Sprague-Dawley雄性大鼠随机分为假手术组(n=7)、模型组(n=35)和推拿组(n=35)。后两组通过暴露并切断胫神经的方法制备失神经骨骼肌萎缩大鼠模型。造模后第2天,推拿组术侧下肢进... 目的探讨推拿延缓失神经骨骼肌萎缩的相关机制。方法 77只Sprague-Dawley雄性大鼠随机分为假手术组(n=7)、模型组(n=35)和推拿组(n=35)。后两组通过暴露并切断胫神经的方法制备失神经骨骼肌萎缩大鼠模型。造模后第2天,推拿组术侧下肢进行推拿干预。分别在造模后0 d、7 d、14 d、21 d和28 d取材,测定术侧腓肠肌湿重比,HE染色测定腓肠肌肌纤维截面积和直径,逆转录实时定量聚合酶链反应检测术侧腓肠肌组织中自噬相关因子Beclin-1、液泡分选蛋白34 (Vps34)和微管相关蛋白轻链3 (LC3)的mRNA表达。结果三组0 d时,腓肠肌湿重比、肌纤维截面积和直径,以及Beclin-1、Vps34和LC3的mRNA表达均无显著性差异(F <1.321, P> 0.05)。与假手术组比较,模型组和推拿组腓肠肌湿重比、肌纤维截面积和直径在不同时间下降(P <0.05),推拿组肌湿重比(除21 d)均高于模型组(P <0.05),推拿组肌纤维截面积和直径(除21 d)均大于模型组(P <0.05)。与假手术组相比,模型组和推拿组术侧腓肠肌Beclin-1、 Vps34、 LC3mRNA表达在不同时间升高(P <0.05),推拿组各项mRNA表达(除14 d)均高于模型组(P <0.05)。组内比较,模型组和推拿组腓肠肌湿重比、肌纤维截面积和直径随时间呈进行性下降趋势(P <0.05);模型组Beclin-1、Vps34 mRNA表达在21 d后呈上升趋势(P <0.05),LC3 mRNA表达在21 d升高(P <0.05);推拿组Beclin-1 mRNA表达呈先上升后下降的趋势(P <0.05),Vps34和LC3 mRNA表达(除14 d)呈先上升后下降趋势(P <0.05)。结论推拿可能通过上调自噬相关因子Beclin-1、Vps34和LC3的mRNA表达,促进细胞自噬的激活,清除损伤细胞器和蛋白质,为肌纤维再生提供一定的合成底物和能量,从而减轻失神经骨骼肌萎缩的程度。 展开更多

关键词 失神经 骨骼肌萎缩 推拿 自噬 BECLIN-1 液泡分选蛋白34 微管相关蛋白轻链3 大鼠

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雷帕霉素在肝脏缺血再灌注损伤中对自噬相关蛋白ULK1、LC3表达的影响 被引量：5

10

作者 杨龙灿 张旭阳 +3 位作者 潘宁波 余曦 李继维 张莹 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2019年第10期2261-2265,共5页

目的研究雷帕霉素在肝脏缺血再灌注损伤中对自噬相关蛋白ULK1、LC3表达的影响及意义。方法建立3组大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型,实验组(n=10)、对照组(n=10)、假手术组(n=10)。分别于术后24、72h取材:检测血清ALT和AST水平、肝脏病理以及... 目的研究雷帕霉素在肝脏缺血再灌注损伤中对自噬相关蛋白ULK1、LC3表达的影响及意义。方法建立3组大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型,实验组(n=10)、对照组(n=10)、假手术组(n=10)。分别于术后24、72h取材:检测血清ALT和AST水平、肝脏病理以及ULK1、LC3mRNA水平、蛋白水平。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果肝脏缺血再灌注损伤24h后血清ALT、AST水平升高,肝脏病理结构损伤(F值分别为1531.83、1799.97,P值均<0.05),实验组血清ALT[(354.58±28.40)U/Lvs(556.15±19.32)U/L]、AST[(384.37±8.98)U/Lvs(575.96±30.21)U/L]水平较对照组降低(P值均<0.05),肝脏病理结构损伤减轻;术后72h后实验组血清ALT[(271.81±8.63)U/Lvs(466.33±30.00)U/L]、AST[(358.92±13.20)U/Lvs(497.05±40.14)U/L]水平低于对照组(P值均<0.05)。而术后72h实验组、对照组血清ALT、AST水平均低于术后24h(ALT:t=8.87、7.92;AST:t=5.04、5.34,P值均<0.05)。术后24h和72h实验组ULK1、LC3mRNA水平、蛋白水平较假手术组升高(P值均<0.05),24h实验组ULK1mRNA水平(13.23±6.58vs4.91±1.64)、LC3mRNA水平(7.82±1.65vs3.70±1.10)、ULK1蛋白水平(1.62±0.19vs1.17±0.33)、LC3蛋白水平(1.62±0.19vs0.84±0.10)较对照组增加(P值均<0.05);72h实验组ULK1mRNA水平(10.58±3.31vs4.83±2.66)、LC3mRNA水平(6.42±1.13vs2.71±0.81)、ULK1蛋白水平(1.29±0.24vs0.90±0.29)、LC3蛋白水平(1.40±0.73vs0.64±0.08)较对照组增加(P值均<0.05)。肝脏缺血再灌注损伤72h后实验组、对照组血清ALT、AST水平较术后24h降低,并且肝脏病理结构损伤减轻,ULK1、LC3mRNA水平、蛋白水平降低(P值均<0.05)。结论肝脏缺血再灌注损伤后ULK1、LC3表达增加,雷帕霉素可能在肝脏缺血再灌注损伤过程中通过上调细胞自噬保护肝脏功能。 展开更多

关键词 再灌注损伤 自噬相关同源蛋白1 微管相关蛋白1轻链3 西罗莫司 大鼠 Sprague-Dawley

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类风湿性关节炎患者外周血单个核细胞微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达增强且与病情相关 被引量：2

11

作者 邵鑫 袁叶双 +3 位作者 蒋先虹 贾艾敏 刘静 刘福 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1030-1034,共5页

目的检测类风湿性关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)中自噬标志性分子微管相关蛋白1轻链3(LC3)的mRNA及蛋白表达,探讨其与RA发病的关系。方法募集22例RA患者,同期纳入性别、年龄匹配的16例健康体检者为正常对照组。采用密度梯度离... 目的检测类风湿性关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)中自噬标志性分子微管相关蛋白1轻链3(LC3)的mRNA及蛋白表达,探讨其与RA发病的关系。方法募集22例RA患者,同期纳入性别、年龄匹配的16例健康体检者为正常对照组。采用密度梯度离心法分离PBMC;采用实时荧光定量PCR检测PBMC中LC3在mRNA水平,Western blot法检测PBMC中LC3蛋白水平,采用免疫荧光细胞化学染色检测PBMC中LC3蛋白表达;采用Pearson方法分析LC3表达与RA患者临床指标的相关性。结果与正常对照组相比,RA患者组PBMC中LC3 mRNA和蛋白水平明显增加,PBMC中LC3表达明显增强,RA患者PBMC中LC3 mRNA水平与血沉(ESR)、28关节疾病活动度评分(DAS28)、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)均呈明显正相关(r依次为0.7480、0.5016、0.6518、0.7232)。结论RA患者LC3表达上调,且与ESR、DAS28、CRP、RF相关。 展开更多

关键词 类风湿性关节炎(RA) 自噬 微管相关蛋白1轻链3(LC3)

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自噬标志物LC3的节律表达破坏参与β_(1)-AA诱导的H9c2大鼠心肌细胞死亡 被引量：4

12

作者 贾微微 宁娜 +6 位作者 孙聪 李朋佳 陆洁蓓 张晟 原媛 王丽 王晓晖 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期10-17,共8页

目的:探讨β_(1)-肾上腺素受体(β_(1)-AR)自身抗体(β_(1)-AA)对大鼠心肌细胞自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(LC3)节律表达的影响及其在心肌细胞死亡中的作用。方法:实验材料为Sprague-Dawley(SD)大鼠和H9c2大鼠心肌细胞。将SD大鼠随机... 目的:探讨β_(1)-肾上腺素受体(β_(1)-AR)自身抗体(β_(1)-AA)对大鼠心肌细胞自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(LC3)节律表达的影响及其在心肌细胞死亡中的作用。方法:实验材料为Sprague-Dawley(SD)大鼠和H9c2大鼠心肌细胞。将SD大鼠随机分为免疫组(β_(1)-AR组)和对照(control)组,每组6只;将H9c2细胞随机分为control组、β_(1)-AA组、慢病毒(LV)-NC组和LV-shPer2组(n=6);合成β_(1)-AR细胞外第二环抗原肽段,用于主动免疫大鼠,并使用亲和层析法从大鼠血清中提纯β_(1)-AA;β_(1)-AA处理H9c2细胞24 h后使用CCK-8法检测细胞活力;用地塞米松同步化细胞后,再给予β_(1)-AA处理,采用real-time PCR及Western blot法检测LC3的表达情况,采用Western blot法检测生物钟蛋白Per2的表达情况,使用JTK_CYCLE算法分析昼夜节律参数;用LV-shPer2感染H9c2细胞以破坏LC3的节律表达,进而采用CCK-8法检测细胞活力。结果:β_(1)-AR组大鼠血清中β_(1)-AA的A值与control组相比显著升高(P<0.05)。β_(1)-AA组H9c2细胞的活力显著低于control组(P<0.05)。β_(1)-AA可破坏H9c2细胞LC3和Per2的节律表达(JTK_CYCLE P<0.05)。通过LV-shPer2干扰Per2基因而破坏H9c2细胞LC3节律表达(JTK_CYCLE P<0.05)后,细胞活力显著降低(P<0.05)。结论:β_(1)-AA破坏H9c2大鼠心肌细胞自噬标志物LC3的节律表达,从而促进细胞死亡。 展开更多

关键词 心肌细胞 β_(1)-肾上腺素受体自身抗体 微管相关蛋白1轻链3 昼夜节律 自噬

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LC3蛋白在小鼠卵泡颗粒细胞中的表达及定位研究 被引量：9

13

作者 郭燕君 徐营 +4 位作者 刘胜兵 侯杰 叶先才 王志坚 沈忠飞 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1690-1695,共6页

目的:探讨自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)在小鼠卵泡颗粒细胞中的表达及定位。方法:昆明小鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin,PMSG)前及注射后的第... 目的:探讨自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)在小鼠卵泡颗粒细胞中的表达及定位。方法:昆明小鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin,PMSG)前及注射后的第1、2、3、4、5天,采用免疫组织化学染色方法检测自噬相关蛋白LC3和凋亡相关蛋白cleaved caspase-3在卵泡中表达及共定位情况;促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)处理颗粒细胞后,Western blot检测LC3和cleaved caspase-3在颗粒细胞中的水平,免疫荧光方法对LC3在颗粒细胞中的亚细胞定位进行研究。结果:在小鼠卵泡发育的各个阶段,LC3蛋白主要在颗粒细胞中表达;免疫荧光显示在闭锁卵泡的颗粒细胞中cleaved caspase-3和LC3的蛋白水平较高;在PMSG腹腔注射后第1、2天,颗粒细胞cleaved caspase-3和LC3-II的蛋白水平减少(P<0.05);在PMSG腹腔注射后第3、4、5天,颗粒细胞的cleaved caspase-3和LC3-II蛋白水平依次增加;LC3-II和cleaved caspase-3的蛋白水平具有相关性(r^2=0.8299,P<0.05)。FSH处理后,LC3-II定位于颗粒细胞胞浆并呈点状分布。结论:LC3主要在卵泡颗粒细胞中表达,其表达具有细胞特异性和区域特异性,提示自噬在卵泡发育过程中主要在颗粒细胞中发生。卵巢颗粒细胞自噬和凋亡具有相关性,均呈促性腺激素依赖性。 展开更多

关键词 颗粒细胞 轻链蛋白3 Cleaved CASPASE-3 卵泡发育

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自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤增强鼻咽癌细胞对放射和化学治疗的敏感性 被引量：11

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作者 宋乐乐 马琳艳 +4 位作者 陈根德 黄莹莹 孙小锦 蒋琛琛 刘浩 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期9-18,共10页

目的:探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)增强鼻咽癌细胞对放射治疗(放疗)和化学治疗(化疗)敏感性的作用及其相关的分子机制。方法:采用MTT法检测3-MA对细胞的增殖抑制作用;集落克隆形成法检测3-MA对细胞集落克隆形成的... 目的:探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)增强鼻咽癌细胞对放射治疗(放疗)和化学治疗(化疗)敏感性的作用及其相关的分子机制。方法:采用MTT法检测3-MA对细胞的增殖抑制作用;集落克隆形成法检测3-MA对细胞集落克隆形成的影响;Annexin V/PI双染法、线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)、DAPI染色检测细胞凋亡;Western印迹检测内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、自噬相关蛋白beclin1和微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)表达。结果:不同体积浓度或剂量的顺铂(cisplatin,DDP)、电离辐射(ionizing radiation,IR)、衣霉素(tunicamycin,TM)、3-MA对鼻咽癌细胞HONE-1均具有增殖抑制作用,且随着体积浓度或剂量的增加和作用时间的延长,对HONE-1细胞增殖抑制作用随之增加。经1.00 mmol/L 3-MA预处理细胞后,再次给予6.00 mol/L DDP,4.00 Gy IR,1.00 mol/L TM处理,细胞存活率明显降低,均低于单用组,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。3-MA增强DDP,IR,TM抑制细胞集落克隆形成作用。用6.00 mol/L DDP或4.00 Gy IR处理HONE-1细胞24 h后,细胞凋亡率分别为5.8%和6.7%,与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。JC-1和DAPI染色显示3-MA增强DDP,IR或TM诱导的细胞凋亡作用;Western印迹结果显示DDP,IR或TM处理组GRP78,beclin1表达呈时间依赖性上调,LC3 I向LC3 II转化,3-MA预处理组beclin1表达明显降低,LC3 I向LC3 II的转化。结论:自噬抑制剂3-MA可增强鼻咽癌细胞对放化疗的敏感性,其机制可能与3-MA抑制内质网应激诱导的自噬所产生的保护作用相关。 展开更多

关键词 鼻咽癌 顺铂 电离辐射 内质网应激 自噬 葡萄糖调节蛋白78 BECLIN1 微管相关蛋白1轻链3 衣霉素

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脂多糖诱导巨噬细胞自噬相关LC3B-GFP荧光聚集体的形成 被引量：1

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作者 张梅 黄保军 +5 位作者 胡梅琮 程艳伟 宋蔚 黄大可 李群 胡春松 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第4期357-361,共5页

目的构建pEGFP-C1/LC3B重组质粒并转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,观察脂多糖(LPS)诱导其自噬相关LC3B-GFP荧光聚集体形成的过程。方法根据编码小鼠微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)的开放读码框(ORF)设计引物,RT-PCR扩增小鼠LC3B的ORF,构建pEGFP-... 目的构建pEGFP-C1/LC3B重组质粒并转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,观察脂多糖(LPS)诱导其自噬相关LC3B-GFP荧光聚集体形成的过程。方法根据编码小鼠微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)的开放读码框(ORF)设计引物,RT-PCR扩增小鼠LC3B的ORF,构建pEGFP-C1/LC3B重组质粒;脂质体法转染并筛选稳定表达RAW264.7细胞株,荧光显微镜观察及Western blot鉴定LC3B-GFP融合蛋白表达;LPS刺激稳定转染的RAW264.7细胞株,激光共聚焦显微镜检测不同时间绿色荧光聚集体的分布。结果成功构建真核表达质粒pEGFP-C1/LC3B,并获得稳定表达LC3B-GFP融合蛋白的RAW264.7细胞株,荧光显微镜下可见细胞内有绿色荧光蛋白分布,Western blot鉴定表达LC3B-GFP融合蛋白,激光共聚焦结果显示LPS刺激前融合蛋白呈弥散性分布在胞浆中,而LPS刺激后细胞内有明显绿色荧光聚集体形成并呈时间依赖性逐渐增加。结论成功构建pEGFP-C1/LC3B,转染RAW264.7细胞可正确表达LC3B-GFP融合蛋白,LPS刺激后显示绿色荧光聚集体形成。 展开更多

关键词 巨噬细胞RAW264.7 微管相关蛋白1轻链3 绿色荧光蛋白

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LC3在成釉细胞瘤中的表达及意义

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作者 黄碧莹 刘洁 +5 位作者 钟鸣 王珺婷 王小玢 康媛媛 孙妍 乔雪 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期101-104,共4页

目的探讨自噬标记蛋白微管相关蛋白1轻链3 (LC3)在成釉细胞瘤组织中的表达及意义。方法应用免疫组织化学染色方法检测104例成釉细胞瘤组织及20例正常口腔黏膜组织中LC3的表达,通过半定量方法分析其表达与临床病理资料的关系。结果 LC3... 目的探讨自噬标记蛋白微管相关蛋白1轻链3 (LC3)在成釉细胞瘤组织中的表达及意义。方法应用免疫组织化学染色方法检测104例成釉细胞瘤组织及20例正常口腔黏膜组织中LC3的表达,通过半定量方法分析其表达与临床病理资料的关系。结果 LC3在成釉细胞瘤上皮细胞中的阳性表达率显著高于正常口腔黏膜组织,差异有统计学意义(P <0.05);LC3的表达在性别、年龄、是否复发方面的差异无统计学意义(P> 0.05);发生于下颌骨的成釉细胞瘤中LC3的阳性表达率高于发生于上颌骨及牙龈的成釉细胞瘤,差异有统计学意义(P <0.05);实性/多囊型中LC3的阳性表达率显著高于其他3种病理分型,差异有统计学意义(P <0.05)。结论成釉细胞瘤中自噬活性显著高于正常口腔黏膜组织,自噬过程在成釉细胞瘤的发生发展中发挥一定作用,可能对成釉细胞瘤的局部侵袭性有一定影响。 展开更多

关键词 微管相关蛋白1轻链3 成釉细胞瘤 自噬 免疫组织化学

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丰富环境对缺氧缺血脑损伤幼鼠空间记忆能力及海马区BDNF、自噬相关蛋白LC3表达的影响 被引量：9

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作者 苑爱云 孙向峰 +1 位作者 侯梅 李小平 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期1296-1301,共6页

目的:探索丰富环境干预对缺氧缺血脑损伤(HIBD)幼鼠空间记忆能力、海马区脑源性神经营养因子(BDNF)及微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达的影响。方法:取7日龄Wistar鼠共32只随机分为假手术组、标准环境组及丰富环境组,采用改良Rice-Vannucci... 目的:探索丰富环境干预对缺氧缺血脑损伤(HIBD)幼鼠空间记忆能力、海马区脑源性神经营养因子(BDNF)及微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达的影响。方法:取7日龄Wistar鼠共32只随机分为假手术组、标准环境组及丰富环境组,采用改良Rice-Vannucci法制备HIBD模型。采用Morris水迷宫定位航行实验测定寻找隐藏平台的逃避潜伏期,采用Western Blot检测海马区BDNF及LC3蛋白的表达。结果:HIBD大鼠寻找平台的逃避潜伏期明显延长,在训练第4、5日丰富环境组逃避潜伏期较标准环境组明显缩短(P<0.01);与标准环境组病灶侧海马相比,丰富环境组病灶侧海马BDNF及LC3-Ⅱ表达显著增高,且LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高(P<0.01)。结论:丰富环境干预可显著改善HIBD幼鼠的空间记忆能力,海马区BDNF表达的上调及自噬信号的激活可能是丰富环境干预有效性的内在机制之一。 展开更多

关键词 缺氧缺血脑损伤 丰富环境 脑源性神经营养因子 微管相关蛋白1轻链3 空间记忆能力

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氧固醇结合蛋白OSBPL3调节胃癌细胞的自噬和迁移 被引量：1

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作者 屈雅萍 林琼 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2022年第3期231-235,共5页

目的 关于氧固醇结合蛋白OSBPL3在自噬中的作用以及对胃癌迁移的影响鲜有报道。文章旨在探索氧固醇结合蛋白OSBPL3对胃癌细胞自噬和迁移的影响。方法 使用GST-LC3沉淀实验和质谱分析检测LC3的结合蛋白;GST-pulldown实验和免疫共沉淀实... 目的 关于氧固醇结合蛋白OSBPL3在自噬中的作用以及对胃癌迁移的影响鲜有报道。文章旨在探索氧固醇结合蛋白OSBPL3对胃癌细胞自噬和迁移的影响。方法 使用GST-LC3沉淀实验和质谱分析检测LC3的结合蛋白;GST-pulldown实验和免疫共沉淀实验验证OSBPL3与LC3的相互作用;构建OSBPL3过表达胃癌细胞株,Western blot法检测OSBPL3对胃癌细胞自噬的影响;采用小室迁移实验来检测OSBPL3对胃癌细胞迁移的影响。结果 质谱分析、GST-pulldown实验和免疫共沉淀实验均表明OSBPL3与LC3能相互结合;在过表达OSBPL3后,无EGF处理的AGS细胞迁移至小室另一侧的细胞数显著增多[(252.333±28.386)vs(86.333±3.480),P<0.01];在EGF处理下,OSBPL3过表达细胞株的迁移能力相比对照细胞株也有所增强[(281.000±16.643)vs(358.667±43.781),P<0.05]。结论 OSBPL3是一个LC3结合蛋白,并且促进胃癌细胞的自噬和迁移。 展开更多

关键词 氧固醇结合蛋白3 微管相关蛋白轻链3 胃癌 自噬 迁移

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右美托咪定对人结肠癌细胞增殖和自噬的影响

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作者 后晓超 徐桂萍 《临床麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期735-740,共6页

目的探讨右美托咪定对人结肠癌细胞增殖和自噬的影响。方法实验一中,选择处于对数生长期的人结肠癌细胞LoVo和HCT116,将细胞分为八组:LoVo-1组(L0-1组)、LoVo+右美托咪定1 nmol/L-1组(L1-1组)、LoVo+右美托咪定10 nmol/L-1组(L10-1组)、... 目的探讨右美托咪定对人结肠癌细胞增殖和自噬的影响。方法实验一中,选择处于对数生长期的人结肠癌细胞LoVo和HCT116,将细胞分为八组:LoVo-1组(L0-1组)、LoVo+右美托咪定1 nmol/L-1组(L1-1组)、LoVo+右美托咪定10 nmol/L-1组(L10-1组)、LoVo+右美托咪定100 nmol/L-1组(L100-1组)、HCT116-1组(H0-1组)、HCT116+右美托咪定1 nmol/L-1组(H1-1组)、HCT116+右美托咪定10 nmol/L-1组(H10-1组)和HCT116+右美托咪定100 nmol/L-1组(H100-1组)。细胞加药处理24、48 h时采用CCK-8法检测细胞增殖率,细胞加药处理24 h时收集细胞,采用Western blot法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ、自噬相关蛋白Beclin-1含量。实验二中,选择处于对数生长期的人结肠癌细胞LoVo和HCT116,将细胞分为四组:LoVo-2组(L0-2组)、LoVo+右美托咪定10 nmol/L-2组(L10-2组)、HCT116-2组(H0-2组)和HCT116+右美托咪定10 nmol/L-2组(H10-2组)。细胞加药处理24 h时,收集细胞,采用免疫荧光法观察LC3蛋白表达情况并计算LC3位点阳性率;细胞加药处理24 h时,收集细胞,采用透射电镜观察自噬体。结果实验一中,与L0-1组和L1-1组比较,L10-1组和L100-1组细胞加药处理后24、48 h细胞增殖率明显降低,细胞加药处理后24 h LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白含量明显升高(P<0.05)。与H0-1组和H1-1组比较,H10-1组和H100-1组细胞加药处理后24、48 h细胞增殖率明显降低,细胞加药处理后24 h LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白含量明显升高(P<0.05)。实验二中,与L0-2组比较,细胞加药处理后24 h L10-2组LC3位点阳性率明显升高(P<0.05)。与H0-2组比较,细胞加药处理后24 h H10-2组LC3位点阳性率明显升高(P<0.05)。L0-2组和H0-2组细胞膜完整,细胞核清晰。L10-2和H10-2组细胞膜破坏,细胞器排列紊乱,可见大量自噬小体及自噬溶酶体。结论右美托咪定可能通过诱导自噬,抑制结肠癌细胞的增殖。 展开更多

关键词 结肠癌 自噬 右美托咪定 微管相关蛋白1轻链3

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脂多糖诱导脓毒症小鼠心肌细胞及线粒体自噬 被引量：26

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作者 赵品 高金鉴 +4 位作者 姜静 彭细娟 吴巍 郑兰兰 姚立农 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期177-181,共5页

目的探讨脓毒症心肌损伤时心肌细胞及线粒体自噬水平的变化。方法雄性C57BL/J小鼠随机分为空白对照组(NC)、LPS处理6、12、24、36 h组。LPS处理组小鼠腹腔注射10 mg/kg LPS建立脓毒症模型,空白对照组注射等量生理盐水。分别于以上时间... 目的探讨脓毒症心肌损伤时心肌细胞及线粒体自噬水平的变化。方法雄性C57BL/J小鼠随机分为空白对照组(NC)、LPS处理6、12、24、36 h组。LPS处理组小鼠腹腔注射10 mg/kg LPS建立脓毒症模型,空白对照组注射等量生理盐水。分别于以上时间点处死小鼠,收集血液及心脏组织,提取心肌组织胞质蛋白、线粒体及线粒体蛋白,另取心肌组织进行冰冻切片;应用ELISA试剂盒测定血清心肌肌钙蛋白I(c Tn I)含量变化;JC-1染色结合荧光酶标仪检测LPS刺激后不同时间点线粒体膜电位变化;Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、PTEN诱导激酶1(pink1)、E3泛素连接酶帕金森病蛋白(parkin)水平;免疫荧光组织化学染色检测心肌组织LC3、pink1/parkin蛋白的定位及其在不同处理组的表达差异。结果与对照组相比,LPS诱导的脓毒症小鼠血清c Tn I在6 h即开始明显升高;LPS处理组线粒体膜电位下降,在LPS 12 h组最低;细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ在腹腔注射LPS 12 h明显升高,然后逐渐下降;pink1/parkin在腹腔注射LPS 6 h明显升高,然后逐渐下降。结论脓毒症心肌损伤时心肌细胞及线粒体自噬水平升高,自噬应激可能更早发于心肌线粒体。 展开更多

关键词 脓毒症 心肌损伤 线粒体自噬 微管相关蛋白1轻链3(LC3) PINK1 PARKIN

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