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Effect of SHU555A labeling on differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into neurocyte-like cells
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作者 Yong Zhang Jing-Liang Cheng Juan Wang Hua-Li Li Lan Zhang Yun-Jun Yang 《放射学实践》 北大核心 2011年第9期944-948,共5页
Objective:To investigate the effect of SHU555A,a clinically approved iron nanoparticle,labeling on differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells(BMSCs) into neurocyte-like cells in vitro.Methods:10 times dilut... Objective:To investigate the effect of SHU555A,a clinically approved iron nanoparticle,labeling on differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells(BMSCs) into neurocyte-like cells in vitro.Methods:10 times dilution of 10μl,20μl,40μl and 80μl SHU555A were added to 2ml of culture medium containing rat BMSCs to obtain four experimental groups of SHU555A labeling of BMSCs with ferri ion concentrations of 14μg/ml,28μg/ml,56μg/ml and 112μg/ml,respectively.2ml of culture medium with rat BMSCs did not contain SHU555A served as control group.The BMSCs of all the groups were pre-induced by bFGF,and induced by DMSO/butylated hydroxyanisole(BHA) for six hours,subsequently reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR) technique was employed to detect mRNA expression of nestin,neuronspecific analase(NSE) and glial fibrillary acid protein(GFAP).Western blot technique was used to detectprotein expression of nestin.Results:Quantitative-PCR revealed high mRNA expression of nestin,NSE and GFAP induced by DMSO/BHA in all the experimental groups,but the difference between the experimental groups and the control group was not significant(P>0.05).Western blot analysis demonstrated there was no statistically significant difference in nestin protein expression between the experimental groups and the control group(P>0.05).Conclusion:SHU555A labeling do not affect differentiation of rat BMSCs into neurocyte-like cells in vitro. 展开更多
关键词 骨髓 放射线 治疗方法 间叶细胞
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Bone marrow mesenchymal stem cell transplantation retards the natural senescence of rat hearts
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《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第B11期196-196,共1页
Aim Aging is an independent risk factor for heart disease, however the effective intervention has not been found so far. Bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) have been shown to offer a wide variety of cel- l... Aim Aging is an independent risk factor for heart disease, however the effective intervention has not been found so far. Bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) have been shown to offer a wide variety of cel- lular functions including the protective effects on damaged hearts. Here we investigated the antiaging properties of BMSCs and the underlying mechanism in a cellular model of cardiomyocyte senescence and a rat model of aging hearts. Methods In vitro study, neonatal rat ventricular cells (NRVCs) and BMSCs were cocultured in the same dish with a semipermeable membrane to separate the two populations. In vivo, the BMSCs were injected into the rat hearts to observe their antiaging effects. The expression of β-galactosidase and aging-related proteins, and the lev- els of oxidative stress were determined in vivo and in vitro. The heart function was measured by the High-Resolution Imaging System. Results Monocultured NRVCs displayed the senescence-associated phenotypes, characterized by an increase in the number of β-galaetosidase-positive cells and decreases in the degradation and disappearance of cellular organelles in a time-dependent manner. The levels of reactive oxygen species and malondialdehyde were el- evated, whereas the activities of antioxidant enzymes superoxide dismutase and glutathione peroxidase were de- creased, along with upregulation of p53, p21cipl/wafl and p16INK4a in the aging eardiomyoeytes. These deleterious alterations were abrogated in aging NRVCs cocultured with BMSCs. Qualitatively, the same senescent phenotypes were consistently observed in aging rat hearts. Notably, BMSC transplantation significantly prevented these detri- mental alterations and improved the impaired cardiac function in the aging rats. Conclusions BMSCs possess strong antiseneseence action on the aging NRVCs and hearts and can improve cardiac function after transplantation in aging rats. The present study, therefore, provides an alternative approach for the treatment of heart failure in the elderly population. 展开更多
关键词 Key words: SENESCENCE BONE marrow mesenchymal stem cells HEART reactive oxygen species p53 p21Cipl/Wafl
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BMSCs通过miR-132-3p调控巨噬细胞M2型极化减轻脓毒症诱导的急性肺损伤
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作者 邓乐秀 王苑娣 +5 位作者 常建亮 李琛 朱梓嫣 刘建华 彭晓翠 张志华 《海南医科大学学报》 北大核心 2025年第18期1418-1426,共9页
目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)通过miR-132-3p调控作用影响巨噬细胞向M2型极化,从而揭示并验证这一过程在缓解脓毒症诱导的急性肺损伤中的潜在机制。方法:采用Lipofectamine^(TM)2000将miR-132-3p mimics转染至BMSCs中,通过盲肠结... 目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)通过miR-132-3p调控作用影响巨噬细胞向M2型极化,从而揭示并验证这一过程在缓解脓毒症诱导的急性肺损伤中的潜在机制。方法:采用Lipofectamine^(TM)2000将miR-132-3p mimics转染至BMSCs中,通过盲肠结扎穿刺法诱导脓毒症肺损伤模型后进行Murine Sepsis Score(MSS)评分。采用qRT-PCR检测肺组织miR-132-3p表达。H&E染色观察各组肺组织病理变化。ELISA检测血清TNFα、IL-1β和IL-6表达。Western blot检测支气管肺泡灌洗液中巨噬细胞iNOS、TNF-α、IL-1β和Arg1、CD206表达水平。细胞实验:采用100 ng/mL脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞,将miR-132-3p mimics转染到BMSCs中,并与RAW264.7共培养。双荧光素酶实验验证TRIB1是miR-132-3p的靶基因。Western blot检测RAW264.7 TNF-α、IL-1β、Arg1、CD206、TRIB1、p-NF-κB p65表达水平。结果:动物实验中,与Sham组比较,Model组中MSS评分升高,肺组织损伤严重,miR-132-3p表达降低,血清炎性因子TNFα、IL-1β和IL-6显著升高,肺泡巨噬细胞中iNOS、TNF-α、IL-1β升高,Arg1、CD206降低。与Model组比较,BMSCs组中MSS评分降低,肺组织损伤得到改善,miR-132-3p表达升高,血清炎性因子TNFα、IL-1β和IL-6显著下降,肺泡巨噬细胞中iNOS、TNF-α、IL-1β下降,Arg1,CD206升高。而BMSCs-miR-132-3p-OE组可进一步改善小鼠上述变化。细胞实验中,双荧光素酶结果示miR-132-3p可靶向作用于TRIB1。与LPS组比较,LPS-BMSCs-miR-132-3p-OE组中TNF-α、IL-1β、p-NF-κB p65降低,miR-132-3p、Arg1、CD206、TRIB1升高。结论:BMSCs可通过miR-132-3p调控巨噬细胞M2型极化减轻脓毒症诱导的急性肺损伤。 展开更多
关键词 急性肺损伤 骨髓间充质干细胞 巨噬细胞极化 miR-132-3p
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黄芪皂苷Ⅳ调控miR-21抑制Notch信号通路对骨质疏松症大鼠BMSCs成骨分化的影响
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作者 肖晶晶 刘晓岚 +1 位作者 黄剑英 豆贲 《中南大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第7期1126-1136,共11页
目的:骨质疏松症的核心病理是骨吸收超过骨形成,因此促进成骨成为关键的治疗策略。骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的成骨分化是骨形成的基础。黄芪皂苷Ⅳ(astragalosideⅣ,A-Ⅳ)作为中药黄芪的主要活性成... 目的:骨质疏松症的核心病理是骨吸收超过骨形成,因此促进成骨成为关键的治疗策略。骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的成骨分化是骨形成的基础。黄芪皂苷Ⅳ(astragalosideⅣ,A-Ⅳ)作为中药黄芪的主要活性成分,其促进成骨的分子机制仍有待研究揭示。本研究旨在探讨A-Ⅳ对骨质疏松症大鼠BMSCs增殖与成骨分化的影响,并通过分析微RNA(microRNA,miR)-21与Notch2的表达变化,深入阐明其分子机制。方法:成熟雌性SD大鼠经1周适应性喂养后,随机分为假手术(Sham)组(n=4)和卵巢切除术(ovariectomy,OVX)组(骨质疏松症模型组;n=8)。术后12周分离、培养大鼠股骨髓腔内提取的BMSCs,并分为S-BMSCs组(来源于Sham组)、O-BMSCs组(来源于OVX组)和A-BMSCs组(来源于OVX组),S-BMSCs组和O-BMSCs组的BMSCs使用成骨诱导培养基诱导其成骨分化,A-BMSCs组的BMSCs添加A-Ⅳ进行干预后诱导其成骨分化。采用流式细胞术鉴定S-BMSCs组和O-BMSCs组BMSCs的细胞表面间充质干细胞标志物CD29和造血干细胞标志物CD34的表达水平,确认间充质干细胞特性。采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测BMSCs增殖活性。采用茜素红染色定量分析钙结节形成情况。采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测评估成骨分化水平。采用实时反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription PCR,real-time RT-PCR)检测成骨相关基因[矮小相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)]和miR-21的表达变化,并通过蛋白质印迹法分析Runx2、OPN和Notch2蛋白质表达情况。结果:流式细胞术结果显示O-BMSCs组的BMSCs仍然符合BMSCs的细胞表面标志物特征。A-Ⅳ可显著促进骨质疏松症大鼠BMSCs的增殖(P<0.05),并增强ALP活性,上调成骨分化Runx2和OPN基因和蛋白质表达水平(P<0.05)。且miR-21与Notch2存在靶向结合关系,A-Ⅳ能促进miR-21的表达,并抑制Notch信号通路关键受体Notch2蛋白表达水平(P<0.05)。结论:A-Ⅳ通过上调miR-21的表达,抑制Notch信号通路关键蛋白质Notch2的表达,从而解除Notch2对骨质疏松症来源BMSCs成骨分化的抑制作用,促进其向成骨分化。 展开更多
关键词 黄芪皂苷Ⅳ 骨质疏松症 骨髓间充质干细胞 成骨分化 NOTCH信号通路
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从“骨玄府-骨络-髓”论治骨质疏松症及BMSCs归巢、分化 被引量:1
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作者 吕浩 王久香 +2 位作者 胡芷苜 王岩 江渟 《中国骨质疏松杂志》 北大核心 2025年第4期614-617,624,共5页
骨质疏松症(osteoporosis,OP)是一种常见的代谢性骨病。OP病理机制涉及多个环节,骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)归巢及分化紊乱会引起OP,阻止其紊乱是防治OP的一个方向。目前中药可协同发挥多环节、多靶点的整合... 骨质疏松症(osteoporosis,OP)是一种常见的代谢性骨病。OP病理机制涉及多个环节,骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)归巢及分化紊乱会引起OP,阻止其紊乱是防治OP的一个方向。目前中药可协同发挥多环节、多靶点的整合效应,但中医诊治思路常重整体和宏观而轻微观。笔者将从“骨玄府-骨络-髓”理论模型入手探讨BMSCs归巢、分化及OP骨代谢紊乱的分子机制,旨在丰富OP的病因病机,以期为该病的治疗提供参考。并将传统的中医理论与现代医学相结合,从微观物质视角探索中医理论的科学内涵。 展开更多
关键词 骨质疏松症 骨髓间充质干细胞 骨玄府-骨络-髓 归巢 分化
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BMP⁃2/Smad信号通路探讨金匮肾气丸对BMSCs成骨分化的影响 被引量:6
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作者 孟菲菲 高志礼 +2 位作者 李娜 王花欣 WANG Jiayun 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期379-384,共6页
目的观察金匮肾气丸含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的影响并探讨其发生的作用机制。方法制备金匮肾气丸含药血清,CCK⁃8法筛选出最佳浓度的金匮肾气丸含药血清对BMSCs向成骨分化的... 目的观察金匮肾气丸含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的影响并探讨其发生的作用机制。方法制备金匮肾气丸含药血清,CCK⁃8法筛选出最佳浓度的金匮肾气丸含药血清对BMSCs向成骨分化的影响。将BMSCs分为空白组(control组)、成骨诱导组(OIS)、空白血清组(ROIS组)及含药血清组(JKSQ⁃OIS),分别对各组BMSCs进行成骨诱导。连续干预14 d及21 d后,分别进行碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红染色镜下观察各组碱性磷酸酶活性和成骨矿化水平;连续干预14 d后,实时荧光定量PCR(q⁃PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测各组BMSCs中骨形态发生蛋白2(BMP⁃2)、Smad1、ALP、Runt相关转录因子2(runt⁃related transcription factor 2,Runx2)及成骨细胞特异性转录因子(Osterix,OSX)mRNA和蛋白的相对表达量。结果与control组相比,OIS组与ROIS组出现点状矿化结节,ALP染色轻微变深,ALP和Runx2 mRNA及蛋白的表达上升(P<0.05,P<0.01),OSX的表达上升但不明显(P>0.05);与OIS组相比,JKSQ⁃OIS组矿化结节成片分布,ALP染色明显加深,BMP⁃2、Smad1、ALP和Runx2 mRNA及蛋白的表达上升(P<0.05,P<0.01),OSX mRNA及蛋白表达有上升趋势(P>0.05)。结论金匮肾气丸含药血清可能通过调控BMP⁃2/Smad信号通路,上调ALP、Runx2和OSX的表达,促进BMSCs向成骨分化,改善OP。 展开更多
关键词 金匮肾气丸 骨髓间充质干细胞 成骨 BMP⁃2/Smad信号通路
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骨免疫学视角下绝经后骨质疏松症防治新靶点:MΦ-BMSCs串扰 被引量:2
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作者 李琰 刘宁 +4 位作者 齐保玉 王旭 孙传睿 章轶立 魏戌 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期732-738,共7页
绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMOP)是以骨量下降、骨结构破坏、易发生骨折为特征的代谢性骨病。PMOP已严重威胁女性健康,制约社会经济发展。近年来雌激素缺乏引起PMOP相关机制研究取得进展,但仍未得到充分阐明。骨免... 绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMOP)是以骨量下降、骨结构破坏、易发生骨折为特征的代谢性骨病。PMOP已严重威胁女性健康,制约社会经济发展。近年来雌激素缺乏引起PMOP相关机制研究取得进展,但仍未得到充分阐明。骨免疫学研究显示PMOP病理过程伴随着慢性炎症和免疫系统的参与。巨噬细胞(macrophage,MΦ)是重要的免疫细胞,被报道在骨稳态和再生中发挥作用。巨噬细胞的耗竭能加重OVX小鼠的骨丢失,减少骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)数量,降低BMSCs成骨分化能力。巨噬细胞的缺失对骨形成的影响似乎超过了其对破骨细胞活性的影响,MΦ与BMSCs之间的串扰可能在这一环节发挥着重要作用。本文基于骨免疫学理论对MΦ-BMSCs串扰和PMOP的相关性进行综述,旨在为PMOP的防治研究提供新思路。 展开更多
关键词 绝经后骨质疏松症 骨免疫学 巨噬细胞 间质干细胞 串扰
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微管调控NLRP3转运探讨生骨再造丸对BMSCs焦亡水平的影响 被引量:1
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作者 胡康一 曹林忠 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期636-642,共7页
目的探讨生骨再造丸对激素诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)焦亡的保护作用机制以及对微管调控NLRP3炎性小体组装的影响。方法将BMSCs分为空白组、模型组、模型组+紫杉醇组、模型组+诺考达唑组、模型组+生骨再造丸含药血清组。制备生骨再造... 目的探讨生骨再造丸对激素诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)焦亡的保护作用机制以及对微管调控NLRP3炎性小体组装的影响。方法将BMSCs分为空白组、模型组、模型组+紫杉醇组、模型组+诺考达唑组、模型组+生骨再造丸含药血清组。制备生骨再造丸含药血清干预BMSCs。使用CCK8检测细胞活力;流式细胞术检测凋亡率;WB检测AC-α-tubulin、NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达;免疫荧光检测ASC炎性大斑点表达,α-tubulin与NLRP3共定位表达;ELISA检测IL-1β和IL-18含量。结果与空白组相比,模型组细胞活力下降、凋亡水平上升,AC-α-tubulin、NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白的表达上升,ASC炎性斑点的荧光强度上升,α-tubulin与NLRP3共定位的荧光强度上升(P<0.01),IL-1β和IL-18含量明显增加(P<0.01);与模型组相比,紫杉醇组细胞活力下降、凋亡水平上升、AC-α-tubulin、NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白的表达上升(P<0.01),ASC炎性斑点的荧光强度上升(P<0.05),α-tubulin与NLRP3共定位的荧光强度上升(P<0.01),IL-1β和IL-18含量增加(P<0.01,P<0.05);诺考达唑和生骨再造丸含药血清组的细胞活力上升、凋亡水平下降,AC-α-tubulin、NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白的表达下降(P<0.01)、ASC炎性斑点的荧光强度下降(P<0.05),α-tubulin与NLRP3共定位的荧光强度下降(P<0.01,P<0.05),IL-1β和IL-18含量减少(P<0.01,P<0.05)。结论生骨再造丸能抑制α-tubulin乙酰化,破坏微管结构,抑制NLRP3炎性小体的组装,从而减少BMSCs细胞焦亡。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 焦亡 NLRP3 微管 生骨再造丸
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甲基转移酶METTL3介导m6A甲基化调控犬JBMMSCs成骨分化
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作者 陈翌 蒋丽花 黄旋平 《海南医学院学报》 CAS 北大核心 2024年第11期811-816,823,共7页
目的:探究甲基转移酶METTL3对颌骨骨髓间充质干细胞(Jaw bone marrow mesenchymal stem cells, JBMMSCs)增殖、迁移及成骨分化的影响。方法:体外培养JBMMSCs,慢病毒转染构建沉默METTL3基因细胞模型,转染后siMETTL3组JBMMSCs mRNA水平(P&... 目的:探究甲基转移酶METTL3对颌骨骨髓间充质干细胞(Jaw bone marrow mesenchymal stem cells, JBMMSCs)增殖、迁移及成骨分化的影响。方法:体外培养JBMMSCs,慢病毒转染构建沉默METTL3基因细胞模型,转染后siMETTL3组JBMMSCs mRNA水平(P<0.001)及蛋白水平(P<0.01)下降。检测两组细胞的增殖、迁移、碱性磷酸酶活性、钙沉积以及成骨相关因子骨钙素(osteocalcin,OCN)mRNA及蛋白水平。结果:与沉默对照(siNC)组相比,siMETTL3组培养24、48、72、96 h的增殖活性降低(P<0.001),24 h后细胞迁移能力下降(P<0.05)。成骨诱导7 d后siMETTL3组碱性磷酸酶活性下降,21 d后矿化沉积较siNC组少。qRT-PCR及Western Blot显示,OCN的mRNA(P<0.001)和蛋白(P<0.05)表达水平降低。结论:沉默METTL3可抑制JBMMSCs的增殖、迁移及成骨分化。 展开更多
关键词 METTL3 颌骨骨髓间充质干细胞 成骨分化 m6A甲基化
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BMSC骨脂分化失衡诱发骨质疏松研究进展
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作者 欧亿林 彭睿 +2 位作者 毛钰蘅 翁锡全 元宇 《中国骨质疏松杂志》 北大核心 2025年第2期289-295,共7页
骨质疏松症(osteoporosis,OP)是一种以骨量流失为主要特征的全身性骨病,其发病率已呈现出高发的态势。骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cell,BMSC)是一种具有高度可塑性的成体干细胞,可分化为成骨细胞、脂肪细... 骨质疏松症(osteoporosis,OP)是一种以骨量流失为主要特征的全身性骨病,其发病率已呈现出高发的态势。骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cell,BMSC)是一种具有高度可塑性的成体干细胞,可分化为成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞等类型,其分化去向影响骨形成与骨吸收之间的平衡。在骨髓微环境中,BMSC的分化命运受Wnt、Notch、Hedgehogs和BMP等信号通路及lncRNAs、circRNA和外泌体等因素的调控,它们共同形成一个复杂而庞大的调控网络,对BMSC的骨脂分化产生正向或负向的调控效应。因此,BMSC成骨和成脂平衡的失调将会加剧骨髓脂肪化的程度,引发机体炎症反应,导致骨代谢紊乱,进而诱发骨质疏松症。多项研究表明,抑制BMSC成脂分化,促进其成骨分化是防治骨质疏松症的重要策略之一。然而,目前国内研究BMSC骨脂分化失衡诱发骨质疏松的相关综述报道较少。鉴于此,笔者在综合国内外相关文献的基础上,概述了调控BMSC骨脂分化的相关信号通路,探讨了BMSC骨脂分化失衡对骨质疏松发生发展的影响,旨在为骨质疏松症的治疗及靶向药物的研制提供理论依据。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 成骨分化 成脂分化 骨代谢 骨质疏松
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大鼠骨髓MSCs体外分离培养及多向分化的实验研究 被引量:13
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作者 韩立赤 胡静 +2 位作者 戚孟春 邹淑娟 王大章 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2004年第2期142-145,共4页
目的 :建立骨髓MSCs体外分离培养体系 ,并进行多向分化诱导 ,以证实其多向分化潜能 ,为MSCs进一步的临床应用研究提供实验依据。方法 :用密度梯度离心法分离大鼠骨髓MSCs ,并对其形态学特征进行观察。用诱导剂对MSCs向成骨细胞、神经元... 目的 :建立骨髓MSCs体外分离培养体系 ,并进行多向分化诱导 ,以证实其多向分化潜能 ,为MSCs进一步的临床应用研究提供实验依据。方法 :用密度梯度离心法分离大鼠骨髓MSCs ,并对其形态学特征进行观察。用诱导剂对MSCs向成骨细胞、神经元样细胞和成肌细胞进行诱导分化 ,并进行形态学观察和免疫细胞化学检测。结果 :用密度梯度离心法成功分离获得了高纯度的骨髓MSCs,细胞增殖活性强。经骨向诱导后 ,ALP和矿化结节染色阳性 ;免疫细胞化学染色提示神经向诱导神经元特异性标志蛋白NSE和NF2 0 0 ,成肌细胞标志蛋白Deamin和Con nexin - 4 3阳性表达。结论 :采用密度梯度离心法成功建立了大鼠骨髓MSCs体外分离和培养体系 ;并能够向成骨细胞。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 细胞培养 多向分化 密度梯度离心法 细胞形态学 大鼠 组织工程 种子细胞
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针刺任督脉对脑缺血MSCs移植后促转分化为神经元作用机制的研究思路 被引量:10
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作者 杨卓欣 陈鹏典 +8 位作者 于海波 罗文舒 皮敏 吴永刚 彭君华 刘永锋 张少芸 缑燕华 洪媛媛 《辽宁中医杂志》 CAS 2012年第9期1663-1666,共4页
间充质干细胞(MSCs)体外移植为临床治疗脑缺血提供前沿的思路和诱人的前景。然而,MSCs在体移植时,其神经元分化率较低。寻找促进MSCs转化为神经元的方法对未来其临床应用和疗效意义重大。前期研究表明,针刺任督脉穴位对脑缺血后神经再... 间充质干细胞(MSCs)体外移植为临床治疗脑缺血提供前沿的思路和诱人的前景。然而,MSCs在体移植时,其神经元分化率较低。寻找促进MSCs转化为神经元的方法对未来其临床应用和疗效意义重大。前期研究表明,针刺任督脉穴位对脑缺血后神经再生具有积极效应,提示针刺任督脉与MSCs移植联用可能起到促进其转分化为神经元的作用。针刺任督脉有可能通过促进MSCs定殖及移植后向神经元分化和宿主细胞分泌功能、上调损伤区微血管密度、抑制细胞凋亡等,从而起到促进其转分化为神经元的作用。上述思路为中西医结合治疗脑缺血提供新的线索。 展开更多
关键词 间充质干细胞移植 脑缺血 任督脉 针刺
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左归丸含药血清调节Runx2激活ALP、OPN蛋白促进BMSCs增殖和分化的研究 被引量:13
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作者 刘飞祥 樊巧玲 +6 位作者 谭峰 李星 麦聪英 叶素敏 张明玥 柴毅 吴丹 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期653-657,共5页
目的探讨左归丸(Zuoguiwan,ZGW)的补肾填精、益髓壮骨的作用,促进骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的增殖和向成骨细胞方向分化。方法制备ZGW含药血清,设置10%FBS DMEM组、成骨诱导液组、2.5%空白大鼠血清-... 目的探讨左归丸(Zuoguiwan,ZGW)的补肾填精、益髓壮骨的作用,促进骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的增殖和向成骨细胞方向分化。方法制备ZGW含药血清,设置10%FBS DMEM组、成骨诱导液组、2.5%空白大鼠血清-成骨诱导液组、2.5%ZGW含药血清-成骨诱导液组。采用MTT法观察各组对BMSCs的增殖,使用碱性磷酸酶钙钴染色法检测BMSCs向成骨细胞方向的分化能力,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)法检测细胞培养液中AKP的含量,Western blot检测BMSCs中Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙蛋白(osteocalcin,OPN)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)蛋白的表达。结果2.5%ZGW含药血清-成骨诱导液组能够促进BMSCs的快速增殖,较早地进入平台期,促进BMSCs中AKP的分泌,提高ALP含量,上调BMSCs细胞中Runx2、ALP和OPN的蛋白表达水平。结论ZGW抗骨质疏松的分子机制,可能与调节Runx2激活ALP、OPN蛋白表达,促进BMSCs增殖和向成骨细胞方向分化有关。 展开更多
关键词 左归丸 Runt相关转录因子2 骨髓间充质干细胞 骨质疏松
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CCK-8与MTT法检测左归丸含药血清干预BMSCs增殖条件的比较 被引量:9
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作者 刘飞祥 谭峰 +6 位作者 樊巧玲 李星 叶素敏 张明玥 柴毅 麦聪英 吴丹 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期6-10,共5页
目的探讨CCK-8与MTT法在检测左归丸含药血清干预大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖时所需的最佳实验条件,并比较两种方法的优缺点。方法用左归丸含药血清进行干预P3 BMSCs,孵育结束后,分别加入CCK-8... 目的探讨CCK-8与MTT法在检测左归丸含药血清干预大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖时所需的最佳实验条件,并比较两种方法的优缺点。方法用左归丸含药血清进行干预P3 BMSCs,孵育结束后,分别加入CCK-8与MTT试剂,检测两种方法的最佳波长、培养时间、灵敏度和增殖时间。结果CCK-8法与MTT法检测BMSCs的最佳波长分别为450 nm和550 nm,孵育时间分别为3 h和4 h,细胞接种密度分别为0.1×10^(4)/孔和0.25×10^(4)/孔。CCK-8法与MTT法在BMSCs接种密度分别高于0.25×10^(4)/孔和0.5×10^(4)/孔时,两种方法检测所得OD值均提早进入平台期,易出现假S型增长曲线。而当密度分别低于0.05×10^(4)/孔和0.1×10^(4)/孔时,细胞增加缓慢,难以形成S型增长曲线,不能反映出BMSCs的增殖特性。与CCK-8法相比较,在细胞密度低于0.1×10^(4)/孔或高于2×10^(4)/孔时,MTT法对BMSCs在翻倍时OD值增加的响应量无明显变化,差异无统计学意义。而细胞密度为0.25×10^(4)/孔至1×10^(4)/孔时,MTT法对BMSCs在翻倍时OD值增加的响应量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MTT法更适用于左归丸含药血清干预BMSCs增殖和分化的研究。 展开更多
关键词 CCK-8法 MTT法 骨髓间充质干细胞 左归丸
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补肾活血汤石油醚提取物对BMSCs迁移过程中Wnt5a/PKC通路的影响 被引量:10
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作者 罗辉 吴志方 +4 位作者 沈玮 胡流超 王斌 余丽娟 罗毅文 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2462-2468,共7页
目的探讨补肾活血汤(熟地黄、菟丝子、补骨脂,等)石油醚提取物对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的迁移作用及相关机制。方法全骨髓贴壁法培养BMSCs,取第3代细胞用于实验,采用流式细胞仪检测细胞表面抗原,细胞划痕、Transwell实验观察补肾... 目的探讨补肾活血汤(熟地黄、菟丝子、补骨脂,等)石油醚提取物对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的迁移作用及相关机制。方法全骨髓贴壁法培养BMSCs,取第3代细胞用于实验,采用流式细胞仪检测细胞表面抗原,细胞划痕、Transwell实验观察补肾活血汤石油醚提取物0、25、50、100、200μg/m L剂量组的细胞迁移能力,Western blot和RT-PCR检测Wnt5a、蛋白激酶C(PKC)表达情况。结果第3代BMSCs表面抗原CD29、CD90、CD44表达阳性,而CD45表达阴性;细胞划痕6 h及12 h后,药物各剂量组细胞迁移速度明显高于空白组(P<0.05,P<0.01);Transwell实验中100μg/m L补肾活血汤石油醚提取物为促细胞迁移最佳剂量,差异有统计学意义(P<0.01);RT-PCR结果显示与空白对照组比较,药物各剂量组的Wnt5a mRNA水平均升高(P<0.05,P<0.01),而与空白对照组的PKC mRNA水平比较,药物只有100μg/m L剂量mRNA表达水平升高(P<0.01);Western blot结果表明药物组各剂量的Wnt5a、PKC蛋白表达较空白对照组都明显升高(P<0.01),均且以100μg/m L剂量最高(P<0.01)。结论补肾活血汤石油醚提取物可以促进BMSCs体外迁移,其作用机制可能与Wnt5a/PKC信号通路有关。 展开更多
关键词 补肾活血汤 信号通路 体外迁移 骨髓间充质干细胞 WNT5A PKC
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三七总皂甙和维甲酸联合诱导大鼠MSCs分化为神经元样细胞 被引量:6
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作者 施雪英 陈先文 +2 位作者 胡慧敏 徐仿成 任于果 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期612-613,624,共3页
目的:体外探讨三七总皂甙、维甲酸对大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)分化为神经元样细胞的影响。方法:以三七总皂甙和维甲酸为诱导条件诱导大鼠MSCs分化,免疫细胞化学检测分化细胞的神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、乙酰... 目的:体外探讨三七总皂甙、维甲酸对大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)分化为神经元样细胞的影响。方法:以三七总皂甙和维甲酸为诱导条件诱导大鼠MSCs分化,免疫细胞化学检测分化细胞的神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、乙酰胆碱酯酶(AchE)、γ-氨基丁酸(GABA)、酪氨酸羟化酶(TH)的表达情况。结果:免疫细胞化学显示MSCs诱导后具有神经细胞的形态,NSE、AchE、GABA、TH有阳性表达,GFAP表达为阴性。结论:三七总皂甙和维甲酸联合应用对大鼠骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞及在提高其分化率中起着重要作用。 展开更多
关键词 骨髓间质干细胞 神经元 三七皂甙 维甲酸
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实时定量PCR检测GDNF基因转染大鼠BMSCs后的转录水平 被引量:6
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作者 杨朝鲜 马芳 +3 位作者 袁琼兰 周玲 高小青 邓莉 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期961-964,共4页
目的了解外源性胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的转录水平。方法体外分离培养大鼠BMSCs,将其随机分为GDNF基因转染组、空质粒转染组和未转染组3组;GDNF基因转染组和空质粒转染组分别用GDNF基因和... 目的了解外源性胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的转录水平。方法体外分离培养大鼠BMSCs,将其随机分为GDNF基因转染组、空质粒转染组和未转染组3组;GDNF基因转染组和空质粒转染组分别用GDNF基因和空质粒重组腺病毒感染BMSCs,并按感染后培养时间的不同(3、6、9和12天)又分为4个亚组。采用实时定量PCR技术检测GDNF基因在BMSCs中的转录水平。结果空质粒转染组和未转染组无GDNFmRNA的表达,GDNF基因转染组在转染后3~12天的GDNFmRNA相对表达量为0.00751±0.00067。结论腺病毒介导的基因转染技术将GDNF基因转染至骨髓间充质干细胞中,有外源性基因GDNFmRNA的表达,这为进一步研究以GDNF基因转染的BMSCs治疗中枢神经系统疾病奠定了基础。 展开更多
关键词 胶质细胞源性神经营养因子 大鼠 骨髓间充质干细胞 基因转染 实时定量PCR
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bMSCs移植对单侧输尿管结扎大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响 被引量:5
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作者 仙淑丽 刘英莉 +2 位作者 沈波 徐影 张薇 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期421-425,共5页
目的探讨骨髓间充质干细胞(bMSCs)移植对单侧输尿管结扎(UUO)模型大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法自Wistar大鼠股骨和胫骨分离bMSCs,经体外传代培养、成脂诱导及鉴定后制备细胞悬液。54只Wistar大鼠随机分为假手术对照组(n=18)、bMS... 目的探讨骨髓间充质干细胞(bMSCs)移植对单侧输尿管结扎(UUO)模型大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法自Wistar大鼠股骨和胫骨分离bMSCs,经体外传代培养、成脂诱导及鉴定后制备细胞悬液。54只Wistar大鼠随机分为假手术对照组(n=18)、bMSC注射组(bMSC组,n=18)和生理盐水注射组(PS组,n=18)。bMSC组和PS组大鼠于UUO模型建立的同时经下腔静脉分别注入bMSCs和等体积生理盐水。于建模后第3、7和14天分批处死大鼠并采集肾脏组织标本,RT-PCR技术检测肾小管细胞FasLmRNA表达,免疫组化染色检测FasL蛋白表达及分布;TUNEL法检测肾小管细胞凋亡,计算凋亡指数。结果与假手术组比较,bMSC组和PS组建模后各时间点FasL mRNA及蛋白表达均明显上调,肾小管细胞凋亡指数显著增加(均P<0.05)。建模后第3、7天时,bMSC组FasL mRNA和蛋白表达的上调幅度及肾小管细胞凋亡指数的增加程度均明显低于PS组(P<0.05);至建模后第14天时,bMSC组与PS组各项检测指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论静脉注入bMSCs对UUO模型大鼠肾小管上皮细胞凋亡有短期抑制作用。 展开更多
关键词 细胞凋亡 FASL基因 单侧输尿管结扎 肾小管上皮细胞 骨髓间充质干细胞
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rhTGF-β_1对SD大鼠MSCs骨向分化的影响及机制研究 被引量:8
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作者 尹素娟 张荣华 +2 位作者 朱晓峰 王攀攀 杨丽 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期460-466,共7页
目的:通过观察重组人转化生长因子β1(rhTGF-β1)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖和骨向分化能力的影响,以及对骨形态发生蛋白2(BMP-2)、Smad4及核心结合因子α1(Cbfa1)的作用,阐释其对MSCs骨向分化影响以及可能的作用机制。方法:用... 目的:通过观察重组人转化生长因子β1(rhTGF-β1)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖和骨向分化能力的影响,以及对骨形态发生蛋白2(BMP-2)、Smad4及核心结合因子α1(Cbfa1)的作用,阐释其对MSCs骨向分化影响以及可能的作用机制。方法:用全骨髓贴壁法分离、纯化SD大鼠MSCs;用MTT法检测0、5、10、20、40、80和100μg/L rhTGF-β1对MSCs增殖活性的影响;以碱性磷酸酶(ALP)活性及ALP染色阳性率确定rhTGF-β1的最佳促MSCs骨向分化浓度,并以该浓度对MSCs骨向分化进行干预。按是否添加经典成骨诱导液将实验分为:正常组、经典组、rhTGF-β1组和rhTGF-β1+经典组。通过检测ALP、I型胶原、骨钙素表达和钙化结节的数目,评价各组骨向分化能力;通过检测BMP-2、Smad4和Cbfa1 mRNA的表达,评价各组促MSCs骨向分化的可能作用机制。结果:rhTGF-β1最佳促MSCs增殖浓度为10μg/L,最佳促MSCs骨向分化浓度为5μg/L。经典组、rhTGF-β1组和rhTGF-β1+经典组均能促进MSCs骨向分化,刺激BMP-2分泌,并上调Smad4和Cbfa1 mRNA的表达,且rhTGF-β1对MSCs成骨分化的早期、中期效果好,而rhTGF-β1+经典组对MSCs成骨分化的晚期效果更为明显。结论:经典组、rhTGF-β1组和rhTGF-β1+经典组均有促MSCs骨向分化的作用,其机制可能是促进BMP-2的分泌,通过TGF-β超家族/Smads信号通路调控骨向分化。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 成骨分化 转化生长因子
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GSB中药血清对rMSCs定向诱导分化为成骨细胞的影响 被引量:8
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作者 阎德文 李海燕 +4 位作者 吴清平 付林 罗国春 桂耀庭 肖建德 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2007年第7期480-485,共6页
目的观察GSB中药血清对大鼠MSCs定向诱导分化成骨的影响。方法将培养的rMSCs分为对照组(C组)[含10%胎牛血清,100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的完全培养液]、诱导组(O组)[完全培养液,加诱导培养液(0.1μmol/L地塞米松、10mmol/Lβ... 目的观察GSB中药血清对大鼠MSCs定向诱导分化成骨的影响。方法将培养的rMSCs分为对照组(C组)[含10%胎牛血清,100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的完全培养液]、诱导组(O组)[完全培养液,加诱导培养液(0.1μmol/L地塞米松、10mmol/Lβ-甘油磷酸钠及50μg/ml维生素C),加20%空白血清]和含药血清诱导组(G组)[完全培养液加诱导培养液诱导培养液中加入20%含药血清)。显微镜下观察细胞形态变化,生化法测定上清中Ca^2+浓度,Gomori改良钙钴法进行ALP染色,Von Kossa法进行矿化结节染色,RT-PCR法测定Ⅰ型胶原(COLL1)和脂蛋白脂酶(LPL)的表达,放免法测定上清中骨钙素含量。结果O组和G组在加入诱导培养液3-4天后梭形细胞比例减少,细胞变形成多角形、乃至方形,部分区域细胞成多层生长;改良Gomori钙钻法碱性磷酸酶染色阳性细胞,Von Kassa染色发现钙盐沉积;培养9d后细胞Ca^2+浓度开始升高,并随时间持续显著增长,且G组明显高于O组。自第15d后,O组和G组细胞ALP活性随时间延长而明显增高,且G组显著高于O组;培养的第14d,G组骨钙素分泌量明显高于O组。成骨诱导剂作用MSCs12d后,COLLⅠ mRNA表达阳性,LPL mRNA表达阴性,且G组比O组COLLⅠ mRNA表达更强。结论补肾填精中药GSB促进骨钙素分泌、增强ALP活性、促钙盐沉积,具有增强成骨诱导剂诱导rMSCs向成骨细胞分化,并促进成骨细胞成熟作用。 展开更多
关键词 含药血清 间充质干细胞 成骨细胞 分化
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