锰过氧化物酶与阴离子型聚丙烯酰胺计算机分子模拟

1

作者 王方略 张力雯 +3 位作者 张东晨 徐敬尧 吴学凤 邓胜松 《环境化学》 北大核心 2025年第4期1468-1477,共10页

为探究锰过氧化物酶(MnP)与阴离子型聚丙烯酰胺(HPAM)的微观相互作用,采用分子对接和分子动力学(MD)模拟研究阴离子型聚丙烯酰胺(HPAM)与MnP的结合,根据-CDOCKER Energy_score打分最高的原则,对获得最佳结合构象进行分析.结合亲和力分... 为探究锰过氧化物酶(MnP)与阴离子型聚丙烯酰胺(HPAM)的微观相互作用,采用分子对接和分子动力学(MD)模拟研究阴离子型聚丙烯酰胺(HPAM)与MnP的结合,根据-CDOCKER Energy_score打分最高的原则,对获得最佳结合构象进行分析.结合亲和力分析表明,MnP对HPAM-5有最高的亲和力,而且MnP对HPAM的亲和力随其碳链的延长逐渐升高.相互作用分析表明,MnPHPAM-2的稳定性比MnP-HPAM-3更差是由于HPAM-2分子内氢键;MnP-HPAM-4比MnP-HPAM-2和MnP-HPAM-3更稳定是由于盐桥;强氢键是MnP-HPAM-5最稳定的主要原因.MD模拟结果分析表明,MnP-HPAM-4享有最小的RMSD、RMSF和Rg,此时复合物结合是最稳定的.根据模拟及降解实验结果提出了MnP降解HPAM机理:H2O2引发MnP中Mn^(2+)氧化为Mn^(3+);Mn^(3+)从HPAM(1)和(2)攻击位点上抢夺一个电子而引发自由基链反应,在不破坏化学键下产生2种阳离子自由基,而且Mn^(3+)还原成Mn^(2+)供循环使用. 展开更多

关键词 锰过氧化物酶(mnp) 阴离子型聚丙烯酰胺(HPAM) 分子对接 分子动力学(MD) 模拟.

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一色齿毛菌产MnP的条件优化及对染料的脱色 被引量：4

2

作者 于存 池玉杰 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第7期121-127,共7页

锰过氧化物酶（MnP）是白腐菌分泌的一种能有效降解木质素及多种异生物质的过氧化物酶。首先对一色齿毛菌在初始条件下进行培养,获得其产生MnP的活性规律曲线,进而进行最佳碳源和最佳氮源的筛选及2次正交试验对一色齿毛菌产MnP的培养条... 锰过氧化物酶（MnP）是白腐菌分泌的一种能有效降解木质素及多种异生物质的过氧化物酶。首先对一色齿毛菌在初始条件下进行培养,获得其产生MnP的活性规律曲线,进而进行最佳碳源和最佳氮源的筛选及2次正交试验对一色齿毛菌产MnP的培养条件进行优化;然后对优化后的胞外酶液进行5种染料的脱色研究。结果表明,一色齿毛菌产MnP的最优组合为：果糖10 g·L^-1、硝酸铵0.2 g·L^-1、Mn2＋2.67 mmol·L^-1、pH 5.5、250 mL三角瓶70 mL装液量、150 r·min^-1摇瓶培养、接种=8 mm的菌片9片、在34℃下培养7天后MnP活性高达95.47 U·L^-1,是初始培养条件最高酶活的5.2倍。染料脱色结果表明,一色齿毛菌对3种结构类型的5种染料都有较大程度的脱色,其中8天时对活性黑的脱色最为彻底,脱色率为98.4%;对中性红、结晶紫、活性红和刚果红的脱色率也高达72.3%-89.4%。 展开更多

关键词 一色齿毛菌 锰过氧化物酶 优化培养 染料脱色 活性黑

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偏肿革裥菌Lg-mnp1基因克隆及表达研究 被引量：4

3

作者 闫洪波 池玉杰 吴书景 《安徽农业科学》 CAS 2014年第11期3186-3190,共5页

[目的]研究偏肿革裥菌Lg-mnp1基因的克隆及表达情况。[方法]根据白腐菌锰过氧化物酶(MnP)基因保守序列设计引物,采用PCR、RACE及染色体步移等方法,克隆偏肿革裥菌Lenzites gibbosa CB1的全长MnP1基因(GenBank登录号JQ327834),进行蛋白... [目的]研究偏肿革裥菌Lg-mnp1基因的克隆及表达情况。[方法]根据白腐菌锰过氧化物酶(MnP)基因保守序列设计引物,采用PCR、RACE及染色体步移等方法,克隆偏肿革裥菌Lenzites gibbosa CB1的全长MnP1基因(GenBank登录号JQ327834),进行蛋白序列分析,并通过双酶切的方法获得重组质粒,将该重组质粒电转化至巴斯德毕赤酵母中进行异源表达。[结果]获得偏肿革裥菌Lenzites gibbosa CB1的全长MnP1基因,命名为Lg-mnp1。蛋白序列分析表明Lg-MnP1含有4个二硫键属于短MnP,预测成熟蛋白分子量为35.94kD,pI为4.43。通过双酶切的方法将Lg-mnp1的开放阅读框(ORF)序列连接到pPICZB载体上,获得重组质粒pPICZB/Lg-mnp1,转化子经PCR验证后,在BMMY培养基中甲醇诱导培养,在未添加血红素的培养液中MnP胞外酶活在72 h达到最高为7 U/L,表明Lg-mnp1已被转化至毕赤酵母中并可诱导表达。[结论]该方法对偏肿革裥菌Lg-mnp1基因的克隆及表达情况进行研究,为偏肿革裥菌Lg-mnp1基因的进一步应用提供了依据。 展开更多

关键词 偏肿革裥菌 锰过氧化物酶 基因克隆 毕赤酵母 基因表达

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一色齿毛菌锰过氧化物酶(MnP)活性检测与MnP1基因的克隆 被引量：2

4

作者 于存 池玉杰 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第3期109-116,共8页

锰过氧化物酶(MnP)广泛存在于白腐菌中,是降解木质素的主要酶系。首先对采自长白山的一色齿毛菌菌株CB1降解木质素的过氧化物酶进行检测,结果表明一色齿毛菌可产生MnP,但不产生木质素过氧化物酶(LiP);Mn2+不是其产生MnP的必要因子,在LNA... 锰过氧化物酶(MnP)广泛存在于白腐菌中,是降解木质素的主要酶系。首先对采自长白山的一色齿毛菌菌株CB1降解木质素的过氧化物酶进行检测,结果表明一色齿毛菌可产生MnP,但不产生木质素过氧化物酶(LiP);Mn2+不是其产生MnP的必要因子,在LNAS培养基中加入木屑为底物的条件下,一色齿毛菌MnP最大酶活为18.4 U·L-1。在酶活检测的基础上,为了深入研究MnP降解木质素的功能,根据已知的MnP基因保守区序列设计引物,以一色齿毛菌菌株CB1的基因组DNA为模板,采用染色体步移技术,克隆到该菌株一个编码MnP1蛋白的全长DNA基因(GenBank登录号JQ782578.1),命名为Cu-mnp1。该基因DNA全长4 268 bp,含有16个外显子和15个内含子;其启动子区域含有TATA-Box,CAAT-Box,SP1,AP1,HSE,XRE等多个顺式作用元件;其cDNA基因(GenBank登录号JQ782579.1)编码区长度为1 092 bp,编码363个氨基酸。BLAST比对分析表明,在cDNA水平上Cu-mnp1与猴头菇菌株CB1的mnp2基因的相似性最高为70%。蛋白结构分析表明,Cu-MnP1含有4个二硫键属于短MnP。 展开更多

关键词 一色齿毛菌(单色下皮黑) 木质素降解酶 锰过氧化物酶 基因克隆 染色体步移

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偏肿革裥菌系统发育与Lg-mnp2和Lg-mnp3基因克隆及结构特征 被引量：3

5

作者 池玉杰 闫洪波 吴书景 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期64-69,87,共7页

白腐菌偏肿革裥菌Lenzites gibbosa能分泌降解木质素的锰过氧化物酶(MnPs),为进一步鉴定试验菌株,对菌株L. gibbosa CB1进行了ITS序列(Gen Bank登录号为JF279440)扩增与测序,并进行了基于ITS序列的比对与系统发育分析,结果表明CB1与桦... 白腐菌偏肿革裥菌Lenzites gibbosa能分泌降解木质素的锰过氧化物酶(MnPs),为进一步鉴定试验菌株,对菌株L. gibbosa CB1进行了ITS序列(Gen Bank登录号为JF279440)扩增与测序,并进行了基于ITS序列的比对与系统发育分析,结果表明CB1与桦革裥菌L. betulina和栓菌属Trametes等相关白腐菌的亲缘关系较近而聚类在一起,并与24个同种其他菌株的ITS序列覆盖度在85%～97%期间内的相似性都为99%,说明该菌株为偏肿革裥菌。为了获得该菌株多个编码MnP家族的基因,从而为研究MnP基因的表达调控奠定序列结构的基础,根据已知白腐菌MnPs基因保守区和已经扩增出的基因片段设计引物,以L. gibbosa CB1的基因组DNA和总RNA为模板,采用PCR、RT-PCR、RACE及染色体步移等方法,克隆到该菌株编码MnP2和MnP3的全长c DNA和DNA基因(Gen Bank登录号分别为JQ388597、JN571114; JQ411249、JN571116),分别命名为Lg-mnp2和Lg-mnp3。2个基因DNA全长分别为2 869、3 992 bp,都含有6个外显子和5个内含子;其启动子区域都含有TATA-Box、CAAT-Box、AP2、MRE等顺式作用元件,Lg-mnp2还含有AP1,Lg-mnp3还含有HSE;其c DNA基因分别含有50、52 bp的5'UTR,150、249 bp的3'UTR和1098、1 101 bp的完整开放阅读框ORF,分别编码了365、366个氨基酸的蛋白质多肽前体(Gen Bank登录号分别为AFC37493、AFC37494),成熟的Lg-mnp2蛋白含有339个氨基酸,比Lg-MnP1蛋白(Gen Bank登录号为ACO92620)多1个氨基酸;成熟的Lg-mnp3蛋白含有340个氨基酸,比Lg-MnP2蛋白多1个氨基酸。 展开更多

关键词 偏肿革裥菌 系统发育 锰过氧化物酶 基因克隆 序列分析

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偏肿革裥菌MnP基因在构巢曲霉中转化方法的建立 被引量：2

6

作者 胡美美 池玉杰 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期129-133,共5页

对已经构建好的携带有白腐菌偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)锰过氧化物酶完整编码序列基因的载体质粒pMDTM18-T/Lg-mnp、以及整合型表达载体质粒pLB01分别双酶切,然后进行连接构建了重组质粒pLB01/Lg-mnp。对构巢曲霉(Aspergillus nidula... 对已经构建好的携带有白腐菌偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)锰过氧化物酶完整编码序列基因的载体质粒pMDTM18-T/Lg-mnp、以及整合型表达载体质粒pLB01分别双酶切,然后进行连接构建了重组质粒pLB01/Lg-mnp。对构巢曲霉(Aspergillus nidulans)尿嘧啶尿苷营养缺陷体菌株TN02A7进行了制备分生孢子原生质体酶解方法的摸索。结果表明:将溶壁酶、纤维素酶和蜗牛酶3种酶以1∶1∶1的比例混合,能有效地使构巢曲霉的分生孢子形成原生质体。采用PEG/CaCl2介导的原生质体转化方法成功地将L.gibbosa的MnP基因转入到了构巢曲霉中,获得了携带有白腐菌MnP基因的构巢曲霉转化子菌株。 展开更多

关键词 偏肿革裥菌 锰过氧化物酶 构巢曲霉 原生质体

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构巢曲霉转化子菌株产MnP条件优化及对3种染料的脱色 被引量：1

7

作者 孙世娜 池玉杰 +1 位作者 于存 李月 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第4期75-82,共8页

【目的】对转入猴头菌MnP1和MnP2基因的2个构巢曲霉转化子菌株TN02A7-He-mnp1和TN02A7-Hemnp2产MnP的初始培养条件进行优化,然后用优化后的酶液对3种染料进行脱色研究,以期提高锰过氧化物酶(MnP)活性。【方法】采用单因素试验进行最适... 【目的】对转入猴头菌MnP1和MnP2基因的2个构巢曲霉转化子菌株TN02A7-He-mnp1和TN02A7-Hemnp2产MnP的初始培养条件进行优化,然后用优化后的酶液对3种染料进行脱色研究,以期提高锰过氧化物酶(MnP)活性。【方法】采用单因素试验进行最适产酶温度的筛选;正交试验检测血红素浓度、Mn^(2+)浓度、pH值和转速4个因素在3个水平下对酶活性的影响,并通过优化培养验证试验检测酶活性;吸光度法检测优化后的酶液对3种染料的脱色率。【结果】菌株TN02A7-He-mnp1产TN02A7-He-MnP1最适培养条件为:在MMPGRT培养基的基础上,加入2 g青杨木屑作为产酶底物,Mn^(2+)浓度为267μmol·L^(-1)、氯化血红素浓度为0.05 g·L^(-1)、培养液pH值为7.5,100 mL三角瓶中装液量为50 mL、接入2个φ=10 mm的菌块,于37℃、180 r·min^(-1)的摇床中培养120 h;菌株TN02A7-He-mnp2产TN02A7-He-MnP2最适培养条件与TN02A7-He-mnp1相似,只是氯化血红素溶液浓度为0.03 g·L^(-1),摇床转速为220 r·min^(-1),其他条件相同。在上述最适培养条件下,2个构巢曲霉转化子菌株产TN02A7-He-MnP1和TN02A7-He-MnP2的酶活性分别为133.62和147.09 U·L^(-1),是初始培养条件的2.89和3.46倍。染料脱色试验表明,2个菌株对杂环类染料中性红和偶氮类染料刚果红在4 h内达到58%以上的脱色率,16 h对中性红达到或接近100%,20 h对刚果红达到或接近100%。【结论】通过优化培养基成分与条件可以提高2个构巢曲霉转化子菌株MnP的产酶量,2个菌株对中性红和刚果红都有高效的脱色作用。 展开更多

关键词 锰过氧化物酶 构巢曲霉 转化子 优化培养 染料脱色

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白腐菌木质素降解酶及其在木质素降解过程中的相互作用 被引量：26

8

作者 唐菊 段传人 +2 位作者 黄友莹 孙达 胡江 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期32-36,共5页

木质素是一类不易降解的生物物质,在自然界中,白腐真菌对木质素的降解能力最强。白腐真菌降解木质素主要依靠分泌的三种酶:木质素过氧化物酶(Lip)、锰过氧化物酶(MnP)和漆酶(Lac)。对白腐真菌分泌的三种木质素降解酶在性质、分布等方面... 木质素是一类不易降解的生物物质,在自然界中,白腐真菌对木质素的降解能力最强。白腐真菌降解木质素主要依靠分泌的三种酶:木质素过氧化物酶(Lip)、锰过氧化物酶(MnP)和漆酶(Lac)。对白腐真菌分泌的三种木质素降解酶在性质、分布等方面进行了比较,系统地介绍三种木质素降解酶的催化作用,并阐述其在木质素降解过程中的相互作用。 展开更多

关键词 木质素过氧化物酶(Lip) 锰过氧化物酶(mnp) 漆酶(Lac) 木质素 降解

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白腐真菌培养条件对其分泌木质素降解酶的影响 被引量：28

9

作者 高大文 文湘华 钱易 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第5期572-575,共4页

应用摇瓶试验研究了不同白腐真菌培养条件对其产酶的影响.通过控制不同转速、投加载体等方式考察了白腐真菌的产酶情况.结果表明,在悬浮培养方式下,转速为160r/min时获得的锰过氧化物酶最高(481.6U/L),其酶活是静置、120r/min条件下培养... 应用摇瓶试验研究了不同白腐真菌培养条件对其产酶的影响.通过控制不同转速、投加载体等方式考察了白腐真菌的产酶情况.结果表明,在悬浮培养方式下,转速为160r/min时获得的锰过氧化物酶最高(481.6U/L),其酶活是静置、120r/min条件下培养的65倍和43倍;投加载体后,载体固定化培养获得的木质素过氧化物酶酶活是悬浮培养的71倍,载体投加量对其产酶影响很大,只有当载体处于非浸没状态时才有利于酶活产生,否则酶活极低.因此,选择载体固定化—非浸没—振荡培养方式培养白腐真菌可获得更高的产酶量和酶活. 展开更多

关键词 白腐真菌 形态 固定化 木质素过氧化物酶(LiP) 锰过氧化物酶(mnp)

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黄孢原毛平革菌过氧化物酶的分离、纯化和酶学特性研究 被引量：9

10

作者 徐淑霞 张跃灵 +2 位作者 张世敏 王学东 吴坤 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期295-300,共6页

从木质素降解菌Phanerochaetechrysosporium中纯化出两种木质素降解酶:木质素过氧化物酶(LiP)和锰依赖过氧化物酶(MnP)。经测定LiP和MnP的分子量分别为37kD和40kD,最适作用温度均是37℃;保温2h,LiP的半失活温度为40℃,MnP为45℃;LiP最... 从木质素降解菌Phanerochaetechrysosporium中纯化出两种木质素降解酶:木质素过氧化物酶(LiP)和锰依赖过氧化物酶(MnP)。经测定LiP和MnP的分子量分别为37kD和40kD,最适作用温度均是37℃;保温2h,LiP的半失活温度为40℃,MnP为45℃;LiP最适作用pH2.8,稳定pH2.2～5.2;MnP最适作用pH4.6,稳定pH4.0～7.0。Fe2+对LiP和MnP均表现出促进作用,Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、Fe3+、Ag+、Co2+、NH4+对LiP有促进作用,对MnP则表现出抑制作用。与此相反,Mn2+对MnP酶活的高效促进作用,对LiP表现出了轻度的抑制作用,这也体现出了MnP对Mn2+的依赖性。Cu2+对LiP活性无影响,而对MnP有强烈的抑制作用。Fe3+对两者活性的抑制都达到了90%。 展开更多

关键词 木质素过氧化物酶 锰依赖过氧化物酶 黄孢原毛平革菌 酶的纯化 酶学特性

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Paraconiothyium variable GHJ-4木质素降解酶的酶学性质 被引量：3

11

作者 王凤娟 李伟庆 +3 位作者 牟志美 王彦文 刘庆信 高绘菊 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第1期94-100,共7页

【目的】研究木质素降解子囊菌Paraconiothyrium variabile GHJ-4分泌的漆酶(laccase)、锰过氧化物酶(MnP)和木质素过氧化物酶(LiP)3种木质素降解酶的酶活性变化规律及其酶学性质,为利用该菌株进行木质素降解酶的工业化生产和应用提供... 【目的】研究木质素降解子囊菌Paraconiothyrium variabile GHJ-4分泌的漆酶(laccase)、锰过氧化物酶(MnP)和木质素过氧化物酶(LiP)3种木质素降解酶的酶活性变化规律及其酶学性质,为利用该菌株进行木质素降解酶的工业化生产和应用提供依据。【方法】分别以愈创木酚、2,6-二甲基苯酚和黎芦醇为底物测定laccase,MnP和LiP的酶活性,研究3种酶的最适反应温度和pH、温度和pH稳定性及金属离子对其活性的影响。【结果】GHJ-4菌株发酵18,15和21天后,分别获得laccase,MnP和LiP最高酶活为1 390.3,30.3和52.5 U·mL^(-1)。laccase的最适反应温度为55℃左右,最适反应pH为5.5左右,在55℃以下、pH 4.0~7.0的范围内较为稳定;MnP的最适反应温度为60℃左右,最适反应pH为5.0左右,在55℃以下、pH 4.0~9.0的范围内较为稳定;LiP的最适反应温度为40℃左右,最适反应pH为3.0左右,在40℃以下、pH 2.0~4.0的范围内较为稳定。Mg^(2+),Zn^(2+),Cu^(2+),K^+对laccase起促进作用,Na^+和Zn^(2+)对LiP起促进作用,Mn^(2+)对MnP起激活作用,而Fe^(3+),Ca^(2+),Pb^(2+),Co^(2+),Al^(3+)对3种酶均起抑制作用,其中尤以5 mmol·L^(-1)Fe^(3+)对3种酶的抑制作用最强。【结论】温度、pH及金属离子对Paraconiothyrium variabile GHJ-4 3种木质素降解酶的酶学特性均有着不同程度的影响。 展开更多

关键词 Paraconiothyrium variabile GHJ-4 漆酶 锰过氧化物酶 木质素过氧化物酶 酶学性质

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白腐菌Phanerochaete sordida YK-624产锰过氧化物酶的生产及初步纯化 被引量：4

12

作者 谢慧芳 近藤隆一郎 李忠正 《林产化学与工业》 EI CAS CSCD 2003年第4期22-26,共5页

　利用白腐菌PhanerochaetesordidaYK 624(ATCC90872),采用Kirk液体培养基在富氧条件下进行振动培养,可得到锰过氧化物酶(MnP)活性较高和漆酶活性微量的酶液。该酶液通过超滤、透析、二乙氨基乙基琼脂糖凝胶(DEAE sepharoseCL 6B,phar... 　利用白腐菌PhanerochaetesordidaYK 624(ATCC90872),采用Kirk液体培养基在富氧条件下进行振动培养,可得到锰过氧化物酶(MnP)活性较高和漆酶活性微量的酶液。该酶液通过超滤、透析、二乙氨基乙基琼脂糖凝胶(DEAE sepharoseCL 6B,pharmacia)离子交换柱层析的方法进行初步纯化后,得到比活性很高(1941.54IU/mg)的MnP酶液。漆酶活性和MnP活性比值的变化、SDS PAGE凝胶电泳试验和406nm附近的吸光值变化均表明,经离子交换柱层析后的YK1部分是主要的MnP,电泳试验同时表明纯化后的主要MnP的分子质量约为43kDa。经超滤、透析、离子交换柱层析纯化后得到的酶液YK1可用于进一步地研究及应用。 展开更多

关键词 白腐菌 锰过氧化物酶 纯化 液体培养 离子交换柱层析 木质素 生物降解 YK-624菌株

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黄孢原毛平革菌产蛋白酶对过氧化物酶的影响 被引量：3

13

作者 鲁时瑛 王树英 +1 位作者 李华钟 陈坚 《无锡轻工大学学报（食品与生物技术）》 CSCD 北大核心 2003年第4期23-26,31,共5页

在培养黄孢原毛平革菌产生木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶(MnP)过程中产生的胞外蛋白酶与LiP和MnP的快速失活有关.该蛋白酶在pH7的条件下酶活很高,其主要作用是促进LiP和MnP的分解,而不是抑制它们的产生.HgCl2是蛋白酶的抑制剂,... 在培养黄孢原毛平革菌产生木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶(MnP)过程中产生的胞外蛋白酶与LiP和MnP的快速失活有关.该蛋白酶在pH7的条件下酶活很高,其主要作用是促进LiP和MnP的分解,而不是抑制它们的产生.HgCl2是蛋白酶的抑制剂,其抑制机理类似于HgCl2对蛋白酶K(PK)的抑制.添加HgCl2的发酵液能提高过氧化物酶的酶活和稳定性,最佳添加量为1μmol/L,最佳添加时间在接种后第5天. 展开更多

关键词 黄孢原毛平革菌 木质素过氧化物酶 锰过氧化物酶 蛋白酶 抑制机理 染料废水处理

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偏肿革裥菌锰过氧化物酶酶学性质和染料脱色 被引量：3

14

作者 张玉龙 池玉杰 冯连荣 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第9期73-80,共8页

【目的】研究白腐菌偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)所产锰过氧化物酶(MnP)纯酶的序列特征、酶学性质及其对染料的脱色能力,为其应用于木质素降解、染料脱色奠定基础。【方法】将纯化后的样品经SDS-PAGE检测后获得的唯一L.gibbosa MnP条... 【目的】研究白腐菌偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)所产锰过氧化物酶(MnP)纯酶的序列特征、酶学性质及其对染料的脱色能力,为其应用于木质素降解、染料脱色奠定基础。【方法】将纯化后的样品经SDS-PAGE检测后获得的唯一L.gibbosa MnP条带切割,采用Nano液相色谱-电喷雾串联质谱法联用(Nano LC-ESI-MS/MS)多肽测序技术对蛋白氨基酸序列进行测定。利用该SDS-PAGE图谱,建立蛋白分子量与迁移率的标准直线,从标准直线上求出MnP纯酶样品的表观分子量;参照酶活测定方法检测最适反应温度及温度稳定性、最适反应p H值及p H稳定性;采用lineweaver-Burk双倒数作图法求解米氏动力学常数Km值。研究L.gibbosa菌种培养液和MnP纯酶液对蒽醌类的茜素红、偶氮类的刚果红、杂环类的中性红和三苯基甲烷类的结晶紫等4种不同类型染料的脱色能力。【结果】串联质谱扫描出2条MnP的保守序列肽段,与克隆到的基因Lg-mnp1编码的Lg-MnP1(Gen Bank登录号:ACO92620)序列完全吻合,表明其所代表的酶蛋白Lg-MnP1就是唯一电泳带中主要的蛋白。Lg-MnP1的表观分子量为45.39 k Da,最适反应温度为35℃,在低于40℃的条件下都具有一定的催化能力,但温度超过50℃后迅速失活;其最适反应pH值为3.5,p H超过4.5反应程度就迅速下降,在p H为2~3时最稳定;在以2,6-DMP为底物时,在21℃条件下其米氏常数Km为6.124 mmol·L^(-1)。L.gibbosa培养液对染料在1 h的脱色率分别为茜素红100%、中性红22.17%、刚果红19.09%,对结晶紫的脱色率很低,在36 h脱色率仅为0.018%。纯化后的Lg-MnP1溶液对染料的最大脱色率在2 h分别为中性红100%、刚果红95.55%、茜素红75.85%和结晶紫36.57%。【结论】SDS-PAGE得到的唯一一条电泳带中的MnP是Lg-MnP1。Lg-MnP1是一种中温性、偏酸性的酶,与2,6-DMP的亲和力较大。L.gibbosa含有菌丝的培养液对茜素红具有彻底的降解效果,但Lg-MnP1纯酶液对中性红、刚果红和结晶紫的降解效率要远高于同时含有菌丝、漆酶和MnPs的培养液。 展开更多

关键词 偏肿革裥菌 锰过氧化物酶 纯化 酶学性质 染料脱色

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活性黑对黄孢原毛平革菌锰过氧化物酶的影响 被引量：4

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作者 喻云梅 刘赟 +1 位作者 黄民生 翁恩琪 《安全与环境学报》 CAS CSCD 2005年第6期4-7,共4页

观察了活性黑KN-B(Reactive Black KN-B,RB KN-B)对黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)锰过氧化物酶(MnP)酶活力和菌丝超微结构的影响以及黄孢原毛平革菌对RB KN-B的降解。于P.chrysosporium培养液MnP酶活达最高前,分别加入... 观察了活性黑KN-B(Reactive Black KN-B,RB KN-B)对黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)锰过氧化物酶(MnP)酶活力和菌丝超微结构的影响以及黄孢原毛平革菌对RB KN-B的降解。于P.chrysosporium培养液MnP酶活达最高前,分别加入质量浓度为50 mg/L,200 mg/L,350 mg/L和500 mg/L的RB KN-B。分光光度法检测培养液MnP酶活,电镜观察菌丝超微结构的影响,紫外可见光谱法检测培养液中RB KN-B的降解。结果显示,1)与对照组相比,50 mg/L RBKN-B组的MnP酶活力增强,200 mg/L3、50 mg/L和500 mg/L组的MnP酶活力均显著低于对照组;2)电镜观察显示,经RB KN-B作用后,菌丝细胞膜受损,细胞内含物减少,胞质浓缩,出现质壁分离现象,500mg/L组有大量细胞解体;3)紫外可见光谱扫描显示,RB KN-B经黄孢原毛平革菌降解,可见光波段最大吸收峰由598 nm移至525 nm和556 nm,峰值减小,紫外波段的吸收峰由315 nm移至352 nm。结果显示,黄孢原毛平革菌对RB KN-B的反应类似机体对不良环境因子的应激反应,经历了诱导、抑制及衰退的过程;RB KN-B对黄孢原毛平革菌菌丝细胞超微结构的损伤随RB KN-B浓度增高而增强,表明RBKN-B对MnP酶活的抑制与黄孢原毛平革菌结构受损密切相关;黄孢原毛平革菌对RB KN-B具有一定的降解能力,其中MnP作为关键酶起了重要的作用。 展开更多

关键词 环境生物学 黄孢原毛平革菌 活性黑KN-B 锰过氧化物酶 超微结构

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白腐菌P．sordida YK-624及其锰过氧化物酶对2-氯酚的转化 被引量：5

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作者 谢慧芳 方林 赵林果 《环境污染与防治》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期51-54,共4页

利用白腐菌P.sordida YK-624和产自该菌株的锰过氧化物酶(MnP)处理2-氯酚(2-CP)。结果表明,当2-CP质量浓度为50mg/L时,培养5d,P.sordidaYK-624能降解50.42%的2-CP;采用300U的MnP处理150mg/L的2-CP,24h时2-CP降解率可达75.00%。利用紫外... 利用白腐菌P.sordida YK-624和产自该菌株的锰过氧化物酶(MnP)处理2-氯酚(2-CP)。结果表明,当2-CP质量浓度为50mg/L时,培养5d,P.sordidaYK-624能降解50.42%的2-CP;采用300U的MnP处理150mg/L的2-CP,24h时2-CP降解率可达75.00%。利用紫外-可见分光光度计、红外光谱仪和高效液相色谱仪对MnP处理过程中的产物进行了分析,表明MnP氧化2-CP过程中有多种产物生成,可能的产物包括醌类和聚合产物。 展开更多

关键词 2-氯酚 白腐菌 锰过氧化物酶

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偏肿革裥菌锰过氧化物酶的分级纯化 被引量：1

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作者 张玉龙 池玉杰 冯连荣 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第8期64-70,共7页

【目的】研究白腐菌偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)锰过氧化物酶(MnP)的分级纯化,以期得到L.gibbosa MnP的纯品和进行后续酶学性质研究。【方法】在对L.gibbosa所产MnPs进行优化培养、获得大量MnPs粗酶液的基础上,通过硫酸铵(NH4)2SO4分... 【目的】研究白腐菌偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)锰过氧化物酶(MnP)的分级纯化,以期得到L.gibbosa MnP的纯品和进行后续酶学性质研究。【方法】在对L.gibbosa所产MnPs进行优化培养、获得大量MnPs粗酶液的基础上,通过硫酸铵(NH4)2SO4分级盐析、聚乙二醇(PEG)沉淀进行粗酶液浓缩、在起始缓冲液中进行透析、经DEAE-琼脂糖CL-6B离子交换柱层析进行梯度洗脱和葡聚糖G-75凝胶过滤柱层析等方法对MnPs粗酶液进行纯化,并对分级纯化方法进行优化,对纯化浓缩后的纯酶样品采用SDS-PAGE方法进行酶纯度检验。【结果】在75%、80%和85%这3种(NH_4)_2SO_4饱和度中,85%的(NH_4)_2SO_4是沉淀MnPs的适宜饱和度,在该饱和度下测得上清液中酶活为3.63 U·L^(-1),蛋白浓度为0.132 mg·mL^(-1),表明MnPs已基本沉淀完全;试管小试法确定离子交换柱层析中上样的最适缓冲体系为pH7的Na_2HPO_4-NaH_2PO_4起始缓冲液;离子交换柱层析后收集的洗脱液检测到3个蛋白吸收峰,其中只在第2个蛋白吸收峰中检测出MnP活性,该MnP活性值变化曲线与蛋白吸光值一致。这个活性峰经凝胶过滤柱层析后,洗脱结果只出现1个明显的蛋白吸收峰,在其中检测出较高的MnP活性;浓缩后的冻干样品经SDS-PAGE电泳检测只在约40 k Da处有1条清晰的蛋白谱带,表明对MnP的纯化已达到电泳纯。【结论】筛选出85%饱和度的(NH_4)2_SO_4盐析法是初期沉淀与纯化L.gibbosa所产MnPs的最适方法;PEG浓缩法简便、易行、有效;初期浓缩后再经过离子交换柱层析和凝胶过滤柱层析可以得到电泳纯的MnP纯化样品。 展开更多

关键词 偏肿革裥菌 锰过氧化物酶 纯化 离子交换柱层析 电泳纯

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麻类生物脱胶与生物制浆酶系 被引量：15

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作者 张运雄 王朝云 《中国麻业》 2002年第2期14-17,共4页

本文对麻类生物脱胶与生物制浆的三类主要酶类,即果胶酶、半纤维素酶(甘露聚糖酶、木聚糖酶)和木质素降解酶进行了比较全面的总结,对其应用前景也进行了评论。

关键词 麻类 生物脱胶 生物制浆 酶系

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粗毛栓菌胞外锰过氧化物酶的纯化及性质(英文)

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作者 孙迅 朱陶 张义正 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第5期40-45,共6页

培养于麦草粉上的白腐担子菌粗毛栓菌分泌胞外木质纤维素降解酶(纤维素酶、木聚糖酶、漆酶、锰过氧化物酶和木质素过氧化物酶)。经过超滤、盐析、离子交换层析、凝胶过滤和活性聚丙烯酰胺凝胶电泳等步骤,获得了初步纯化的锰过氧化物酶... 培养于麦草粉上的白腐担子菌粗毛栓菌分泌胞外木质纤维素降解酶(纤维素酶、木聚糖酶、漆酶、锰过氧化物酶和木质素过氧化物酶)。经过超滤、盐析、离子交换层析、凝胶过滤和活性聚丙烯酰胺凝胶电泳等步骤,获得了初步纯化的锰过氧化物酶组分。利用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电点聚焦技术所测定的锰过氧化物酶的相对分子质量和等电点分别为35.7 ku和pI 2.8。研究结果表明,所纯化的锰过氧化物酶在407nm处具有最大光吸收峰,该酶最适作用pH值和温度分别为pH 5.3和35℃。 展开更多

关键词 粗毛栓菌 木质纤维素降解酶 锰过氧化物酶 纯化 性质分析

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裂拟迷孔菌生物学特性及驯化栽培分析 被引量：8

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作者 汪阳 李硕 +4 位作者 张桐 郭艳芳 李丹 张波 李玉 《中国食用菌》 北大核心 2019年第7期9-14,18,共7页

为了发掘与利用多孔菌资源,对采自辽宁省白狼山国家级自然保护区白腐真菌裂拟迷孔菌(Daedaleopsis confragosa)分离纯化得到的菌株,从碳源、氮源、pH值、温度4个方面进行生物学特性和驯化栽培试验研究,从中选出3个较优水平进行正交试验... 为了发掘与利用多孔菌资源,对采自辽宁省白狼山国家级自然保护区白腐真菌裂拟迷孔菌(Daedaleopsis confragosa)分离纯化得到的菌株,从碳源、氮源、pH值、温度4个方面进行生物学特性和驯化栽培试验研究,从中选出3个较优水平进行正交试验。结果表明,单因素试验中最适碳源是可溶性淀粉,最适氮源为磷酸氢二铵,最适初始pH值为8,最适生长温度为30℃。最适培养条件下对裂拟迷孔菌液体发酵菌种进行锰过氧化物酶(manganese peroxidase, MnP)活力测定,得出酶活在第8天到达峰值19.411 U·L-1,具有一定锰过氧化物酶活性。出菇试验中,二级种选用麦粒菌种,25℃培养。裂拟迷孔菌可在人工栽培下形成子实体,培养料配方为阔叶树木屑78%、麸皮20%、石膏1%、蔗糖1%,含水量65%,从接种至子实体成熟需要54 d。 展开更多

关键词 白腐真菌 生物学特性 驯化栽培 锰过氧化物酶

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