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锰过氧化物酶与阴离子型聚丙烯酰胺计算机分子模拟
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作者 王方略 张力雯 +3 位作者 张东晨 徐敬尧 吴学凤 邓胜松 《环境化学》 北大核心 2025年第4期1468-1477,共10页
为探究锰过氧化物酶(MnP)与阴离子型聚丙烯酰胺(HPAM)的微观相互作用,采用分子对接和分子动力学(MD)模拟研究阴离子型聚丙烯酰胺(HPAM)与MnP的结合,根据-CDOCKER Energy_score打分最高的原则,对获得最佳结合构象进行分析.结合亲和力分... 为探究锰过氧化物酶(MnP)与阴离子型聚丙烯酰胺(HPAM)的微观相互作用,采用分子对接和分子动力学(MD)模拟研究阴离子型聚丙烯酰胺(HPAM)与MnP的结合,根据-CDOCKER Energy_score打分最高的原则,对获得最佳结合构象进行分析.结合亲和力分析表明,MnP对HPAM-5有最高的亲和力,而且MnP对HPAM的亲和力随其碳链的延长逐渐升高.相互作用分析表明,MnPHPAM-2的稳定性比MnP-HPAM-3更差是由于HPAM-2分子内氢键;MnP-HPAM-4比MnP-HPAM-2和MnP-HPAM-3更稳定是由于盐桥;强氢键是MnP-HPAM-5最稳定的主要原因.MD模拟结果分析表明,MnP-HPAM-4享有最小的RMSD、RMSF和Rg,此时复合物结合是最稳定的.根据模拟及降解实验结果提出了MnP降解HPAM机理:H2O2引发MnP中Mn^(2+)氧化为Mn^(3+);Mn^(3+)从HPAM(1)和(2)攻击位点上抢夺一个电子而引发自由基链反应,在不破坏化学键下产生2种阳离子自由基,而且Mn^(3+)还原成Mn^(2+)供循环使用. 展开更多
关键词 锰过氧化物酶(mnp) 阴离子型聚丙烯酰胺(HPAM) 分子对接 分子动力学(MD) 模拟.
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一色齿毛菌产MnP的条件优化及对染料的脱色 被引量:4
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作者 于存 池玉杰 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第7期121-127,共7页
锰过氧化物酶(MnP)是白腐菌分泌的一种能有效降解木质素及多种异生物质的过氧化物酶。首先对一色齿毛菌在初始条件下进行培养,获得其产生MnP的活性规律曲线,进而进行最佳碳源和最佳氮源的筛选及2次正交试验对一色齿毛菌产MnP的培养条... 锰过氧化物酶(MnP)是白腐菌分泌的一种能有效降解木质素及多种异生物质的过氧化物酶。首先对一色齿毛菌在初始条件下进行培养,获得其产生MnP的活性规律曲线,进而进行最佳碳源和最佳氮源的筛选及2次正交试验对一色齿毛菌产MnP的培养条件进行优化;然后对优化后的胞外酶液进行5种染料的脱色研究。结果表明,一色齿毛菌产MnP的最优组合为:果糖10 g·L^-1、硝酸铵0.2 g·L^-1、Mn2+2.67 mmol·L^-1、pH 5.5、250 mL三角瓶70 mL装液量、150 r·min^-1摇瓶培养、接种=8 mm的菌片9片、在34℃下培养7天后MnP活性高达95.47 U·L^-1,是初始培养条件最高酶活的5.2倍。染料脱色结果表明,一色齿毛菌对3种结构类型的5种染料都有较大程度的脱色,其中8天时对活性黑的脱色最为彻底,脱色率为98.4%;对中性红、结晶紫、活性红和刚果红的脱色率也高达72.3%-89.4%。 展开更多
关键词 一色齿毛菌 锰过氧化物酶 优化培养 染料脱色 活性黑
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偏肿革裥菌Lg-mnp1基因克隆及表达研究 被引量:4
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作者 闫洪波 池玉杰 吴书景 《安徽农业科学》 CAS 2014年第11期3186-3190,共5页
[目的]研究偏肿革裥菌Lg-mnp1基因的克隆及表达情况。[方法]根据白腐菌锰过氧化物酶(MnP)基因保守序列设计引物,采用PCR、RACE及染色体步移等方法,克隆偏肿革裥菌Lenzites gibbosa CB1的全长MnP1基因(GenBank登录号JQ327834),进行蛋白... [目的]研究偏肿革裥菌Lg-mnp1基因的克隆及表达情况。[方法]根据白腐菌锰过氧化物酶(MnP)基因保守序列设计引物,采用PCR、RACE及染色体步移等方法,克隆偏肿革裥菌Lenzites gibbosa CB1的全长MnP1基因(GenBank登录号JQ327834),进行蛋白序列分析,并通过双酶切的方法获得重组质粒,将该重组质粒电转化至巴斯德毕赤酵母中进行异源表达。[结果]获得偏肿革裥菌Lenzites gibbosa CB1的全长MnP1基因,命名为Lg-mnp1。蛋白序列分析表明Lg-MnP1含有4个二硫键属于短MnP,预测成熟蛋白分子量为35.94kD,pI为4.43。通过双酶切的方法将Lg-mnp1的开放阅读框(ORF)序列连接到pPICZB载体上,获得重组质粒pPICZB/Lg-mnp1,转化子经PCR验证后,在BMMY培养基中甲醇诱导培养,在未添加血红素的培养液中MnP胞外酶活在72 h达到最高为7 U/L,表明Lg-mnp1已被转化至毕赤酵母中并可诱导表达。[结论]该方法对偏肿革裥菌Lg-mnp1基因的克隆及表达情况进行研究,为偏肿革裥菌Lg-mnp1基因的进一步应用提供了依据。 展开更多
关键词 偏肿革裥菌 锰过氧化物酶 基因克隆 毕赤酵母 基因表达
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一色齿毛菌锰过氧化物酶(MnP)活性检测与MnP1基因的克隆 被引量:2
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作者 于存 池玉杰 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第3期109-116,共8页
锰过氧化物酶(MnP)广泛存在于白腐菌中,是降解木质素的主要酶系。首先对采自长白山的一色齿毛菌菌株CB1降解木质素的过氧化物酶进行检测,结果表明一色齿毛菌可产生MnP,但不产生木质素过氧化物酶(LiP);Mn2+不是其产生MnP的必要因子,在LNA... 锰过氧化物酶(MnP)广泛存在于白腐菌中,是降解木质素的主要酶系。首先对采自长白山的一色齿毛菌菌株CB1降解木质素的过氧化物酶进行检测,结果表明一色齿毛菌可产生MnP,但不产生木质素过氧化物酶(LiP);Mn2+不是其产生MnP的必要因子,在LNAS培养基中加入木屑为底物的条件下,一色齿毛菌MnP最大酶活为18.4 U·L-1。在酶活检测的基础上,为了深入研究MnP降解木质素的功能,根据已知的MnP基因保守区序列设计引物,以一色齿毛菌菌株CB1的基因组DNA为模板,采用染色体步移技术,克隆到该菌株一个编码MnP1蛋白的全长DNA基因(GenBank登录号JQ782578.1),命名为Cu-mnp1。该基因DNA全长4 268 bp,含有16个外显子和15个内含子;其启动子区域含有TATA-Box,CAAT-Box,SP1,AP1,HSE,XRE等多个顺式作用元件;其cDNA基因(GenBank登录号JQ782579.1)编码区长度为1 092 bp,编码363个氨基酸。BLAST比对分析表明,在cDNA水平上Cu-mnp1与猴头菇菌株CB1的mnp2基因的相似性最高为70%。蛋白结构分析表明,Cu-MnP1含有4个二硫键属于短MnP。 展开更多
关键词 一色齿毛菌(单色下皮黑) 木质素降解酶 锰过氧化物酶 基因克隆 染色体步移
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偏肿革裥菌系统发育与Lg-mnp2和Lg-mnp3基因克隆及结构特征 被引量:3
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作者 池玉杰 闫洪波 吴书景 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期64-69,87,共7页
白腐菌偏肿革裥菌Lenzites gibbosa能分泌降解木质素的锰过氧化物酶(MnPs),为进一步鉴定试验菌株,对菌株L. gibbosa CB1进行了ITS序列(Gen Bank登录号为JF279440)扩增与测序,并进行了基于ITS序列的比对与系统发育分析,结果表明CB1与桦... 白腐菌偏肿革裥菌Lenzites gibbosa能分泌降解木质素的锰过氧化物酶(MnPs),为进一步鉴定试验菌株,对菌株L. gibbosa CB1进行了ITS序列(Gen Bank登录号为JF279440)扩增与测序,并进行了基于ITS序列的比对与系统发育分析,结果表明CB1与桦革裥菌L. betulina和栓菌属Trametes等相关白腐菌的亲缘关系较近而聚类在一起,并与24个同种其他菌株的ITS序列覆盖度在85%~97%期间内的相似性都为99%,说明该菌株为偏肿革裥菌。为了获得该菌株多个编码MnP家族的基因,从而为研究MnP基因的表达调控奠定序列结构的基础,根据已知白腐菌MnPs基因保守区和已经扩增出的基因片段设计引物,以L. gibbosa CB1的基因组DNA和总RNA为模板,采用PCR、RT-PCR、RACE及染色体步移等方法,克隆到该菌株编码MnP2和MnP3的全长c DNA和DNA基因(Gen Bank登录号分别为JQ388597、JN571114; JQ411249、JN571116),分别命名为Lg-mnp2和Lg-mnp3。2个基因DNA全长分别为2 869、3 992 bp,都含有6个外显子和5个内含子;其启动子区域都含有TATA-Box、CAAT-Box、AP2、MRE等顺式作用元件,Lg-mnp2还含有AP1,Lg-mnp3还含有HSE;其c DNA基因分别含有50、52 bp的5'UTR,150、249 bp的3'UTR和1098、1 101 bp的完整开放阅读框ORF,分别编码了365、366个氨基酸的蛋白质多肽前体(Gen Bank登录号分别为AFC37493、AFC37494),成熟的Lg-mnp2蛋白含有339个氨基酸,比Lg-MnP1蛋白(Gen Bank登录号为ACO92620)多1个氨基酸;成熟的Lg-mnp3蛋白含有340个氨基酸,比Lg-MnP2蛋白多1个氨基酸。 展开更多
关键词 偏肿革裥菌 系统发育 锰过氧化物酶 基因克隆 序列分析
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猴头菌MnP1基因全长cDNA克隆及生物信息学分析 被引量:3
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作者 尹立伟 池玉杰 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第5期68-77,共10页
【目的】克隆猴头菌CB1锰过氧化物酶(Mn P)基因,用于分析He-mnp1基因及蛋白序列、基因的结构与功能,为研究猴头菌Mn Ps基因功能、转录调控和构建优良工程菌株提供参考。【方法】根据Gen Bank中已报道的白腐菌Mn Ps基因c DNA序列的保守... 【目的】克隆猴头菌CB1锰过氧化物酶(Mn P)基因,用于分析He-mnp1基因及蛋白序列、基因的结构与功能,为研究猴头菌Mn Ps基因功能、转录调控和构建优良工程菌株提供参考。【方法】根据Gen Bank中已报道的白腐菌Mn Ps基因c DNA序列的保守区域设计引物,采用简并PCR、逆转录RT-PCR、c DNA末端的快速扩增(RACE)等方法扩增出全长c DNA基因序列,命名为He-mnp1(Gen Bank登录号为HM116841.3),并对其猴头菌He-mnp1基因进行生物信息学的分析。通过NCBI数据库进行BLAST同源搜索;ORF Finder查找该基因的完整开放阅读框(ORF);利用Expasy数据库和Bio Edit软件预测He-mnp1蛋白质的理化特性及氨基酸的组成;同时进行亲/疏水性及跨膜区的分析;采用Signal P 4.1软件进行蛋白信号肽的预测;并利用Clustal W和MEGA 5.1软件对He-mnp1蛋白序列同源性比对和构建白腐菌Mn Ps系统发育树;利用数据库Conserved Domain Database(CDD)蛋白保守结构域的预测,查看He-mnp1血红素、基质及锰、钙等结合位点;采用Predict Protein软件和SWISS-MODEL软件进行He-mnp1蛋白二级结构的预测和同源三维建模。【结果】该基因He-mnp1的c DNA全长1 279 bp,完整开放阅读框1 080 bp,起始密码子ATG,终止密码子TAA,5'端非翻译区有68个核苷酸,3'端非翻译区有131个核苷酸,编码蛋白359 aa;生物信息学分析表明,猴头菌He-mnp1氨基酸组成中丙氨酸含量最高,无酪氨酸,分子量为38.18 k Da,等电点为4.35,He-mnp1的蛋白有明显的亲水区,存在81-105、121-141间有2处疏水区域,此蛋白为亲水蛋白。He-mnp1蛋白质多肽前体包含1个18 aa的信号肽及1个5 aa的中间前导短肽。【结论】蛋白系统进化分析表明He-mnp1分布在第2组群,与平菇侧耳、冬生多孔菌、变色栓菌的Mn Ps亲缘关系最为接近。He-mnp1基因存在1个保守结构域,分析显示为ClassⅡ类的真菌血红素过氧化物酶蛋白家族。He-mnp1蛋白二级结构预测α-螺旋占30.99%,β-折叠占3.38%,无规则卷曲占65.63%,属于稳定蛋白。He-mnp1蛋白三维建模,结果得到1个Fe血红素,2个Ca2+、1个Mn2+的结合位点及组氨酸残基等。 展开更多
关键词 猴头菌 锰过氧化物酶 基因克隆 生物信息学 序列分析
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细胞外酶MnP降解聚乙烯的分子动力学研究 被引量:3
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作者 姚学峰 宋怡铃 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第S1期356-359,共4页
MnP酶(manganese peroxidase)已被鉴定为降解聚乙烯的关键酶,通过设计不同长度的碳链聚乙烯蜡为实验底物,分别与MnP结合分析。采用Auto dock分子对接软件进行结合能的预测。并用Gromacs软件模拟了水、离子环境下,底物复合物能量、空间... MnP酶(manganese peroxidase)已被鉴定为降解聚乙烯的关键酶,通过设计不同长度的碳链聚乙烯蜡为实验底物,分别与MnP结合分析。采用Auto dock分子对接软件进行结合能的预测。并用Gromacs软件模拟了水、离子环境下,底物复合物能量、空间构象的变化等情况。研究结果表明MnP酶只能催化C56以下的聚乙烯蜡,随着碳链长度的增加酶与底物结合越不稳定;能量分析表明随着碳链长度的增加,其动能逐渐降低,而总能量亦有降低的趋势。 展开更多
关键词 锰过氧化物酶 聚乙烯降解 分子动力学 结合能 生物降解
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紫孢侧耳Ps-mnp1基因克隆与蛋白结构预测
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作者 尹立伟 杨春成 +2 位作者 朱玉 伦志明 张静 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期393-400,共8页
克隆紫孢侧耳PS1菌株锰过氧化物酶基因Ps-mnp1,具有生物降解木质素的活性,可用于分析锰过氧化物酶的蛋白功能与结构,并对深入了解紫孢侧耳Ps-mnp1基因功能和转录调控具有重要意义。基于ITS序列分析,明确了该菌株的分类地位。根据Gen Ban... 克隆紫孢侧耳PS1菌株锰过氧化物酶基因Ps-mnp1,具有生物降解木质素的活性,可用于分析锰过氧化物酶的蛋白功能与结构,并对深入了解紫孢侧耳Ps-mnp1基因功能和转录调控具有重要意义。基于ITS序列分析,明确了该菌株的分类地位。根据Gen Bank中白腐菌Mn Ps保守序列设计引物,采用染色体步移法和逆转录PCR法获得Ps-mnp1基因,Gen Bank登录号为(KP189358.1)。在克隆Ps-mnp1基因并分析蛋白结构时,采用多种现代生物信息学技术,经染色体步移法克隆的DNA全长序列后,利用contigexpress拼接软件预测Psmnp1基因的c DNA全长序列;使用Bio Edit分析软件对DNA和c DNA核苷酸序列比对;通过Augustus网站预测RNA的剪接位点并在NCBI上进行同源序列比对校正;采用基因结构软件对比了解白腐菌Mn Ps基因的内含子/外显子的组成。序列分析表明Ps-mnp1的DNA全长序列1 854 bp,具有外显子14条和内含子13条。从Ps-mnp1与其它白腐菌Mn Ps基因的内含子/外显子组成分析来看,紫孢侧耳和糙皮侧耳同属于侧耳属,但它们之间的Mn Ps基因结构完全不同。Ps-mnp1开放阅读框为1 095 bp,起始密码子ATG,终止密码子TAA,编码364 aa,含有20 aa残基构成的信号肽序列。采用MEGA 5.1软件构建的蛋白系统进化树表明Ps-mnp1与6株白腐菌蛋白聚类在短枝Mn Ps,区分了含有5个二硫键组成的长枝Mn Ps组群;此外,构建的蛋白同源模型表明,与刺芹侧耳多功能过氧化物酶相似度为72.51%,蛋白配体中结合位点有1个含铁血红素、2个钙离子、1个锰离子等,这些结合位点为不守恒。该研究为紫孢侧耳锰过氧化物酶的结构,蛋白功能Ps-mnp1奠定了基础,并进一步为Ps-mnp1的蛋白质工程改造提供借鉴作用。 展开更多
关键词 紫孢侧耳 锰过氧化物酶 蛋白结构 生物信息学 同源模建
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偏肿革裥菌MnP基因在构巢曲霉中转化方法的建立 被引量:2
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作者 胡美美 池玉杰 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期129-133,共5页
对已经构建好的携带有白腐菌偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)锰过氧化物酶完整编码序列基因的载体质粒pMDTM18-T/Lg-mnp、以及整合型表达载体质粒pLB01分别双酶切,然后进行连接构建了重组质粒pLB01/Lg-mnp。对构巢曲霉(Aspergillus nidula... 对已经构建好的携带有白腐菌偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)锰过氧化物酶完整编码序列基因的载体质粒pMDTM18-T/Lg-mnp、以及整合型表达载体质粒pLB01分别双酶切,然后进行连接构建了重组质粒pLB01/Lg-mnp。对构巢曲霉(Aspergillus nidulans)尿嘧啶尿苷营养缺陷体菌株TN02A7进行了制备分生孢子原生质体酶解方法的摸索。结果表明:将溶壁酶、纤维素酶和蜗牛酶3种酶以1∶1∶1的比例混合,能有效地使构巢曲霉的分生孢子形成原生质体。采用PEG/CaCl2介导的原生质体转化方法成功地将L.gibbosa的MnP基因转入到了构巢曲霉中,获得了携带有白腐菌MnP基因的构巢曲霉转化子菌株。 展开更多
关键词 偏肿革裥菌 锰过氧化物酶 构巢曲霉 原生质体
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构巢曲霉转化子菌株产MnP条件优化及对3种染料的脱色 被引量:1
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作者 孙世娜 池玉杰 +1 位作者 于存 李月 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第4期75-82,共8页
【目的】对转入猴头菌MnP1和MnP2基因的2个构巢曲霉转化子菌株TN02A7-He-mnp1和TN02A7-Hemnp2产MnP的初始培养条件进行优化,然后用优化后的酶液对3种染料进行脱色研究,以期提高锰过氧化物酶(MnP)活性。【方法】采用单因素试验进行最适... 【目的】对转入猴头菌MnP1和MnP2基因的2个构巢曲霉转化子菌株TN02A7-He-mnp1和TN02A7-Hemnp2产MnP的初始培养条件进行优化,然后用优化后的酶液对3种染料进行脱色研究,以期提高锰过氧化物酶(MnP)活性。【方法】采用单因素试验进行最适产酶温度的筛选;正交试验检测血红素浓度、Mn^(2+)浓度、pH值和转速4个因素在3个水平下对酶活性的影响,并通过优化培养验证试验检测酶活性;吸光度法检测优化后的酶液对3种染料的脱色率。【结果】菌株TN02A7-He-mnp1产TN02A7-He-MnP1最适培养条件为:在MMPGRT培养基的基础上,加入2 g青杨木屑作为产酶底物,Mn^(2+)浓度为267μmol·L^(-1)、氯化血红素浓度为0.05 g·L^(-1)、培养液pH值为7.5,100 mL三角瓶中装液量为50 mL、接入2个φ=10 mm的菌块,于37℃、180 r·min^(-1)的摇床中培养120 h;菌株TN02A7-He-mnp2产TN02A7-He-MnP2最适培养条件与TN02A7-He-mnp1相似,只是氯化血红素溶液浓度为0.03 g·L^(-1),摇床转速为220 r·min^(-1),其他条件相同。在上述最适培养条件下,2个构巢曲霉转化子菌株产TN02A7-He-MnP1和TN02A7-He-MnP2的酶活性分别为133.62和147.09 U·L^(-1),是初始培养条件的2.89和3.46倍。染料脱色试验表明,2个菌株对杂环类染料中性红和偶氮类染料刚果红在4 h内达到58%以上的脱色率,16 h对中性红达到或接近100%,20 h对刚果红达到或接近100%。【结论】通过优化培养基成分与条件可以提高2个构巢曲霉转化子菌株MnP的产酶量,2个菌株对中性红和刚果红都有高效的脱色作用。 展开更多
关键词 锰过氧化物酶 构巢曲霉 转化子 优化培养 染料脱色
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锰过氧化物酶(MnP)对农药毒死蜱降解的初步研究 被引量:3
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作者 莫彩萍 赵林果 谢慧芳 《环境科学与技术》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期65-70,共6页
以广泛使用的有机磷杀虫剂毒死蜱为研究对象,利用白腐菌P.sordida YK-624菌株所产锰过氧化物酶(MnP)对其进行生物降解的初步研究。首先比较确定了MnP降解毒死蜱所需要的降解体系,即对于毒死蜱的降解,需要在有机酸(丙二酸)存在的缓冲体... 以广泛使用的有机磷杀虫剂毒死蜱为研究对象,利用白腐菌P.sordida YK-624菌株所产锰过氧化物酶(MnP)对其进行生物降解的初步研究。首先比较确定了MnP降解毒死蜱所需要的降解体系,即对于毒死蜱的降解,需要在有机酸(丙二酸)存在的缓冲体系中进行,此体系不需要表面活性剂Tween 80,但必须含有Mn2+和葡萄糖氧化酶氧化葡萄糖产生的H2O2。随后对主要影响因素的试验结果表明,MnP降解毒死蜱较好的条件是在pH 4.5的丙二酸缓冲体系中含7.5 mmol/L MnSO4、2.5 mmol/L葡萄糖以及40 U葡萄糖氧化酶,温度30℃。此时,400 U/L的MnP可将30 mg/L的毒死蜱经3 d时间降解77.51%。同时,利用GC-MS对毒死蜱酶降解后的产物进行了初步分析,得到1种可能的酶解产物O,O,O’,O’-四乙基二硫代焦磷酸酯,不同于水解和细菌降解途径,值得进行进一步研究。 展开更多
关键词 毒死蜱 锰过氧化物酶 生物降解 白腐菌 酶解产物
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诱导剂对乳白耙齿菌产MnP活性影响研究 被引量:3
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作者 何平 张健 池玉杰 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期988-994,共7页
为显著提高白腐菌(Irpex lacteus)产锰过氧化物酶(MnP)的活性。在液体培养条件下用分光光度计法检测12种诱导剂对乳白耙齿菌MnP活性的诱导效果。其中化学诱导剂包括愈创木酚、苯酚、香兰素、藜芦醇、苯甲酸、没食子酸、酪氨酸、二甲苯... 为显著提高白腐菌(Irpex lacteus)产锰过氧化物酶(MnP)的活性。在液体培养条件下用分光光度计法检测12种诱导剂对乳白耙齿菌MnP活性的诱导效果。其中化学诱导剂包括愈创木酚、苯酚、香兰素、藜芦醇、苯甲酸、没食子酸、酪氨酸、二甲苯、苯胺蓝和ABTS,生物诱导剂包括麦麸和木屑。乳白耙齿菌在28℃下分别加入12种诱导剂进行培养,得到了不同时间的培养液,然后检测培养液中Mn P活性,从而得到乳白耙齿菌产MnP活性与诱导剂之间的关系。在初始培养基中加入0.2 mmol/L Mn^(2+)的培养条件下,诱导剂麦麸和ABTS对Mn P的诱导效果极为明显,二者在添加量分别为1.5%和0.2 mmol/L时,MnP活力分别为104.2 U/L和145.2 U/L,是初始产酶培养基酶活的8.6倍和11倍;而两种诱导剂组合,即同时添加1.5%麦麸与0.2 mmol/L ABTS,MnP活力为203.2 U/L,是初始培养条件MnP活性的21.9倍,实验表明诱导剂麦麸和ABTS能大幅度地提高白腐菌产MnP的活性。 展开更多
关键词 白腐菌 乳白耙齿菌 诱导剂 锰过氧化物酶 酶活检测
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诱导物及种间诱导对白腐菌的锰过氧化物酶(MnP)的诱导 被引量:1
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作者 钟紫旋 刘丽 +1 位作者 张勇 罗锋 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期166-170,共5页
本实验通过添加外源诱导物诱导和不同白腐菌种间相互诱导两种途径来研究Trametes versicolor、Pleurotus ostreatus、Dichomitus squalens、Bjerkandera adusta四种白腐菌产Mn P活性,发现这些白腐菌在一些诱导条件下可产生大量Mn P。结... 本实验通过添加外源诱导物诱导和不同白腐菌种间相互诱导两种途径来研究Trametes versicolor、Pleurotus ostreatus、Dichomitus squalens、Bjerkandera adusta四种白腐菌产Mn P活性,发现这些白腐菌在一些诱导条件下可产生大量Mn P。结果表明,外源诱导物中,2,5-二甲基苯胺是有效的Mn P诱导剂,对四种菌产Mn P均有不同程度的诱导作用。异丙醇能提高T.versicolor、P.ostreatus和D.squalens产Mn P活性,且诱导效果优于乙醇。Cu2+能显著提高T.versicolor和D.squalens产Mn P活性。Mn2+能显著提高P.ostreatus和B.adusta产Mn P活性。不同白腐菌相互作用时,T.versicolor、P.ostreatus和D.squalens三种菌两两共培养均有明显的Mn P种间诱导效果。本研究为大量产Mn P并将其应用于工业提供可能。 展开更多
关键词 白腐菌 锰过氧化物酶 外源诱导物 种间诱导
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木质素的生物降解和生物利用 被引量:5
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作者 刘宽庆 张以恒 《合成生物学》 CSCD 北大核心 2024年第6期1264-1278,共15页
木质素是木质纤维素的主要成分之一,按干重计约占15%~30%,全球年产量约200亿吨。木质素是由苯丙烷单元通过多种不同的碳碳键和碳氧键构成的一类芳香族高聚化合物,是高等陆生植物次生细胞壁的主要成分,赋予了植物刚性并保护植物体免受微... 木质素是木质纤维素的主要成分之一,按干重计约占15%~30%,全球年产量约200亿吨。木质素是由苯丙烷单元通过多种不同的碳碳键和碳氧键构成的一类芳香族高聚化合物,是高等陆生植物次生细胞壁的主要成分,赋予了植物刚性并保护植物体免受微生物的入侵。由于木质素产量巨大、可再生,近些年全球对木质素利用的兴趣持续升高。但是木质素的成分复杂,无论是其降解还是后续的利用都充满了挑战,因此目前多用作燃料。在众多木质素降解利用的方法中,生物法反应条件温和、绿色环保,近些年在绿色可持续发展的大背景下受到广泛关注。本文介绍了自然界中催化木质素降解的关键酶:漆酶、锰过氧化物酶、木质素过氧化物酶、染料脱色过氧化物酶、多功能过氧化物酶等,同时简要介绍了其催化机制。并总结了生物利用木质素类芳香族化合物过程中涉及的四个主要反应:O-脱甲基、脱羧、羟基化和双加氧酶介导的开环反应,以及相关的酶和催化机制。最后,简要介绍了利用合成生物学手段构建细胞工厂实现木质素高值利用的案例。木质素的生物降解和利用是一个极具潜力的领域,同时也存在诸多的挑战,例如转化效率低、反应时间长等。但相信随着合成生物学的迅猛发展,利用高效基因编辑和代谢工程改造提高关键酶的反应速率和代谢通路的效率、提高底盘细胞对有毒芳香族化合物的抵抗能力、维持还原力的平衡等,将有效提高木质素生物降解利用的效率,其工业应用也许在不久的将来就会实现。 展开更多
关键词 木质素 生物降解 生物利用 漆酶 锰过氧化物酶 木质素过氧化物酶 染料脱色过氧化物酶 多功能过氧化物酶
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白腐真菌培养条件对其分泌木质素降解酶的影响 被引量:28
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作者 高大文 文湘华 钱易 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第5期572-575,共4页
应用摇瓶试验研究了不同白腐真菌培养条件对其产酶的影响.通过控制不同转速、投加载体等方式考察了白腐真菌的产酶情况.结果表明,在悬浮培养方式下,转速为160r/min时获得的锰过氧化物酶最高(481.6U/L),其酶活是静置、120r/min条件下培养... 应用摇瓶试验研究了不同白腐真菌培养条件对其产酶的影响.通过控制不同转速、投加载体等方式考察了白腐真菌的产酶情况.结果表明,在悬浮培养方式下,转速为160r/min时获得的锰过氧化物酶最高(481.6U/L),其酶活是静置、120r/min条件下培养的65倍和43倍;投加载体后,载体固定化培养获得的木质素过氧化物酶酶活是悬浮培养的71倍,载体投加量对其产酶影响很大,只有当载体处于非浸没状态时才有利于酶活产生,否则酶活极低.因此,选择载体固定化—非浸没—振荡培养方式培养白腐真菌可获得更高的产酶量和酶活. 展开更多
关键词 白腐真菌 形态 固定化 木质素过氧化物酶(LiP) 锰过氧化物酶(mnp)
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黄孢原毛平革菌过氧化物酶的分离、纯化和酶学特性研究 被引量:9
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作者 徐淑霞 张跃灵 +2 位作者 张世敏 王学东 吴坤 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期295-300,共6页
从木质素降解菌Phanerochaetechrysosporium中纯化出两种木质素降解酶:木质素过氧化物酶(LiP)和锰依赖过氧化物酶(MnP)。经测定LiP和MnP的分子量分别为37kD和40kD,最适作用温度均是37℃;保温2h,LiP的半失活温度为40℃,MnP为45℃;LiP最... 从木质素降解菌Phanerochaetechrysosporium中纯化出两种木质素降解酶:木质素过氧化物酶(LiP)和锰依赖过氧化物酶(MnP)。经测定LiP和MnP的分子量分别为37kD和40kD,最适作用温度均是37℃;保温2h,LiP的半失活温度为40℃,MnP为45℃;LiP最适作用pH2.8,稳定pH2.2~5.2;MnP最适作用pH4.6,稳定pH4.0~7.0。Fe2+对LiP和MnP均表现出促进作用,Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、Fe3+、Ag+、Co2+、NH4+对LiP有促进作用,对MnP则表现出抑制作用。与此相反,Mn2+对MnP酶活的高效促进作用,对LiP表现出了轻度的抑制作用,这也体现出了MnP对Mn2+的依赖性。Cu2+对LiP活性无影响,而对MnP有强烈的抑制作用。Fe3+对两者活性的抑制都达到了90%。 展开更多
关键词 木质素过氧化物酶 锰依赖过氧化物酶 黄孢原毛平革菌 酶的纯化 酶学特性
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白腐菌木质素降解酶及其在木质素降解过程中的相互作用 被引量:26
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作者 唐菊 段传人 +2 位作者 黄友莹 孙达 胡江 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期32-36,共5页
木质素是一类不易降解的生物物质,在自然界中,白腐真菌对木质素的降解能力最强。白腐真菌降解木质素主要依靠分泌的三种酶:木质素过氧化物酶(Lip)、锰过氧化物酶(MnP)和漆酶(Lac)。对白腐真菌分泌的三种木质素降解酶在性质、分布等方面... 木质素是一类不易降解的生物物质,在自然界中,白腐真菌对木质素的降解能力最强。白腐真菌降解木质素主要依靠分泌的三种酶:木质素过氧化物酶(Lip)、锰过氧化物酶(MnP)和漆酶(Lac)。对白腐真菌分泌的三种木质素降解酶在性质、分布等方面进行了比较,系统地介绍三种木质素降解酶的催化作用,并阐述其在木质素降解过程中的相互作用。 展开更多
关键词 木质素过氧化物酶(Lip) 锰过氧化物酶(mnp) 漆酶(Lac) 木质素 降解
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灵芝属木质素降解高效菌株筛选 被引量:14
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作者 张金萍 王敬文 +1 位作者 姜景民 杨卫东 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2005年第1期106-108,共3页
The diagnostic methods of extracelluar oxidase mat were used to select lignin-degrading enzymes producers among nineteen Ganoderma lucidum fungal strains.The results showed that the producing laccase activity of G.sp.... The diagnostic methods of extracelluar oxidase mat were used to select lignin-degrading enzymes producers among nineteen Ganoderma lucidum fungal strains.The results showed that the producing laccase activity of G.sp.var.Tianzhi was the highest,followed by that of G.lucidum 10 and G.lucidum 8.The producing lignin peroxidase activity of G.sp.var Tianzhi was the highes,and the producing Manganese peroxidase activity of G.sp.var yuanzhi 6 and G.lucidum G 8 were the highest,followed by that of the G.sp.var.Tianzhi and G.lucidum 10.It was found that G.sp.var Tianzhi,G.sp.var.Yuanzhi 6G.lucidum 8 and G.lucidum 10 showed the highest lignin-degrading enzymes activity. 展开更多
关键词 漆酶 木质素降解酶 锰过氧化物酶 灵芝菌
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木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶对染料脱色的性能比较 被引量:8
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作者 章燕芳 李华钟 +1 位作者 华兆哲 陈坚 《环境科学研究》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第5期17-21,共5页
通过控制培养基中Mn2 +的浓度获得只含有木质素过氧化物酶 (LiP)或锰过氧化物酶 (MnP)的单一酶培养物 ,用于比较LiP和MnP对染料降解脱色的条件和能力的差异。结果表明 ,LiP对橙Ⅰ降解脱色的最佳条件为H2 O2 0 15mmol L ,pH 3 0 ,温度 ... 通过控制培养基中Mn2 +的浓度获得只含有木质素过氧化物酶 (LiP)或锰过氧化物酶 (MnP)的单一酶培养物 ,用于比较LiP和MnP对染料降解脱色的条件和能力的差异。结果表明 ,LiP对橙Ⅰ降解脱色的最佳条件为H2 O2 0 15mmol L ,pH 3 0 ,温度 4 0℃ ;MnP为H2 O2 0 15mmol L ,pH 3 5,温度 4 0℃。最佳条件下 ,考察LiP和MnP作用下染料浓度和染料类型对脱色的影响 ,发现LiP作用下脱色率明显高于MnP作用下的脱色率 ,表明LiP可作用的染料浓度比MnP高 ,可作用的染料范围比MnP大。 展开更多
关键词 黄孢原毛平革菌 木质素过氧化物酶 锰过氧化物酶 脱色 染料 废水处理
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白腐菌Phanerochaete sordida YK-624产锰过氧化物酶的生产及初步纯化 被引量:4
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作者 谢慧芳 近藤隆一郎 李忠正 《林产化学与工业》 EI CAS CSCD 2003年第4期22-26,共5页
 利用白腐菌PhanerochaetesordidaYK 624(ATCC90872),采用Kirk液体培养基在富氧条件下进行振动培养,可得到锰过氧化物酶(MnP)活性较高和漆酶活性微量的酶液。该酶液通过超滤、透析、二乙氨基乙基琼脂糖凝胶(DEAE sepharoseCL 6B,phar...  利用白腐菌PhanerochaetesordidaYK 624(ATCC90872),采用Kirk液体培养基在富氧条件下进行振动培养,可得到锰过氧化物酶(MnP)活性较高和漆酶活性微量的酶液。该酶液通过超滤、透析、二乙氨基乙基琼脂糖凝胶(DEAE sepharoseCL 6B,pharmacia)离子交换柱层析的方法进行初步纯化后,得到比活性很高(1941.54IU/mg)的MnP酶液。漆酶活性和MnP活性比值的变化、SDS PAGE凝胶电泳试验和406nm附近的吸光值变化均表明,经离子交换柱层析后的YK1部分是主要的MnP,电泳试验同时表明纯化后的主要MnP的分子质量约为43kDa。经超滤、透析、离子交换柱层析纯化后得到的酶液YK1可用于进一步地研究及应用。 展开更多
关键词 白腐菌 锰过氧化物酶 纯化 液体培养 离子交换柱层析 木质素 生物降解 YK-624菌株
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