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基于沙门菌属LAMP检测的食品卫生检验优化方法
1
作者 甘方勇 《现代食品》 2025年第1期196-199,共4页
沙门菌是一种常见的食源性病原体,能够引起沙门菌感染,导致食物中毒,严重时甚至可危及生命。优化检测方法对于快速准确地识别污染源、防止疾病的传播至关重要。本文通过对比传统的分离培养法,发现环介导等温扩增技术(Loop-mediated Isot... 沙门菌是一种常见的食源性病原体,能够引起沙门菌感染,导致食物中毒,严重时甚至可危及生命。优化检测方法对于快速准确地识别污染源、防止疾病的传播至关重要。本文通过对比传统的分离培养法,发现环介导等温扩增技术(Loop-mediated Isothermal Amplification,LAMP)在检测速度、操作简便性和成本效益方面具有显著优势。实验结果表明,LAMP方法远快于分离培养法,且LAMP法的操作步骤简单,不需要复杂的设备和高技能的操作人员,能够有效降低成本。 展开更多
关键词 沙门菌属 环介导等温扩增技术(lamp) 食品检测
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LAMP法检测食品中开心果过敏原成分 被引量：15
2
作者 刘昊 黄文胜 +3 位作者 邓婷婷 傅凯 鞠兴荣 陈颖 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第22期128-132,共5页
为建立食品中开心果过敏原成分的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,根据GenBank中公布的开心果过敏原2S种子贮存蛋白基因序列设计合成LAMP引物,筛选最佳引物并对其内引物浓度进行优化。以开心果、腰果、胡桃等坚果类以及大米、玉米、大豆... 为建立食品中开心果过敏原成分的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,根据GenBank中公布的开心果过敏原2S种子贮存蛋白基因序列设计合成LAMP引物,筛选最佳引物并对其内引物浓度进行优化。以开心果、腰果、胡桃等坚果类以及大米、玉米、大豆等常见农产品验证该方法的特异性,将开心果DNA进行梯度稀释以验证方法的检测低限,并以小麦为基质配制模拟添加样品测试方法的相对灵敏度。结果表明:该方法能够特异性检测食品中的开心果成分,对开心果基因组DNA的检测限为0.2ng,食品中开心果成分相对检测灵敏度低于0.1%(m/m),通过在反应终产物中加入SYBR GreenⅠ,可用肉眼判断检测结果,LAMP检测时间不超过60min。该方法快速准确,不依赖复杂昂贵的检测仪器,可应用于过敏原开心果成分的快速检测。 展开更多
关键词 过敏原 开心果 环介导等温扩增 检测
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可视化的RT-LAMP方法检测禽白血病病毒 被引量：13
3
作者 刘业兵 张磊 +3 位作者 孙跃辉 毛娅卿 李俊平 宁宜宝 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期150-156,共7页
本研究旨在建立一种快速检测禽白血病病毒(ALV)的RT-LAMP方法。根据GenBank中ALV序列,在其保守序列区域设计了多套LAMP引物,通过LAMP Real-time Turbidimeter仪对ALV的LAMP引物、反应体系及反应进程进行监测和分析,以评价该方法的特异... 本研究旨在建立一种快速检测禽白血病病毒(ALV)的RT-LAMP方法。根据GenBank中ALV序列,在其保守序列区域设计了多套LAMP引物,通过LAMP Real-time Turbidimeter仪对ALV的LAMP引物、反应体系及反应进程进行监测和分析,以评价该方法的特异性和敏感性,并对加入SYBR GreenⅠ肉眼判定与仪器监测结果进行比对。结果表明:建立的RT-LAMP方法在63℃水浴中36min可对ALV核酸进行高效扩增,在反应结束后加入SYBR GreenⅠ肉眼判断结果与Real-time Turbidimeter仪检测结果一致;该方法具有很强特异性,对其它相关鸡病病原检测结果均为阴性;其检出限量为14.2pg.μL-1,显示出很高的敏感性;用建立的LAMP方法对24个样品进行检测,结果表明LAMP法与其原检测结果基本一致;本研究建立了可对ALV进行快速检测并可肉眼判定结果的可视化RT-LAMP方法,其操作简便、无需昂贵设备,适用于ALV的快速检测。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 环介导等温扩增技术(lamp) 检测
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同时检测贝类派琴虫和包纳米虫的双重LAMP方法的建立 被引量：13
4
作者 王彩霞 冯春燕 +4 位作者 王巧黎 袁向芬 邓俊花 吕继洲 吴绍强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第8期1935-1942,共8页
为满足贝类寄生虫快速检测需求,本研究根据GenBank中发布的派琴虫ITS序列和包纳米虫18SrRNA序列的保守区域分别设计LAMP扩增引物,分别建立了两种寄生虫的单重LAMP检测方法,进一步对反应体系进行优化,组装成两种寄生虫的双重LAMP方法,同... 为满足贝类寄生虫快速检测需求,本研究根据GenBank中发布的派琴虫ITS序列和包纳米虫18SrRNA序列的保守区域分别设计LAMP扩增引物,分别建立了两种寄生虫的单重LAMP检测方法,进一步对反应体系进行优化,组装成两种寄生虫的双重LAMP方法,同时还进行了特异性检测和敏感性检测,并通过对扩增产物进行限制性内切酶酶切检验双重LAMP方法的准确性。结果表明本研究建立的贝类寄生虫双重LAMP方法具有较好的特异性,检测派琴虫时的最低检测限为10拷贝/μL质粒DNA,检测包纳米虫时的最低检测限为100拷贝/μL质粒DNA,同时酶切试验也验证了双重LAMP检测结果的准确性。对随机采自东海和黄海的20份菲律宾蛤仔和10份美国进口牡蛎的检测结果显示,该双重LAMP方法在口岸检疫工作中可以作为派琴虫和包纳米虫的快速检测方法。 展开更多
关键词 贝类寄生虫病 环介导等温扩增反应(lamp) 检测 派琴虫 包纳米虫
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LAMP在检测转基因抗草甘膦大豆cp4-epsps基因上的应用 被引量：21
5
作者 兰青阔 王永 +2 位作者 赵新 朱珠 程奕 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第24期10377-10378,10390,共3页
以转基因抗草甘膦大豆为主要研究对象,利用环介导等温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP),针对cp4-epsps合成酶基因(5-enolpyruvlshimimate-3-phosphate synthase)的6个区域设计4条特异性引物,利用一种链置换DNA聚... 以转基因抗草甘膦大豆为主要研究对象,利用环介导等温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP),针对cp4-epsps合成酶基因(5-enolpyruvlshimimate-3-phosphate synthase)的6个区域设计4条特异性引物,利用一种链置换DNA聚合酶(BstDNA polymerase),在65℃保温30 min,通过荧光显色即可完成对转基因的检测工作。结果显示,该LAMP方法能够特异性检测cp4-epsps基因,其检测灵敏度是常规定性PCR方法的10倍。建立了针对转基因大豆cp4-epsps基因的LAMP检测方法,其具有高度的特异性及稳定性,结果可靠,适合转基因抗草甘膦大豆的快速检测。 展开更多
关键词 转基因抗草甘膦大豆 cp4-epsps IAMP 检测
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LAMP法检测转基因大豆A2704-12品系 被引量：12
6
作者 邵碧英 陈文炳 +4 位作者 曾莹 陈彬 郑晶 缪婷玉 彭娟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第24期202-207,共6页
根据转基因大豆A2704-12品系的特异序列设计了4套环介导等温扩增(LAMP)引物。通过反应温度优化、特异性测定,筛选出1套特异性强的LAMP引物。对筛选到的LAMP引物进行反应条件、反应体系的优化,建立了转基因大豆A2704-12品系的LAMP检测方... 根据转基因大豆A2704-12品系的特异序列设计了4套环介导等温扩增(LAMP)引物。通过反应温度优化、特异性测定,筛选出1套特异性强的LAMP引物。对筛选到的LAMP引物进行反应条件、反应体系的优化,建立了转基因大豆A2704-12品系的LAMP检测方法。结果表明:建立的LAMP检测方法能特异、稳定地检测转基因大豆A2704-12品系,检测限达到0.1%(m/m)。应用建立的LAMP方法检测大豆及其制品中转基因大豆A2704-12品系,检测结果与实时荧光聚合酶链式反应(PCR)结果完全一致。 展开更多
关键词 环介导等温扩增 转基因大豆A2704 12品系 特异性检测
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RT-LAMP技术检测菜豆荚斑驳病毒的研究 被引量：24
7
作者 闻伟刚 杨翠云 +1 位作者 崔俊霞 张颖 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期139-141,146,共4页
菜豆荚斑驳病毒（Beanpodmottlevirus，BPMV）是我国对外公布的检疫性有害生物，本研究采用环介导等温扩增技术（100p-mediatedisothermal amplification，LAMP），建立了一种快速、灵敏和特异的BPMV检测方法。根据BPMV外壳蛋白编码基... 菜豆荚斑驳病毒（Beanpodmottlevirus，BPMV）是我国对外公布的检疫性有害生物，本研究采用环介导等温扩增技术（100p-mediatedisothermal amplification，LAMP），建立了一种快速、灵敏和特异的BPMV检测方法。根据BPMV外壳蛋白编码基因上的8个位点，共设计了6条引物，通过RT-LAMP扩增得到特征性的瀑布状条带。特异性试验表明，引物对BPMV的检测具有良好的特异性；灵敏度试验显示RT-LAMP比RTPCR灵敏度高1000倍。该方法无需特殊的试剂和设备，只需在水浴锅中60℃等温扩增，整个检测周期约2～2．5h，适合BPMV的快速、准确检测。 展开更多
关键词 菜豆荚斑驳病毒 环介导等温扩增 检测
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牛病毒性腹泻病毒LAMP检测方法的建立与应用 被引量：26
8
作者 李家伟 郭利 +4 位作者 杨勇 王建科 张淑琴 张加力 程世鹏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第12期3111-3118,共8页
针对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5′UTR基因(GenBank登录号:AY278459.1)序列设计4条特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,特异性识别靶基因序列上4个独立区域,采用LAMP技术,利用实时浊度仪实时检测LAMP反应过程中所产生的焦磷酸镁白色沉淀,实时... 针对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5′UTR基因(GenBank登录号:AY278459.1)序列设计4条特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,特异性识别靶基因序列上4个独立区域,采用LAMP技术,利用实时浊度仪实时检测LAMP反应过程中所产生的焦磷酸镁白色沉淀,实时监测反应液浊度来判断反应结果,实现对扩增反应全过程的监控,建立BVDV的LAMP快速检测方法。通过实时浊度仪在恒温63℃下50min完成检测,对方法的特异性、灵敏度、重复性进行了评价。结果显示,经优化该方法只检测BVDV阳性,特异性强;病毒10-6倍稀释时仍能被检测到,比PCR方法灵敏度至少高100倍;重复性良好。LAMP实时浊度法具有简单、快速、灵敏度高、特异性强的优势,为BVDV的临床检测提供了一种简单快速的试验手段。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 环介导等温扩增技术 PCR
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柑橘溃疡病菌的普通LAMP及快速LAMP检测方法的建立 被引量：11
9
作者 张仑 殷幼平 +1 位作者 吴瑜佳 王中康 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期95-101,共7页
建立柑橘溃疡病菌的普通LAMP和快速LAMP检测方法,使其能应用于基层检验检疫部门对病害的快速检测。利用柑橘溃疡病菌基因组特有的保守区域设计LAMP引物,通过优化反应条件,建立柑橘溃疡病菌的普通LAMP检测体系;在普通LAMP引物的基础上设... 建立柑橘溃疡病菌的普通LAMP和快速LAMP检测方法,使其能应用于基层检验检疫部门对病害的快速检测。利用柑橘溃疡病菌基因组特有的保守区域设计LAMP引物,通过优化反应条件,建立柑橘溃疡病菌的普通LAMP检测体系;在普通LAMP引物的基础上设计一对环引物,建立柑橘溃疡病菌的快速LAMP检测体系,并以多种参比菌DNA以及健康柑橘叶片基因组DNA为模板对普通LAMP和快速LAMP检测体系的特异性进行了验证,利用柑橘溃疡病菌菌液和DNA溶液梯度稀释液对普通LAMP和快速LAMP检测体系的灵敏度进行了验证。普通LAMP检测体系菌体和DNA检测灵敏度分别达到了2.25×104cfu和2.03×10-1 ng,快速LAMP检测体系菌体和DNA检测灵敏度分别达到了2.25cfu和2.03×10-5 ng。在特异性测试中,普通LAMP检测体系与快速LAMP检测体系均仅对柑橘溃疡病菌进行扩增,对非靶标菌和柑橘叶片基因组DNA不产生扩增,普通LAMP与快速LAMP检测体系特异性测试结果一致。快速LAMP检测体系在0.5h内就可以达到普通LAMP检测体系的扩增量,是普通LAMP检测体系反应时间的一半,大大提高了检测的效率;快速LAMP检测体系菌悬液和DNA检测灵敏度均比普通LAMP检测体系提高了10 000倍。成功地建立了柑橘溃疡病菌的普通LAMP及快速LAMP检测方法,为柑橘溃疡病菌的检测提供了一种新的简便、快速的检测手段。 展开更多
关键词 柑橘溃疡病菌 环介导等温扩增 lamp 检疫
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布鲁氏菌环介导等温扩增(LAMP)可视化检测方法的建立 被引量：26
10
作者 许邹亮 南文龙 +6 位作者 周洁 陆明哲 郭玉广 谭鹏飞 毛开荣 彭大新 陈义平 《中国动物检疫》 CAS 2011年第8期37-40,共4页
应用环介导等温扩增(LAMP)技术建立了布鲁氏菌可视化快速检测方法。针对布鲁氏菌外膜蛋白OMP25基因保守区设计6条特异引物,反应前加入染料羟基萘芬蓝(HNB)作为LAMP扩增的指示剂,63℃恒温反应60min,根据HNB的颜色变化进行结果判定。分别... 应用环介导等温扩增(LAMP)技术建立了布鲁氏菌可视化快速检测方法。针对布鲁氏菌外膜蛋白OMP25基因保守区设计6条特异引物,反应前加入染料羟基萘芬蓝(HNB)作为LAMP扩增的指示剂,63℃恒温反应60min,根据HNB的颜色变化进行结果判定。分别评价所建立LAMP方法的特异性和灵敏性,并对60份牛布鲁氏菌病虎红平板凝集试验(RBT)阳性血清样本,经LAMP和B4/B5-PCR方法进行平行检测。结果显示,本方法最低检出限约为17fg布鲁氏菌基因组DNA。本方法特异性良好,布鲁氏菌反应管均出现特异性LAMP扩增反应,而猪大肠杆菌K99、巴氏杆菌C48-1、猪链球菌ST171、绿脓杆菌等对照组均未出现扩增。针对60份RBT阳性血清的平行检测结果显示,LAMP和B4/B5-PCR这两种方法间的结果符合率为85.0%。B4/B5-PCR检测为阳性的43份样品,经本方法检测全部为阳性;B4/B5-PCR检测为阴性的17份样品,经本方法检测,9份为阳性,8份为阴性。LAMP的敏感性高于B4/B5-PCR方法。实验表明,本文所建立的基于颜色判定的布鲁氏菌LAMP检测方法具有特异、灵敏、设备要求简单等特点,适用于基层兽医部门进行布鲁氏菌的快速检测。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 环介导等温扩增(lamp) 可视化检测
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PMA-LAMP检测单增李斯特活菌方法的建立 被引量：6
11
作者 蒋亚男 满朝新 +5 位作者 赵凤 刘颖 薛玉清 胡惠秩 李博 姜毓君 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期410-412,416,共4页
建立一种将荧光染料Propidium Monoazide(PMA)与环介导等温扩增(LAMP)相结合的检测方法,用于高效检测活的单核细胞增多性李斯特氏菌(简称单增李斯特菌)。利用PMA抑制单增李斯特死菌后进行LAMP扩增实验、并研究了PMA-LAMP方法检测单增李... 建立一种将荧光染料Propidium Monoazide(PMA)与环介导等温扩增(LAMP)相结合的检测方法,用于高效检测活的单核细胞增多性李斯特氏菌(简称单增李斯特菌)。利用PMA抑制单增李斯特死菌后进行LAMP扩增实验、并研究了PMA-LAMP方法检测单增李斯特活菌的灵敏度,同时与PMA-PCR方法灵敏度进行比较。结果表明,50μmol/L的PMA处理浓度为5×108cfu/mL单增李斯特死菌,能够完全抑制LAMP扩增。PMA-LAMP方法检测单增李斯特活菌的检出限为4.9×101cfu/mL,其灵敏度是PMA-PCR方法的10倍。该方法可以作为一种快速检测单增李斯特活菌的新技术。 展开更多
关键词 单核细胞增多性李斯特菌 环介导等温扩增 PMA—lamp
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林麝源化脓隐秘杆菌LAMP快速检测方法的建立 被引量：7
12
作者 唐婕 刘二龙 +3 位作者 卢丽 李斐然 王永奇 刘文华 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期316-320,共5页
根据GenBank已公布的化脓隐秘杆菌溶血素((Pyolysin,PLO)基因设计6条引物,建立一种灵敏的环介导等温扩增方法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)用于化脓隐秘杆菌(Arcanobacterium pyogenes)的快速检测,并对检测方法的特异... 根据GenBank已公布的化脓隐秘杆菌溶血素((Pyolysin,PLO)基因设计6条引物,建立一种灵敏的环介导等温扩增方法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)用于化脓隐秘杆菌(Arcanobacterium pyogenes)的快速检测,并对检测方法的特异性和灵敏度进行验证。对化脓隐秘杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、非O1霍乱弧菌、单增李斯特氏菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、嗜水气单孢菌、副溶血性弧菌、蜡样芽孢杆菌等9株实验菌株进行的特异性试验表明,建立的LAMP方法仅对化脓隐秘杆菌的检测结果为阳性;该方法的检测灵敏度在DNA水平上可达112 fg。采用本研究建立的方法检测20份林麝临床病例样品,共鉴定出10株化脓隐秘杆菌,与API Coryne生化鉴定方法的符合率为100%。 展开更多
关键词 林麝 化脓隐秘杆菌 环介导等温扩增(lamp)
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豇豆疫霉LAMP检测方法的建立 被引量：5
13
作者 李本金 刘小丽 +3 位作者 刘裴清 王荣波 翁启勇 陈庆河 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期119-124,共6页
本研究以豇豆疫霉Phytophthora vignae Purss核糖体内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列为靶标片段,设计4条特异性引物,建立了环介导等温扩增(LAMP)检测方法。特异性检测结果表明:8株不同地理来源的豇豆疫霉菌株LAMP检... 本研究以豇豆疫霉Phytophthora vignae Purss核糖体内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列为靶标片段,设计4条特异性引物,建立了环介导等温扩增(LAMP)检测方法。特异性检测结果表明:8株不同地理来源的豇豆疫霉菌株LAMP检测均为阳性(绿色),扩增产物用2.0%琼脂糖凝胶电泳出现特有的梯形条带,而其他11种卵菌近缘种及12种常见病原真菌和细菌共42个菌株均未观察到这些现象。灵敏度分析显示:该方法检测灵敏度在DNA水平上可达到100fg/25μL。采用LAMP方法对福建建瓯和宁德采集的62份疑似豇豆疫病病株样本进行检测,并用组织分离方法进行验证。结果表明,LAMP和组织分离方法的检出率分别为67.7%(42/62)和61.3%(38/62)。综合以上结果,LAMP方法具有特异性强、灵敏度高、快速高效、操作简单的特点,适合基层部门用于田间豇豆疫霉快速检测。 展开更多
关键词 豇豆疫霉 内转录间隔区(ITS) 环介导等温扩增技术(lamp) 分子检测
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食品中芥末过敏原成分LAMP检测方法的建立 被引量：9
14
作者 程晋霞 周熙诚 +2 位作者 马丹 刘莉 曾静 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第20期148-152,共5页
目的:建立食品过敏原芥末成分环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,并与实时荧光-聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测方法比对。方法:针对白芥的主要过敏原基因Sin A1,... 目的:建立食品过敏原芥末成分环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,并与实时荧光-聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测方法比对。方法:针对白芥的主要过敏原基因Sin A1,设计LAMP引物并建立反应体系,在特异性和灵敏度方面与RT-PCR检测方法比对。结果:建立的LAMP检测方法,经特异性验证,与所测试的13种植物,无交叉反应。通过添加实验,方法的检测灵敏度为0.5%,与RT-PCR方法检测灵敏度相当。检测了25份实际样品,检测结果与RT-PCR检测结果一致。结论:建立的食品过敏原芥末成分LAMP检测方法简单经济,检测结果可靠,可有效缩短检测时间,适用于芥末过敏原成分的检测,具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 芥末 过敏原 环介导等温扩增 实时荧光-聚合酶链式反应
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犬瘟热病毒RT-LAMP检测方法的建立及初步应用 被引量：10
15
作者 胡嘉欣 温永俊 +4 位作者 霍志云 师新川 杨博超 武华 高维凡 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第10期45-49,共5页
环介导等温基因扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种特异、灵敏、快速的检测方法。为提高犬瘟热病毒(CDV)检测效率、降低检测成本,针对犬瘟热病毒N基因保守区的8个位点设计了6条引物进行RT-LAMP一步法扩增。... 环介导等温基因扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种特异、灵敏、快速的检测方法。为提高犬瘟热病毒(CDV)检测效率、降低检测成本,针对犬瘟热病毒N基因保守区的8个位点设计了6条引物进行RT-LAMP一步法扩增。对反应体系及条件优化,检测特异性、敏感性,扩增产物通过凝胶电泳、显色反应和浑浊度比较进行判定。试验结果表明,该方法特异性强、敏感度高,操作简便、快速、便于观察,适用于门诊和现场检测。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 环介导等温基因扩增技术 N基因
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猪繁殖与呼吸综合征病毒M基因RT-LAMP检测方法的建立 被引量：14
16
作者 赵彦宗 张显浩 +2 位作者 余小利 苏丹萍 贺东生 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第12期53-56,共4页
本研究根据GenBank中登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)M基因保守序列6个特异性部位设计了2对引物,建立了PRRSV的环介导逆转录等温检测方法。结果表明,该方法灵敏度比RT-PCR高... 本研究根据GenBank中登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)M基因保守序列6个特异性部位设计了2对引物,建立了PRRSV的环介导逆转录等温检测方法。结果表明,该方法灵敏度比RT-PCR高100倍;全部反应可在1 h内完成并可得到其特有的阶梯状条带,而且猪圆环病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒的扩增结果均为阴性;在反应体系中添加SYBR GREENⅠ染料后,可通过肉眼观察有无荧光而直接判定结果。该方法灵敏度高、特异性好,可作为猪繁殖与呼吸综合征病毒的快速诊断方法。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 M基因 环介导逆转录等温扩增
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猪瘟病毒RT-LAMP快速检测方法的建立 被引量：10
17
作者 刘中勇 曾小娜 +4 位作者 朱道中 房红莹 蒋启荣 吴志强 罗满林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第6期71-74,共4页
本研究设计了4条针对猪瘟病毒6个位点的特异性引物,建立了一种灵敏、特异、快速的猪瘟病毒体外等温扩增(RT-LAMP)检测方法,所建立的方法能够特异地检测出猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的存在,检测PRV、PRRSV、PCV-2等病... 本研究设计了4条针对猪瘟病毒6个位点的特异性引物,建立了一种灵敏、特异、快速的猪瘟病毒体外等温扩增(RT-LAMP)检测方法,所建立的方法能够特异地检测出猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的存在,检测PRV、PRRSV、PCV-2等病毒均为阴性;灵敏度高,所建立的CSFV-RT-LAMP方法灵敏度为10-5,总RNA的检测阈值约为1pg;反应快速,整个扩增反应可在1h内完成;操作简单,不需要PCR仪等复杂的仪器,结果可经肉眼观察及电泳检测。本试验为猪瘟的现场快速检测提供更加简便、快速的方法,可以满足基层检疫的需要。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 环介导等温扩增技术
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LAMP技术研究进展及其在动物疫病检测中的应用 被引量：18
18
作者 徐淑菲 孔繁德 +3 位作者 苗丽 蔡振鸿 林振基 赵冉 《中国动物检疫》 CAS 2017年第1期75-80,共6页
本文从技术原理、研究进展及在动物疫病检测中的应用三个方面对环介导等温扩增(LAMP)技术进行了阐述。与普通PCR、荧光定量PCR相比,LAMP技术具有不需要精密仪器、肉眼即可判定、操作简单、所用时间短、灵敏度高等优点,在水生和陆生动物... 本文从技术原理、研究进展及在动物疫病检测中的应用三个方面对环介导等温扩增(LAMP)技术进行了阐述。与普通PCR、荧光定量PCR相比,LAMP技术具有不需要精密仪器、肉眼即可判定、操作简单、所用时间短、灵敏度高等优点,在水生和陆生动物的细菌病、病毒病、寄生虫病的检测中得到广泛应用。LAMP技术与其他技术的联合应用以及LAMP检测仪器的出现,更加促进了LAMP技术的发展和应用。 展开更多
关键词 环介导等温扩增技术 检测 发展 应用
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微流控LAMP芯片构建及在MRSA快速检测中的应用研究 被引量：5
19
作者 管潇 张梦军 +5 位作者 韩清娟 冯志强 曹文轩 刘明 郭嘉伟 张惠静 《中国测试》 CAS 北大核心 2015年第4期50-54,共5页
构建一种基于环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),集细菌在线裂解、核酸提取、目标基因扩增和产物检测一体化的用于病原菌快速检测的集成式微流控芯片。以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant st... 构建一种基于环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),集细菌在线裂解、核酸提取、目标基因扩增和产物检测一体化的用于病原菌快速检测的集成式微流控芯片。以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus,MRSA)为模式菌,以mec A为靶基因,在优化条件下用芯片实现对病原菌的在线检测,完成对101~106cfu MRSA的在线裂解、LAMP扩增和产物测定,采用荧光原位检测可得101~105cfu的检测范围和101cfu的检出限。该微流控LAMP芯片结构简单,操作便捷,可在1 h内实现对MRSA mec A基因的快速检测,具有较高的灵敏度和特异性,为下一步临床生物样本病原菌快速检测微流控芯片系统的构建奠定前期研究基础。 展开更多
关键词 微流控芯片 环介导等温扩增 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 MEC A基因 快速检测
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鹅新城疫病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立 被引量：6
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作者 刘文俊 黄运茂 +4 位作者 阳佑天 许丹宁 曹楠 周德荣 田允波 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第1期22-31,共10页
本研究拟建立一种能在基层实时、便捷诊断鹅新城疫病毒(goose Newcastle disease virus,GNDV)的检测方法。根据GenBank中公布的GNDVF基因的高度同源保守序列设计特异性引物,并在反应体系中添加钙黄绿素/氯化锰指示剂,建立可视化RT-LAMP... 本研究拟建立一种能在基层实时、便捷诊断鹅新城疫病毒(goose Newcastle disease virus,GNDV)的检测方法。根据GenBank中公布的GNDVF基因的高度同源保守序列设计特异性引物,并在反应体系中添加钙黄绿素/氯化锰指示剂,建立可视化RT-LAMP检测方法。结果显示,建立的方法能特异地检测出GNDV及NDV Lasota疫苗株,而小鹅瘟病毒(GPV)、禽流感病毒(AIV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)等其他病毒均为阴性。所建立的GNDV可视化RT-LAMP检测方法对RNA的最低检测限为10pg,反应过程不需PCR仪等复杂的仪器,50min即可完成反应,可经肉眼观察反应体系颜色判定结果。该方法特异性强、灵敏度高,且操作安全、简便、快捷,可满足基层筛查GNDV的需求。 展开更多
关键词 鹅新城疫病毒(GNDV) 环介导等温扩增(lamp) 钙黄绿素
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