马铃薯卷叶病毒PLRV RT-LAMP检测方法优化 被引量：8

1

作者 高彦萍 张武 +4 位作者 王国祥 席春艳 吴雁斌 梁宏杰 吕和平 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期259-264,306,共7页

马铃薯卷叶病毒Potato leafroll virus(PLRV)是目前严重影响马铃薯产量与品质的主要病毒之一,给马铃薯产业造成巨大损失。本研究采用环介导等温核酸扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技术建立PLRV的RT-LAMP检测方法... 马铃薯卷叶病毒Potato leafroll virus(PLRV)是目前严重影响马铃薯产量与品质的主要病毒之一,给马铃薯产业造成巨大损失。本研究采用环介导等温核酸扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技术建立PLRV的RT-LAMP检测方法。采取单因素变化试验,对RT-LAMP反应体系中多个因素包括引物组合、温度条件及Mg2+、betaine、Bst 3.0 DNA聚合酶、dNTPs、UNG、SYBR GreenⅠ和引物组合的浓度进行一系列试验和优化。采用RT-PCR检测方法进行平行比对试验,对优化后的RT-LAMP反应体系进行了验证。结果表明,最佳引物组合为P3,最适反应温度62℃,25μL反应体系中,Mg2+、betaine、Bst 3.0 DNA聚合酶和UNG的最佳终浓度分别为4 mmol/L、0 mmol/L、0.64 U/μL和0.08 U/μL,dNTPs的最佳用量为1μL(dATP、dGTP、dCTP各0.4 mmol/L,dUTP 1.2 mmol/L),SYBR GreenⅠ(20×)的最佳用量1μL,primer mix的最佳用量2.5μL(PLRV-FIP/BIP、PLRV-F3/B3和PLRV-LF/LB的浓度分别为0.8、0.2μmol/L和0.6μmol/L),RNA模板1μL(2 ng/μL),加DEPC-H2O至25μL,反应时间50 min。优化后的RT-LAMP检测结果与RT-PCR一致,且可视化判读结果。因此,建立的PLRV RT-LAMP检测方法为进一步开发RT-LAMP检测试剂盒及其实际应用奠定了基础。 展开更多

关键词 马铃薯卷叶病毒(plrv) 反转录环介导等温扩增(RT-LAMP) 检测方法

在线阅读 下载PDF 职称材料

PLRV 56KD蛋白基因植物转化载体的构建 被引量：2

2

作者 邸宏 田兴亚 +1 位作者 陈伊里 卢翠花 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2002年第1期1-7,共7页

为培育转基因抗马铃薯卷叶病毒的新材料 ,采用二次连接法将存在于克隆载体 p L R5 6中的马铃薯卷叶病毒 5 6 KD蛋白基因及 3 端非编码区构建到双元载体系统的中间表达载体质粒p ROK 中 ,采用三亲融合法和直接导入法转化根癌农杆菌 LBA4 ... 为培育转基因抗马铃薯卷叶病毒的新材料 ,采用二次连接法将存在于克隆载体 p L R5 6中的马铃薯卷叶病毒 5 6 KD蛋白基因及 3 端非编码区构建到双元载体系统的中间表达载体质粒p ROK 中 ,采用三亲融合法和直接导入法转化根癌农杆菌 LBA4 40 4 ,PCR法检测。实验表明 ,二次连接法效果优于一次连接法 ,两种连接法对比 ,二次连接法更适用于大分子质粒的重组。直接导入法比三亲融合法更简便 ,二者转化效率没有显著差异。实验构建完成马铃薯卷叶病毒 5 6 KD蛋白基因及 3 端非编码植物转化载体 ,建立了高效。 展开更多

关键词 马铃薯卷叶病毒 蛋白基因 plrv 56KD 植物转化 载体构建 二次连接法

在线阅读 下载PDF 职称材料

二价核酶基因构建及对PLRV负链靶序列的体外切割研究 被引量：1

3

作者 张剑峰 张鹤龄 +4 位作者 于嘉林 迟胜起 贺秀芳 郝文胜 杨静华 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第2期12-18,共7页

根据锤头状核酶的作用模式,设计、合成并克隆了特异性切割马铃薯卷叶病毒(Potato leaf roll virus,PLRV)中国分离株(PLRV-Ch)复制酶基因负链RNA的二价核酶序列。将该核酶基因克隆到pGEM-4Z中,构建成体外转录载体pGEM-4ZDR;同时将包含核... 根据锤头状核酶的作用模式,设计、合成并克隆了特异性切割马铃薯卷叶病毒(Potato leaf roll virus,PLRV)中国分离株(PLRV-Ch)复制酶基因负链RNA的二价核酶序列。将该核酶基因克隆到pGEM-4Z中,构建成体外转录载体pGEM-4ZDR;同时将包含核酶切割识别位点的PLRV-Ch复制酶基因cDNA近5'端的874 bp片段反向插入到pGEM-4Z中,构建了体外转录载体pGEM-4ZR5。以线性化的重组质粒pGEM-4ZDR和pGEM-4ZR5为模板,在T7 RNA聚合酶的作用下,分别转录获得核酶RNA和PLRV-Ch复制酶基因5'端负链RNA底物片段。将以上2种RNA转录物混合并经37℃保温后,检测结果表明,所得核酶RNA对PLRV-Ch复制酶基因负链RNA在体外具有较强的特异切割活性。 展开更多

关键词 二价核酶 马铃薯卷叶病毒 复制酶基因 体外切割

在线阅读 下载PDF 职称材料

马铃薯抗晚疫病及病毒病种质资源分子标记辅助筛选

4

作者 卢瑶 金鑫 +3 位作者 沈日敏 范向斌 毛向红 白小东 《中国马铃薯》 2024年第4期289-299,共11页

为筛选具有多个晚疫病、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)和马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV)抗性基因的马铃薯种质资源,利用4个与晚疫病抗性相关分子标记R2-800、R3a、R3b、R2F,3个与抗PVY的基因Ry_(sto)、Ry_(chc)紧密连... 为筛选具有多个晚疫病、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)和马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV)抗性基因的马铃薯种质资源,利用4个与晚疫病抗性相关分子标记R2-800、R3a、R3b、R2F,3个与抗PVY的基因Ry_(sto)、Ry_(chc)紧密连锁的分子标记YES3-3B、GP122-564、Ry364和抗PLRV的基因PLRV.1紧密连锁的分子标记N1271164,对174份山西省保存的马铃薯种质资源进行检测。174份种质资源均含有1个或1个以上的抗性分子标记,单个标记中含有R3b和GP122-564抗性分子标记的有173份;多个标记中只含有7个标记R3a、R3b、R2F、N127_(1164)、YES3-3B、Ry364、GP122-564的马铃薯种质资源有84份。聚类分析结果将174份种质资源分为5类,其中第Ⅲ类25份均含有8个分子标记,其中仅有6份为国内育成品种,分别为‘早大白’‘内薯7号’‘希森4号’‘天薯9号’‘中薯19号’‘京张薯1号’,其余均为国际马铃薯中心提供的资源,因此这一类可作为山西省马铃薯抗病育种材料。筛选出的晚疫病和PVY、PLRV抗性资源,将为相关病害抗性资源、分子标记的进一步利用以及抗病基因的聚合育种奠定基础。 展开更多

关键词 马铃薯 分子标记 晚疫病 马铃薯Y病毒(PVY) 马铃薯卷叶病毒(plrv)

在线阅读 下载PDF 职称材料

应用RT-PCR法快速检测马铃薯卷叶病毒 被引量：26

5

作者 吴志明 朱水芳 +1 位作者 张成良 田文会 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期77-79,共3页

根据马铃薯卷叶病毒的外壳蛋白基因序列 ,设计合成了一对寡核苷酸引物 ,从感染PLRV的马铃薯病叶组织中提取出病毒的RNA ,进行cDNA合成及PCR扩增 ,得到一条长度约 6 2 0bp的特异PCR扩增产物 ,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致。建立了... 根据马铃薯卷叶病毒的外壳蛋白基因序列 ,设计合成了一对寡核苷酸引物 ,从感染PLRV的马铃薯病叶组织中提取出病毒的RNA ,进行cDNA合成及PCR扩增 ,得到一条长度约 6 2 0bp的特异PCR扩增产物 ,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致。建立了快速灵敏简便的PLRV检测的新方法 ,其灵敏度要比PLRV的血清学检测方法高 10 4倍 ,在基因水平上为PLRV的检测提供了更新手段 。 展开更多

关键词 马铃薯 卷叶病毒 病毒检测 RT-PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

马铃薯卷叶病毒分离株外壳蛋白基因和17k蛋白基因的克隆及序列分析 被引量：7

6

作者 吴志明 朱水芳 +1 位作者 田文会 张成良 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期62-66,72,共6页

从典型的马铃薯卷叶病毒病株中直接提取出植物总RNA ,根据PLRV外壳蛋白基因序列 ,设计合成了一对寡核苷酸引物 ,经RT -PCR法扩增出全长的cDNA片段 ,将其克隆到质粒pGEM - 3Zf (+)上 ,并进行了序列分析。结果表明 ,克隆的cDNA片段由 6 2 ... 从典型的马铃薯卷叶病毒病株中直接提取出植物总RNA ,根据PLRV外壳蛋白基因序列 ,设计合成了一对寡核苷酸引物 ,经RT -PCR法扩增出全长的cDNA片段 ,将其克隆到质粒pGEM - 3Zf (+)上 ,并进行了序列分析。结果表明 ,克隆的cDNA片段由 6 2 7个核苷酸组成 ,编码 2 0 8个氨基酸组成的理论分子量为2 3k的蛋白 ,与PLRV外壳蛋白的大小一致 ;此外克隆片段还含有一个不同于外壳蛋白基因的阅读框架 ,该框架由 46 5个核苷酸组成 ,编码 15 5个氨基酸组成的理论分子量为 17k的蛋白 ,与PLRV的 17k蛋白大小一致。与国外报道的几个株系相比 ,PLRV分离物的外壳蛋白基因及 17k蛋白基因的核苷酸同源率分别高达97 5 %～ 99 7%和 96 5 %～ 99 6 % ,由此推测的氨基酸同源率高达 97 6 %～ 99 5 %和 96 1%～ 99 4% ,说明所克隆的PLRV外壳蛋白基因和 17k蛋白基因具有高度的保守性 ,本研究克隆了PLRV分离物外壳蛋白和17k蛋白基因的序列 。 展开更多

关键词 序列分析 马铃薯卷叶病毒 外壳蛋白基因 基因克隆 基因表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

重组CP多克隆抗体在马铃薯卷叶病毒DAS-ELISA检测中的应用 被引量：12

7

作者 李楠楠 左玉玲 +4 位作者 隋炯明 盖树鹏 樊连梅 李广存 郭宝太 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第6期85-88,共4页

先经过饱和硫酸铵沉淀分离,再用Protein G亲和层析柱纯化,从马铃薯卷叶病毒(PLRV)重组CP作抗原制备的抗血清中获得了高纯度多克隆抗体(IgG),并用戊二醛法一步法进行碱性磷酸酶的标记获得了酶标抗体(IgG-AP)。将纯化的抗体与酶标抗体用... 先经过饱和硫酸铵沉淀分离,再用Protein G亲和层析柱纯化,从马铃薯卷叶病毒(PLRV)重组CP作抗原制备的抗血清中获得了高纯度多克隆抗体(IgG),并用戊二醛法一步法进行碱性磷酸酶的标记获得了酶标抗体(IgG-AP)。将纯化的抗体与酶标抗体用于感染PLRV病叶的检测,DAS-ELISA反应呈阳性,结果表明,用重组CP制备的多克隆抗体可成功地用于PLRV的DAS-ELISA检测。本研究为PLRV重组CP多克隆抗体的大量制备及ELISA检测奠定了基础。 展开更多

关键词 马铃薯卷叶病毒 重组CP 多克隆抗体 酶标抗体 DAS-ELISA

在线阅读 下载PDF 职称材料

基于重组酶聚合酶扩增技术(RPA)的葡萄卷叶伴随病毒3号检测方法 被引量：17

8

作者 张娜 乾义柯 +6 位作者 魏霜 胡白石 陆平 赛铁尔汗 刘中勇 张永江 张祥林 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期302-308,共7页

【目的】建立一种快速、灵敏的重组酶聚合酶扩增技术(RPA)检测葡萄卷叶伴随病毒3(Grapevine leafroll-associated virus 3,GLRaV-3)方法。【方法】根据GLRaV-3已测序和已报道的HSP70基因(Heat shock protein 70)保守序列,设计用于RPA检... 【目的】建立一种快速、灵敏的重组酶聚合酶扩增技术(RPA)检测葡萄卷叶伴随病毒3(Grapevine leafroll-associated virus 3,GLRaV-3)方法。【方法】根据GLRaV-3已测序和已报道的HSP70基因(Heat shock protein 70)保守序列,设计用于RPA检测的特异性引物,建立GLRaV-3的RPA检测方法,并对其特异性和灵敏度进行验证。【结果】建立RPA检测方法能够从GLRaV-3带毒株中检测到约380 bp的特异性条带,仅需在37℃下恒温反应40 min,无需特殊的仪器设备,经特异性评价特异性好,且该方法与普通PCR检测灵敏度基本一致。【结论】建立的RPA检测方法特异性强、灵敏度高,无需特殊的仪器设备,适合GLRaV-3的快速检测方法。 展开更多

关键词 葡萄卷叶伴随病毒3 RPA 检测方法

在线阅读 下载PDF 职称材料

三种葡萄病毒的RT-PCR检测和系统进化分析 被引量：12

9

作者 王建辉 刘建军 +3 位作者 陈克玲 李洪雯 何建 关斌 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期197-201,共5页

【目的】为了研究不同葡萄病毒病快速检测方法和四川分离株系统进化,【方法】比较3种葡萄总RNA提取方法,还优化了葡萄病毒病的RT-PCR检测方法。分别克隆了3种病毒四川分离株的部分基因组区域,并开展了系统进化分析。【结果】结果表明,... 【目的】为了研究不同葡萄病毒病快速检测方法和四川分离株系统进化,【方法】比较3种葡萄总RNA提取方法,还优化了葡萄病毒病的RT-PCR检测方法。分别克隆了3种病毒四川分离株的部分基因组区域,并开展了系统进化分析。【结果】结果表明,改进硅胶颗粒吸附法快速从葡萄枝条的韧皮组织中提取了总RNA,并以葡萄18SRNA为内参基因,RT-PCR分别成功扩增出3种病毒的目的片段。把16个地理起源的GLRaV-2分离株的外壳蛋白基因(Coat protein,CP)分成5个系统进化组。而7个地理起源的GVB分离株CP同源性为79.1%～98.7%。此外,5个GVA四川分离株分别位于系统进化树的4个聚类群。【结论】GLRaV-2、GVB和GVA不同地理起源的分离株在核酸水平上具有变异性,其中GVA四川分离株之间具有显著的遗传差异,可能包括4种株系。 展开更多

关键词 葡萄卷叶伴随2型病毒 葡萄B病毒 葡萄A病毒 病毒外壳蛋白基因 病毒沉默抑制子基因

在线阅读 下载PDF 职称材料

马铃薯卷叶病毒的RT-PCR快速检测 被引量：13

10

作者 路平 王蒂 司怀军 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2005年第4期532-534,共3页

根据马铃薯卷叶病毒的外壳蛋白基因序列,设计合成了一对寡核苷酸引物。从感染马铃薯卷叶病毒(PLRV)的马铃薯叶片中提取出病毒RNA,进行cDNA合成并运用RT-PCR技术进行体外扩增,得到一条长度约627bp的特异PCR扩增产物,与理论设计的外壳蛋... 根据马铃薯卷叶病毒的外壳蛋白基因序列,设计合成了一对寡核苷酸引物。从感染马铃薯卷叶病毒(PLRV)的马铃薯叶片中提取出病毒RNA,进行cDNA合成并运用RT-PCR技术进行体外扩增,得到一条长度约627bp的特异PCR扩增产物,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致,而对照未得到任何产物。从而建立了快速灵敏的PLRV检测方法,为PLRV的防治及检测提供了有效手段。 展开更多

关键词 马铃薯卷叶病毒 逆转录-聚合酶链式反应 病毒检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

葡萄卷叶病毒Ⅲ RT-PCR检测技术研究 被引量：11

11

作者 刘三军 郭卫东 +3 位作者 张秋叶 何水涛 周厚成 张亚冰 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期15-18,共4页

利用ＲＴ－ＰＣＲ技术,对葡萄卷叶病毒株系Ⅲ进行了检测。采用的技术流程为:通过提取葡萄叶片或韧皮部总ＲＮＡ,获得病毒的ＲＮＡ,反转录合成ｃＤＮＡ,经ＰＣＲ扩增,获得病毒ｃＤＮＡ的特征片段,并进行了序列分析。对提取的总ＲＮＡ进... 利用ＲＴ－ＰＣＲ技术,对葡萄卷叶病毒株系Ⅲ进行了检测。采用的技术流程为:通过提取葡萄叶片或韧皮部总ＲＮＡ,获得病毒的ＲＮＡ,反转录合成ｃＤＮＡ,经ＰＣＲ扩增,获得病毒ｃＤＮＡ的特征片段,并进行了序列分析。对提取的总ＲＮＡ进行了完整性和纯度检测,确定了良好的ＲＮＡ获得方法。结果表明,通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增的片段序列与病毒源序列的同源性高达９９．３%,说明采用本研究确定的方法检测葡萄卷叶病毒株系Ⅲ结果可靠。 展开更多

关键词 葡萄 卷叶病毒Ⅲ RT-PCR 检测 克隆 序列分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

陕西马铃薯卷叶病病原的分子生物学鉴定 被引量：7

12

作者 颜永杰 吴宽 +1 位作者 谢海峰 高云芳 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2010年第5期87-92,共6页

【目的】对陕西榆林疑似感染马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV)的病株毒源进行分子生物学鉴定,为陕西省马铃薯卷叶病的防治提供参考。【方法】根据GenBank数据库已报道的马铃薯卷叶病毒外壳蛋白(Coat protein,CP)基因序列设计... 【目的】对陕西榆林疑似感染马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV)的病株毒源进行分子生物学鉴定,为陕西省马铃薯卷叶病的防治提供参考。【方法】根据GenBank数据库已报道的马铃薯卷叶病毒外壳蛋白(Coat protein,CP)基因序列设计了1对引物,利用RT-PCR技术成功扩增了陕西PLRV.CP基因,然后进行克隆、测序,并与GenBank中已报道的27个PLRV分离物的CP基因进行同源性分析。【结果】获得的陕西PLRV.CP基因大小为627 bp,含有1个ORF,编码208个氨基酸的多肽,其与已报道的27个国内外PLRV.CP高度同源。【结论】陕西榆林的疑似病株确定为感染PLRV的马铃薯病株。 展开更多

关键词 马铃薯卷叶病 马铃薯卷叶病毒 RT-PCR 分子生物学鉴定

在线阅读 下载PDF 职称材料

冬种马铃薯卷叶病田间调查及RT-PCR检测技术研究 被引量：5

13

作者 陈兆贵 林于绵 黄成 《湖北农业科学》 北大核心 2010年第9期2134-2137,共4页

对惠州市冬种马铃薯卷叶病发病情况进行调查研究,建立了马铃薯卷叶病毒(PLRV)RT-PCR检测技术。结果表明,马铃薯卷叶病发病率为3.0%～29.7%。比较LiCl、异硫氰酸胍和试剂盒3种方法提取马铃薯卷叶病毒总RNA,以异硫氰酸胍和试剂盒提取效果... 对惠州市冬种马铃薯卷叶病发病情况进行调查研究,建立了马铃薯卷叶病毒(PLRV)RT-PCR检测技术。结果表明,马铃薯卷叶病发病率为3.0%～29.7%。比较LiCl、异硫氰酸胍和试剂盒3种方法提取马铃薯卷叶病毒总RNA,以异硫氰酸胍和试剂盒提取效果较好,LiCl次之;根据卷叶病毒外壳蛋白基因序列设计引物,从感染马铃薯卷叶病毒的马铃薯叶片中提取出病毒RNA,合成cDNA并运用RT-PCR技术进行体外扩增,得到一条长度约336bp的特异PCR扩增产物,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致,而健康叶片RNA扩增未得到任何产物。应用RT-PCR技术对马铃薯试管苗和种薯进行了卷叶病毒检测。 展开更多

关键词 马铃薯 卷叶病毒病 田间调查 RT-PCR检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

马铃薯卷叶病毒P0蛋白抑制RNA沉默及其与AGO蛋白的相互作用 被引量：3

14

作者 霍晓辉 申永梅 +1 位作者 刘国富 曹雪松 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期70-76,共7页

马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV)P0是由开放阅读框1(ORF1)所编码,利用农杆菌介导的瞬时表达技术渗透注射转绿色荧光蛋白(GFP)基因的16c烟草叶片发现PLRV-P0能够抑制由GFP mRNA引起的基因沉默,结果表明PLRV-P0是马铃薯卷叶... 马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV)P0是由开放阅读框1(ORF1)所编码,利用农杆菌介导的瞬时表达技术渗透注射转绿色荧光蛋白(GFP)基因的16c烟草叶片发现PLRV-P0能够抑制由GFP mRNA引起的基因沉默,结果表明PLRV-P0是马铃薯卷叶病毒编码的一个基因沉默抑制因子。通过序列分析发现PLRV-P0基因序列中含有两个重复的WG基序,我们将PLRV-P0基因序列中第87位和第140位的色氨酸(W)点突变为丙氨酸(A)(命名为P0WA),构建植物表达载体pCAMBIA1300-CE-P0,pCAMBIA1300-CE-P0WA,农杆菌渗透注射本氏(Nicotiana benthamiana)烟草叶片,通过荧光显微镜观察发现PLRV-P0和AGO共同注射后有绿色荧光出现而PLRV-P0WA和AGO共同注射后则没有绿色荧光出现。研究结果初步表明,PLRV-P0能够和AGO蛋白发生相互作用,重复的WG基序是其与AGO蛋白相互作用的关键氨基酸。 展开更多

关键词 马铃薯卷叶病毒(plrv) P0蛋白 抑制RNA沉默 AGO蛋白 相互作用

在线阅读 下载PDF 职称材料

青海省马铃薯卷叶病毒的RT-PCR法检测 被引量：6

15

作者 周云 杨永智 王舰 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期210-211,224,共3页

根据马铃薯卷叶病毒(PLRV)外壳蛋白基因的保守序列设计了一对寡聚核苷酸引物,从田间自然感染PLRV的马铃薯病株中提取病毒总RNA,用反转录-聚合酶链式反应扩增出符合设计大小240bp的特异性产物,而对照没有任何扩增产物。建立了快速、准确... 根据马铃薯卷叶病毒(PLRV)外壳蛋白基因的保守序列设计了一对寡聚核苷酸引物,从田间自然感染PLRV的马铃薯病株中提取病毒总RNA,用反转录-聚合酶链式反应扩增出符合设计大小240bp的特异性产物,而对照没有任何扩增产物。建立了快速、准确检验PLRV的分子检测方法,为青海省马铃薯生产中卷叶病毒的检测和防治提供了有效手段。 展开更多

关键词 马铃薯卷叶病毒 RT-PCR 病毒检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

马铃薯卷叶病毒陕西分离物外壳蛋白(CP)的生物信息学分析 被引量：3

16

作者 颜永杰 吴宽 +2 位作者 张珏 高云芳 谢海峰 《西北大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期473-476,共4页

目的分析预测马铃薯卷叶病毒(PLRV)外壳蛋白的理化性质及结构。方法应用DNA-MAN软件、ExPASy中的ProtParam工具,SignalP,LipoP程序,TMHMM,PSIPRED和3D-PSSM等方法,分析PLRV.CP的核苷酸基本特征、蛋白质理化性质、亲疏水性、可溶性、信... 目的分析预测马铃薯卷叶病毒(PLRV)外壳蛋白的理化性质及结构。方法应用DNA-MAN软件、ExPASy中的ProtParam工具,SignalP,LipoP程序,TMHMM,PSIPRED和3D-PSSM等方法,分析PLRV.CP的核苷酸基本特征、蛋白质理化性质、亲疏水性、可溶性、信号肽、跨膜结构域、二级结构、保守区域、三级结构等。结果陕西PLRV.CP,与已报道的PLRV.CP高度同源。蛋白序列分析显示无跨膜螺旋结构,不属分泌蛋白,是可溶的亲水性蛋白。二级结构主要为折叠和无规则卷曲,不含转角。三级结构保守区预测表明,该蛋白属于黄化病毒属外壳蛋白成员。结论对马铃薯卷叶病毒外壳蛋白的生物信息学分析为进一步研究其功能、探索抗病途径奠定了基础。 展开更多

关键词 马铃薯卷叶病毒 外壳蛋白 生物信息学

在线阅读 下载PDF 职称材料

葡萄卷叶病毒RT-PCR检测技术研究 被引量：9

17

作者 牛建新 陈萍 +2 位作者 李西平 马兵钢 鲁晓燕 《西北农业学报》 CAS CSCD 2004年第1期28-32,共5页

以葡萄叶片和皮层为材料,对植物总RNA和dsRNA提取方法进行了研究,从中筛选出了提取葡萄总RNA和dsRNA的适合方法。建立了GLRaV RT-PCR的有效体系,在有效体系基础上,通过研究RT-PCR主要成分对RT-PCR的影响,确立了GLRaVRT-PCR的优化体系。

关键词 葡萄卷叶病毒Ⅲ RT-PCR检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

马铃薯卷叶病毒RT-LAMP检测方法的建立 被引量：11

18

作者 高彦萍 吕和平 +3 位作者 张武 王国祥 吴雁斌 梁宏杰 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1943-1950,共8页

为建立一种快速准确检测马铃薯卷叶病毒(potato leafroll virus,PLRV)的方法,本研究以PLRV CP(coat protein,CP)基因ORF3保守序列为靶标,建立了PLRV反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测体系,并对建立的RT-LAMP检测体系的特异性、灵敏度... 为建立一种快速准确检测马铃薯卷叶病毒(potato leafroll virus,PLRV)的方法,本研究以PLRV CP(coat protein,CP)基因ORF3保守序列为靶标,建立了PLRV反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测体系,并对建立的RT-LAMP检测体系的特异性、灵敏度、实际应用效果进行评估。结果表明,建立的PLRV RT-LAMP检测方法,在62℃恒温下扩增50 min,扩增产物中加入双链嵌合荧光染色(SYBR GreenⅠ),阳性样品颜色变为绿色,阴性样品颜色仍为褐色,可直接目测判断待检测样品是否感染PLRV。该方法只特异性检测PLRV,不与马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯S病毒(PVS)、马铃薯A病毒(PVA)和马铃薯M病毒(PVM)等其他5种马铃薯主要病毒发生交叉反应。此外,建立的PLRV RT-LAMP检测方法的灵敏度较反转录PCR(RT-PCR)方法高100倍。田间样品检测验证,该方法与标准RT-PCR方法符合率达100%。本研究建立的以SYBR GreenΙ为颜色指示的PLRV可视化检测RT-LAMP方法,特异、灵敏、便捷,成本低,可满足科研、基层单位对该病毒快速诊断和检测的需要。 展开更多

关键词 马铃薯卷叶病毒 反转录环介导等温扩增 反转录聚合酶链式扩增 检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

葡萄卷叶伴随病毒2实时荧光定量RT-PCR技术的检测应用 被引量：4

19

作者 任芳 张尊平 +3 位作者 范旭东 胡国君 张梦妍 董雅凤 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期180-187,共8页

通过引物筛选和体系优化建立了葡萄卷叶伴随病毒2 Grapevine leafroll-associated virus 2(GLRaV-2)的SYBR GreenⅠ染料法实时荧光定量RT-PCR检测技术。该技术标准曲线扩增效率为102.2%,决定系数为0.999,最低检出限可达10-3稀释梯度,是... 通过引物筛选和体系优化建立了葡萄卷叶伴随病毒2 Grapevine leafroll-associated virus 2(GLRaV-2)的SYBR GreenⅠ染料法实时荧光定量RT-PCR检测技术。该技术标准曲线扩增效率为102.2%,决定系数为0.999,最低检出限可达10-3稀释梯度,是常规RT-PCR的100倍。对不同季节和不同部位葡萄样品的检出率普遍高于常规RT-PCR。春夏秋季样品检出率分别为67%、89%和86%,比常规RT-PCR检出率分别高42%、28%和17%。冬季休眠枝条检出率最高(100%),与常规RT-PCR相同。夏季老叶柄和卷须、秋季和冬季枝条等样品检测效果最好,检出率均为100%。对来自我国17个省38个品种的116份田间葡萄样品检测结果表明,qRT-PCR共检测到10个样品为阳性,检出率略高于常规RT-PCR。 展开更多

关键词 葡萄 葡萄卷叶伴随病毒2 实时荧光定量RT-PCR 常规RT-PCR 检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

蚜虫中携带马铃薯卷叶病毒检测方法的改进 被引量：2

20

作者 韩树鑫 白艳菊 +4 位作者 张威 高艳玲 范国权 张抒 申宇 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期986-992,共7页

马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV)对马铃薯生产的危害极大,是一种极为重要的马铃薯病毒病。RT-PCR是马铃薯卷叶病毒检测较为常用的方法,该方法检测准确率高、成本低、适用范围广。但在实际生产中其检测对象多为染病植株,对P... 马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV)对马铃薯生产的危害极大,是一种极为重要的马铃薯病毒病。RT-PCR是马铃薯卷叶病毒检测较为常用的方法,该方法检测准确率高、成本低、适用范围广。但在实际生产中其检测对象多为染病植株,对PLRV传播的主要介体桃蚜(Myzus persicae)的检测,则由于蚜虫体积小、RNA提取难度大、成本高、且不能复检,因而在生产中不能被广泛使用。该研究以马铃薯感病植株和带毒蚜虫为材料,利用改进的RNA提取方法从它们中提取到PLRV的RNA,并以CP基因设计特异性引物,进行PCR检测。结果表明:该方法提取的RNA完整性好,可用于蚜虫中PLRV检测,且同样适用于对马铃薯感病植株的检测。另外,通过对田间有翅蚜和无翅蚜携带PLRV情况进行检测发现,无翅蚜PLRV检出率为100%,有翅蚜PLRV检出率也高达60%,证明该体系在生产中的实用性。该研究使用改进的RNA提取方法,提取蚜虫中RNA,并利用RT-PCR进行了PLRV检测,与以前的方法相比简单实用,可被应用于生产检测中。该研究结果为马铃薯生产中PLRV的防控提供了一种新的手段。 展开更多

关键词 马铃薯卷叶病毒 蚜虫 CP基因 检测

在线阅读 下载PDF 职称材料