紫花苜蓿MsLEA4-4基因的克隆、表达分析及遗传转化 被引量：7

1

作者 贾会丽 王学敏 +6 位作者 郭继承 高洪文 吴欣明 刘建宁 石永红 董宽虎 王运琦 《草业学报》 CSCD 北大核心 2017年第12期108-116,共9页

胚胎晚期富集蛋白(LEA)广泛参与植物对多种逆境胁迫的反应。本研究利用同源克隆的方法,从紫花苜蓿中克隆了一个LEA4类基因的开放阅读框(ORF),命名为Ms LEA4-4。该基因编码512个氨基酸,结构分析显示MsLEA4-4包含5个重复的由11个氨基酸TAQ... 胚胎晚期富集蛋白(LEA)广泛参与植物对多种逆境胁迫的反应。本研究利用同源克隆的方法,从紫花苜蓿中克隆了一个LEA4类基因的开放阅读框(ORF),命名为Ms LEA4-4。该基因编码512个氨基酸,结构分析显示MsLEA4-4包含5个重复的由11个氨基酸TAQAAKEKTQQ组成的序列特征。利用实时荧光定量PCR检测了Ms LEA4-4在不同逆境下的表达量,结果显示,该基因受干旱、NaCl、Cu^(2+)、Zn^(2+)和外源ABA诱导表达上调,其中Na Cl胁迫2h、Cu2+和Zn2+胁迫8 h,Ms LEA4-4基因表达量最高;冷胁迫和干旱胁迫下,该基因的表达量随处理时间的延长呈逐渐上升趋势,表明该基因可能参与了紫花苜蓿的抗逆性调控。构建植物超表达载体p CAMBIA3301-Ms LEA4-4,采用农杆菌介导法侵染拟南芥花序,通过草铵膦(PPT)筛选和分子检测,7株抗性苗呈阳性,表明目的基因已成功导入拟南芥基因组中。本研究为进一步探索Ms LEA4-4基因在紫花苜蓿抗逆性调控中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 紫花苜蓿 胚胎晚期富集蛋白(lea) 逆境胁迫 遗传转化

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棉花种子特异表达的LEA启动子克隆及功能验证 被引量：9

2

作者 刘峰 汪小东 +1 位作者 赵彦鹏 孙杰 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2014年第4期310-317,共8页

以棉花品种新陆早33号为材料,克隆获得其胚胎发育晚期丰富蛋白LEA基因的种子特异性启动子。启动子序列全长为1228bp;作用元件分析表明该区域除了具有启动子核心调控序列外,还含有多个与组织特异性、激素、逆境等表达相关的顺式作用元件,... 以棉花品种新陆早33号为材料,克隆获得其胚胎发育晚期丰富蛋白LEA基因的种子特异性启动子。启动子序列全长为1228bp;作用元件分析表明该区域除了具有启动子核心调控序列外,还含有多个与组织特异性、激素、逆境等表达相关的顺式作用元件,如E-box、ABRE元件、A-box等。与已报道的棉花品种Coker 201的LEA基因D34的5'端上游调控序列1212bp相比,两者具有97%的一致性。拟南芥遗传转化的功能分析结果表明,所克隆的序列能驱动GUS基因在种子中特异表达,且GUS主要在转基因植物的种子发育后期表达;其表达强度要弱于组成型的CaMV35S启动子。研究结果不仅有助于进一步深入认识棉花LEA基因功能及其表达调控规律,也为植物遗传转化提供组织特异性的启动子。 展开更多

关键词 棉花 种子特异性启动子 胚胎发育晚期丰富蛋白

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转TaLEA基因小黑杨抗寒株系的筛选 被引量：7

3

作者 王遂 刘梦然 +3 位作者 黄海娇 穆怀志 李志新 刘桂丰 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期5-7,16,共4页

为验证转TaLEA基因小黑杨耐低温能力并筛选抗寒的优良株系,对11个转LEA基因小黑杨株系与非转基因野生型小黑杨对照(WT)进行了低温胁迫处理,测定其丙二醛(MDA)的质量摩尔浓度、过氧化物酶(POD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、叶绿素质量分... 为验证转TaLEA基因小黑杨耐低温能力并筛选抗寒的优良株系,对11个转LEA基因小黑杨株系与非转基因野生型小黑杨对照(WT)进行了低温胁迫处理,测定其丙二醛(MDA)的质量摩尔浓度、过氧化物酶(POD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、叶绿素质量分数、冷害指数等。结果表明:低温胁迫条件下,除XL09外,其余各转基因株系的MDA质量摩尔浓度均低于WT,转基因株系MDA的质量摩尔浓度平均值低于WT的16.5%;抗氧化酶类活性在低温胁迫下仅XL10和XL11株系相对较高;叶绿素质量分数除XL01略低于WT外,其余转基因株系均高于WT,转基因株系叶绿素的质量分数平均值为35.1 mg.g-1,高于WT的6.4%;冷害指数方面,各转基因株系中除XL03高于WT外,其余均低于WT。采用隶属函数法综合评价各株系的抗寒性,从强到弱排序为:XL11>XL10>XL14>XL04>XL07>XL03>XL13>WT>XL06>XL01>XL05>XL09。外源基因LEA的导入不同程度地提高了小黑杨的抗寒性,其中XL11、XL10、XL14、XL04株系耐低温能力较强。 展开更多

关键词 小黑杨 lea基因 抗寒性

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水稻OsLEA5c基因的克隆、表达和抗逆性分析 被引量：3

4

作者 胡廷章 杨俊年 +2 位作者 周大祥 黄小云 陈再刚 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2014年第9期18-23,共6页

为了研究水稻胚胎发育后期丰富蛋白基因OsLEA5c 的抗逆性，利用 RT PCR技术从水稻中克隆到OsLEA5c的 cDNA。序列分析表明，OsLEA5c基因的读码框为456 bp，编码1个由151个氨基酸残基组成的蛋白。蛋白分子量为16.55 kD，等电点为5.07。OsL... 为了研究水稻胚胎发育后期丰富蛋白基因OsLEA5c 的抗逆性，利用 RT PCR技术从水稻中克隆到OsLEA5c的 cDNA。序列分析表明，OsLEA5c基因的读码框为456 bp，编码1个由151个氨基酸残基组成的蛋白。蛋白分子量为16.55 kD，等电点为5.07。OsLEA5c蛋白的平均亲水系数（GRAVY）为0.020，为疏水蛋白。OsLEA5c蛋白的44－140位氨基酸残基形成 LEA_2结构域。进化树分析表明，OsLEA5 c属于第5组LEA蛋白的C亚组。OsLEA5 c与5 C亚组LEA蛋白的氨基酸一致性为45.14％～61.59％。利用基因重组技术构建的原核表达载体 pET32a Os-LEA5c，转化到E．coli BL21 pLysS菌株中，诱导得到34 kD的融合蛋白。OsLEA5c在大肠杆菌中的表达增加了大肠杆菌对高温、高盐、高渗透压和反复冻融的抗性。OsLEA5c 基因在水稻抗逆和种子成熟脱水过程中发挥重要作用。 展开更多

关键词 水稻 胚胎发育后期丰富蛋白 Oslea5c基因 表达 抗逆性 ORYZA SATIVA L.

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水稻OsLEA19a基因在大肠杆菌中的表达和抗逆性分析 被引量：4

5

作者 胡廷章 杨俊年 +1 位作者 吴应梅 陈再刚 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第6期1-4,共4页

根据胚胎发育后期丰富蛋白基因OsLEA19a的读码框序列设计引物,PCR扩增目的基因后,利用基因重组技术成功构建原核表达载体pET30a-OsLEA19a,并将重组质粒转化到E.coli BL21中。优化诱导OsLEA19a表达的条件,使目的蛋白可在E.coli BL21中高... 根据胚胎发育后期丰富蛋白基因OsLEA19a的读码框序列设计引物,PCR扩增目的基因后,利用基因重组技术成功构建原核表达载体pET30a-OsLEA19a,并将重组质粒转化到E.coli BL21中。优化诱导OsLEA19a表达的条件,使目的蛋白可在E.coli BL21中高效表达。OsLEA19a融合蛋白的SDS-PAGE电泳分析表明,诱导蛋白表达的最适条件是37℃、4 h,融合蛋白的大小大约为30 kDa。抗逆性分析表明,OsLEA19a的表达能增强大肠杆菌对高盐、高渗透压、高温和低温等非生物胁迫的抗性。 展开更多

关键词 胚胎发育后期丰富蛋白 Oslea19a 蛋白表达 大肠杆菌 抗逆性

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转CkLEA4基因拟南芥种子萌发期的抗逆性分析 被引量：2

6

作者 于秀敏 张燕娜 +4 位作者 岳文冉 杨杞 万永青 李国婧 王瑞刚 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期648-654,共7页

该研究在实验室前期研究的基础上,将受脱水、盐胁迫和ABA诱导的柠条锦鸡儿CkLEA4基因转入野生型拟南芥,并利用实时荧光定量PCR从8株纯合体中筛选出3个表达量不同的株系,比较野生型和转CkLEA4基因过表达拟南芥种子在不同胁迫处理下的萌发... 该研究在实验室前期研究的基础上,将受脱水、盐胁迫和ABA诱导的柠条锦鸡儿CkLEA4基因转入野生型拟南芥,并利用实时荧光定量PCR从8株纯合体中筛选出3个表达量不同的株系,比较野生型和转CkLEA4基因过表达拟南芥种子在不同胁迫处理下的萌发率,以探讨CkLEA4基因在植物抵抗逆境胁迫中的功能。结果发现:(1)在不同浓度NaCl、甘露醇及ABA处理下,转CkLEA4基因过表达拟南芥种子的萌发率均高于野生型,随着NaCl、甘露醇及ABA浓度增加,各株系萌发率均降低,但野生型的萌发率下降幅度均高于3个过表达株系,并且在200mmol/L NaCl和400mmol/L甘露醇处理下,过表达株系子叶绿化率均显著高于野生型。(2)在低浓度ABA处理下,CkLEA4过表达植株子叶的绿化率也高于野生型。研究表明,柠条锦鸡儿CkLEA4基因提高了拟南芥种子萌发阶段对盐、ABA及渗透胁迫的耐受性。 展开更多

关键词 柠条锦鸡儿 胚胎晚期丰富蛋白基因 非生物胁迫 转基因拟南芥

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花生中三个LEA基因的克隆与表达分析 被引量：12

7

作者 赵小波 张廷婷 +5 位作者 闫彩霞 李春娟 王娟 张浩 石程仁 单世华 《花生学报》 北大核心 2016年第4期14-19,共6页

胚胎发生晚期丰富蛋白(LEA)是一类受发育阶段及脱水信号调节的脱水保护蛋白,在响应植物干旱、低温、高盐等逆境胁迫中具有重要功能。本研究在转录组数据分析时,发现3个LEA基因在花生干旱胁迫时大量上调表达。利用RACE技术以及生物信息... 胚胎发生晚期丰富蛋白(LEA)是一类受发育阶段及脱水信号调节的脱水保护蛋白,在响应植物干旱、低温、高盐等逆境胁迫中具有重要功能。本研究在转录组数据分析时,发现3个LEA基因在花生干旱胁迫时大量上调表达。利用RACE技术以及生物信息学方法,发现这三个基因分别属于LEA2、LEA3以及LEA4。通过序列比对进行进化分析,结果表明其均与Arachis duranensis,A.ipaensis相关基因具有极高相似度,印证了栽培花生来源于Arachis duranensis和A.ipaensis的研究结果。通过表达分析发现,正常状态下这三个基因在花生根、茎、叶中均有表达;干旱胁迫状态下,花生根部的LEA基因大量表达,暗示其在花生抗旱机制中发挥重要作用。本研究结果可为筛选新的抗旱花生种质提供理论依据。 展开更多

关键词 花生 胚胎发生晚期丰富蛋白 干旱 转录组

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扁蓿豆MrLEA2基因的克隆和原核表达 被引量：5

8

作者 马超 沈迎芳 +1 位作者 吴小培 王海庆 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1944-1950,共7页

从扁蓿豆(Medicago ruthenica L.)幼苗中克隆到一个编码晚期胚胎发生丰富蛋白的基因MrLEA2,Pfam数据库检索表明其编码产物属于LEA_2蛋白家族。半定量RT-PCR分析发现MrLEA2在幼苗中表达水平不受非生物胁迫(脱水、高盐和低温)和脱落酸诱... 从扁蓿豆(Medicago ruthenica L.)幼苗中克隆到一个编码晚期胚胎发生丰富蛋白的基因MrLEA2,Pfam数据库检索表明其编码产物属于LEA_2蛋白家族。半定量RT-PCR分析发现MrLEA2在幼苗中表达水平不受非生物胁迫(脱水、高盐和低温)和脱落酸诱导。利用MrLEA2基因构建原核表达载体,在大肠杆菌中实现了过量表达。通过斑点试验和菌落计数实验,对过量表达MrLEA2蛋白的大肠杆菌细胞在高盐(0.5mol/L NaCl和0.5mol/L KCl)、55℃高温和-20℃冷冻胁迫处理下的生长存活情况检测发现,MrLEA2蛋白过量表达能够明显提高大肠杆菌对上述胁迫的耐受性。研究表明,MrLEA2蛋白对高盐和温度胁迫引起的细胞损伤具有保护作用。 展开更多

关键词 扁蓿豆 晚期胚胎发生丰富蛋白 大肠杆菌 过量表达 盐胁迫 温度胁迫

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OsLEA2基因在原核生物中的异源表达和抗性分析 被引量：2

9

作者 胡廷章 钟彦 +2 位作者 陈林 杨俊年 黄小云 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第6期2281-2284,共4页

为了研究胚胎发育后期丰富蛋白基因OsLEA2的功能,利用PCR方法扩增目的基因,采用基因重组、蛋白质表达和抗逆性分析对OsLEA2基因进行研究。结果表明,构建的原核表达载体pET32a-OsLEA2,转化到E.coli BL21中,得到表达OsLEA2融合蛋白的工程... 为了研究胚胎发育后期丰富蛋白基因OsLEA2的功能,利用PCR方法扩增目的基因,采用基因重组、蛋白质表达和抗逆性分析对OsLEA2基因进行研究。结果表明,构建的原核表达载体pET32a-OsLEA2,转化到E.coli BL21中,得到表达OsLEA2融合蛋白的工程菌;SDA-PAGE分析表明融合蛋白的分子量约为29.4 kDa。OsLEA2的表达增强了大肠杆菌对高盐、高温、低温和紫外照射等非生物胁迫的抗性。该研究为进一步改良作物品种、提高农作物的抗逆性奠定基础。 展开更多

关键词 胚胎发育后期丰富蛋白 Oslea2 异源表达 大肠杆菌 抗逆性

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水稻干尖线虫Ab-lea基因在高渗透压下的表达 被引量：2

10

作者 陈俏丽 王峰 +2 位作者 李丹蕾 零雅茗 张瑞芝 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期652-657,共6页

【目的】水稻干尖线虫(Aphelenchoides besseyi)在侵染寄主以前,能够以变渗隐生状态在土壤和种子中的高渗透压环境下长期存活,使防治该线虫极为困难。通常,非生物胁迫下,胚胎发育晚期丰富蛋白(late embryogenesis abundant protein,LEA... 【目的】水稻干尖线虫(Aphelenchoides besseyi)在侵染寄主以前,能够以变渗隐生状态在土壤和种子中的高渗透压环境下长期存活,使防治该线虫极为困难。通常,非生物胁迫下,胚胎发育晚期丰富蛋白(late embryogenesis abundant protein,LEA)的基因表达量会显著上调。作为逆境表达蛋白,LEA能在逆境下保护生物。为探究水稻干尖线虫LEA编码基因(Ab-lea)在高渗透压胁迫下的表达模式及功能,【方法】根据转录组数据克隆到Ab-lea。以无机溶剂饱和Mg SO4·7H2O溶液为高渗透压胁迫剂,对水稻干尖线虫进行高渗透压胁迫,240 min后该线虫进入变渗隐生。通过RT-PCR验证Ab-lea在线虫进入变渗隐生及维持变渗隐生过程中的表达特性。使用RNAi技术,探究该线虫Ab-lea沉默后,高渗透压胁迫下存活率变化。【结果】RT-PCR结果表明,Ab-lea在进入变渗隐生前期及维持变渗隐生过程中表达量上调。Ab-lea沉默后,水稻干尖线虫在进入变渗隐生后存活率显著下降。【结论】表明该基因可能参与调控水稻干尖线虫变渗隐生。本研究为进一步探究该线虫抗高渗透压胁迫的生理机制奠定基础,为防治该线虫提供新思路。 展开更多

关键词 胚胎发育晚期丰富蛋白 水稻干尖线虫 高渗透压胁迫 变渗隐生 基因干涉

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丹参晚期胚胎蛋白基因SmLEA的克隆及表达分析 被引量：4

11

作者 刘丛玲 王喆之 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期80-84,共5页

对丹参EST序列进行Blast分析,发现一条序列与晚期胚胎丰富蛋白(late embryogenesis abundant)基因有较高的相似性,在此基础上设计引物,分别从cDNA和gDNA水平克隆到该基因的全长(Genbank注册号:AY725206),命名为SmLEA。该序列全长739 bp... 对丹参EST序列进行Blast分析,发现一条序列与晚期胚胎丰富蛋白(late embryogenesis abundant)基因有较高的相似性,在此基础上设计引物,分别从cDNA和gDNA水平克隆到该基因的全长(Genbank注册号:AY725206),命名为SmLEA。该序列全长739 bp,无内含子,包含1个长为495 bp的开放阅读框,编码164个氨基酸。序列比对结果显示,该序列与番茄的晚期胚胎丰富蛋白Lemmi9有较高的相似性(69%),推测该编码蛋白属于晚期胚胎蛋白LEA14家族成员。生物信息学显示,SmLEA所编码蛋白SmLEA的相对分子质量为17.34 kD,理论等电点为4.51,富含天冬氨酸及AS、IP、KV、VS、TIP肽段,定位于细胞质中,为稳定类蛋白。实时荧光定量PCR结果显示,该基因在丹参的根、茎、叶中均有表达,为组成型表达基因。 展开更多

关键词 晚期胚胎丰富蛋白 生物信息学 组成型基因 丹参

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海马齿胚胎发育晚期丰富蛋白基因SpLea5的克隆与表达分析 被引量：2

12

作者 付桂 范伟 +1 位作者 畅文军 张治礼 《热带作物学报》 CSCD 2011年第1期89-93,共5页

根据筛选文库时获得的EST序列信息,利用RACE技术从海马齿根中分离获得了一个海马齿胚胎发育晚期丰富蛋白基因的全长cDNA,命名为SpLea5。序列分析结果表明,SpLea5基因cDNA全长685 bp,含有一个294 bp的完整开放阅读框,编码97个氨基酸残基... 根据筛选文库时获得的EST序列信息,利用RACE技术从海马齿根中分离获得了一个海马齿胚胎发育晚期丰富蛋白基因的全长cDNA,命名为SpLea5。序列分析结果表明,SpLea5基因cDNA全长685 bp,含有一个294 bp的完整开放阅读框,编码97个氨基酸残基;推测编码的氨基酸序列与柽柳、杨木樨、烟草、甜橙、温州蜜柑、麻风树和陆地棉中相应基因的氨基酸序列一致性为54%、52%、48%、47%、47%、46%、44%、41%,在聚类分析时与高等植物聚为一类。SpLea5在海马齿植株中呈组成型表达,但根中表达最为丰富,茎和叶次之;海水、NaCl、PEG、ABA处理均能够诱导根部SpLea5基因的表达。这些结果表明,SpLea5基因可能参与了海马齿对盐和干旱胁迫的分子响应。 展开更多

关键词 海马齿 胚胎发育晚期丰富蛋白基因 表达分析

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花生胚胎发育晚期丰富蛋白基因AhLEAL的克隆及其在非生物胁迫下的表达分析 被引量：1

13

作者 陈娜 程果 +8 位作者 陈明娜 姜健美 潘丽娟 陈静 王通 王冕 杨珍 迟晓元 禹山林 《花生学报》 北大核心 2018年第2期6-12,共7页

低温、高盐和干旱等非生物胁迫严重影响花生的生长和产量,而花生中有关非生物胁迫的研究及抗性基因的挖掘较少。胚胎发育晚期丰富蛋白(Late embryogenesis abundant,LEA)是一类亲水性蛋白,其功能主要是参与调控植物应答脱水相关的非生... 低温、高盐和干旱等非生物胁迫严重影响花生的生长和产量,而花生中有关非生物胁迫的研究及抗性基因的挖掘较少。胚胎发育晚期丰富蛋白(Late embryogenesis abundant,LEA)是一类亲水性蛋白,其功能主要是参与调控植物应答脱水相关的非生物胁迫包括耐盐、抗旱和抗冻等。本研究以花生品种花育33号为试验材料,根据cDNA文库中已知的胚胎发育晚期丰富蛋白基因全长序列设计引物,通过RT-PCR克隆到该基因。该基因全长为555bp,开放阅读框为291bp,编码97个氨基酸。核苷酸序列比对表明,该基因与花生中已注册基因AhARG2(XM_016113504)同源性为100%,与AhLEA6-1(HM543588)同源性为99%。蛋白序列比对分析表明,该基因编码的蛋白与Genbank上已经注册的沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus)、牧豆树(Prosopis juliflora)和柠条锦鸡儿(Caragana korshinskii)等植物中的胚胎发育晚期丰富蛋白同源性达到近65%。我们将该基因命名为AhLEAL(Arachis hypogaea Late Embryogenesis Abundant Like)。预测该基因编码的蛋白可能定位于细胞液、线粒体、内质网和叶绿体中。荧光定量PCR结果显示,AhLEAL在花生叶片和根中的表达受低温和高盐胁迫的强烈诱导,在根中受干旱胁迫的强烈诱导,说明该基因可能参与了花生对三种非生物胁迫的适应性调控;此外,AhLEAL在花生叶片和根中的表达也明显受ABA的诱导,说明该基因对花生逆境胁迫的调控可能是以依赖ABA的方式进行的。 展开更多

关键词 花生 胚胎发育晚期丰富蛋白 克隆 非生物胁迫 荧光定量PCR

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OsLEA2对乳酸脱氢酶的保护分析

14

作者 胡廷章 黄小云 +1 位作者 杨俊年 陈再刚 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第6期2327-2330,共4页

在大肠杆菌DL21中表达胚胎发育后期丰富蛋白基因Os LEA2,用Hi TrapTMchelating HP层析柱纯化得到了Os LEA2蛋白。研究表明,高温会使乳酸脱氢酶的活性降低,高温处理时间的延长会增加对乳酸脱氢酶的损害;干燥脱水5 h后,乳酸脱氢酶活性几... 在大肠杆菌DL21中表达胚胎发育后期丰富蛋白基因Os LEA2,用Hi TrapTMchelating HP层析柱纯化得到了Os LEA2蛋白。研究表明,高温会使乳酸脱氢酶的活性降低,高温处理时间的延长会增加对乳酸脱氢酶的损害;干燥脱水5 h后,乳酸脱氢酶活性几乎全部失活,其活性仅仅是未处理的3.06%;反复冻融也会降低乳酸脱氢酶的活性。在高温、脱水和冻融胁迫下,Os LEA2的加入能保护乳酸脱氢酶;随着Os LEA2的增加,乳酸脱氢酶的活性增加。因此,Os LEA2蛋白对乳酸脱氢酶具有保护作用,能减少高温、脱水和冻融对乳酸脱氢酶的损伤。 展开更多

关键词 胚胎发育后期丰富蛋白 OS lea2 乳酸脱氢酶 保护效应

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OsLEA5c在大肠杆菌中的表达、纯化及对蛋白质的保护效应研究

15

作者 胡廷章 陈再刚 +1 位作者 秦娟 黄小云 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2015年第12期11-14,共4页

为了研究OsLEA5c蛋白对其他蛋白的保护效应,在大肠杆菌DL21中异源表达OsLEA5c蛋白,采用HiTrap^(TM) chelating HP层析柱纯化OsLEA5c蛋白。纯化的OsLEA5c蛋白用于高温、脱水和冻融胁迫下对乳酸脱氢酶的保护效应研究。结果表明,在PBS缓冲... 为了研究OsLEA5c蛋白对其他蛋白的保护效应,在大肠杆菌DL21中异源表达OsLEA5c蛋白,采用HiTrap^(TM) chelating HP层析柱纯化OsLEA5c蛋白。纯化的OsLEA5c蛋白用于高温、脱水和冻融胁迫下对乳酸脱氢酶的保护效应研究。结果表明,在PBS缓冲体系中,50℃处理10、20、30 min后,乳酸脱氢酶的活性分别残留43.20%、24.53%、17.55%;而按1∶1的质量比加入纯化的OsLEA5c蛋白后,乳酸脱氢酶活性分别保留85.77%、74.24%、65.27%。干燥脱水5 h后,乳酸脱氢酶活性仅保留2.55%~4.19%;按2∶1、5∶1和10∶1的质量比加入OsLEA5c蛋白,乳酸脱氢酶活性分别保留17.59%、24.73%、36.39%。反复冻融5次,乳酸脱氢酶活性残留9.41%~12.14%;而按2∶1、5∶1和10∶1的质量比加入纯化的OsLEA5c蛋白,乳酸脱氢酶活性分别保留28.09%、69.44%、95.16%。表明OsLEA5c蛋白对其他蛋白质具有保护作用,能减少高温、脱水和冻融胁迫对蛋白质的损伤。 展开更多

关键词 胚胎发育后期丰富蛋白 Oslea5c蛋白 乳酸脱氢酶 蛋白质活性

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应用荧光光谱法研究植物LEA3蛋白11-氨基酸基序的保护功能

16

作者 刘昀 邓银霞 +2 位作者 张玉芹 徐宏 郑易之 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1579-1584,共6页

胚胎晚期富集蛋白(late embryogenesis abundant,LEA)是增强生物抵抗干旱、低温和盐渍等多种胁迫的重要功能蛋白,但其保护机理仍不清楚。本文利用紫外光谱法证实,含多拷贝11-氨基酸基序的多肽(如PM2D和PM2E)可较好的保护经冻融的乳酸脱... 胚胎晚期富集蛋白(late embryogenesis abundant,LEA)是增强生物抵抗干旱、低温和盐渍等多种胁迫的重要功能蛋白,但其保护机理仍不清楚。本文利用紫外光谱法证实,含多拷贝11-氨基酸基序的多肽(如PM2D和PM2E)可较好的保护经冻融的乳酸脱氢酶(LDH)活性。进一步通过荧光光谱法证实,含多拷贝11-氨基酸基序的多肽可通过多位点协同结合模式,稳定LDH酶的结构。而含低拷贝11-氨基酸基序的多肽(如PM2F和PM2G)与LDH酶只有一种结合位点,二者的结合强度较弱,因而不能表现出对LDH酶活性的保护作用。此外,含多拷贝11-氨基酸的多肽与海藻糖在保护LDH酶活性上存在协同作用,且二者有着不同的保护机理。 展开更多

关键词 紫外光谱 荧光光谱 胚胎晚期富集蛋白 11-氨基酸基序 LDH酶保护作用

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转MsLEA4-4基因拟南芥株系的耐盐性分析 被引量：8

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作者 贾会丽 王学敏 +6 位作者 高涛 石永红 王运琦 吴欣明 刘建宁 方志红 董宽虎 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期597-605,共9页

为了深入研究紫花苜蓿(Medicago sativa)MsLEA4-4基因的抗逆性,本试验对前期获得的转MsLEA4-4基因的拟南芥(Arabidopsis thaliana)株系进行不同浓度盐胁迫处理,以验证MsLEA4-4基因在拟南芥植株体内的耐盐性。试验结果表明:盐胁迫后转基... 为了深入研究紫花苜蓿(Medicago sativa)MsLEA4-4基因的抗逆性,本试验对前期获得的转MsLEA4-4基因的拟南芥(Arabidopsis thaliana)株系进行不同浓度盐胁迫处理,以验证MsLEA4-4基因在拟南芥植株体内的耐盐性。试验结果表明:盐胁迫后转基因株系的发芽率达到55%,比对照植株(Control plant,CK)高81%;转基因株系的鲜重、叶绿素含量均高于CK(P<0.05);盐胁迫后转基因株系的存活率比CK提高75.0%~81.3%;盐胁迫明显抑制根系生长,但转基因植株的侧根数量比CK多4~5根(P<0.05);盐胁迫后转基因株系体内的可溶性糖含量(P<0.05)和超氧化物歧化酶(P<0.01),过氧化氢酶(P<0.01),过氧化物酶(P<0.05)活性均高于CK,脯氨酸(P<0.01)和丙二醛(P<0.05)含量均低于CK。综上可得,MsLEA4-4基因参与了拟南芥体内的耐盐性调控,提高了转基因拟南芥对盐胁迫的耐受性。本研究为进一步探索MsLEA4-4在转基因紫花苜蓿盐胁迫中的功能及培育耐盐性紫花苜蓿品种提供依据。 展开更多

关键词 紫花苜蓿 盐胁迫 胚胎晚期富集蛋白 拟南芥

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小球藻LEA家族蛋白Ccor1和Ccor2在抗盐胁迫中的作用

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作者 刘小香 徐旭东 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期558-562,共5页

LEA蛋白是与植物抗逆反应相关的一类重要蛋白质，可以在发育的植物胚胎、处于干旱、寒冷、盐胁迫的植物组织中高水平表达。LEA蛋白最早发现于棉花子叶中，随后也在其他高等植物、藻类、真菌、蓝藻以及线虫中被发现 。LEA蛋白代表一个庞... LEA蛋白是与植物抗逆反应相关的一类重要蛋白质，可以在发育的植物胚胎、处于干旱、寒冷、盐胁迫的植物组织中高水平表达。LEA蛋白最早发现于棉花子叶中，随后也在其他高等植物、藻类、真菌、蓝藻以及线虫中被发现 。LEA蛋白代表一个庞大的基因家族，早期是根据特征基元序列进行分类的 。 展开更多

关键词 小球藻 lea蛋白 耐盐性 胁迫

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蒺藜苜蓿MtLEA5B的克隆和功能分析 被引量：2

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作者 张业猛 沈迎芳 +2 位作者 王英芳 姚品雅 王海庆 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期101-107,共7页

胚胎发育晚期丰富蛋白(Late embryogenesis abundant protein,LEA protein)是一类参与植物抗逆性应答的亲水蛋白。旨在揭示异源表达LEA蛋白在非生物胁迫条件下对宿主的保护作用。从蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)幼苗中克隆到一个编码LE... 胚胎发育晚期丰富蛋白(Late embryogenesis abundant protein,LEA protein)是一类参与植物抗逆性应答的亲水蛋白。旨在揭示异源表达LEA蛋白在非生物胁迫条件下对宿主的保护作用。从蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)幼苗中克隆到一个编码LEA_5蛋白的基因,命名为MtLEA5B,通过半定量RT-PCR分析MtLEA5B的表达模式。利用SDS-PAGE蛋白电泳检测重组蛋白的耐热性和可溶性。构建原核表达载体,转化大肠杆菌过表达,检测大肠杆菌的生长存活情况。MtLEA5B的表达模式受到低温(4℃)、脱水、150 mmol/L NaCl胁迫和ABA处理的调控。SDS-PAGE蛋白电泳出现一条相比理论预测值较大,且沸水条件下可溶性未降低的条带。在大肠杆菌中过表达MtLEA5B蛋白能明显提升宿主菌在高温(55℃)和冷冻(-20℃)条件下的生存率。MtLEA5B是诱导性表达基因;MtLEA5B蛋白具有较高的亲水性和耐热性。在大肠杆菌中过表达可以明显提升其对温度胁迫的耐受性。 展开更多

关键词 蒺藜苜蓿 胚胎发育晚期丰富蛋白 Mtlea

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沙冬青胚胎晚期发生丰富蛋白基因序列及表达特性分析 被引量：10

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作者 师静 刘美芹 +3 位作者 史军娜 赵晓鑫 卢存福 尹伟伦 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期114-119,共6页

从沙冬青叶片EST文库中获得了胚胎晚期发生丰富蛋白(LEA)基因cDNA全长序列,命名为AmLEA14。序列分析表明该基因全长579bp,含有一个459bp编码152个氨基酸的开放阅读框,推测编码的蛋白质分子质量为16.6ku。二级结构预测显示此编码蛋白属于... 从沙冬青叶片EST文库中获得了胚胎晚期发生丰富蛋白(LEA)基因cDNA全长序列,命名为AmLEA14。序列分析表明该基因全长579bp,含有一个459bp编码152个氨基酸的开放阅读框,推测编码的蛋白质分子质量为16.6ku。二级结构预测显示此编码蛋白属于第4类LEA蛋白。系统发生分析表明,此编码蛋白与大豆LEA14蛋白(P46519.1)的亲缘关系最近。荧光定量PCR结果显示,AmLEA14的表达量在低温、干旱、盐胁迫条件下升高,但是主要在低温胁迫后期富集。推测AmLEA14基因可能在沙冬青抵御低温、干旱、盐胁迫中发挥作用,主要是参与沙冬青的低温防御机制。 展开更多

关键词 沙冬青 胚胎晚期发生丰富蛋白 序列分析 表达分析

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