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棕矢车菊素通过调节cGAS-STING信号通路影响结直肠癌细胞免疫逃逸的机制研究
1
作者 董永杰 董静 +2 位作者 岳峰 贾辉 乔光超 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第3期634-639,共6页
目的:探讨棕矢车菊素调节环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶(cGAS)-干扰素基因刺激因子(STING)信号通路对结直肠癌(CRC)细胞免疫逃逸的影响。方法:体外培养人CRC细胞HCT116,分为对照组、棕矢车菊素-L组(25μmol/L)、棕矢车菊素-M组(50μmol/L)、... 目的:探讨棕矢车菊素调节环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶(cGAS)-干扰素基因刺激因子(STING)信号通路对结直肠癌(CRC)细胞免疫逃逸的影响。方法:体外培养人CRC细胞HCT116,分为对照组、棕矢车菊素-L组(25μmol/L)、棕矢车菊素-M组(50μmol/L)、棕矢车菊素-H组(100μmol/L)、激活剂组[100μmol/L棕矢车菊素+10μmol/L cGAS激活剂氯化锰(Mn-Cl_(2)·4H_(2)O)]、抑制剂组(100μmol/L棕矢车菊素+1μmol/L cGAS抑制剂RU.521);CCK-8检测HCT116细胞增殖;流式细胞术检测HCT116细胞凋亡;HCT116细胞与NK细胞共培养检测NK细胞杀伤活性;ELISA法检测共培养细胞上清中IFN-γ、粒酶B(Granzyme B)水平;Western blot和qRT-PCR检测cGAS-STING信号通路及凋亡相关因子表达。结果:与对照组相比,棕矢车菊素-L、棕矢车菊素-M、棕矢车菊素-H组HCT116细胞A_(450)值和Bcl-2表达显著降低,细胞凋亡率、cGAS、STING及Bax表达显著升高,且呈剂量依赖性(P<0.05);与对照共培养组相比,棕矢车菊素-L、棕矢车菊素-M、棕矢车菊素-H组共培养组细胞上清中IFN-γ、Granzyme B水平、NK细胞杀伤活性升高,且呈剂量依赖性(P<0.05);cGAS激活剂MnCl_(2)·4H_(2)O增强了高剂量棕矢车菊素对HCT116细胞增殖、免疫逃逸的抑制作用以及对细胞凋亡的促进作用,cGAS抑制剂RU.521减弱了高剂量棕矢车菊素对HCT116细胞增殖、免疫逃逸的抑制作用以及对细胞凋亡的促进作用。结论:棕矢车菊素通过激活cGAS-STING信号通路抑制HCT116细胞增殖、免疫逃逸,促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 棕矢车菊素 结直肠癌 环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶-干扰素基因刺激因子信号通路 增殖 凋亡 免疫逃逸
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干扰素-γ基因敲除小鼠饲养繁殖方法的优化
2
作者 柳慧敏 何茜 +5 位作者 贾瑞莲 李娜 许瑞 冯耀宇 肖立华 郭亚琼 《中国实验动物学报》 北大核心 2025年第4期489-500,共12页
目的繁育获得干扰素-γ基因敲除纯合子(IFN-γ^(-/-))小鼠,并改善繁育策略,建立稳定的干扰素-γ基因敲除纯合子(IFN-γ^(-/-))小鼠繁育体系,为相关研究提供理想的动物模型。方法首先以C57BL/6J为背景的IFN-γ基因敲除杂合子(IFN-γ+/-)... 目的繁育获得干扰素-γ基因敲除纯合子(IFN-γ^(-/-))小鼠,并改善繁育策略,建立稳定的干扰素-γ基因敲除纯合子(IFN-γ^(-/-))小鼠繁育体系,为相关研究提供理想的动物模型。方法首先以C57BL/6J为背景的IFN-γ基因敲除杂合子(IFN-γ+/-)小鼠作为亲本进行繁育。之后,基于获得的子代小鼠,采用3种配种方式进行繁育:(1)雌性杂合子与雄性杂合子;(2)雄性纯合子与雌性杂合子;(3)雌性纯合子与雄性纯合子。并比较子代中IFN-γ^(-/-)小鼠的数量和存活情况,筛选最优繁育策略。在最优繁育策略下,评估雌鼠配种周龄和饲料种类对IFN-γ^(-/-)小鼠繁殖性能的影响,共统计60只IFN-γ^(-/-)雌鼠的前3胎窝产仔数、离乳存活数和离乳存活率,同时记录和分析了孕鼠营养补充、放置遮蔽物等环境优化措施对繁育效果的影响。结果在通过添加蛋黄以及瓜子充分保障孕鼠营养的条件下,雌性和雄性IFN-γ^(-/-)小鼠配种,单胎新生IFN-γ^(-/-)小鼠存活数为5~8只,繁育获得的IFN-γ^(-/-)小鼠的效率优于其他配种模式。此外,饲料种类和配种周龄对雌鼠繁殖性能影响显著,7~9周龄的雌性与雄性IFN-γ^(-/-)小鼠合笼配种并且饲喂繁殖饲料时,雌鼠的窝产仔数(6.9±1.7)、离乳存活数(6.5%±2.0%)和离乳存活率(93.2%±17.8%)均高于其他繁育条件。另外,通过放置遮蔽物预防种鼠打架有助于提高繁殖效果。结论采用优化的IFN-γ^(-/-)小鼠配种策略,结合高蛋白饲料饲喂、营养补充及规范化配种周龄管理,可显著提高IFN-γ^(-/-)小鼠的繁育效率和稳定性,为相关研究提供可靠的动物模型支持。 展开更多
关键词 干扰素-Γ 基因敲除小鼠 饲养 繁殖
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电针通过cGAS-STING通路影响小胶质细胞介导的带状疱疹后神经痛
3
作者 辛欢 邹璟 乐薇 《中国医科大学学报》 北大核心 2025年第3期208-213,218,共7页
目的探讨电针(EA)通过环鸟苷酸-腺苷酸合酶(cGAS)-干扰素基因刺激因子(STING)影响小胶质细胞介导的带状疱疹后神经痛(PHN)的机制。方法将50只大鼠随机分为Vehicle组、树脂素(RTX)组、RTX+EA组、RTX+cGAS抑制剂(RU.521)组、RTX+STING抑制... 目的探讨电针(EA)通过环鸟苷酸-腺苷酸合酶(cGAS)-干扰素基因刺激因子(STING)影响小胶质细胞介导的带状疱疹后神经痛(PHN)的机制。方法将50只大鼠随机分为Vehicle组、树脂素(RTX)组、RTX+EA组、RTX+cGAS抑制剂(RU.521)组、RTX+STING抑制剂(C-176)组,每组10只。通过旷场实验、斜板实验、悬尾实验、机械退缩阈值检测对各组大鼠进行行为学评估,ELISA检测P物质(SP)、神经激肽1(NK-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素-10(IL-10)、精氨酸酶1(Arg1)的表达水平,TUNEL染色检测细胞凋亡情况,免疫荧光染色检测脊髓背角组织中Iba1、cGAS、STING水平,Western blotting检测cGAS-STING通路相关因子的表达。结果与Vehicle组比较,RTX组大鼠焦虑行为增加、运动功能降低、抑郁加重、机械退缩阈值降低,脊髓背角组织中疼痛递质相关因子水平增加、细胞凋亡增加、小胶质细胞激活并向M1极化且激活cGAS-STING通路,EA或cGAS-STING抑制剂则部分逆转上述结果,使小胶质细胞向M2极化(均P<0.05)。结论EA可能通过抑制小胶质细胞中cGAS-STING通路发挥对PHN的治疗作用。 展开更多
关键词 电针 环鸟苷酸-腺苷酸合酶 干扰素基因刺激因子 小胶质细胞 带状疱疹后神经痛
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cGAS-STING通路在肿瘤免疫治疗中的作用机制与研究进展
4
作者 王适豪 石万瑞 +1 位作者 刘轶 张皓 《高等学校化学学报》 北大核心 2025年第1期66-75,共10页
环磷酸鸟苷酸合成酶[Cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate(GMP-AMP)synthase,cGAS蛋白]-干扰素刺激因子(Stimulator of interferon genes,STING蛋白)(cGAS-STING)信号通路是识别细胞质中异常DNA、激活先天免疫应答... 环磷酸鸟苷酸合成酶[Cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate(GMP-AMP)synthase,cGAS蛋白]-干扰素刺激因子(Stimulator of interferon genes,STING蛋白)(cGAS-STING)信号通路是识别细胞质中异常DNA、激活先天免疫应答系统的重要通路.cGAS蛋白在识别细胞质内异常DNA后,可催化三磷酸腺苷(ATP)和三磷酸鸟苷(GTP)合成环状鸟苷酸二磷酸腺苷(Cyclic GMP-AMP,cGAMP).cGAMP作为第二信使激活STING蛋白,促进I型干扰素的释放,从而引起一系列免疫反应.cGAS-STING通路可以调控肿瘤的转移和增长,参与抗肿瘤的先天免疫反应,探究cGAS-STING通路的作用机制在肿瘤免疫治疗中具有重要意义.本综合评述介绍了cGAS-STING通路的作用机制,概述了目前在抗肿瘤免疫治疗中激活cGAS-STING通路的各类策略. 展开更多
关键词 环磷酸鸟苷酸合成酶-干扰素刺激因子信号通路 肿瘤 免疫治疗 纳米药物
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结核分枝杆菌感染者外周血单个核细胞中 肝激酶B1的表达及其与γ-干扰素的相关性
5
作者 魏潇芮 于泽洋 +5 位作者 杨琨 周柯 黄芳 刘昊 白露 刘家云 《中国防痨杂志》 北大核心 2025年第6期779-784,共6页
目的:分析结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中肝激酶B1(liver kinase B1,LKB1)基因表达水平及其与γ-干扰素(IFN-γ)水平的相关性。方法:采用前瞻性研究... 目的:分析结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中肝激酶B1(liver kinase B1,LKB1)基因表达水平及其与γ-干扰素(IFN-γ)水平的相关性。方法:采用前瞻性研究方法,纳入2024年3—6月期间于西安市胸科医院住院的23例活动性肺结核患者作为肺结核组;纳入同期空军军医大学西京医院门诊诊断的20例结核分枝杆菌潜伏感染(latent tuberculosis infection,LTBI)者作为LTBI组;纳入同期于空军军医大学西京医院进行健康体检的20名健康体检者作为健康对照组。收集所有研究对象的外周血样本,分离出PBMC,比较各组PBMC中LKB1 mRNA表达情况、IFN-γ水平,分析LKB1基因表达水平与IFN-γ水平的相关性。结果:(1)肺结核组、LTBI组和健康对照组LKB1的相对表达量分别为0.529(0.304,0.964)、1.326(1.064,1.591)、0.949(0.732,1.396),差异有统计学意义(H=23.707,P<0.01)。肺结核组的LKB1 mRNA表达量明显低于健康对照组,差异有统计学意义(H=2.560,P=0.031),LTBI组的LKB1 mRNA表达量明显高于肺结核组,差异有统计学意义(H=-4.857,P<0.01)。(2)肺结核组患者外周血LKB1 mRNA相对表达水平与早期分泌抗原靶-6刺激的IFN-γ水平呈负相关(r=-0.647,P=0.001),与培养滤液蛋白-10刺激的IFN-γ水平也呈负相关(r=-0.435,P=0.038)。结论:活动性肺结核患者PBMC中的LKB1基因呈低表达水平,且与IFN-γ的水平呈负相关。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 感染 肝激酶B1 基因表达 干扰素Γ
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柴胡皂苷D调节cGAS-STING信号通路改善重症急性胰腺炎大鼠肠损伤
6
作者 陈铮月 邓晚秋 +2 位作者 尹建军 刘微 温建立 《海南医科大学学报》 北大核心 2025年第14期1069-1076,共8页
目的:探讨柴胡皂苷D(SSD)调节环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶(cGAS)-干扰素基因刺激因子(STING)信号通路对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠损伤的影响。方法:建立SAP大鼠模型,造模成功的SAP大鼠随机分为模型组、SSD低剂量组(12.5 mg/kg)、SSD中剂量... 目的:探讨柴胡皂苷D(SSD)调节环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶(cGAS)-干扰素基因刺激因子(STING)信号通路对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠损伤的影响。方法:建立SAP大鼠模型,造模成功的SAP大鼠随机分为模型组、SSD低剂量组(12.5 mg/kg)、SSD中剂量组(25 mg/kg)、SSD高剂量组(50 mg/kg)、阳性药物组(2×10~4 U/kg的乌司他丁)、SSD高剂量+cGAS过表达组(50 mg/kg的SSD+100μL的cGAS重组质粒pcDNA3.1载体),每组12只。另取12只大鼠设为假手术组。各组给予相应药物干预7 d,1次/d。全自动生化分析仪检测血清中脂肪酶、淀粉酶水平;酶联免疫吸附法检测回肠组织中白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;苏木素-伊红染色检测胰腺组织和回肠组织病理变化;TUNEL染色检测回肠组织中细胞凋亡;蛋白印迹法检测回肠组织中闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、cGAS、STING蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠血清脂肪酶、淀粉酶、回肠组织IL-6、IL-1β、TNF-α、胰腺、回肠组织病理评分、回肠组织中细胞凋亡率、cGAS、STING蛋白表达显著升高,Occludin、ZO-1蛋白表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,SSD低、中、高剂量组大鼠血清脂肪酶、淀粉酶、回肠组织IL-6、IL-1β、TNF-α、胰腺、回肠组织病理评分、回肠组织中细胞凋亡率、cGAS、STING蛋白表达呈剂量依赖性降低,Occludin、ZO-1蛋白表达呈剂量依赖性升高(P<0.05);cGAS过表达可减弱高剂量SSD对SAP大鼠上述指标的作用效果(P<0.05)。结论:SSD可能通过抑制cGAS-STING信号通路,减轻回肠组织炎症反应和细胞凋亡,改善SAP大鼠肠损伤。 展开更多
关键词 柴胡皂苷D 重症急性胰腺炎 环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶 干扰素基因刺激因子 肠损伤
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基于cGAS-STING通路和突触融合蛋白17介导的自噬在脑缺血再灌注损伤中的作用研究进展
7
作者 杨航 高安邦 +2 位作者 倪莹 马跃 高名同 《中国卒中杂志》 北大核心 2025年第4期479-485,共7页
急性缺血性卒中后,脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)可进一步损伤患者的神经功能,影响其预后。自噬在CIRI的病理过程中是一把“双刃剑”,其不同的激活程度以及在CIRI的不同时期,可对脑组织产生保护或损伤... 急性缺血性卒中后,脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)可进一步损伤患者的神经功能,影响其预后。自噬在CIRI的病理过程中是一把“双刃剑”,其不同的激活程度以及在CIRI的不同时期,可对脑组织产生保护或损伤的相反作用。环鸟苷酸-腺苷酸合酶(cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate synthase,cGAS)-干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon gene,STING)通路是先天免疫中重要的效应通路,突触融合蛋白17(syntaxin 17,STX17)是可溶性N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感性因子附着蛋白受体亚家族成员,两者在CIRI过程中对细胞自噬和线粒体自噬均具有重要的调节作用。本文对cGAS-STING通路和STX17在CIRI中调控自噬的机制及其相互关系进行综述,以期为CIRI的干预提供新的思路和依据。 展开更多
关键词 环鸟苷酸-腺苷酸合酶-干扰素基因刺激因子通路 突触融合蛋白17 自噬 脑缺血再灌注损伤
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Gene MTB/RIF、TB-IGRA检测与传统组织病理学检查在脊柱结核诊断中的应用价值 被引量：9
8
作者 杨增敏 芮敏劼 +5 位作者 嵇辉 张国英 洪练青 黄振超 陈其义 陈林萍 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期50-55,共6页
目的:评估传统组织病理学(简称“病理”)检查与Gene MTB/RIF(简称“Xpert”)、γ干扰素释放试验(TB-IGRA)在脊柱结核诊断中的应用价值。方法:回顾性分析2017年11月~2020年6月在我院经临床诊断为“脊柱结核”的131例患者资料,男79例,女52... 目的:评估传统组织病理学(简称“病理”)检查与Gene MTB/RIF(简称“Xpert”)、γ干扰素释放试验(TB-IGRA)在脊柱结核诊断中的应用价值。方法:回顾性分析2017年11月~2020年6月在我院经临床诊断为“脊柱结核”的131例患者资料,男79例,女52例;年龄18~90岁(50±18.0岁);颈椎7例,胸椎39例,胸腰段11例,腰椎57例,腰骶椎12例,骶椎5例。所有患者术前进行TB-IGRA检测,然后通过穿刺或手术获得病灶组织,分别进行病理检查与Xpert检测。病理检查结果分四类:Ⅰ类为确诊结核、Ⅱ类为倾向于结核,Ⅲ类为疑诊结核,Ⅳ类为未确诊结核。Ⅰ类、Ⅱ类病理结果支持脊柱结核诊断,Ⅲ类、Ⅳ类不支持脊柱结核诊断。计算三者的阳性率与阴性率。以病理检查为参照标准,计算Xpert、TB-IGRA的敏感度、特异度,三者单独检测的阳性率、联合检测的阳性率分别进行比较,计算Kappa值评估两者的一致性,并绘制Xpert、TB-IGRA检测的受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线并计算曲线下面积(area under curve,AUC),评估Xpert、TB-IGRA检测的价值。结果:所有患者中,病理确诊为结核85例(64.9%,95%CI为56.6%~73.2%),病理未确诊结核46例(35.1%,95%CI为26.8%~43.4%);Xpert检测阳性79例(60.3%,95%CI为51.0%~68.1%),阴性52例(39.7%,95%CI为31.9%~49%),发现RNA聚合酶β亚基的编码基因(rpoB)突变6例(4.6%,95%CI为0.95%~8.20%);TB-IGRA检测阳性99例(75.6%,95%CI为68.1%.83.0%),阴性32例(24.4%,95%CI为17.0%~31.9%)。病理检查与Xpert检测联合诊断脊柱结核89例(67.9%,95%CI为59.02%~75.32%),未确诊结核42例(32.1%,95%CI为24.68%~40.98%)。病理检查与TB-IGRA检测联合诊断脊柱结核107例(81.7%,95%CI为74.97%~88.39%),未确诊结核24例(18.3%,95%CI为11.61%~25.03%)。Xpert检测敏感度为87.1%(74/85),特异度为91.3%(42/46);TB-IGR检测敏感度为90.6%(77/85),特异度为52.2%(24/46)。病理检查与Xpert检测联合诊断脊柱结核的阳性率为67.9%(89/131);病理检查与TB-IGRA检测联合诊断脊柱结核的阳性率为81.7%(107/131);三者联合诊断脊柱结核的阳性率为82.4%(108/131)。以临床诊断结果作为参照,TB-IGRA联合病理检查阳性率高于病理检查(χ^(2)=9.435,P=0.002),三者联合检测阳性率高于病理检查(χ^(2)=9.855,P=0.002),也高于Xpert与病理检查联合(χ^(2)=16.681,P<0.001)。病理检查与Xpert两种检测确诊脊柱结核的Kappa值为0.76(95%CI为0.631~0.873),一致性好;病理检查与TB-IGRA两种检测确诊脊柱结核的Kappa值为0.46(95%CI为0.295~0.616),一致性较好。Xpert检测诊断脊柱结核的AUC为0.892;TB-IGRA检测诊断脊柱结核的AUC为0.751。结论:TB-IGRA检测敏感性较高,Xpert检测特异性较高,并且能发现利福平耐药突变;二者联合病理学检查对诊断脊柱结核具有较高的应用价值。 展开更多
关键词 脊柱结核 诊断 组织病理检查 gene MTB/RIF检测 Γ干扰素释放试验
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右美托咪定通过cGAS-STING通路介导的免疫调控机制对胃癌细胞恶性生物学行为的影响 被引量：4
9
作者 孟元元 刘艳 +3 位作者 李俊 周民 王晶晶 龙丹 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期945-951,960,共8页
目的:探究右美托咪定(DEX)通过环磷酸鸟苷-磷酸腺苷合酶-干扰素基因刺激因子(cGAS-STING)通路介导的免疫调控机制对胃癌(GC)细胞恶性生物学行为的影响。方法:将GC细胞株MGC-803随机分为对照组(Control组,空白培养基处理)、DEX低浓度组(D... 目的:探究右美托咪定(DEX)通过环磷酸鸟苷-磷酸腺苷合酶-干扰素基因刺激因子(cGAS-STING)通路介导的免疫调控机制对胃癌(GC)细胞恶性生物学行为的影响。方法:将GC细胞株MGC-803随机分为对照组(Control组,空白培养基处理)、DEX低浓度组(DEX-L组,1 ng/ml)、DEX中浓度组(DEX-M组,10 ng/ml)、DEX高浓度组(DEX-H组,100 ng/ml)和DEX高浓度+cGAS抑制剂RU.521组(DEX-H+RU.521组,100 ng/ml DEX+1.0μmol/L RU.521)。CCK-8法检测细胞增殖情况。细胞划痕实验检测各组细胞的迁移能力。Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力。流式细胞术检测细胞凋亡率。ELISA检测细胞中IL-2、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测细胞cGAS、STING、Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)mRNA的表达水平。Western blot检测细胞cGAS、STING、Bax、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、N钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、E钙黏蛋白(E-cadherin)、Caspase3、Caspase8及其剪切型蛋白表达和TANK结合激酶1(TBK1)、干扰素调节因子3(IRF3)磷酸化水平。结果:与Control组相比,DEX-M组、DEX-H组MGC-803细胞迁移率、细胞侵袭数目、TNF-α水平、CyclinD1、MMP9、N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著下降(P<0.05),生长抑制率(48 h、72 h)、细胞凋亡率、IL-2、IFN-γ、Bax、E-cadherin、Cleaved Caspase3、Cleaved Caspase8蛋白表达水平、cGAS、STING、IFN-ⅠmRNA水平和蛋白表达水平、TBK1和IRF3磷酸化水平显著上升(P<0.05)。RU.521减弱了DEX对GC细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用和诱导细胞凋亡的能力,减轻了对免疫功能的改善作用。结论:DEX可能通过激活cGAS-STING通路介导的免疫调控,抑制GC细胞增殖、迁移和侵袭,诱导GC细胞凋亡。 展开更多
关键词 右美托咪定 环磷酸鸟苷-磷酸腺苷合酶-干扰素基因刺激因子通路 免疫调控 胃癌 恶性生物学行为
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猪源SIRT5促进O型口蹄疫病毒在PK-15细胞复制
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作者 陈国辉 史喜绢 +11 位作者 别鑫恬 杨行 赵思越 张大俊 赵登率 闫文倩 陈玲玲 赵美玉 何路 郑海学 刘霞 张克山 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期421-429,共9页
目的探究猪源SIRT5对O型口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus serotype O,FMDV-O)复制的影响及其调控FMDV-O复制的初步机制。方法利用Western Blotting和RT-qPCR检测FMDV-O感染PK-15细胞后内源性SIRT5表达情况;设计合成3对SIRT5特... 目的探究猪源SIRT5对O型口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus serotype O,FMDV-O)复制的影响及其调控FMDV-O复制的初步机制。方法利用Western Blotting和RT-qPCR检测FMDV-O感染PK-15细胞后内源性SIRT5表达情况;设计合成3对SIRT5特异性siRNA,通过Western Blotting和RT-qPCR检测SIRT5、FMDV-O蛋白水平、转录水平及病毒拷贝数的变化情况;构建SIRT5真核表达质粒转染至PK-15细胞,运用Western Blotting、RT-qPCR实验方法探究过表达SIRT5对FMDV-O复制的影响,同时利用RT-qPCR检测过表达SIRT5对SeV、FMDV-O诱导的I型干扰素刺激基因mRNA表达水平的影响。结果FMDV-O感染PK-15细胞后内源性SIRT5的表达上调;siRNA干扰SIRT5抑制FMDV-O的复制;过表达SIRT5促进FMDV-O复制;过表达SIRT5降低了SeV、FMDV-O诱导的干扰素刺激基因mRNA的表达水平。结论FMDV-O感染刺激宿主SIRT5表达,而猪源SIRT5通过抑制I型干扰素刺激基因的产生进而促进FMDV-O复制。本研究为进一步探究猪源SIRT5促进FMDV-O复制的机制提供参考依据。 展开更多
关键词 猪源SIRT5 FMDV-O 干扰素刺激基因 PK-15细胞
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重组猫IFN-α的质粒构建、真核表达及体外抗病毒活性分析
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作者 李沛恒 邹万成 +5 位作者 陈竞 张国庆 崔春梅 蒋嵘 金宁一 李昌 《中国动物传染病学报》 北大核心 2024年第6期17-24,共8页
本文为探究猫IFN-α(FeIFN-α)在体外MDCK、F81细胞中的抗病毒效果,为后续体内实验提供参考。根据猫IFN-α(GenBank登录号:NP_001027000.1)序列并添加6×His标签,合成后通过pUC57载体进行克隆,然后亚克隆至pcDNA3.1载体,获得含有目... 本文为探究猫IFN-α(FeIFN-α)在体外MDCK、F81细胞中的抗病毒效果,为后续体内实验提供参考。根据猫IFN-α(GenBank登录号:NP_001027000.1)序列并添加6×His标签,合成后通过pUC57载体进行克隆,然后亚克隆至pcDNA3.1载体,获得含有目的基因的真核表达质粒,转染293T细胞,通过Western blot检测FeIFN-α的表达情况。通过重组绿色荧光蛋白水疱性口炎病毒(VSV-GFP)感染细胞实验,利用结晶紫染色法进行FeIFN-α抗病毒活性初步分析并确定最佳稀释倍数,通过荧光观察法、流式细胞术检测其抗病毒活性,最后通过相对荧光定量qPCR技术检测猫IFN-α对干扰素刺激基因(ISG15、MX1、OAS1)的调控作用。结果表明,成功表达FeIFN-α并具有生物学活性,且可以明显抑制VSV-GFP病毒侵染F81、MDCK细胞,qPCR结果分析表明猫IFN-α在F81、MDCK细胞中均可有效诱导ISG15、MX1、OAS1基因上调。本研究结果为后续犬猫体内抗病毒实验提供参考依据。 展开更多
关键词 猫IFN-α 构建与表达 抗病毒活性 干扰素刺激基因
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凉血解毒化瘀方通过抑制cGAS-STING通路治疗小鼠慢加急性肝衰竭 被引量：1
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作者 唐巧 周超 +7 位作者 柏兆方 姚清 陈思敏 温心茹 何召云 张瑾 李瑞生 宫嫚 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期2291-2299,共9页
目的基于cGAS-STING信号通路,研究中药凉血解毒化瘀方(LXJDHYF)治疗小鼠慢加急性肝衰竭(ACLF)的可能作用机制。方法30只C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、凉血解毒化瘀方高剂量组、凉血解毒化瘀方低剂量组及cGASSTING信号通路特异性... 目的基于cGAS-STING信号通路,研究中药凉血解毒化瘀方(LXJDHYF)治疗小鼠慢加急性肝衰竭(ACLF)的可能作用机制。方法30只C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、凉血解毒化瘀方高剂量组、凉血解毒化瘀方低剂量组及cGASSTING信号通路特异性抑制剂H151组,6只/组。除空白组外,其余各组采用CCl4诱导形成肝硬化,后予以脂多糖联合D-氨基半乳糖腹腔注射急性攻击形成ACLF小鼠模型。取小鼠肝组织进行HE以及TUNEL染色,生化法测定血清ALT、AST及TBil水平以检测凉血解毒化瘀方对小鼠肝功能的影响。同时采用RT-qPCR测定凉血解毒化瘀方对小鼠骨髓巨噬细胞(BMDMs)β干扰素(IFN-β)、干扰素刺激基因15(ISG15)、白细胞介素6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达水平的影响;Western blotting分析凉血解毒化瘀方对BMDMs干扰素调节因子3(IRF3)及干扰素基因刺激因子(STING)蛋白磷酸化水平的影响;结合RT-qPCR检测ACLF小鼠肝组织中上述mRNA表达水平,ELISA法检测ACLF小鼠血清IL-6及TNF-α水平以观察凉血解毒化瘀方对cGAS-STING信号通路的作用。结果HE染色显示,凉血解毒化瘀方组肝细胞坏死及炎症浸润程度与模型组相比较轻,TUNEL染色提示凉血解毒化瘀方组凋亡阳性细胞比例低于模型组(P<0.001)。凉血解毒化瘀方组血清ALT、AST及TBil水平均低于模型组(P<0.001)。RT-qPCR结果表明,凉血解毒化瘀方能抑制BMDMs及小鼠肝组织IFN-β、ISG15、IL-6及TNF-α的mRNA表达(P<0.05)。Western blotting结果显示,随着凉血解毒化瘀方给药剂量增加,BMDMs细胞中IRF3及STING蛋白磷酸化水平降低(P<0.05),凉血解毒化瘀方组血清IL-6及TNF-α水平均低于模型组(P<0.05)。结论凉血解毒化瘀方能够改善ACLF小鼠肝功能,降低小鼠血清促炎细胞因子水平,其机制可能与抑制cGAS-STING通路过度激活有关。 展开更多
关键词 慢加急性肝衰竭 cGAS-STING信号通路 Β干扰素 干扰素刺激基因15 凉血解毒化瘀方
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惠阳胡须鸡IFN-α基因克隆和序列分析 被引量：16
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作者 夏春 汪明 +3 位作者 朱凌云 刘津 吴志光 郭玉璞 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期563-566,共4页
根据红色原鸡IFN A基因设计了引物对 ,采用PCR法克隆并测序了我国地方标准品种惠阳胡须鸡的IFN α基因 ,定名为HyIFNA4。HyIFNA4与红色原鸡类IFN α比较 ,ORF长度均为 582个核苷酸、编码 162个氨基酸 ,相互间同源性在 97 4 %～ 99%。
关键词 惠阳胡须鸡 IFN 干扰素基因 克隆 序列分析
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京巴犬α-干扰素全基因的克隆与分子进化分析 被引量：6
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作者 陈红英 李新生 +3 位作者 董海聚 崔保安 郭明彦 宋亚朋 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期512-516,共5页
根据基因库(GenBank)中收录的犬α-干扰素(IFN-α)基因核苷酸序列(AB102731),设计并合成了1对引物,PCR扩增京巴犬IFN-α全基因,并克隆、测序。结果表明,犬IFN-α基因全基因序列为564 bp,包含1个开放阅读框,编码187个氨基酸的多肽,推导... 根据基因库(GenBank)中收录的犬α-干扰素(IFN-α)基因核苷酸序列(AB102731),设计并合成了1对引物,PCR扩增京巴犬IFN-α全基因,并克隆、测序。结果表明,犬IFN-α基因全基因序列为564 bp,包含1个开放阅读框,编码187个氨基酸的多肽,推导氨基酸序列有3个潜在的N-糖基化位点,有10个与二硫键形成有关的半胱氨酸。序列比较分析发现,京巴犬IFN-α基因序列与GenBank发表的其它品种犬IFN-α基因序列核苷酸同源性为96.3%以上,氨基酸同源性为94.1%以上,其中与AB102731核苷酸同源性最高,为99.5%,仅有3个碱基差异。京巴犬与人和其他8种动物的IFN-α基因序列分析和系统进化分析表明,IFN-α基因存在种属的差异性,亲缘关系越近,同源性越高。京巴犬IFN-α基因的成功克隆为进一步研究犬IFN-α基因表达、生物学活性和应用奠定基础。 展开更多
关键词 京巴犬 α-干扰素基因 扩增 基因克隆 进化分析
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狮头鹅α-干扰素基因的克隆与遗传分析 被引量：10
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作者 郑晓灵 卢曦 +3 位作者 刘艳芬 陈绍红 杨乐乐 刘铀 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第6期29-33,共5页
从狮头鹅外周血细胞中提取基因组DNA,采用巢式PCR方法扩增α-干扰素基因片段（d-Go-IFN-α）;同时从新城疫病毒（NDV）刺激培养外周血淋巴细胞提取总RNA,用RT-PCR方法扩增α-干扰素基因片段（m-Go-IFN-α）,将上述扩增片段分别克隆到pGE... 从狮头鹅外周血细胞中提取基因组DNA,采用巢式PCR方法扩增α-干扰素基因片段（d-Go-IFN-α）;同时从新城疫病毒（NDV）刺激培养外周血淋巴细胞提取总RNA,用RT-PCR方法扩增α-干扰素基因片段（m-Go-IFN-α）,将上述扩增片段分别克隆到pGEM-T载体并进行序列测定。结果表明,α-干扰素基因全长均为576 bp,编码192个氨基酸,比较d-Go-IFN-α和m-Go-IFN-α的核苷酸序列,可见155位核苷酸由A突变为G,相应地52位氨基酸由M突变为R,提示狮头鹅α-干扰素基因存在单链核苷酸多态性;狮头鹅与其它家禽品种α-干扰素基因的核苷酸序列同源性介于41.2%~98.3%之间,其推导的氨基酸序列同源性为13.0%~96.4%,不同鹅品种的α-干扰素具有极为相似的二级结构。 展开更多
关键词 狮头鹅 Α-干扰素 克隆 序列分析
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干扰素-α对骨髓增殖性肿瘤JAK2V617F基因表达的影响 被引量：7
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作者 庞缨 蔡晓东 +3 位作者 刘凌 周旭红 叶絮 冯莹 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期316-320,共5页
【目的】研究干扰素-α在治疗骨髓增殖性肿瘤(MPN)中的疗效及对JAK2V617F基因表达的影响。【方法】分析73例应用干扰素-α治疗超过6个月的MPN患者的临床资料及JAK2V617F基因表达,并与同期单用羟基脲治疗的20例MPN做对照。治疗前后采用AS... 【目的】研究干扰素-α在治疗骨髓增殖性肿瘤(MPN)中的疗效及对JAK2V617F基因表达的影响。【方法】分析73例应用干扰素-α治疗超过6个月的MPN患者的临床资料及JAK2V617F基因表达,并与同期单用羟基脲治疗的20例MPN做对照。治疗前后采用AS-PCR方法检测JAK2V617F基因表达。【结果】干扰素-α治疗组中真性红细胞增多症、原发性血小板增多症分别有85.2%、87%达到完全或部分缓解(与对照组单用羟基脲治疗比较,P<0.01)。随访1～6年,56例干扰素-α治疗组的真性红细胞增多症、原发性血小板增多症JAK2V617F突变基因转阴率分别为54%、41%,转阴患者100%达到临床及血液学完全缓解,而对照组无一例转阴。干扰素-α治疗过程中的副作用主要表现为流感样症状,但均能耐受。【结论】干扰素-α治疗MPN能取得很好的疗效及较好的耐受性,JAK2V617F或可作为骨髓增殖性肿瘤患者能否达到分子生物学缓解的主要标志之一。 展开更多
关键词 骨髓增殖性肿瘤 干扰素-Α JAK2V617F基因
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绍兴鸭α-干扰素基因克隆、表达及活性测定 被引量：4
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作者 叶伟成 张存 +4 位作者 王一成 刘蔓雯 徐丽华 袁秀芳 张燕 《浙江农业学报》 CSCD 2005年第3期115-119,共5页
采用PCR法从绍兴鸭的肝组织基因组DNA中扩增出α干扰素基因,插入pUC18载体,进行序列测定及分析;将成熟α干扰素基因亚克隆到表达载体pET 28α(+)中,并转化入大肠杆菌BL21进行表达;表达产物经复性后,进行抗病毒活性的测定。测序结果表明... 采用PCR法从绍兴鸭的肝组织基因组DNA中扩增出α干扰素基因,插入pUC18载体,进行序列测定及分析;将成熟α干扰素基因亚克隆到表达载体pET 28α(+)中,并转化入大肠杆菌BL21进行表达;表达产物经复性后,进行抗病毒活性的测定。测序结果表明,该基因(sxDuIFN α)由576个核苷酸组成,共编码191个氨基酸。该基因与GenBank公布的鸭α干扰素基因(X84764,AB128861)的核苷酸序列同源性分别为99.3%和99.1%,氨基酸序列同源性均为97.9%。表达载体经IPTG诱导表达出相对分子量为20.7kD的DuIFN α。该产物经细胞病变抑制法测定,显示出具有明显的抗猪水泡性口炎病毒(VSV)及鸭瘟弱毒疫苗毒的活性。 展开更多
关键词 绍兴鸭 Α-干扰素 基因克隆 原核表达
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牦牛α-干扰素基因的克隆及其原核表达的研究 被引量：2
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作者 景志忠 李玉萍 +3 位作者 窦永喜 陈国华 房永祥 才学鹏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期194-199,共6页
植物血凝素(PHA)诱导培养牦牛外周血淋巴细胞,提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增牦牛IFN-α-A和IFN-α-Ⅱ基因,分别经PCR、酶切鉴定及测序分析后,再分别构建原核表达重组质粒,用SDS-PAGE和Western blot分析IPTG诱导表达的重组蛋白。序列分... 植物血凝素(PHA)诱导培养牦牛外周血淋巴细胞,提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增牦牛IFN-α-A和IFN-α-Ⅱ基因,分别经PCR、酶切鉴定及测序分析后,再分别构建原核表达重组质粒,用SDS-PAGE和Western blot分析IPTG诱导表达的重组蛋白。序列分析表明,牦牛IFN-α-A基因ORF为570 bp,与NCBI上发表的奶牛IFN-α-A参考序列同源性为94.4%,与黄牛IFN-α-B基因(M10953)的同源性最高,为97.0%;牦牛IFN-α-Ⅱ基因ORF为588 bp,与NCBI上发表的奶牛IFN-α-Ⅱ参考序列同源性为94.2%,与黄牛IFN-δ-1基因(XM-871297)的同源性最高,为96.1%。分子遗传进化树分析表明牦牛IFN-α-A和IFN-α-Ⅱ与黄牛、奶牛和水牛亲缘关系最近,与猪、马、人的次之,与其它动物都较远,说明这两基因均具有种属差异性。诱导表达重组蛋白分析表明,pGEX4T/IFN-α-A和pGEX4T/IFN-α-Ⅱ在大肠杆菌中得到了正确表达,均可表达约44 ku的融合蛋白,主要以包涵体形式存在,且具有与抗血清发生反应的生物活性。 展开更多
关键词 牦牛IFN-α-A基因 牦牛IFN-α-Ⅱ基因 分子克隆 遗传演化关系 表达分析
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贵宾犬α-干扰素基因的扩增、克隆与序列分析 被引量：1
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作者 宋亚鹏 陈红英 +3 位作者 崔保安 贾艳艳 郭显坡 张蕾 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第2期339-343,共5页
参照基因库中收录的犬α-干扰素基因序列设计1对引物,应用PCR技术直接从贵宾犬肝组织基因组DNA中扩增IFN-α基因,将回收得到的特异性片段克隆于pGEM-T Easy载体中,转化感受态细胞DH5α,经蓝白斑筛选,质粒PCR鉴定及酶切鉴定筛选阳性重组... 参照基因库中收录的犬α-干扰素基因序列设计1对引物,应用PCR技术直接从贵宾犬肝组织基因组DNA中扩增IFN-α基因,将回收得到的特异性片段克隆于pGEM-T Easy载体中,转化感受态细胞DH5α,经蓝白斑筛选,质粒PCR鉴定及酶切鉴定筛选阳性重组质粒,测定其核苷酸序列。测序结果表明,贵宾犬α-干扰素基因全长为564 bp,包含一个完整的开放阅读框,编码187个氨基酸的多肽,推导氨基酸序列有3个潜在的N-糖基化位点,有10个与二硫键形成有关的半胱氨酸。用DNAStar软件将所得序列与人和其他种动物的IFN-α基因进行核苷酸及氨基酸同源性比较,并通过绘制系统进化树可知,IFN-α基因存在种属的差异性,亲缘关系越近,同源性越高。 展开更多
关键词 犬 IFN-Α 扩增 基因克隆 序列分析
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家蚕细胞基因工程人α-干扰素注射液抗Ⅱ型单纯疱疹病毒作用 被引量：5
20
作者 王秋娟 李运曼 +2 位作者 王旻 吴梧桐 朱宝立 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第9期557-557,共1页
报道家蚕细胞基因工程人α－干扰素注射液具有明显抗ＨＳＶ－２的作用。在Ｖｅｒｏ细胞上，其有一定的细胞毒性，但随浓度降低而毒性减少；明显地抑制ＨＳＶ－２所致细胞病变；对ＨＳＶ－２的抑制指数为３．０￣４．０；能有效地抑制Ｈ... 报道家蚕细胞基因工程人α－干扰素注射液具有明显抗ＨＳＶ－２的作用。在Ｖｅｒｏ细胞上，其有一定的细胞毒性，但随浓度降低而毒性减少；明显地抑制ＨＳＶ－２所致细胞病变；对ＨＳＶ－２的抑制指数为３．０￣４．０；能有效地抑制ＨＳＶ－２在细胞内复制。在体实验表明该药对ＨＳＶ－２所致小鼠阴道炎有明显治疗作用。该药小鼠ｉｍ和ｉｖ的最大耐受剂量均大于５×１０＾７Ｉｕ／ｋｇ。 展开更多
关键词 干扰素 单纯疱疹病毒 家蚕细胞 基因工程
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