血浆是血液的重要组成部分,它作为临床蛋白质组学研究的重要样本,蕴含着丰富的生理与病理信息,是发现疾病相关生物标志物的理想来源。蛋白质N-糖基化作为一种关键的翻译后修饰,广泛参与细胞间通讯、免疫调节和信号转导等生物学过程,其...血浆是血液的重要组成部分,它作为临床蛋白质组学研究的重要样本,蕴含着丰富的生理与病理信息,是发现疾病相关生物标志物的理想来源。蛋白质N-糖基化作为一种关键的翻译后修饰,广泛参与细胞间通讯、免疫调节和信号转导等生物学过程,其异常变化与肿瘤、自身免疫疾病和神经退行性疾病等多种病理状态密切相关。因此,N-糖基化蛋白质组学在生物标志物和药物靶点开发中具有重要价值。然而,由于N-糖肽在生物样本中的丰度较低,且质谱分析时易受高丰度非修饰肽段的信号抑制,因此,在质谱检测前对其进行高效富集是实现深度N-糖蛋白质组覆盖的关键挑战,特别是对于微量血浆样本目前尚缺乏深入研究。本工作针对微量血浆N-糖肽构建了一种高效富集方法和高灵敏度质谱分析策略,首先通过优化亲水相互作用色谱法(HILIC)填料固定相化学组成、孔径大小等关键参数与N-糖肽的洗脱梯度,得到具有高选择性的富集方案,并结合基于平行累积序列碎片技术(PASEF)高分辨质谱仪Tims TOF Pro 2与高质量精度的Orbitrap Lumos的双平台互补分析,显著提升了N-糖肽的鉴定深度,在仅使用20μg血浆肽段(等效0.5μL全血浆)的条件下,通过HILIC富集得到了2962条完整N-糖肽,显著提高了N-糖肽鉴定的灵敏度,成功填补了微量血浆N-糖肽富集技术的空白,也为基于血浆N-糖蛋白质组学的精准医学研究提供了可靠的分析平台,为疾病生物标志物的发现提供了技术支持。展开更多
文摘血浆是血液的重要组成部分,它作为临床蛋白质组学研究的重要样本,蕴含着丰富的生理与病理信息,是发现疾病相关生物标志物的理想来源。蛋白质N-糖基化作为一种关键的翻译后修饰,广泛参与细胞间通讯、免疫调节和信号转导等生物学过程,其异常变化与肿瘤、自身免疫疾病和神经退行性疾病等多种病理状态密切相关。因此,N-糖基化蛋白质组学在生物标志物和药物靶点开发中具有重要价值。然而,由于N-糖肽在生物样本中的丰度较低,且质谱分析时易受高丰度非修饰肽段的信号抑制,因此,在质谱检测前对其进行高效富集是实现深度N-糖蛋白质组覆盖的关键挑战,特别是对于微量血浆样本目前尚缺乏深入研究。本工作针对微量血浆N-糖肽构建了一种高效富集方法和高灵敏度质谱分析策略,首先通过优化亲水相互作用色谱法(HILIC)填料固定相化学组成、孔径大小等关键参数与N-糖肽的洗脱梯度,得到具有高选择性的富集方案,并结合基于平行累积序列碎片技术(PASEF)高分辨质谱仪Tims TOF Pro 2与高质量精度的Orbitrap Lumos的双平台互补分析,显著提升了N-糖肽的鉴定深度,在仅使用20μg血浆肽段(等效0.5μL全血浆)的条件下,通过HILIC富集得到了2962条完整N-糖肽,显著提高了N-糖肽鉴定的灵敏度,成功填补了微量血浆N-糖肽富集技术的空白,也为基于血浆N-糖蛋白质组学的精准医学研究提供了可靠的分析平台,为疾病生物标志物的发现提供了技术支持。
