褪黑素对人腹膜间皮细胞上皮-间质转化的作用及机制

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作者 刘珊 张明霞 刘伦志 《中国医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第3期235-239,共5页

目的探讨褪黑素对人腹膜间皮细胞上皮-间质转化(EMT)的作用及机制。方法培养人腹膜间皮细胞株HMrSV5,构建核心蛋白聚糖(DCN)过表达和敲减质粒。将细胞分为正常对照组、TGF-β1组、TGF-β1+褪黑素组、TGF-β1+褪黑素+siDCN组、TGF-β1+... 目的探讨褪黑素对人腹膜间皮细胞上皮-间质转化(EMT)的作用及机制。方法培养人腹膜间皮细胞株HMrSV5,构建核心蛋白聚糖(DCN)过表达和敲减质粒。将细胞分为正常对照组、TGF-β1组、TGF-β1+褪黑素组、TGF-β1+褪黑素+siDCN组、TGF-β1+褪黑素+siNC组、TGF-β1+DCN组。采用CCK-8法检测细胞增殖存活率;采用蛋白免疫印迹和实时定量PCR检测DCN、TGF-β1、Smad2、E-cadherin蛋白和mRNA表达水平。结果CCK-8结果显示,TGF-β1+褪黑素组、TGF-β1+褪黑素+siDCN组、TGF-β1+DCN组细胞存活率均较TGF-β1组高,TGF-β1+褪黑素组较TGF-β1+褪黑素+siDCN组细胞存活率更高(均P<0.05)。蛋白免疫印迹及实时定量PCR表明,TGF-β1组较对照组DCN和E-cadherin表达明显下调,TGF-β1+褪黑素组与TGF-β1+褪黑素+siDCN组较TGF-β1组DCN、E-cadherin蛋白及mRNA表达上调,TGF-β1、Smad2蛋白及mRNA表达下调;TGF-β1+褪黑素组较TGF-β1+褪黑素+siDCN组进一步上调E-cadherin、DCN蛋白及mRNA表达,进一步下调TGF-β1、Smad2蛋白及mRNA表达(均P<0.05)。结论褪黑素可延缓人腹膜间皮细胞EMT进程,DCN基因可能是抑制该细胞发生EMT的一个重要靶点。 展开更多

关键词 褪黑素 人腹膜间皮细胞 核心蛋白聚糖 上皮-间质转化

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Troglitazone对人腹膜间皮细胞TGF-β_1和纤维连接蛋白表达的影响 被引量：5

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作者 刘虹 彭佑铭 +4 位作者 刘伏友 刘映红 李玲艳 李军 陈星 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期473-479,共7页

目的:研究过氧化物增生体激活受体γ(PPAR-γ)激动剂troglitazone(曲格列酮,TGZ)对高浓度葡萄糖刺激下体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMCs)中TGF-β1和细胞外基质纤维连接蛋白(Fn)表达的影响。方法:采用胰蛋白酶消化法从人大网膜组织中分... 目的:研究过氧化物增生体激活受体γ(PPAR-γ)激动剂troglitazone(曲格列酮,TGZ)对高浓度葡萄糖刺激下体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMCs)中TGF-β1和细胞外基质纤维连接蛋白(Fn)表达的影响。方法:采用胰蛋白酶消化法从人大网膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型。根据细胞增殖与毒性实验选择troglitazone的最佳浓度15μmol/L,干预高浓度葡萄糖(30mmol/LD-葡萄糖)刺激下的人腹膜间皮细胞。采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)半定量检测HPMCs中PPAR-γ,TGF-β1以及Fn的 mRNA表达;采用双抗夹心法酶联免疫吸附实验检测HPMCs培养液中TGF-β1蛋白质水平;Western印迹检测Fn蛋白质水平。结果:高糖(30mmol/LD-葡萄糖)刺激可在 mRNA和蛋白质水平明显上调HPMCs表达TGF-β1和Fn(P<0.01),troglitazone干预高糖孵育的HPMCs,可使TGF-β1和Fn mRNA和蛋白质的表达明显下调(P<0.05)。结论:Troglitazone能够明显抑制在高糖刺激下的HPMCsTGF-β1和Fn的表达,这可能为临床防治长期腹膜透析患者的腹膜纤维化提供一种较为有效的方法。 展开更多

关键词 PPAR-Γ TROGLITAZONE 人腹膜间皮细胞 转化生长因子-β1 纤维连接蛋白

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高糖腹膜透析液对人腹膜间皮细胞NLRP3-IL-1β的影响 被引量：6

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作者 李相友 伍军 +5 位作者 罗丹 陈晚先 朱戈丽 张艳霞 毕智敏 封宝红 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期954-960,共7页

目的:观察高糖腹膜透析液对人腹膜间皮细胞NLRP3-IL-1β的影响。方法:体外培养人腹膜间皮细胞株第5~10代[HMr SV5,DMEM/F12培养基含10%(体积分数)胎牛血清],观察1.5%、2.5%、4.25%(质量分数)葡萄糖腹膜透析液(dextrose)及线粒体呼吸链... 目的:观察高糖腹膜透析液对人腹膜间皮细胞NLRP3-IL-1β的影响。方法:体外培养人腹膜间皮细胞株第5~10代[HMr SV5,DMEM/F12培养基含10%(体积分数)胎牛血清],观察1.5%、2.5%、4.25%(质量分数)葡萄糖腹膜透析液(dextrose)及线粒体呼吸链复合酶Ⅰ抑制剂鱼藤酮(rotenone),线粒体呼吸链复合酶Ⅱ抑制剂噻吩甲酰三氟丙酮(thenoyltrifluoroacetone,TTFA),线粒体呼吸链复合酶Ⅲ抑制剂抗霉素A(antimycin A)对细胞IL-1β表达的影响(免疫印迹);通过小RNA干扰技术下调NLRP3的表达,免疫印迹分析4.25%高糖腹膜透析液作用下细胞IL-1β的表达;通过白藜芦醇(resveratrol,RSV)诱导自噬,3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)、自噬相关蛋白5(autophagy related gene 5,ATG5)siRNA、自噬相关蛋白(Beclin1)siRNA抑制自噬,流式细胞仪分析细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS),免疫印迹分析IL-1β的表达。结果:对照组、1.5%高糖腹膜透析液、2.5%高糖腹膜透析液、4.25%高糖腹膜透析液、鱼藤酮(10μmol/L)、抗霉素A(50 mg/L)、噻吩甲酰三氟丙酮(10μmol/L)各组细胞上清IL-1β的相对表达依次为0、0.175±0.082、0.418±0.163、2.357±0.288、2.642±0.358、3.271±0.462、0.123±0.091,提示2.5%高糖腹膜透析液、4.25%高糖腹膜透析液、鱼藤酮、抗霉素A作用细胞IL-1β表达明显升高,应用NLRP3 siRNA可阻断上述效应;此外,对照组、阴性对照siRNA(negative control,NC siRNA)、RSV(50μmol/L,诱导自噬)、3-MA(10 mmol/L,抑制自噬)、ATG5 siRNA(抑制自噬)、Beclin1 siRNA(抑制自噬)各组总线粒体荧光强度分别为1.76±0.42、1.83±0.55、1.85±0.62、7.36±0.92、5.35±0.77、5.06±0.62,超氧化线粒体荧光强度分别为821.68±95.12、868.15±102.82、723.39±92.56、1 660.08±113.65、1 433.01±107.24、1 562.36±112.88,结合免疫印迹结果,提示抑制自噬可增强线粒体ROS产生和提高IL-1β表达,诱导自噬对ROS、IL-1β无明显影响。结论:长期应用高糖腹膜透析液,腹膜间皮细胞NLRP3-IL-1β持续激活,实时启动自噬可能成为干预NLRP3-IL-1β持续激活、延缓腹膜透析腹腔慢性炎症及腹膜纤维化的治疗靶点。 展开更多

关键词 高糖腹膜透析液 人腹膜间皮细胞 NLRP3 IL-1Β

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葡萄糖PDS对单层人腹膜间皮跨细胞电阻及迁移修复能力的影响 被引量：4

4

作者 凌光辉 朱雪婧 +6 位作者 夏运成 刘伏友 彭佑铭 段绍斌 刘虹 刘映红 孙林 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期418-424,共7页

目的:观察不同浓度葡萄糖PDS(PDS)对单层人腹膜间皮细胞(HPMCs)跨细胞电阻(TER)以及迁移修复能力的影响。方法:用不同葡萄糖浓度PDS(1.5%,2.5%,4.25%)分别与DMEM以1:1比例混合后体外培养HPMCs。四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞增殖... 目的:观察不同浓度葡萄糖PDS(PDS)对单层人腹膜间皮细胞(HPMCs)跨细胞电阻(TER)以及迁移修复能力的影响。方法:用不同葡萄糖浓度PDS(1.5%,2.5%,4.25%)分别与DMEM以1:1比例混合后体外培养HPMCs。四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞增殖。使用双池培养皿(transwell)构建HPMCs单层细胞模型。采用TER技术测定PDS对HPMCs通透性的影响。划痕损伤实验观察葡萄糖对HPMCs修复再生能力的影响。结果:不同浓度葡萄糖PDS(1.5%,2.5%,4.25%)干预均可明显地抑制HPMCs的增殖(P<0.05)。TER值随PDS干预时间的延长而逐渐下降,且与葡萄糖浓度呈负相关(P<0.01)。葡萄糖PDS可明显抑制HPMCs迁移修复能力,且与葡萄糖浓度相关。结论:高糖PDS液抑制细胞增殖,降低单层HPMCs的TER值,并抑制HPMCs损伤后迁移修复能力。提示PDS中高糖成分是导致腹透患者腹膜高通透性和超滤衰竭的重要因素。 展开更多

关键词 人腹膜间皮细胞 跨细胞电阻 细胞迁移 腹膜透析

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丹参酮ⅡA对腹膜透析液诱导的人腹膜间皮细胞转分化及致纤维化因子表达的影响 被引量：5

5

作者 邵秋媛 蒋春明 +2 位作者 孙琤 于立杰 张苗 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2012年第1期20-25,共6页

目的腹膜纤维化是长期腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)的常见并发症,也是透析不充分和退出PD的主要原因,研究表明丹参酮ⅡA能改善各种组织中的纤维化。文中研究丹参酮ⅡA磺酸钠注射液对在高糖腹膜透析液(peritonealdialysis fluid,PDF... 目的腹膜纤维化是长期腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)的常见并发症,也是透析不充分和退出PD的主要原因,研究表明丹参酮ⅡA能改善各种组织中的纤维化。文中研究丹参酮ⅡA磺酸钠注射液对在高糖腹膜透析液(peritonealdialysis fluid,PDF)诱导下体外培养的人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)纤维化及其相关因子表达的影响。方法选择非尿毒症、非糖尿病择期手术患者的大网膜作为HPMCs的来源,将培养的细胞随机分成4组:对照组、PDF组、丹参酮1组(含丹参酮ⅡA浓度为50μmol/L的PDF组)、丹参酮2组(含丹参酮ⅡA浓度为100μmol/L的PDF组),同步培养72h后,应用间接免疫荧光法检测α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、上皮钙黏素(E-cadherin)表达,实时荧光定量PCR检测E-cadherin、α-SMA、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、Ⅰ型胶原酶(CollagenⅠ)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、smad2、smad7 mRNA表达。结果免疫荧光法发现,丹参酮ⅡA能显著抑制高糖诱导的E-cadherin低表达和α-SMA高表达。Real-time-PCR发现,添加丹参酮ⅡA的PDF组α-SMA、FN、CollagenⅠ、TGF-β1、smad2 mRNA表达与PDF组比较显著下调(P<0.05);E-cadherin、smad7 mRNA表达显著上调(P<0.05)。结论在PDF中添加丹参酮ⅡA可显著减轻PDF导致的HPMCs转分化,从而抑制纤维化相关因子的表达。 展开更多

关键词 丹参酮ⅡA 腹膜透析液 人腹膜间皮细胞 腹膜纤维化 间叶转分化

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黄芪甲苷对高糖腹透液诱导的腹膜间皮细胞线粒体损伤的干预机制研究 被引量：6

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作者 李正红 史俊 +3 位作者 赵君谊 张露 高坤 盛梅笑 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期436-441,共6页

目的研究黄芪甲苷对高糖腹透液诱导的人腹膜间皮细胞(HPMCs)线粒体损伤的影响,并探讨其干预机制.方法①人腹膜间皮细胞株(HMrSV5)在RPMI 1640(含1%FCS)培养液中培养24 h后分为6组:空白组:正常培养液2 mL;高糖腹透液组:含4.25%PDS 1 mL+... 目的研究黄芪甲苷对高糖腹透液诱导的人腹膜间皮细胞(HPMCs)线粒体损伤的影响,并探讨其干预机制.方法①人腹膜间皮细胞株(HMrSV5)在RPMI 1640(含1%FCS)培养液中培养24 h后分为6组:空白组:正常培养液2 mL;高糖腹透液组:含4.25%PDS 1 mL+正常培养液1 mL;低剂量黄芪甲苷组:黄芪甲苷剂量终浓度10μmol/mL;中剂量黄芪甲苷组:黄芪甲苷剂量终浓度20μmol/mL;高剂量黄芪甲苷组:黄芪甲苷剂量终浓度40μmol/mL;阳性药对照组:吡菲尼酮50μmol/mL.②分别采用CCK-8法测定HMrSV5的增殖活性;流式细胞仪检测细胞活性氧族(ROS)水平变化;罗丹明123荧光染色检测HMrSV5膜电位水平变化;JC-1法测定HMrSV5线粒体膜电位的去极化;Western blot检测HPMCs线粒体形态和功能相关蛋白的表达情况.结果①CCK-8检测结果显示,与模型组相比,黄芪甲苷处理组OD值明显升高,细胞存活率也相应增加,呈浓度依赖性,黄芪甲苷对HPMCs有保护作用;②流式检测提示高糖腹透液刺激后线粒体ROS产生增加,而黄芪甲苷可有效降低ROS水平;③JC-1和罗丹明123染色后流式检测发现随着黄芪甲苷浓度的增加,线粒体膜电位的去极化程度随之减少,同时有效增加线粒体膜电位,线粒体膜通透性降低,黄芪甲苷能部分修复高糖腹透液对线粒体的损伤;④Western blot检测结果显示,黄芪甲苷处理的细胞线粒体分裂蛋白DRP1、FIS1的表达水平明显降低,线粒体外膜结合蛋白OPA1、TOM70的表达水平明显升高.结论①高糖腹透液能诱导HPMCs线粒体损伤模型;②黄芪甲苷能够通过促进HPMCs线粒体外膜OPA1、TOM70蛋白的表达,降低DRP1、FIS1蛋白表达水平,减少线粒体膜电位去极化,同时有效增加膜电位及降低线粒体膜通透性,进而改善高糖腹透液诱导的HPMCs线粒体氧化应激损伤,保护其结构功能的稳定. 展开更多

关键词 黄芪甲苷 人腹膜间皮细胞 活性氧族 线粒体损伤

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乳酸盐腹膜透析液对人腹膜间皮细胞凋亡及bcl-2、bax表达和caspase-3活性的影响 被引量：4

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作者 崔明姬 王芳 +2 位作者 顾春梅 黄金杰 南光贤 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期470-473,共4页

目的:探讨不同浓度乳酸盐腹膜透析液(L-PDS)对腹膜间皮细胞(HPMC)凋亡和bcl-2、bax表达及caspase-3活性的影响。方法:采用酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型,分别用浓度为1.50%、2.50%和4.25%的L-PDS与HPMC共... 目的:探讨不同浓度乳酸盐腹膜透析液(L-PDS)对腹膜间皮细胞(HPMC)凋亡和bcl-2、bax表达及caspase-3活性的影响。方法:采用酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型,分别用浓度为1.50%、2.50%和4.25%的L-PDS与HPMC共同培养,同时设对照组。采用流式细胞术检测HPMC凋亡,采用RT-PCR法测定bcl-2及bax mRNA的表达,采用免疫荧光法检测caspase-3的活性。结果:与对照组比较,L-PDS各组HPMC凋亡率增加,bcl-2 mRNA的表达降低,bax mRNA表达升高,caspase-3活性增加,上述指标变化中2.50%及4.25%L-PDS组与对照组比较差异有显著性(P<0.05),4.25%L-PDS组与2.50%L-PDS组比较差异也有显著性(P<0.05),而1.50%L-PDS组与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。结论:L-PDS可诱导HPMC凋亡,其机制可能是通过对bcl-2及bax mRNA表达的改变以及激活caspase-3活性而实现。 展开更多

关键词 乳酸盐腹膜透析液 腹膜间皮细胞 细胞凋亡 基因 BCL-2 bax caspase-3

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pcDU_6质粒载体介导的TGFβ_1 shRNA抑制TGFβ_1在人腹膜间皮细胞中的表达 被引量：3

8

作者 刘虹 刘伏友 +2 位作者 彭佑铭 袁芳 刘映红 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期552-557,共6页

目的 :研究pcDU6质粒载体介导的转化生长因子β1短发夹RNA(shorthairpinRNA ,shRNA)对人腹膜间皮细胞 (HPMCs)转化生长因子 β1(TGFβ1)表达的影响。方法 :针对TGFβ1的以GGCC开始的 2 1碱基大小的片段 ,分别设计 2对寡核苷酸 ,形成双... 目的 :研究pcDU6质粒载体介导的转化生长因子β1短发夹RNA(shorthairpinRNA ,shRNA)对人腹膜间皮细胞 (HPMCs)转化生长因子 β1(TGFβ1)表达的影响。方法 :针对TGFβ1的以GGCC开始的 2 1碱基大小的片段 ,分别设计 2对寡核苷酸 ,形成双链后将其依次连入带有U6启动子的 pcDNA3.1( )载体 (命名为 pcDU6) ,2对DNA双链通过BamHI酶切位点连接后形成中间由 6碱基序列间隔的反向互补序列 ,构建成TGFβ1短发夹RNA的产生质粒。采用胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞 ,建立稳定的体外培养模型。用脂质体转染表达转化生长因子β1shRNA的pcDU6载体质粒和表达反义TGFβ1RNA的pcDNA3.1( )的载体质粒入 4 .2 5 %D 葡萄糖和LPS刺激下人腹膜间皮细胞。采用逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)半定量分析HPMC中TGFβ1mRNA的表达。采用双抗夹心法酶联免疫吸附实验检测HPMC培养液中TGFβ1蛋白质水平。结果 :HPMC在 4 .2 5 %D 葡萄糖和LPS的刺激下可明显上调TGFβ1的表达 (P <0 .0 1)。pcDU6载体质粒介导的转化生长因子 β1shRNA干扰组较 pc DU6空载体组明显下调TGFβ1的表达 (P <0 .0 1)。pcDU6载体质粒介导的转化生长因子 β1shRNA干扰组间比较 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;pcDNA3.1( )的载体质粒介导的反义RNA组与 展开更多

关键词 TGFβ1 DU 转化生长因子β1 表达 hpmc 人腹膜间皮细胞 RNA干扰 质粒介导 PCDNA3 酶切位点

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lnc-MGC对高糖诱导的人腹膜间皮细胞转分化的影响 被引量：7

9

作者 李欢 何丽洁 +1 位作者 娄未娟 王汉民 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期189-194,共6页

目的探索长链非编码RNA-MGC(lnc-MGC)在高糖诱导的人腹膜间皮细胞(HPMCs)转分化中的作用。方法使用永生化的HPMCs,设置对照组及高糖组,对照组给予常规培养基培养,高糖组给予含60mmol/L葡萄糖的常规培养液培养72h。采用Real-time PCR检... 目的探索长链非编码RNA-MGC(lnc-MGC)在高糖诱导的人腹膜间皮细胞(HPMCs)转分化中的作用。方法使用永生化的HPMCs,设置对照组及高糖组,对照组给予常规培养基培养,高糖组给予含60mmol/L葡萄糖的常规培养液培养72h。采用Real-time PCR检测两组lnc-MGC的表达变化,并采用Real-time PCR及Western bloting检测两组上皮细胞E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ型胶原蛋白(COL-1)和Ⅲ型胶原蛋白(COL-3)mRNA及蛋白表达的变化。采用慢病毒转染HPMCs,上调和下调lnc-MGC后,分别观察上述指标的变化。结果高糖刺激HPMCs 72h后,Real-time PCR检测结果显示:与对照组相比,高糖组lnc-MGC及α-SMA、CTGF、COL-1、COL-3 mRNA表达水平均明显增加(P<0.05),E-Cadherin mRNA表达水平明显降低(P<0.05);Western blotting检测结果显示其蛋白表达与mRNA表达变化趋势一致,差异均有统计学意义(P<0.05)。此外,Real-time PCR检测结果还显示,与对照组相比,慢病毒转染下调lnc-MGC后,lnc-MGC、α-SMA、CTGF、COL-1、COL-3的表达明显降低(P<0.05),E-Cadherin的表达明显升高(P<0.05);Western blotting检测结果显示其蛋白表达与mRNA表达变化趋势一致,差异均有统计学意义(P<0.05)。而慢病毒转染上调lnc-MGC后,Real-time PCR检测结果显示,与对照组相比,lncMGC、α-SMA、CTGF、COL-1、COL-3的表达增加(P<0.05),E-Cadherin的表达降低(P<0.05);Western blotting检测结果显示其蛋白表达与mRNA表达变化趋势一致,差异均有统计学意义(P<0.05)。采用mi RBase数据库预测所得lncRNA下游靶分子为miRNA126-3p,与对照组相比,高糖刺激后miRNA126-3p表达明显升高(P<0.05),转染下调lnc-MGC的慢病毒后miRNA126-3p表达明显降低(P<0.05),转染上调lnc-MGC的慢病毒后miRNA126-3p表达明显升高(P<0.05)。结论lnc-MGC通过调控miRNA126-3p参与HPMCs的转分化过程,调控lnc-MGC的表达可以改变HPMCs的表型转换,并有可能延缓腹膜纤维化的发展。 展开更多

关键词 长链非编码RNA 腹膜间皮细胞 细胞表型转换

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黄芪注射液对腹膜透析相关腹膜间皮细胞TGF-β_1分泌与表达的影响 被引量：8

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作者 徐海红 张苗 蒋春明 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2005年第7期791-794,共4页

目的:探讨黄芪对腹膜透析相关性腹膜纤维化的作用。方法:人腹膜间皮细胞(HPMC)做体外培养,第三代细胞用于实验。分5组观察,对照组为RP-MI1640;PDS(peritoneal dialysis solution,腹膜透析液)组为加入PDS;黄芪12、3、组为加入含黄芪注射... 目的:探讨黄芪对腹膜透析相关性腹膜纤维化的作用。方法:人腹膜间皮细胞(HPMC)做体外培养,第三代细胞用于实验。分5组观察,对照组为RP-MI1640;PDS(peritoneal dialysis solution,腹膜透析液)组为加入PDS;黄芪12、3、组为加入含黄芪注射液的PDS,黄芪终浓度分别为102、04、0 mg.ml-1。分别在24 h采用ELISA法检测细胞上清液中转移生长因子-1β(TGF-1β)的含量,采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测TGF-1βmRNA表达。结果:腹膜间皮细胞在PDS干预下分泌TGF-1β明显增加(P<0.05)。腹膜间皮细胞经含不同浓度黄芪注射液的PDS干预后,TGF-1β分泌与PDS组比较有显著下降(P<0.05)。不同浓度黄芪注射液组之间比较无显著差异(P>0.05)。腹膜间皮细胞在PDS干预下TGF-1βmRNA表达明显升高,比对照组上升62.43%,腹膜间皮细胞经含不同浓度黄芪注射液的PDS干预后,TGF-1βmRNA表达显著低于PDS组(P<0.01)。结论:商业性腹膜透析液可促进腹膜间皮细胞分泌和表达TGF-1β,黄芪可以部分抵消这一作用所致的腹膜透析相关性腹膜纤维化。 展开更多

关键词 黄芪 腹膜透析 腹膜间皮细胞 细胞因子 腹膜纤维化

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人腹膜间皮细胞的分离培养 被引量：7

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作者 刘宏发 臧燕 +1 位作者 侯凡凡 王力 《第一军医大学学报》 CSCD 1999年第5期435-437,共3页

目的体外培养的人腹膜间皮细胞（ＨＰＭＣ）是研究腹膜功能的有用模型，我们为此建立了一种改良消化法，以从人大网膜分离腹膜间皮细胞。方法用０．２％胰蛋白酶－０．０２％ＥＤＴＡＮａ２消化人大网膜组织碎片，细胞悬液经１００目筛... 目的体外培养的人腹膜间皮细胞（ＨＰＭＣ）是研究腹膜功能的有用模型，我们为此建立了一种改良消化法，以从人大网膜分离腹膜间皮细胞。方法用０．２％胰蛋白酶－０．０２％ＥＤＴＡＮａ２消化人大网膜组织碎片，细胞悬液经１００目筛网滤过后进行培养：瑞士姬姆萨染色观察细胞形态，计算细胞纯度：免疫组化（ＡＢＣ法）鉴定细胞。结果分离培养的细胞光镜下呈铺路鹅卵石状，纯度达９５％以上。细胞表面标志鉴定显示角蛋白、波形蛋白抗原阳性，第Ⅷ因子相关抗原、白细胞ＣＤ４５抗原阴性，证实分离培养的确是ＨＰＭＣ。结论胰蛋白酶消化法是一种简单实用的分离ＨＰＭＣ的方法。 展开更多

关键词 大网膜 人腹膜间皮细胞 分离 培养 hpmc

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高糖对人腹膜间皮细胞氧化应激的影响 被引量：4

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作者 边帆 葛勤敏 +1 位作者 栗明 苏青 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期685-688,共4页

目的研究不同浓度葡萄糖对人腹膜间皮细胞(HPMC)氧化应激的影响。方法HPMC体外培养并行免疫组化鉴定,取第2代细胞用于实验。将不同浓度葡萄糖干预HPMC一定时间后,MTT比色法检测细胞活力;采用活性氧捕获剂双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-... 目的研究不同浓度葡萄糖对人腹膜间皮细胞(HPMC)氧化应激的影响。方法HPMC体外培养并行免疫组化鉴定,取第2代细胞用于实验。将不同浓度葡萄糖干预HPMC一定时间后,MTT比色法检测细胞活力;采用活性氧捕获剂双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)孵育细胞,通过流式细胞仪检测细胞内的荧光强度而测得细胞内活性氧(ROS)水平。分析不同浓度葡萄糖及不同作用时间对HPMC细胞活力及ROS水平的影响。结果高糖明显抑制HPMC细胞活力(P<0.05),随着葡萄糖浓度增加及作用时间的延长,抑制率呈上升趋势。高糖干预HPMC后,细胞内的平均荧光强度明显升高。结论高糖导致细胞发生氧化应激,其对细胞的损伤作用可能与氧自由基生成过多及ROS蓄积有关。 展开更多

关键词 高糖 人腹膜间皮细胞 氧化应激 活性氧

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黄芪对腹膜间皮细胞致纤维化细胞生长因子分泌与表达的影响 被引量：9

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作者 蒋春明 张苗 孙琤 《医学研究生学报》 CAS 2005年第11期972-976,共5页

目的:了解黄芪注射液对体外培养的人腹膜间皮细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)分泌及其mRNA表达的影响。方法:取择期手术患者的网膜间皮细胞进行体外培养传代,第三代细胞用于实验,待细胞同步后分为五组(对... 目的:了解黄芪注射液对体外培养的人腹膜间皮细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)分泌及其mRNA表达的影响。方法:取择期手术患者的网膜间皮细胞进行体外培养传代,第三代细胞用于实验,待细胞同步后分为五组(对照组、腹膜透析组、黄芪1组、2组和3组)观察。单四唑(MTT)法检测各组间皮细胞的增殖活性。用ELISA法检测细胞上清液中TGF-β1和bFGF的含量,并进行比较。采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)法检测两种细胞因子mRNA表达情况并进行比较。结果:腹膜间皮细胞在PDS干预下还原能力明显下降,A值显著低于对照组和黄芪组(P<0.05);分泌TGF-β1和bFGF明显增加,与对照组比较,P<0.05。腹膜间皮细胞经含不同浓度黄芪注射液的PDS干预后,TGF-β1和bFGF分泌与PDS组比较显著下降(P<0.05),黄芪2组和3组显著低于黄芪1组(P<0.05),黄芪3组和2组间比较无显著差异(P>0.05)。腹膜间皮细胞在PDS干预下TGF-β1和bFGF mRNA表达明显升高,分别比对照组上升62.43%和37.68%。黄芪组TGF-β1和bFGF mRNA表达显著低于PDS组(P<0.05);黄芪2组和3组表达显著低于黄芪1组(P<0.05),黄芪3组和2组间比较无显著差异。结论:黄芪注射液具有抑制PDS导致的腹膜间皮细胞TGF-β1和bFGF过度分泌和表达的作用。 展开更多

关键词 黄芪 腹膜间皮细胞 转移生长因子-Β1 碱性成纤维细胞生长因子

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氟伐他汀对高糖腹透液诱导人腹膜间皮细胞纤维连接蛋白表达的影响 被引量：2

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作者 刘艳春 刘佳 +4 位作者 徐亚光 赵秀芬 钱军 孙彬 邢昌赢 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期908-912,共5页

目的:探讨氟伐他汀(fluvastatin,Flu)对高糖腹透液(high-glucose peritoneal dialysate,HGPDS)诱导人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)纤维连接蛋白(fibronectin,FN)表达的影响。方法:体外培养HPMCs,同步化24 h... 目的:探讨氟伐他汀(fluvastatin,Flu)对高糖腹透液(high-glucose peritoneal dialysate,HGPDS)诱导人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)纤维连接蛋白(fibronectin,FN)表达的影响。方法:体外培养HPMCs,同步化24 h后,分为正常对照组、HGPDS组、HGPDS+Flu组、单纯氟伐他汀组、DMSO对照组,各组分别刺激不同时间后,噻唑蓝(MTT)检测各组细胞的活力,RT-PCR检测FN的mRNA表达,ELISA法检测上清液FN蛋白表达的变化。结果:与正常对照组比较,HGPDS明显抑制细胞活力,HGPDS联合Flu共同培养24、36 h,细胞活力有所恢复,其中,1×10-6mol/L Flu作用24 h,细胞活力改善差异有统计学意义(P<0.05);与正常对照组比较,HGPDS明显增加人腹膜间皮细胞FN mRNA及蛋白表达(P<0.05),并呈时间依赖性,其中FN mRNA于6 h达高峰,FN蛋白于24 h达高峰。Flu可抑制HGPDS诱导的FN的高表达(P<0.05),并呈浓度依赖性。结论:HGPDS诱导体外培养人腹膜间皮细胞FN表达增加,此作用可被Flu抑制。 展开更多

关键词 氟伐他汀 高糖腹透液 人腹膜间皮细胞 纤维连接蛋白

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EGCG对人腹膜间皮细胞上皮-间质转化的影响及机制 被引量：2

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作者 张林 李大伟 +3 位作者 刘沧桑 何晓兰 曾妮 蒋亚芬 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期654-658,共5页

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate, EGCG)对人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells, HPMCs)上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响及机制。方法 不同浓度晚期糖基... 目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate, EGCG)对人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells, HPMCs)上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响及机制。方法 不同浓度晚期糖基化终产物(advanced glycation end products, AGEs)刺激HPMCs 72 h或EGCG预处理细胞1 h后用500 μg/mL AGEs处理细胞72 h,Western blot法检测E-cadherin、α-SMA和Nrf2蛋白的表达,MTT法检测细胞活力。将Nrf2特异性siRNA(si-Nrf2)转染HPMCs,同时转染无干扰作用的siRNA(si-Control)作为阴性对照组,qRT-PCR检测转染后的细胞Nrf2 mRNA表达,Western blot法检测E-cadherin、α-SMA和Nrf2蛋白表达。结果 三种浓度的AGEs均可下调E-cadherin表达,上调α-SMA表达,其中500 μg/mL AGEs对E-cadherin表达下调及α-SMA表达上调最明显。三种浓度的EGCG均可促进HPMCs生长,其中100 μg/mL EGCG对细胞生长抑制最低。与AGEs组比较,EGCG+AGEs组E-cadherin和Nrf2表达明显升高,α-SMA表达明显降低( P <0.05)。转染si-Nrf2的HPMCs中Nrf2 mRNA表达明显降低( P <0.05)。抑制Nrf2表达可减弱EGCG对HPMCs E-cadherin表达上调及α-SMA表达下调作用。结论 EGCG可通过调节Nrf2抑制HPMCs的EMT。 展开更多

关键词 人腹膜间皮细胞 表没食子儿茶素没食子酸酯 上皮-间充质转化 增殖

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丹参酮ⅡA对腹膜透析患者基质金属蛋白酶-2及金属蛋白酶组织抑制剂-1的影响 被引量：1

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作者 孙琤 张苗 蒋春明 《医学研究生学报》 CAS 2011年第9期913-918,共6页

目的基质金属蛋白酶-2（matrix metalloprote inase-2,MMP-2）及金属蛋白酶组织抑制剂-1（tissue inh ib itor of m et-alloprote inase-1,TIMP-1）失衡可导致细胞外基质沉积,是组织纤维化包括腹膜组织纤维化发生发展的重要机制之一。... 目的基质金属蛋白酶-2（matrix metalloprote inase-2,MMP-2）及金属蛋白酶组织抑制剂-1（tissue inh ib itor of m et-alloprote inase-1,TIMP-1）失衡可导致细胞外基质沉积,是组织纤维化包括腹膜组织纤维化发生发展的重要机制之一。通过体外细胞培养,观察丹参酮ⅡA对人腹膜间皮细胞增殖活性及MMP-2、TIMP-1表达的影响,并通过在腹膜透析液（peritoneal dial-ysis solution,PDS）中添加丹参酮ⅡA了解其对腹膜透析（peritoneal dialysis,PD）患者腹腔MMP-2和TIMP-1的影响。方法取6例择期手术患者的网膜体外培养腹膜间皮细胞,第3代细胞用于实验,细胞同步后分成对照组、PDS组、丹参酮ⅡA 1mg/L组（丹参酮ⅡA终浓度为1mg/L）、丹参酮ⅡA 5mg/L组（丹参酮ⅡA终浓度为5mg/L）、丹参酮ⅡA 10 mg/L组（丹参酮ⅡA终浓度为10 mg/L）5组（每组6例）进行干预。ELISA法检测各组上清液中MMP-2、TIMP-1的含量,RT-PCR检测各组细胞MMP-2、TIMP-1mRNA的表达。前瞻性观察38例持续非卧床PD患者,随机分为实验组和对照组,每组19例,进行为期6周的研究。实验组在前3周使用添加丹参酮ⅡA注射液（10mg/2L）的PDS治疗,4~6周使用常规PDS治疗,对照组均不加药治疗6周,分别在开始时、第3周末和第6周末检测2组患者透出液MMP-2、TIMP-1的浓度,并进行比较。结果与对照组比较,PDS组人腹膜间皮细胞产生MMP-2明显增加（P〈0.05）,MMP-2/TIMP-1比值明显升高（P〈0.05）,表达MMP-2 mRNA明显升高（P〈0.05）;添加丹参酮ⅡA干预后,丹参酮ⅡA 1 mg/L组、5 mg/L组、10 mg/L组MMP-2产生与PDS组比较有显著下降（P〈0.05）,MMP-2/TIMP-1比值明显下降（P〈0.05）,MMP-2mRNA表达水平显著下调（P〈0.01）,TIMP-1mRNA表达水平显著上调（P〈0.05）。用药后实验组患者透出液MMP-2较用药前有明显降低（P〈0.05）,透出液TIMP-1无明显变化,停药3周后,透出液MMP-2较用药3周后明显升高（P〈0.05）。结论丹参酮ⅡA可影响人腹膜间皮细胞MMP-2、TIMP-1mRNA的表达,调节MMP-2/TIMP-1平衡,改善人腹膜间皮细胞的增殖活性,显著降低PD患者腹腔内高MMP-2状态。 展开更多

关键词 丹参酮ⅡA 腹膜透析 人腹膜间皮细胞 基质金属蛋白酶-2 金属蛋白酶组织抑制剂-1

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微小RNA-22-3p负性调控人腹膜间皮细胞NLRP3的表达及功能

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作者 伍军 李相友 +5 位作者 封宝红 李菊霜 朱戈丽 张艳霞 毕智敏 巩雪敏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期2068-2073,共6页

目的:探讨微小RNA-22-3p(miR-22-3p)对人腹膜间皮细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)表达及功能的影响。方法:将NLRP3基因的3'-非翻译区(3'-UTR)序列及其突变体克隆到双萤光素酶报告基因载体psiCHECK2中,构建野生型... 目的:探讨微小RNA-22-3p(miR-22-3p)对人腹膜间皮细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)表达及功能的影响。方法:将NLRP3基因的3'-非翻译区(3'-UTR)序列及其突变体克隆到双萤光素酶报告基因载体psiCHECK2中,构建野生型及突变型重组双萤光素酶报告质粒,与miR-22-3p mimic和miR-22-3p in⁃hibitor共转染LPS预处理的人腹膜间皮细胞株HMrSV5,检测萤光素酶活性;HMrSV5细胞随机分为以下6组:miR-22-3p NC+LPS组、miR-22-3p NC+LPS+ATP组、miR-22-3p mimic+LPS组、miR-22-3p mimic+LPS+ATP组、miR-22-3p inhibitor+LPS组和miR-22-3p inhibitor+LPS+ATP组。RT-qPCR和Western blot检测NLRP3 mRNA和蛋白的表达,ELISA检测白细胞介素1β(IL-1β)的表达和caspase-1的活性,Western blot检测caspase-1 p20蛋白的表达。结果:NLRP3-3'-UTR野生型与miR-22-3p mimic共转染HMrSV5细胞后,萤光素酶活性较对照组降低(P<0.05);NLRP3-3'-UTR野生型与miR-22-3p inhibitor共转染HMrSV5细胞后,萤光素酶活性较对照组升高(P<0.05)。与miR-22-3p NC+LPS组比较,miR-22-3p mimic+LPS组NLRP3的mRNA和蛋白表达、IL-1β和caspase-1 p20的水平均下降且cas⁃pase-1活性减弱(P<0.05),而miR-22-3p inhibitor+LPS组NLRP3的mRNA和蛋白表达、IL-1β和caspase-1 p20的水平均上升且caspase-1的活性增强(P<0.05)。与miR-22-3p NC+LPS+ATP组比较,miR-22-3p inhibitor+LPS+ATP组NLRP3的mRNA和蛋白表达、IL-1β和caspase-1 p20的水平均上升且caspase-1的活性增强(P<0.05)。结论:miR-22-3p可负性调控人腹膜间皮细胞NLRP3的表达及功能。 展开更多

关键词 微小RNA-22-3p 核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3 人腹膜间皮细胞 腹膜透析 终末期肾脏病

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黄芪多糖对高糖腹透液诱导HMrSV5细胞凋亡的影响 被引量：10

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作者 赵君谊 单云 +4 位作者 朱晓琳 史俊 俞曼殊 李正红 盛梅笑 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2020年第10期113-117,I0032,I0033,共7页

目的观察黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对高糖腹透液(peritoneal dialysis solution,PDS)诱导人腹膜间皮细胞(HMrSV5)凋亡的影响及其抗凋亡机制。方法①体外培养HMrSV5细胞株,CCK-8法检测不同浓度PDS(1.5%、2.5%、3.0%、3.5%... 目的观察黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对高糖腹透液(peritoneal dialysis solution,PDS)诱导人腹膜间皮细胞(HMrSV5)凋亡的影响及其抗凋亡机制。方法①体外培养HMrSV5细胞株,CCK-8法检测不同浓度PDS(1.5%、2.5%、3.0%、3.5%、4.25%PDS)及不同浓度APS(50、75、100、200、300、400、500、600、800μg·mL^-1)对细胞活力的影响,根据CCK-8检测结果筛选用于后续实验PDS及APS的合适浓度;②将实验分为4组:空白组、APS(100μg·mL^-1)组、PDS(3.0%)组、PDS+APS(3.0%+100μg·mL^-1)组,相差显微镜观察细胞形态变化,通过JC-1法测定线粒体膜电位的去极化;TUNEL技术检测各组细胞凋亡情况;③Western Blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Cleaved Caspase-3蛋白的表达。结果①不同浓度PDS作用下HMrSV5细胞活力均下降,呈浓度依赖(P<0.01);25~100μg·mL^-1的APS能提高PDS对HMrSV5细胞的抑制作用,且100μg·mL^-1 APS组最显著(P<0.01)。②与空白组相比,PDS模型组细胞形态变小、拉长,细胞内出现空泡样变,线粒体膜电位下降,细胞凋亡率增加;与PDS模型组比较,PDS+APS组细胞形态有所恢复,细胞内空泡样变减轻,线粒体膜电位水平升高,细胞凋亡率降低。③与空白组相比,PDS模型组Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加,Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与PDS模型组相比,PDS+APS组Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。结论APS能改善高糖腹透液对HMrSV5细胞诱导的凋亡,其机制可能是影响与线粒体凋亡相关的Bcl-2、Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达。 展开更多

关键词 黄芪多糖 高糖腹透液 凋亡 人腹膜间皮细胞 线粒体

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左旋肉碱对高糖条件下人腹膜间皮细胞增殖、凋亡及纤维连接蛋白分泌的影响 被引量：2

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作者 马犁 马健飞 +3 位作者 丁红 樊怡 李志明 王力宁 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期357-358,366,共3页

目的:探讨左旋肉碱对高糖条件下体外培养人腹膜间皮细胞增殖、凋亡及纤维连接蛋白(FN)分泌的影响。方法:以不同浓度左旋肉碱作用体外培养人腹膜间皮细胞,MTT法测定细胞增殖,Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡,ELISA法检测培养液中F... 目的:探讨左旋肉碱对高糖条件下体外培养人腹膜间皮细胞增殖、凋亡及纤维连接蛋白(FN)分泌的影响。方法:以不同浓度左旋肉碱作用体外培养人腹膜间皮细胞,MTT法测定细胞增殖,Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡,ELISA法检测培养液中FN浓度。结果:不同浓度左旋肉碱作用24h后,0.1%左旋肉碱组细胞增殖活性显著升高(P<0.05),作用72 h后0.5%及1.0%左旋肉碱组细胞增殖活性明显降低(P<0.05)。作用48及72 h后0.05%及0.1%左旋肉碱组细胞凋亡率降低。作用24 h后0.05%左旋肉碱组培养液中FN浓度升高(P<0.05),作用72 h后左旋肉碱组培养液中FN浓度均下降(P<0.01)。结论:高糖条件下一定浓度的左旋肉碱可以促进人腹膜间皮细胞增殖、减少其凋亡。 展开更多

关键词 腹膜透析 左旋肉碱 人腹膜间皮细胞 增殖 凋亡 纤维连接蛋白

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PUMA-α蛋白在高糖诱导的人腹膜间皮细胞凋亡及纤维化中的作用 被引量：6

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作者 车明文 李凤容 +5 位作者 龚莉芳 方秀凤 邓海平 蒋希 唐亚为 王汉民 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期781-787,共7页

目的探讨p53上调凋亡调节因子(PUMA)-α蛋白在高糖刺激诱导的人腹膜间皮细胞(HPMC)凋亡及纤维化中的作用。方法以50mmol/L D型葡萄糖和甘露醇分别刺激HPMC 72h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blotting检测凋亡及纤维化相关蛋... 目的探讨p53上调凋亡调节因子(PUMA)-α蛋白在高糖刺激诱导的人腹膜间皮细胞(HPMC)凋亡及纤维化中的作用。方法以50mmol/L D型葡萄糖和甘露醇分别刺激HPMC 72h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blotting检测凋亡及纤维化相关蛋白的表达。分别以Lenti-PUMA-α和sh RNA-PUMA-α转染正常的HPMC和高糖刺激72h后的HPMC,采用流式细胞仪检测凋亡细胞数目,Western blotting检测凋亡及纤维化相关蛋白的表达。结果高糖刺激HPMC 72h后,流式细胞仪检测结果显示细胞凋亡率增加;Western blotting检测结果显示,促进凋亡及纤维化的蛋白表达增加,而抑制凋亡及纤维化的蛋白表达减少。上调PUMA-α的表达可促进HPMC的凋亡及纤维化;下调PUMA-α的表达可抑制HPMC的凋亡及纤维化(P<0.05)。结论高糖刺激通过上调PUMA-α的表达,促进了HPMC的凋亡及纤维化。 展开更多

关键词 细胞凋亡 PUMA-α蛋白 人腹膜间皮细胞

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