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应用荧光原位杂交检测人凝血因子Ⅸ在转基因小鼠染色体上的整合被引量：12: 1; 作者肖艳萍奚鹰 +1 位作者黄文英黄英《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期232-236,共5页; 应用荧光原位杂交 (FISH)技术检测两个转基因小鼠家系从F1到F4 代的整合情况。阳性转基因小鼠 98%～ 10 0 %的中期分裂相 ,85 %～ 94%的间期核出现杂交信号 ;阴性对照小鼠 10 0 %的中期分裂相、95 %～ 96 %的间期核未出现杂交信号。结... 展开更多; 关键词荧光原位杂交检测人凝血因子ⅸ 转基因小鼠染色体整合位点; 在线阅读下载PDF 职称材料

逆转录病毒载体转染的人凝血因子Ⅸ基因在人脐带组织源间充质干细胞中的表达被引量：3: 2; 作者陈晓梨董春兰 +8 位作者冯小明陈振萍周泽平许显辉赵钦军邱志勇任倩张蕾韩忠朝《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第1期184-187,共4页; 为了研究逆转录病毒(pLEGFP-N1)转染的人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)基因在人脐带间充质干细胞中的表达,应用DNA重组技术将hFⅨcDNA构建入pLEGFP-N1载体,转导入包装细胞系Pheonix细胞,应用病毒上清感染人脐带组织源间充质干细胞(hUCT-MSCs),经G41... 展开更多; 关键词逆转录病毒人凝血因子ⅸ 人脐带组织源间充质干细胞基因治疗血友病B; 在线阅读下载PDF 职称材料

人干细胞因子cDNA克隆及其在大肠杆菌中的高效表达被引量：3: 3; 作者陈卫东狄旭 +3 位作者李江宋飞陈松森梁植权《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期29-34,共6页; 以超速离心法提取的HepG2细胞总RNA为模板，应用RT-PCR技术扩增得到编码人干细胞因子（SCF）全长CDNA（约0.8kb）。克隆、序列分析确证编码人SCF膜外活性区的CDNA（约0.5kb）结构正确，构建了含有该基因的表达质粒（PBV-mhSCF）并在大... 展开更多; 关键词人干细胞因子 cdna 聚合酶链反应基因重组表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

人源载体pHrnF9介导的凝血因子Ⅸ基因在肠上皮sw480细胞中的表达被引量：2: 4; 作者杜建伟陈方平 +2 位作者夏昆文路宋永平《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第4期878-882,共5页; 本研究探索肠上皮细胞和人源载体pHrnFⅨ用于血友病B基因治疗的可能性。用含人凝血因子Ⅸ(human coagulation factorⅨ,hFⅨ)基因的人源载体质粒pHrnF9转染肠上皮细胞sw480,用RT-PCR检测mRNA的转录,荧光显微镜观察转染效率,ELISA和一期... 展开更多; 关键词肠上皮细胞sw480 人源载体pHrnF9 凝血因子ⅸ 基因治疗; 在线阅读下载PDF 职称材料

人干细胞生长因子cDNA克隆、表达和纯化及其造血种属特异性: 5; 作者原野张云生 +5 位作者李秀森郭子宽刘晓丹侯春梅唐佩弦毛宁《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第2期379-383,共5页; 人干细胞生长因子(humanstemcellgrowthfactor,hSCGF)是一种早期造血调控因子。已知人干细胞生长因子具有两种形式,包括全长分子hSCGF以及在Ca2+依赖糖识别结构域(calcium-dependentcarbohydraterecognitiondomain,CRD)内缺失78氨基酸... 展开更多; 关键词人干细胞生长因子 CRD区 cdna克隆融合表达造血种属特异性; 在线阅读下载PDF 职称材料

人凝血因子IX突变型研究现状被引量：5: 6; 作者颜景斌《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期833-838,共6页; 血友病B是一种性连锁隐性遗传病,其发病机制是位于X染色体上的人凝血因子IX(hFIX)基因发生了突变,导致血浆中hFIX含量或活性大幅下降,从而使得内源性凝血途径受到阻碍,无法进行正常的凝血。文章综述了hFIX基因及其编码蛋白质的结构和功... 展开更多; 关键词血友病B 人凝血因子ⅸ 突变凝血活性; 在线阅读下载PDF 职称材料

以山羊BLG基因调控成分构建乳腺特异性表达载体的研究: 7; 作者张恩平石玉强 +1 位作者潘庆杰刘林丽《莱阳农学院学报》 2002年第3期168-170,182,共4页; 为构建乳腺特异性表达载体 ,本研究利用PCR方法克隆了山羊BLG基因 5′调控成分 (2 .9Kb) ,包含 5′侧翼序列 (2 .1Kb) ,第一外显子及第一内含子 (80 0bp)。经序列分析后 ,用于构建表达载体。为验证此调控成分的活性 ,将人凝血因子ⅨcDN... 展开更多; 关键词基因调控成分山羊 BLG基因人凝血因子ⅸcdna 乳腺上皮细胞表达载体外源活性蛋白; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名应用荧光原位杂交检测人凝血因子Ⅸ在转基因小鼠染色体上的整合被引量：12: 1; 作者肖艳萍奚鹰黄文英黄英; 机构上海市儿童医院; 出处《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期232-236,共5页; 基金国家"8 6 3"高技术项目 (编号 2 0 0 1AA2 130 1) 上海市现代生物与新药产业发展基金 ( 9943190 4)资助; 文摘应用荧光原位杂交 (FISH)技术检测两个转基因小鼠家系从F1到F4 代的整合情况。阳性转基因小鼠 98%～ 10 0 %的中期分裂相 ,85 %～ 94%的间期核出现杂交信号 ;阴性对照小鼠 10 0 %的中期分裂相、95 %～ 96 %的间期核未出现杂交信号。结果表明 ,该FISH实验条件能对转基因整合位点进行高效特异检测。本文分析的两家系转基因小鼠均为单位点整合 ,但整合位点不同。各家系内F1到F4 代的转基因小鼠均可检出整合染色体 ,且整合位点相同 ,表明外源基因稳定整合并遗传给后代。; 关键词荧光原位杂交检测人凝血因子ⅸ 转基因小鼠染色体整合位点; Keywords fluorescence in situ hybridization (FISH) transgenic mice integration site human clotting factor ⅸ (hFⅸ); 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名逆转录病毒载体转染的人凝血因子Ⅸ基因在人脐带组织源间充质干细胞中的表达被引量：3: 2; 作者陈晓梨董春兰冯小明陈振萍周泽平许显辉赵钦军邱志勇任倩张蕾韩忠朝; 机构中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室; 出处《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第1期184-187,共4页; 基金中国科学与技术部863资助项目(2006AA02A110) 国家自然科学基金(30570357和30600238); 文摘为了研究逆转录病毒(pLEGFP-N1)转染的人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)基因在人脐带间充质干细胞中的表达,应用DNA重组技术将hFⅨcDNA构建入pLEGFP-N1载体,转导入包装细胞系Pheonix细胞,应用病毒上清感染人脐带组织源间充质干细胞(hUCT-MSCs),经G418筛选10天后获得全部的转染阳性细胞,从蛋白质水平和其功能活性上检测hFⅨ的表达。结果显示:配养上清液中可检测到hFⅨ的表达,每24小时分泌量达2.68±0.36μg/106细胞。Western blot检测表明,转导hFⅨ的hUCT-MSCs能分泌预期分子大小的hFⅨ入上清。功能性凝集测定实验表明了转导FⅨ的hUCT-MSCs2天培养上清中hFⅨ的活性为100%-130%。结论:pLEGFP-N1-hFⅨ能有效地转导hUCT-MSCs,并在其子代细胞中表达具有凝血活性的hFⅨ,这为hUCT-MSCs成为血友病B基因治疗的细胞载体研究奠定了基础。; 关键词逆转录病毒人凝血因子ⅸ 人脐带组织源间充质干细胞基因治疗血友病B; Keywords retrovirus human factor ⅸ hUCT-MSC gene therapy hemophilia B; 分类号 R554.1 [医药卫生—血液循环系统疾病] Q789 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名人干细胞因子cDNA克隆及其在大肠杆菌中的高效表达被引量：3: 3; 作者陈卫东狄旭李江宋飞陈松森梁植权; 机构中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所; 出处《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期29-34,共6页; 基金中国医学科学院基金; 文摘以超速离心法提取的HepG2细胞总RNA为模板，应用RT-PCR技术扩增得到编码人干细胞因子（SCF）全长CDNA（约0.8kb）。克隆、序列分析确证编码人SCF膜外活性区的CDNA（约0.5kb）结构正确，构建了含有该基因的表达质粒（PBV-mhSCF）并在大肠杆菌中获得高效表达。; 关键词人干细胞因子 cdna 聚合酶链反应基因重组表达; Keywords human stem cell factor cdna RT-PCR gene recombination high expression; 分类号 R394.8 [医药卫生—医学遗传学] Q784 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名人源载体pHrnF9介导的凝血因子Ⅸ基因在肠上皮sw480细胞中的表达被引量：2: 4; 作者杜建伟陈方平夏昆文路宋永平; 机构河南省肿瘤医院血液科中南大学湘雅医院血液科中南大学湘雅医院遗传学国家重点实验室; 出处《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第4期878-882,共5页; 基金国家科技部863项目(2001AA217181)的资助; 文摘本研究探索肠上皮细胞和人源载体pHrnFⅨ用于血友病B基因治疗的可能性。用含人凝血因子Ⅸ(human coagulation factorⅨ,hFⅨ)基因的人源载体质粒pHrnF9转染肠上皮细胞sw480,用RT-PCR检测mRNA的转录,荧光显微镜观察转染效率,ELISA和一期法检测蛋白表达及凝血活性。结果表明:转染后的细胞中有hFⅨmRNA的转录;荧光显微镜观察到48小时转染效率最高;ELISA法测得转染后24小时细胞上清中的hFⅨ蛋白量为(11.34±0.23)ng/(106cells.24h),第48小时hFⅨ蛋白量最高,达(29.34±1.00)ng/(106cells.24h),转染后72小时降为(12.45±0.15)ng)/(106cells.24h)。一期法结果显示转染pHrnF9的sw480细胞分泌的FⅨ有凝血活性,48小时达峰值(6.07±0.17)%/106cells,第72小时降至(1.81±0.06)%/106cells。结论:肠上皮细胞sw480转染pHrnF9质粒后可表达有凝血活性的hFⅨ,肠上皮细胞有望成为血友病B基因治疗的靶细胞。; 关键词肠上皮细胞sw480 人源载体pHrnF9 凝血因子ⅸ 基因治疗; Keywords in testinal epithelial cell sw480 human source vector pHrnF9 coagnlation factor ⅸ gene therapy; 分类号 R971.1 [医药卫生—药品] R554.1 [医药卫生—血液循环系统疾病]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名人干细胞生长因子cDNA克隆、表达和纯化及其造血种属特异性: 5; 作者原野张云生李秀森郭子宽刘晓丹侯春梅唐佩弦毛宁; 机构军事医学科学院基础医学研究所细胞生物学研究室武警江苏总队医院检验科; 出处《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第2期379-383,共5页; 基金国家高技术研究发展规划("863"计划)计划资助编号:2003AA205170; 文摘人干细胞生长因子(humanstemcellgrowthfactor,hSCGF)是一种早期造血调控因子。已知人干细胞生长因子具有两种形式,包括全长分子hSCGF以及在Ca2+依赖糖识别结构域(calcium-dependentcarbohydraterecognitiondomain,CRD)内缺失78氨基酸的截短型分子hSCGFβ。hSCGFβ的造血刺激活性具有严格的种属特异性。本研究目的在于探讨hSCGF能否协同刺激小鼠粒/单系祖细胞增殖。为克服hSCGF的cDNAGC含量较高的困难,本研究以两步PCR的方法从人胎肝cDNA文库(Clontech)中成功克隆hSCGFcDNA,进而将hSCGF成熟肽编码序列亚克隆于原核表达载体pGEX4T-2中,融合表达。研究结果表明,通过低温诱导(28℃),重组表达产物主要以可溶蛋白的形式存在于裂解上清中,利用亲和层析纯化融合表达蛋白。对重组蛋白的造血刺激活性分析表明,不同于截短型分子hSCGFβ,全长分子hSCGF能够刺激小鼠骨髓粒/单系造血祖细胞增殖。结论:hSCGFCRD不直接结合受体,可能具有其他生物学功能。; 关键词人干细胞生长因子 CRD区 cdna克隆融合表达造血种属特异性; Keywords human stem cell growth factor CRD region cdna clone fusion expression hematopoietic species specificity; 分类号 Q786 [生物学—分子生物学] Q461 [生物学—生理学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名人凝血因子IX突变型研究现状被引量：5: 6; 作者颜景斌; 机构上海交通大学医学遗传研究所; 出处《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期833-838,共6页; 基金国家863高科技研究发展项目(编号:2002AA206201)~~; 文摘血友病B是一种性连锁隐性遗传病,其发病机制是位于X染色体上的人凝血因子IX(hFIX)基因发生了突变,导致血浆中hFIX含量或活性大幅下降,从而使得内源性凝血途径受到阻碍,无法进行正常的凝血。文章综述了hFIX基因及其编码蛋白质的结构和功能,并分类详细论述了血友病B中发现的几种主要突变类型。其中包括奠基者效应造成的突变、调控区的突变、编码区的突变、内含子剪切位点的突变及另外两种较为特殊的突变,同时介绍了这些突变所造成的生物学效应。最后还简要介绍了一种能提高hFIX蛋白凝血活性的突变类型(第338位Arg→Ala),并对其应用作了展望。; 关键词血友病B 人凝血因子ⅸ 突变凝血活性; Keywords hemophilia B human coagulation factor ⅸ （hFIX） mutation clotting activity; 分类号 R554 [医药卫生—血液循环系统疾病]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名以山羊BLG基因调控成分构建乳腺特异性表达载体的研究: 7; 作者张恩平石玉强潘庆杰刘林丽; 机构西北农林科技大学动物科技学院莱阳农学院动物科学系西北农林科技大学生命科学院; 出处《莱阳农学院学报》 2002年第3期168-170,182,共4页; 文摘为构建乳腺特异性表达载体 ,本研究利用PCR方法克隆了山羊BLG基因 5′调控成分 (2 .9Kb) ,包含 5′侧翼序列 (2 .1Kb) ,第一外显子及第一内含子 (80 0bp)。经序列分析后 ,用于构建表达载体。为验证此调控成分的活性 ,将人凝血因子ⅨcDNA克隆在其下游构建表达载体 ,转化原代培养的山羊乳腺上皮细胞 ,提取细胞培养液经ELISA免疫法测定人凝血因子Ⅸ蛋白的含量高达 15ng/ml。基于此 ,可以初步断定此调控序列可以调节外源基因在乳腺细胞中特异性表达。; 关键词基因调控成分山羊 BLG基因人凝血因子ⅸcdna 乳腺上皮细胞表达载体外源活性蛋白; Keywords goatβ-lactoglobulin gene human factor ⅸcdna gland epithelia expressional vector; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	应用荧光原位杂交检测人凝血因子Ⅸ在转基因小鼠染色体上的整合	肖艳萍奚鹰黄文英黄英	《遗传》 CAS CSCD 北大核心	2002	12	在线阅读下载PDF 职称材料
2	逆转录病毒载体转染的人凝血因子Ⅸ基因在人脐带组织源间充质干细胞中的表达	陈晓梨董春兰冯小明陈振萍周泽平许显辉赵钦军邱志勇任倩张蕾韩忠朝	《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD	2009	3	在线阅读下载PDF 职称材料
3	人干细胞因子cDNA克隆及其在大肠杆菌中的高效表达	陈卫东狄旭李江宋飞陈松森梁植权	《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心	1997	3	在线阅读下载PDF 职称材料
4	人源载体pHrnF9介导的凝血因子Ⅸ基因在肠上皮sw480细胞中的表达	杜建伟陈方平夏昆文路宋永平	《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD	2008	2	在线阅读下载PDF 职称材料
5	人干细胞生长因子cDNA克隆、表达和纯化及其造血种属特异性	原野张云生李秀森郭子宽刘晓丹侯春梅唐佩弦毛宁	《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD	2006	0	在线阅读下载PDF 职称材料
6	人凝血因子IX突变型研究现状	颜景斌	《遗传》 CAS CSCD 北大核心	2005	5	在线阅读下载PDF 职称材料
7	以山羊BLG基因调控成分构建乳腺特异性表达载体的研究	张恩平石玉强潘庆杰刘林丽	《莱阳农学院学报》	2002	0	在线阅读下载PDF 职称材料