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HepG2.9706细胞内HDV核酶对HCV RNA抑制活性的初步研究 被引量:2
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作者 郭焕珍 毛青 +3 位作者 李奇芬 王宇明 顾长海 于乐成 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期960-962,共3页
目的 探讨HDV核酶在细胞内抑制HCVRNA的可能性。方法 将重组载体转染至转基因细胞HepG2 .970 6中 ,通过荧光定量PCR检测细胞和培养上清中的HCVRNA ,初步探讨HDV核酶对HCVRNA的抑制活性。结果 ①RzC1,RzC2 ,RzC3 3组HDV核酶定向插入... 目的 探讨HDV核酶在细胞内抑制HCVRNA的可能性。方法 将重组载体转染至转基因细胞HepG2 .970 6中 ,通过荧光定量PCR检测细胞和培养上清中的HCVRNA ,初步探讨HDV核酶对HCVRNA的抑制活性。结果 ①RzC1,RzC2 ,RzC3 3组HDV核酶定向插入到真核表达载体。②在转基因细胞HepG2 .970 6中 ,pC1 RzC1、pC1 RzC2、pC1 RzC3对HCV 5′NCR CRNA抑制活性分别为 69.2 %,3 8.7%、4.2 %。结论 ①成功构建了 3个HDV核酶重组表达载体。②pC1 RzC1、pC1 RzC2在转基因细胞HepG2 .970 6具有抑制HCV 5′NCR 展开更多
关键词 核酶 hdv核酶 丙型肝炎 荧光定量PCR
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剪切HCV RNA的HDV核酶的设计及活性测定 被引量:1
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作者 于乐成 顾长海 +3 位作者 毛青 李奇芬 王宇明 郭焕珍 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期312-314,共3页
目的 探讨丁型肝炎病毒 (HepatitisDvirus ,HDV)核酶用于抗丙型肝炎病毒 (HepatitisCvirus ,HCV)基因治疗的可能性。方法 以HDV基因组核酶的假结样结构为基础 ,优化其茎Ⅳ区 ,改建其底物结合区 ,获得 3种针对HCVRNA的HDV核酶RzC1、Rz... 目的 探讨丁型肝炎病毒 (HepatitisDvirus ,HDV)核酶用于抗丙型肝炎病毒 (HepatitisCvirus ,HCV)基因治疗的可能性。方法 以HDV基因组核酶的假结样结构为基础 ,优化其茎Ⅳ区 ,改建其底物结合区 ,获得 3种针对HCVRNA的HDV核酶RzC1、RzC2 和RzC3 。体外转录获取含HCVRNA 5’ 非编码区 ( 5’ noncodingregion ,5’ NCR)及部分C区在内的底物RNA(HCVRNA 5’ NCR C) ,并进行 5’端放射性标记。在pH 7.5、37℃、Mg2 + 2 0mmol/L和去离子甲酰胺 2 .5mol/L等条件下 ,将核酶和底物按摩尔比 1 0 0∶1混合 ,在不同的时间点观察剪切百分率。结果 RzC1、RzC2 对底物的剪切百分率随时间延长而递增 ,90min时分别达 2 4.9%、2 0 .3% ;未观察到RzC3 有剪切活性。 展开更多
关键词 丁型肝炎病毒 核酮 基因组 丙型肝炎病毒 基因治疗 剪切活性 HCV-RNA
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我国部分地区慢性HBV感染者HDV感染情况调查 被引量:9
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作者 刘玉梅 郭小平 +15 位作者 张慧敏 白洪霞 王春梅 任姗 蒋永芳 杨胜 彭锋 王晓忠 于雷 廖柏明 宁玲 何英利 杨霞 黄亮 刘学恩 庄辉 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2023年第4期795-803,共9页
目的了解目前我国部分地区慢性HBV感染者丁型肝炎病毒(HDV)感染流行情况。方法2021年3月—2022年6月从全国10个省市自治区收集3131例慢性HBV感染者血清,用抗-HDV IgG酶联免疫试剂检测全部血清标本。对抗-HDV IgG阳性标本用巢式逆转录聚... 目的了解目前我国部分地区慢性HBV感染者丁型肝炎病毒(HDV)感染流行情况。方法2021年3月—2022年6月从全国10个省市自治区收集3131例慢性HBV感染者血清,用抗-HDV IgG酶联免疫试剂检测全部血清标本。对抗-HDV IgG阳性标本用巢式逆转录聚合酶链式反应(nRT-PCR)法检测HDV RNA。对HDV RNA阳性标本的nRT-PCR扩增产物测序后进行序列分析,确定HDV基因型。分析抗-HDV IgG阳性患者的临床特征。计量资料两组间比较采用Mann-Whitney U秩和检验。计数资料两组间比较采用χ^(2)检验或Fisher精确检验。结果3131例慢性HBV感染者的抗-HDV IgG阳性率为0.70%(22/3131),内蒙古自治区、新疆维吾尔自治区、北京市和湖南省慢性HBV感染者的抗-HDV IgG阳性率分别为1.81%(16/886)、0.88%(2/226)、0.28%(2/708)和1.00%(2/200),其中内蒙古自治区慢性HBV感染者抗-HDV IgG阳性率显著高于北京市(P=0.004),其余地区间比较差异均无统计学意义(P值均>0.05)。对内蒙古自治区慢性HBV感染者临床特征分析发现,抗-HDV IgG阳性组蒙古族患者(P=0.001)、ALT异常患者(P=0.007)和抗病毒治疗患者(P=0.029)的比例显著高于抗-HDV IgG阴性组,而中位HBV DNA水平明显较低(P=0.030)。共检出19例HDV RNA阳性标本,均为HDV基因1型。结论我国不同地区HDV流行率差异较大,内蒙古自治区慢性HBV感染者中HDV流行率较高。我国北方部分省市的HDV流行基因型主要为1型。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 δ肝炎病毒 抗-hdv IgG 基因型
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞传代毒株反向遗传系统的优化 被引量:1
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作者 李燕华 韦祖樟 +1 位作者 谭菲菲 袁世山 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第3期13-20,共8页
反向遗传系统已成为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndromevirus,PRRSV)结构与功能非常重要的手段,并且在设计基因工程疫苗中发挥不可替代的作用。因而,有效提高感染性克隆拯救病毒的效率和稳定性... 反向遗传系统已成为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndromevirus,PRRSV)结构与功能非常重要的手段,并且在设计基因工程疫苗中发挥不可替代的作用。因而,有效提高感染性克隆拯救病毒的效率和稳定性以及降低经济成本是一个急需解决的课题。本研究在已构建完成的高致病性PRRSV细胞传代毒株反向遗传系统(pAJXM)的基础上,做了以下三方面的工作:(1)将T7启动子换成hCMV(人类巨细胞病毒,Human cytomegalovirus)启动子,从而全长cDNA克隆不需经过体外转录成mRNA的过程,直接通过DNA转染MARC-145细胞拯救病毒;(2)研究hCMV启动子的TATA框与病毒基因组5末端之间最佳的碱基数目,使体内转染获得的病毒基因组5末端序列为病毒的真实序列;(3)在病毒基因组3末端添加丁型肝炎病毒核酶(delta hepatitis virus ribozyme,HDVr)序列,体内转染获得的病毒基因组3末端的非病毒序列通过核酶自动去除。研究发现,基于DNA转染的反向操作系统是可行的,并且hCMV启动子的TATA框与病毒基因组5末端之间的碱基数目设置为25和在病毒基因组3末端添加HDVr序列后,能够有效地提高全长感染性cDNA克隆的病毒拯救效率和稳定性。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 反向遗传系统 人类巨细胞病毒启动子 丁型肝炎病毒核酶
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反义寡核苷酸体外抗丁型肝炎病毒的初步研究
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作者 邹正升 王升启 +6 位作者 陈菊梅 马立人 施红 韩凤连 程云 雷周云 王玉芝 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第5期326-329,共4页
以质粒(sSVLD3)为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增得到一条139bp的片段,它含有丁型肝炎病毒(HDV)基因组RNA中核酶(ribozyme)区的cDNA,该核酶具有自身裂解功能,将上述片段插入到pGEM-... 以质粒(sSVLD3)为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增得到一条139bp的片段,它含有丁型肝炎病毒(HDV)基因组RNA中核酶(ribozyme)区的cDNA,该核酶具有自身裂解功能,将上述片段插入到pGEM-3Z中,经筛选、鉴定,得到一重组质粒(pHDV108),经测序发现有2个碱基变异,以该质粒为模板,通过T7RNA聚合酶,转录出核酶的前体,并观察到其自身裂解产物,自裂率达71%。针对核酶两个重要的单链区,设计并合成二条反义寡核背酸(ASON),当在转录反应中同时加入ASON后,核酶的自裂率下降均较明显,当ASON浓度为16umo1/L时,核酶自裂抑制率均在70%以上。提示,ASON可与核酶两个重要的单链区结合,从而抑制核酶的自裂活性。 展开更多
关键词 反义寡核苷酸 丁型肝炎病毒 丁型肺炎 基因治疗
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