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筛选hALR的相互作用蛋白基因(英) 被引量:3
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作者 陈思强 姚汝华 +1 位作者 佟明华 孔祥平 《华南理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第4期17-22,共6页
为筛选与人肝再生增强因子(hALR)相互作用蛋白的基因,探讨肝再生增强因子在肝再生过程中的分子生物学机制,将人肝再生增强因子基因的开放读码框片断,重组入载体pGBKT7构建成“诱饵”质粒pGBKT7-hALR,然后用酵母双杂交系统从预转化酵母菌... 为筛选与人肝再生增强因子(hALR)相互作用蛋白的基因,探讨肝再生增强因子在肝再生过程中的分子生物学机制,将人肝再生增强因子基因的开放读码框片断,重组入载体pGBKT7构建成“诱饵”质粒pGBKT7-hALR,然后用酵母双杂交系统从预转化酵母菌Y187的成人肝细胞cDNA文库中筛选与人肝再生增强因子相互作用蛋白的基因.筛出的阳性克隆基因序列被测出后,经GenBank查询,结果发现它们分别是血清白蛋白、金属硫蛋白、硒蛋白类似物、Na+/K+ ATPase和一个未知功能的蛋白的部分序列.这初步克隆了与hALR相互作用的蛋白基因,为进一步探讨ALR在肝再生过程中的作用机制奠定了基础. 展开更多
关键词 酵母双杂交系统 人肝再生增强因子 halr 相互作用蛋白 基因筛选 分子生物学 作用机制
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应用酵母双杂交系统发现hALR与Na^+,K^+-ATPase间的相互作用 被引量:3
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作者 佟明华 陈思强 +1 位作者 姚汝华 孔祥平 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期310-313,共4页
目的 :采用酵母双杂交系统寻找与人肝再生增强因子 (hALR)相互作用的蛋白质 ,探讨ALR的作用机理。方法 :构建hALR诱饵质粒pGBKT7-hALR ,醋酸锂法转化AH10 9酵母菌 ,转化菌在SD/ -Trp -His培养基上培养及滤纸法 β一半乳糖苷酶活性检测... 目的 :采用酵母双杂交系统寻找与人肝再生增强因子 (hALR)相互作用的蛋白质 ,探讨ALR的作用机理。方法 :构建hALR诱饵质粒pGBKT7-hALR ,醋酸锂法转化AH10 9酵母菌 ,转化菌在SD/ -Trp -His培养基上培养及滤纸法 β一半乳糖苷酶活性检测排除自身激活作用后 ,与人肝cDNA文库质粒预转化的酵母菌Y187进行接合试验 ,接合产物在QDO培养基上筛选 ,阳性克隆进一步在含X -α -Gal的QDO平板上鉴定 ,X -α -Gal活性呈阳性的克隆 ,进行PCR及酶切鉴定排除完全相同克隆 ,进一步进行回交试验排除假阳性 ,对阳性克隆进行序列测定和生物信息学分析。结果 :得到数个阳性克隆 ,序列分析结果表明其中 1个阳性克隆是Na+ ,K+ -ATPaseβ亚基部分基因 ,长669bp ,3′端非编码区 2 2 4bp ,编码区长 44 5bp ,编码Na+ ,K+ -ATPaseβ亚基C端的 147个氨基酸残基。 结论 :应用酵母双杂交系统筛选出Na+ ,K+ -ATPase与hALR具有相互作用。 展开更多
关键词 酵母双杂交系统 halr NA^+ K^+-ATPase 肝再生增强因子
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河套蜜瓜花粉管通道法转化hALR基因 被引量:1
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作者 张立全 哈斯阿古拉 +1 位作者 扈廷茂 刘明秋 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期70-73,共4页
为利用河套蜜瓜为生物反应器生产可用于治疗肝病的蛋白因子,以人胎肝mRNA为模板,经RT-PCR扩增获得了471 bp cDNA片段。克隆到pMD18-T载体,命名为pMD-ALR,测序分析结果与GenBank中报道的hALR编码序列完全相同。酶切回收hALR片段,插入到... 为利用河套蜜瓜为生物反应器生产可用于治疗肝病的蛋白因子,以人胎肝mRNA为模板,经RT-PCR扩增获得了471 bp cDNA片段。克隆到pMD18-T载体,命名为pMD-ALR,测序分析结果与GenBank中报道的hALR编码序列完全相同。酶切回收hALR片段,插入到含有甜瓜果实黄瓜素(Cucumisin)基因启动子的果实特异性表达载体pPZP-CGN中,构建了hALR甜瓜果实特异性表达载体pPZP-CAN。花粉管通道法转化试验大田自花授粉花63朵,收获T0代果实27颗,结实率为42.9%。提取T0代种子无菌苗DNA,经PCR、PCR-southern和斑点杂交检测有13株呈阳性。 展开更多
关键词 人肝再生增强因子 果实特异性 花粉管通道法 河套蜜瓜
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重组人肝再生增强因子对肝星状细胞基质分解素-1及其抑制因子基因表达的调节 被引量:4
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作者 王爱民 韩涛 +5 位作者 杨晓明 江龙安 王清明 陈惠鹏 贺福初 王宝恩 《解放军医学杂志》 CSCD 北大核心 2000年第4期284-287,共4页
关键词 肝纤维化 halr 基因表达 TIMP1 MMP3
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IPTG诱导浓度对重组人肝再生增强因子基因表达的影响 被引量:11
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作者 赵春丽 范秀军 +3 位作者 赵冰 于洋 李庆章 郝艳红 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2004年第4期441-445,共5页
以人肝再生增强因子(humanaugmenterofliverregeneration,hALR)基因与含有T7启动子的融合表达载体pET28a(+)相连的重组子(pET-A)作为研究对象,转化大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG作为诱导剂,分析比较不同IPTG诱导浓度对于表达产物的影响,... 以人肝再生增强因子(humanaugmenterofliverregeneration,hALR)基因与含有T7启动子的融合表达载体pET28a(+)相连的重组子(pET-A)作为研究对象,转化大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG作为诱导剂,分析比较不同IPTG诱导浓度对于表达产物的影响,以确定最佳的IPTG诱导浓度。结果表明,当IPTG终浓度为1.0mmol·L-1时,hALR表达量最大。这为IPTG作为诱导剂最终应用于重组基因工程药物的工业化生产提供了可靠的实验依据。 展开更多
关键词 人肝再生增强因子 诱导浓度 外源蛋白 表达
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利用5′-RACE技术进行人肝再生增强因子相互作用肽cDNA5′末端快速扩增及序列分析 被引量:2
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作者 邓建川 刘杞 +3 位作者 陈曜 孙航 唐琳 王娜 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2006年第4期463-465,共3页
目的:利用5′-RACE技术进行人肝再生增强因子(hALR)相互作用肽cDNA5′末端快速扩增并进行序列分析。方法:按照5′-RACE试剂盒(Takara)操作流程进行hALR相互作用肽cDNA5′末端快速扩增,用BLAST技术对扩增序列进行生物信息学分析。结果:... 目的:利用5′-RACE技术进行人肝再生增强因子(hALR)相互作用肽cDNA5′末端快速扩增并进行序列分析。方法:按照5′-RACE试剂盒(Takara)操作流程进行hALR相互作用肽cDNA5′末端快速扩增,用BLAST技术对扩增序列进行生物信息学分析。结果:成功获取487bp的5′-RACE反应产物,其中5′端延伸了275bp,同源序列分析表明与人Citron激酶mRNA高度同源。结论:5′-RACE技术可以用于快速有效扩增已知部分cDNA序列的5′末端,Citron激酶可能是与hALR具有相互作用的蛋白。 展开更多
关键词 5′-RACE 人肝再生增强因子 相互作用肽 CDNA
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汽车半轴凸缘的模糊可靠性设计
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作者 杨清文 刘建军 张文杰 《汽车技术》 北大核心 2001年第10期11-12,共2页
汽车半轴凸缘是受弯扭联合作用的联接零件,其强度、载荷及实际尺寸具有不确定性。文中运用模糊可靠性设计理论,在隶属函数和基本随机变量概率特性已知的情况下,导出了汽车半轴凸缘的模糊可靠性设计公式,并给出了计算实例。应用模糊可靠... 汽车半轴凸缘是受弯扭联合作用的联接零件,其强度、载荷及实际尺寸具有不确定性。文中运用模糊可靠性设计理论,在隶属函数和基本随机变量概率特性已知的情况下,导出了汽车半轴凸缘的模糊可靠性设计公式,并给出了计算实例。应用模糊可靠性设计理论,可以提高设计水平、节省材料、降低成本,符合汽车轻量化的发展方向。 展开更多
关键词 模糊技术 可靠性 设计 汽车 半轴凸缘
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肝再生增强因子RNAi对肝癌细胞株HepG2表达MHCI、DR、CD80、CD86的影响
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作者 谢松丽 张云霞 +1 位作者 孙航 刘杞 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期122-126,共5页
利用肝再生增强因子(augmenter of liver regeneration,ALR)的siRNA阻断人肝癌细胞株HepG2表达ALR,观察HepG2细胞MHCI、DR、CD80、CD86的表达是否受影响,以探讨ALR是否通过影响MHCI、DR、CD80、CD86表达参与肝癌细胞逃避机体的免疫监视... 利用肝再生增强因子(augmenter of liver regeneration,ALR)的siRNA阻断人肝癌细胞株HepG2表达ALR,观察HepG2细胞MHCI、DR、CD80、CD86的表达是否受影响,以探讨ALR是否通过影响MHCI、DR、CD80、CD86表达参与肝癌细胞逃避机体的免疫监视。培养HepG2,分为未转染组、转染阳性SiRNA组、转染阴性SiRNA组、转染脂质体空质粒组;RT-PCR检测转染前后hALR mRNA的表达,RT-PCR、Western blot印迹法、流式细胞术(FCM)检测HepG2细胞表达MHCI、DR、CD80、CD86的水平。结果表明,转染阳性SiRNA组hALR mRNA的表达较转染阴性SiRNA组明显下降,转染阳性SiRNA组和转染阴性SiRNA组MHCI、DR、CD80、CD86的表达均无差异;脂质体转染组除CD80 mRNA外,MHCI、DR、CD86 mRNA表达均较未转染组增高;脂质体转染组MHCI、DR、CD80、CD86的表达水平均较未转染组有上升趋势。因此,阳性SiRNA具有显著和特异性抑制hALR表达的作用,阻断ALR的表达不影响HepG2细胞表达MHCI、DR、CD80、CD86,ALR不通过影响MHCI、DR、CD80、CD86的表达参与肝癌细胞逃避机体免疫监视。转染载体可能影响某些基因的表达。 展开更多
关键词 人肝再生增强因子 RNA干扰 主要组织相容性复合体B7
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