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原矛头蝮蛇毒中一个新颖双链纤溶酶的分离纯化与性质研究
被引量：
8
1
作者
季仁升
孙黔云
乙引
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期818-823,共6页
目的从原矛头蝮蛇毒中寻找新型纤溶酶,对其理化性质与生物学活性进行研究,以了解其在蛇伤中的作用与毒性机制,并评估其潜在的应用价值。方法采用蛋白层析技术分离纯化获得目标蛋白,检测其分子量、等电点、肽指纹图谱、多种蛋白水解活性...
目的从原矛头蝮蛇毒中寻找新型纤溶酶,对其理化性质与生物学活性进行研究,以了解其在蛇伤中的作用与毒性机制,并评估其潜在的应用价值。方法采用蛋白层析技术分离纯化获得目标蛋白,检测其分子量、等电点、肽指纹图谱、多种蛋白水解活性、抗补体活性、出血活性、水肿活性及对流血时间的影响。结果通过阴离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和层析从原矛头蝮蛇毒中纯化出一个酸性纤溶酶PMSP-A,它是由两条等电点分别为5.7与6.1的非均等肽链共价结合而成。SDS-PAGE和凝胶过滤测定其分子量分别为26.1 ku与25.3 ku。肽指纹图谱分析表明PMSP-A与黄绿烙铁头蛇毒中的血液凝固结合因子有部分序列吻合。PMSP-A能够依次降解纤维蛋白原的Bβ、Aα链,该活性能被PMSF、1,10-phenanthroline抑制,EDTA、EGTA、SBTI不能抑制其活性。PMSP-A具有纤维蛋白、精氨酸酯水解活性,没有偶氮酪蛋白水解活性。它还具有抗补体活性。动物实验表明,PMSP-A明显延长小鼠尾静脉流血时间,能诱导小鼠足趾轻度水肿,无皮下出血活性。结论 PMSP-A是一个新颖的原矛头蝮蛇毒双链丝氨酸蛋白酶,具有多种影响机体的生物学活性。
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关键词
蛇毒丝氨酸蛋白酶
纤溶酶
抗凝活性
纤维蛋白(原)水解活性
抗补体活性
蛇伤
蛇毒
原矛头蝮蛇
烙铁头蛇
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职称材料
C端序列的删除对非出血重组蛇毒纤溶酶的影响
被引量：
1
2
作者
马涛
邱鹏新
颜光美
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第4期404-408,共5页
【目的】研究C端序列对非出血重组纤溶酶(rFⅡ)特异性、活性和热敏感性的影响。【方法】通过SOEingPCR方法构建删除C端序列的突变体,突变体和rFⅡ分别在P.pastoris中诱导表达。表达和纯化的蛋白用SDS-PAGE和Westerenblot进行鉴定。之后...
【目的】研究C端序列对非出血重组纤溶酶(rFⅡ)特异性、活性和热敏感性的影响。【方法】通过SOEingPCR方法构建删除C端序列的突变体,突变体和rFⅡ分别在P.pastoris中诱导表达。表达和纯化的蛋白用SDS-PAGE和Westerenblot进行鉴定。之后分析其生化特性。【结果】rFⅡ及突变体通过SDS-PAGE和Westerenblot得到证实。生化分析揭示:①突变体对显色底物N-(p-Tosyl)-Gly-Pro-Lys-pNA的催化效率(Kcat/Km)是rFⅡ的1.9倍;②突变体和rFⅡ对氧化的胰岛素B链拥有共同的优先裂解位点,可是在随后的裂解中开始展现差异;③突变体显示了更高的纤(原)活性;④热处理表明突变体相较rFⅡ对温度的增加更敏感;⑤通过圆二色谱测量,突变体的螺旋比例有所增加。【结论】删除的序列参与rFⅡ的特异性、活性和热敏感性,该序列可作为下一步优化的候选序列。
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关键词
血重组
蛇毒纤溶酶
序列
删除
C端
PASTORIS
SDS-PAGE
热敏感性
突变体
blot
PCR方法
胰岛素B链
诱导表达
生化特性
生化分析
裂解位点
圆二色谱
特异性
rF
活性
热处理
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职称材料
题名
原矛头蝮蛇毒中一个新颖双链纤溶酶的分离纯化与性质研究
被引量：
8
1
作者
季仁升
孙黔云
乙引
机构
贵州师范大学生命科学学院
贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室
出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期818-823,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(No30560035)
贵州省科技计划资助项目(No黔科合SY(2010)3050号)
贵州省优秀青年科技人才资助项目(No黔科合人字2005-0510)
文摘
目的从原矛头蝮蛇毒中寻找新型纤溶酶,对其理化性质与生物学活性进行研究,以了解其在蛇伤中的作用与毒性机制,并评估其潜在的应用价值。方法采用蛋白层析技术分离纯化获得目标蛋白,检测其分子量、等电点、肽指纹图谱、多种蛋白水解活性、抗补体活性、出血活性、水肿活性及对流血时间的影响。结果通过阴离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和层析从原矛头蝮蛇毒中纯化出一个酸性纤溶酶PMSP-A,它是由两条等电点分别为5.7与6.1的非均等肽链共价结合而成。SDS-PAGE和凝胶过滤测定其分子量分别为26.1 ku与25.3 ku。肽指纹图谱分析表明PMSP-A与黄绿烙铁头蛇毒中的血液凝固结合因子有部分序列吻合。PMSP-A能够依次降解纤维蛋白原的Bβ、Aα链,该活性能被PMSF、1,10-phenanthroline抑制,EDTA、EGTA、SBTI不能抑制其活性。PMSP-A具有纤维蛋白、精氨酸酯水解活性,没有偶氮酪蛋白水解活性。它还具有抗补体活性。动物实验表明,PMSP-A明显延长小鼠尾静脉流血时间,能诱导小鼠足趾轻度水肿,无皮下出血活性。结论 PMSP-A是一个新颖的原矛头蝮蛇毒双链丝氨酸蛋白酶,具有多种影响机体的生物学活性。
关键词
蛇毒丝氨酸蛋白酶
纤溶酶
抗凝活性
纤维蛋白(原)水解活性
抗补体活性
蛇伤
蛇毒
原矛头蝮蛇
烙铁头蛇
Keywords
snake venom serine proteinases
fibrin
olysin
anticoagulant
activity
fibrin（ogen）olytic activity
anticomplementary
activity
snake bite
snake venom
Protobothrops mucrosquamatus
Trimeresurus mucrosquamatus
分类号
R345.63 [医药卫生—基础医学]
R973.2 [医药卫生—药品]
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职称材料
题名
C端序列的删除对非出血重组蛇毒纤溶酶的影响
被引量：
1
2
作者
马涛
邱鹏新
颜光美
机构
中山大学基础医学院药理学教研室
出处
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第4期404-408,共5页
基金
广东省科技厅计划资助项目(2003A10905)
文摘
【目的】研究C端序列对非出血重组纤溶酶(rFⅡ)特异性、活性和热敏感性的影响。【方法】通过SOEingPCR方法构建删除C端序列的突变体,突变体和rFⅡ分别在P.pastoris中诱导表达。表达和纯化的蛋白用SDS-PAGE和Westerenblot进行鉴定。之后分析其生化特性。【结果】rFⅡ及突变体通过SDS-PAGE和Westerenblot得到证实。生化分析揭示:①突变体对显色底物N-(p-Tosyl)-Gly-Pro-Lys-pNA的催化效率(Kcat/Km)是rFⅡ的1.9倍;②突变体和rFⅡ对氧化的胰岛素B链拥有共同的优先裂解位点,可是在随后的裂解中开始展现差异;③突变体显示了更高的纤(原)活性;④热处理表明突变体相较rFⅡ对温度的增加更敏感;⑤通过圆二色谱测量,突变体的螺旋比例有所增加。【结论】删除的序列参与rFⅡ的特异性、活性和热敏感性,该序列可作为下一步优化的候选序列。
关键词
血重组
蛇毒纤溶酶
序列
删除
C端
PASTORIS
SDS-PAGE
热敏感性
突变体
blot
PCR方法
胰岛素B链
诱导表达
生化特性
生化分析
裂解位点
圆二色谱
特异性
rF
活性
热处理
Keywords
snake venom
fibrin
(
ogen
)
olytic
enzyme, recombinant
metalloprotease
C-terminal sequence
deletion
分类号
R544.1 [医药卫生—心血管疾病]
R973.2 [医药卫生—药品]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
原矛头蝮蛇毒中一个新颖双链纤溶酶的分离纯化与性质研究
季仁升
孙黔云
乙引
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
8
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
C端序列的删除对非出血重组蛇毒纤溶酶的影响
马涛
邱鹏新
颜光美
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2005
1
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职称材料
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