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肌动蛋白基因在棉花纤维中的作用研究 被引量:8
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作者 范小平 范博红 +2 位作者 李学宝 杨维才 徐子勤 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第5期73-75,共3页
运用农杆菌介导法将肌动蛋白RNAi表达载体PBI121-GhACT1转化棉花,经胚胎发生获得再生植株。非转化组培再生苗作为对照。以NPTII制备探针,Southern杂交结果表明,获得8个独立遗传转化系,其中3个系有2个拷贝插入;其余6个系为多拷贝。显微... 运用农杆菌介导法将肌动蛋白RNAi表达载体PBI121-GhACT1转化棉花,经胚胎发生获得再生植株。非转化组培再生苗作为对照。以NPTII制备探针,Southern杂交结果表明,获得8个独立遗传转化系,其中3个系有2个拷贝插入;其余6个系为多拷贝。显微镜下观察开花后第5天的幼胚珠孔端,对照纤维长度约是RNAi载体转基因的3-5倍。成熟后绒长F测验结果表明,RNAi载体转化株与对照差异显著,RNAi转基因植株的绒长显著短于对照。说明GhACT1基因对纤维有延缓和抑制作用,并且主要作用于纤维发育早期。 展开更多
关键词 RNAi表达载体 肌动蛋白 转化 绒长
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动态压应力对大鼠干骺端软骨干细胞PTHrP mRNA表达的影响
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作者 宗军 张玉玲 +3 位作者 白广超 金宏亮 雷堃 李宽新 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期509-513,共5页
目的研究动态压应力对大鼠干骺端软骨干细胞甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)mRNA表达的影响,进一步探索纤维形肌动蛋白(F-actin)是否参与该力学信号转导过程。方法免疫磁珠法分离培养大鼠干骺端软骨干细胞。第3代大鼠干骺端软骨干细胞按照... 目的研究动态压应力对大鼠干骺端软骨干细胞甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)mRNA表达的影响,进一步探索纤维形肌动蛋白(F-actin)是否参与该力学信号转导过程。方法免疫磁珠法分离培养大鼠干骺端软骨干细胞。第3代大鼠干骺端软骨干细胞按照动态压应力强度的大小随机分为4组:0%、3%、6%、12%形变组,使用自行制备的动态压应力培养装置对各组细胞施加不同强度的压应力刺激24h,流式细胞术检测各组细胞周期分布及凋亡率,实时定量PCR检测各组细胞PTHrP mRNA表达水平。进一步,第3代大鼠干骺端软骨干细胞按照是否施加压应力及细胞骨架松弛素D随机分为4组:对照组、单纯压应力组(6%形变)、压应力+细胞骨架松弛素D组、单纯细胞骨架松弛素D组,各组细胞施加干预24h后以鬼笔环肽染F-actin纤维,置于激光共聚焦显微镜下观察,以及实时定量PCR检测各组细胞PTHrP mRNA表达水平。结果流式细胞术结果显示:0%、3%、6%、12%形变组细胞G0/G1、G2/M及S期比例差异无统计学意义(P>0.05);3%、6%形变组凋亡率与0%形变组相比,差异无统计学意义(P>0.05),12%形变组凋亡率明显高于对照组(P<0.05)。激光共聚焦显微镜观察结果表明:单纯压应力组F-actin纤维排列较对照组整齐,相互平行,与受力方向趋于一致;压应力+细胞骨架松弛素D组及单纯细胞骨架松弛素D组细胞内F-actin纤维结构破坏,相互聚集缠绕成团块状。实时定量PCR结果显示:3%形变组细胞PTHrP mRNA表达水平与0%形变组差异无统计学意义(P>0.05),6%及12%形变组细胞PTHrP mRNA表达量明显高于0%形变组(P<0.05);单纯压应力组细胞PTHrP mRNA表达量明显高于对照组(P<0.05),单纯细胞骨架松弛素D组细胞PTHrP mRNA表达量与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),压应力+细胞骨架松弛素D组细胞PTHrP mRNA表达量高于对照组,但低于单纯压应力组(P<0.05)。结论适当强度的动态压应力可以上调大鼠干骺端软骨干细胞PTHrP mRNA表达,在该力学信号转导过程中有F-actin的参与。 展开更多
关键词 动态压应力 干骺端 软骨干细胞 甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP) 肌动蛋白纤维(f-actin)
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棉花GhWLIM5在棉纤维发育中的功能分析 被引量:1
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作者 张世鹏 刘文丽 +2 位作者 程昌豪 李学宝 李扬 《山西农业科学》 2023年第9期974-982,共9页
LIM结构域蛋白是重要的发育调控因子,常作为肌动蛋白结合蛋白(F-Actin)参与调控细胞骨架建成。为了进一步研究GhWLIM5在棉纤维中的生物学功能,通过研究棉花的遗传转化并获得相应的转基因植株,同时对多株转基因植株进行表型分析,并通过... LIM结构域蛋白是重要的发育调控因子,常作为肌动蛋白结合蛋白(F-Actin)参与调控细胞骨架建成。为了进一步研究GhWLIM5在棉纤维中的生物学功能,通过研究棉花的遗传转化并获得相应的转基因植株,同时对多株转基因植株进行表型分析,并通过分子试验对棉花LIM蛋白GhWLIM5在棉花纤维发育中的功能进行相关研究。结果表明,与野生型相比,抑制GhWLIM5表达的GhWLIM5 RNAi转基因棉花纤维中肌动蛋白细胞骨架较为稀疏,细胞生长速度降低,成熟纤维较短,纤维强度较弱。通过低速共沉淀检测发现,GhWLIM5促进F-Actin成束的能力与pH环境密切相关,随着pH值的升高,GhWLIM5促进F-Actin成束的能力逐渐下降。高速共沉淀结果显示,加入同等浓度F-Actin的情况下,经高速离心,GhXLIM6存在于沉淀中的比例明显高于GhWLIM5,说明GhWLIM5结合F-Actin的能力弱于GhXLIM6。纤维品质分析表明,抑制GhWLIM5的表达还会影响棉纤维次生壁的发育;但实时荧光定量结果显示,与野生型相比,转基因棉花纤维中这些纤维素合酶基因GhCESA4/7/8的表达并未发生明显变化,说明GhWLIM5可能不直接影响棉纤维次生壁发育。研究结果揭示,GhWLIM5通过结合并维持动态的F-Actin细胞骨架在棉纤维伸长生长中起重要作用。 展开更多
关键词 陆地棉 纤维伸长生长 肌动蛋白细胞骨架 LIM蛋白
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去氢木香烃内酯通过抑制TGF-β1/Smad2/3通路改善单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化
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作者 黎忠大 王舒泓 +4 位作者 谭宏伟 王晓 庄锦炀 申升 孙其鹏 《器官移植》 2025年第5期763-770,共8页
目的 探讨去氢木香烃内酯(DHL)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化(RIF)的作用机制。方法 将44只雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、单纯药物干预组(Sham+DHL组)、实验组(UUO+Vehicle组)和DHL治疗组(UUO+DHL组),每组11只,分别进... 目的 探讨去氢木香烃内酯(DHL)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化(RIF)的作用机制。方法 将44只雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、单纯药物干预组(Sham+DHL组)、实验组(UUO+Vehicle组)和DHL治疗组(UUO+DHL组),每组11只,分别进行假手术、假手术+腹腔注射DHL[10 mg/(kg·d)]、UUO造模+腹腔注射等量溶剂、UUO造模+腹腔注射DHL[10 mg/(kg·d)],手术造模2 d后连续用DHL或等量溶剂灌胃14 d。通过苏木素-伊红(HE)和Masson染色观察大鼠肾组织病理学改变;免疫组织化学染色检测collagenⅠ、collagenⅢ及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平;蛋白质印迹法检测转化生长因子(TGF)-β1/Smad2/3通路蛋白水平。结果 与UUO+Vehicle组比较,DHL治疗缓解大鼠肾间质病理损伤,减少胶原纤维沉积以及collagen I、collagen III、α-SMA表达,同时抑制TGF-β1和Smad2/3蛋白的表达。结论 DHL通过抑制TGF-β1/Smad2/3通路减轻大鼠RIF,为慢性肾病的治疗提供新策略。 展开更多
关键词 去氢木香烃内酯 转化生长因子-β1 胶原纤维 单侧输尿管梗阻 肾间质纤维化 胶原蛋白 α-平滑肌肌动蛋白 慢性肾病
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