fps基因过量表达对烟叶类胡萝卜素生物合成的影响 被引量：7

1

作者 王冰莹 杨永霞 +3 位作者 闫鼎 滑夏华 冯琦 崔红 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第2期44-48,共5页

为探索法呢基焦磷酸合酶(FPS)基因过量表达对烤烟叶片类胡萝卜素生物合成的影响,利用RT-PCR技术,比较了4个fps转基因株系(K-4、K-6、K-17、K-35)及其非转基因对照中参与类胡萝卜素生物合成的关键酶基因的表达强度,并利用LC/MS技术,分析... 为探索法呢基焦磷酸合酶(FPS)基因过量表达对烤烟叶片类胡萝卜素生物合成的影响,利用RT-PCR技术,比较了4个fps转基因株系(K-4、K-6、K-17、K-35)及其非转基因对照中参与类胡萝卜素生物合成的关键酶基因的表达强度,并利用LC/MS技术,分析了叶片发育过程中类胡萝卜素及其各组分含量的变化规律。结果表明:外源fps在烟草中的过量表达,对烟叶类胡萝卜素合成相关基因Psy、Lycb皆有正向调节作用,但对Zds的表达影响不大;化学分析表明,fps转基因烤烟株系中,总类胡萝卜素及其各组分的含量在叶片不同发育期均高于未转基因K326对照株系。说明外源fps基因在烟草中的过表达,对类胡萝卜素生物合成具有促进作用。 展开更多

关键词 烟草 法呢基焦磷酸合酶 转基因 类胡萝卜素

在线阅读 下载PDF 职称材料

Ri质粒介导fps基因对烟草的转化及表达 被引量：5

2

作者 崔红 慕平利 +2 位作者 李雪君 刘梦林 王哲 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期355-359,共5页

为了探讨外源fps基因表达对发状根合成抗菌物质能力的影响,将含有薄荷(Mentha spicataL.)fps基因的双元表达载体质粒,通过冻融法转化到发根农杆菌菌株Ar1334中,转化菌株与烟草叶圆片共培养诱导发状根产生,共获得18个稳定的发状根无性系... 为了探讨外源fps基因表达对发状根合成抗菌物质能力的影响,将含有薄荷(Mentha spicataL.)fps基因的双元表达载体质粒,通过冻融法转化到发根农杆菌菌株Ar1334中,转化菌株与烟草叶圆片共培养诱导发状根产生,共获得18个稳定的发状根无性系,在附加20 mg·L-1卡那霉素的MS培养基上,筛选到4个生长旺盛的无性系.经PCR扩增得到大小为1 kb的目的片段,PCR-Southern检测表明外源fps基因已整合到烟草发状根的基因组中,Northern blot检测证明外源fps基因在转录水平进行了表达;酶活分析显示转基因发状根株系中FPS酶活性明显高于对照,抑菌试验也发现转基因发状根汁液对赤星病菌具有较高水平的抗性,表明外源fps基因在发状根中的表达有利于抗菌物质的合成与积累. 展开更多

关键词 烟草 法呢基焦磷酸合酶 发状根 赤星病菌

在线阅读 下载PDF 职称材料

烟草fps转基因发状根的离体培养及其抗菌性 被引量：5

3

作者 崔红 慕平利 +1 位作者 李雪君 刘梦林 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期422-425,共4页

为研究fps基因在烟草发状根中的表达对发状根生长及物质代谢的影响,对fps转基因发状根株系k-3离体培养条件下的生长特性及抗菌性进行了研究.在摇瓶悬浮培养过程中,发状根生长呈现"S"型曲线,最初生长缓慢,到第10天开始迅速生长... 为研究fps基因在烟草发状根中的表达对发状根生长及物质代谢的影响,对fps转基因发状根株系k-3离体培养条件下的生长特性及抗菌性进行了研究.在摇瓶悬浮培养过程中,发状根生长呈现"S"型曲线,最初生长缓慢,到第10天开始迅速生长,25 d进入生长平台期;利用气升式内环流生物器,在25℃通气量为2 L/min,接种量为1 g的条件下培养25 d,发状根鲜重达94.7 g/L;以赤星病菌(Alternaria alternata)粗毒素为诱导子对发状根诱导培养,转基因发状根浸提液在黑胫病根刺接种试验中,能够明显提高烟草幼苗对黑胫病的抗性. 展开更多

关键词 法呢基焦磷酸合酶 转基因发状根 离体培养 抗病性

在线阅读 下载PDF 职称材料

三七与其它植物FPS序列的比较分析 被引量：1

4

作者 吴耀生 陈莉 +2 位作者 蓝秀万 朱华 赵瑞强 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期1563-1570,共8页

三萜皂甙是中药三七(Panax notoginseng)的主要有效成分,为阐明三七三萜皂甙合成途径中法呢基焦磷酸合酶(FPS)的结构特征,采用RT-PCR及3-'RACE和5′-末端分析法,对三七FPS进行克隆,获得三七FPS cDNA全长,已提交GenBank,登录号为DQ05... 三萜皂甙是中药三七(Panax notoginseng)的主要有效成分,为阐明三七三萜皂甙合成途径中法呢基焦磷酸合酶(FPS)的结构特征,采用RT-PCR及3-'RACE和5′-末端分析法,对三七FPS进行克隆,获得三七FPS cDNA全长,已提交GenBank,登录号为DQ059550;结合生物信息数据库及相关分析软件,对三七根FPS进行性质预测,并与GenBank中记载的植物FPS进行比对分析,构建了植物FPS系统进化树,进行聚类关系分析,根据FPS聚类关系将这些植物异戊二烯类物质合成途径的产物分组.结果表明,植物FPS有2个保守核心区,分别为DDIMD和QVQDDYLD;比对分析及构建的系统进化树表明,三七与人参、积雪草的FPS序列一致性分别为99%、95%,其三萜物质结构也相似. 展开更多

关键词 法呢基焦磷酸合酶 三七 异戊二烯 三萜 系统进化树

在线阅读 下载PDF 职称材料

暗紫贝母FPS基因克隆与表达特性分析 被引量：4

5

作者 张志勇 陈莹 +3 位作者 江学波 祝漂 曾燕羚 齐泽民 《种子》 北大核心 2019年第11期39-45,共7页

法尼基焦磷酸合酶(FPS)是异戊二烯生物合成途径中的一个关键酶。为探究FPS在暗紫贝母生物碱合成代谢过程中的作用,本研究利用RT-PCR和RACE技术,克隆了暗紫贝母法基尼焦磷酸合酶基因的全长cDNA序列,命名为FrFPS,GenBank登录号为KX 90048... 法尼基焦磷酸合酶(FPS)是异戊二烯生物合成途径中的一个关键酶。为探究FPS在暗紫贝母生物碱合成代谢过程中的作用,本研究利用RT-PCR和RACE技术,克隆了暗紫贝母法基尼焦磷酸合酶基因的全长cDNA序列,命名为FrFPS,GenBank登录号为KX 900485。该序列全长1333 bp,具有长度为1059 bp的完整开放阅读框,编码352个氨基酸,预测分子量40.13 kDa,等电点pH值为5.17。FrFPS基因的推导氨基酸序列含有高等植物FPS蛋白的典型保守结构域,亚细胞定位预测其在细胞质、线粒体基质空间及微体上。系统进化分析显示,暗紫贝母与铁炮百合处于同一分支,其亲缘关系最近。实时荧光定量PCR分析结果表明,FrFPS主要在鳞茎表达,且表达量随海拔梯度升高而降低,而在茎、叶中表达量很低。HPLC测定暗紫贝母鳞茎中生物碱含量,发现随海拔梯度升高生物碱含量降低。研究认为,FrFPS基因响应了对不同海拔梯度的应答。 展开更多

关键词 暗紫贝母 fps 基因克隆 基因表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

转fps基因烟草纯合系的获得及其特性分析 被引量：1

6

作者 刘海礁 王哲 +1 位作者 李雪君 崔红 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 2006年第4期41-43,共3页

携带有外源法呢基焦磷酸合酶(fps)基因和卡那霉素抗性基因(NptII)的烟草种子在含卡那霉素(300mg/L)的培养基上能够正常地萌发和生长,对照种子虽能萌发,但幼苗形态与对照有着明显的差异。转fps基因植株所具有的卡那霉素抗性和与其抗病性... 携带有外源法呢基焦磷酸合酶(fps)基因和卡那霉素抗性基因(NptII)的烟草种子在含卡那霉素(300mg/L)的培养基上能够正常地萌发和生长,对照种子虽能萌发,但幼苗形态与对照有着明显的差异。转fps基因植株所具有的卡那霉素抗性和与其抗病性之间密切相关,由此建立了一种鉴定转基因烟草后代纯合度的简易方法,得到4个fps转基因烟草纯合系(K4、K6、K17、K35),并对其农艺性状、田间抗性、化学成份和品质进行了评估,其中K4转基因品系的综合性状较原有品种有所提高。 展开更多

关键词 转基因烟草 法呢基焦磷酸合酶 卡那霉素抗性 抗病性 纯合系

在线阅读 下载PDF 职称材料

三疣梭子蟹fps克隆及其在卵巢发育中的表达分析 被引量：4

7

作者 朱韬 朱冬发 +3 位作者 邱锡尔 周彦琦 柳志业 谢熙 《生物学杂志》 CAS CSCD 2016年第3期10-14,19,共6页

法尼基焦磷酸合成酶(FPS)是类异戊二烯生物合成途径中的关键酶,参与甲壳动物甲基法尼酯(MF)等萜类激素的合成。为研究FPS在甲壳动物卵巢发育中的调控作用,采用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术(RACE技术)克隆得到了三疣梭子蟹fps(Ptfps)的... 法尼基焦磷酸合成酶(FPS)是类异戊二烯生物合成途径中的关键酶,参与甲壳动物甲基法尼酯(MF)等萜类激素的合成。为研究FPS在甲壳动物卵巢发育中的调控作用,采用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术(RACE技术)克隆得到了三疣梭子蟹fps(Ptfps)的序列全长(Gen Bank登录号:KM013803)。结果显示:Ptfps cDNA全长为2 360 bp,开放阅读框长1 290 bp,编码429个氨基酸。生物信息学分析发现PtFPS具有7个异戊烯基转移酶的保守结构域,与已公布的内华达古白蚁FPS同源性最高(达到58%)。实时荧光定量PCR分析结果显示:fps主要在大颚器(MO)中表达,远高于其它组织的表达水平(P<0.01);在第1次卵巢发育过程中,fps的表达水平在Ⅳ期显著升高(P<0.05),之后略有下降;在第2次卵巢发育过程中,fps的表达水平在Ⅲ期显著升高(P<0.05),并在IV期达到最大。以上结果表明fps可能参与三疣梭子蟹卵巢发育的调控。 展开更多

关键词 三疣梭子蟹 法尼基焦磷酸合成酶 克隆 卵巢发育 表达水平

在线阅读 下载PDF 职称材料

枸骨IcFPS1基因的克隆、表达及生物信息学分析 被引量：3

8

作者 马良琼 曾慧 +3 位作者 罗彩霞 张威威 许锋 程水源 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期328-335,共8页

法尼基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)是三萜皂苷生物合途径的一个关键酶,为研究FPS基因在枸骨中的功能,该研究采用PCR技术将一个FPS基因的cDNA序列从枸骨叶中分离出来,并命名为IcFPS1。结果表明:根据测序结果分析发现... 法尼基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)是三萜皂苷生物合途径的一个关键酶,为研究FPS基因在枸骨中的功能,该研究采用PCR技术将一个FPS基因的cDNA序列从枸骨叶中分离出来,并命名为IcFPS1。结果表明:根据测序结果分析发现扩增获得的IcFPS1基因cDNA长度为1 591 bp,包含一个完整的开放阅读框,大小为1 029 bp。通过序列分析发现枸骨IcFPS1基因编码342个氨基酸,分子量和等电点分别为39.58 kDa和5.18。通过理化性质预测分析发现IcFPS1蛋白不含信号肽,不含有跨膜区域,该IcFPS1蛋白为亲水性蛋白质。通过序列多重比对发现IcFPS1蛋白质与其他植物的FPS蛋白质高度同源,有共同的保守区域和氨基酸序列,其中与西洋参FPS序列的相似性高达89%。通过系统进化树分析发现枸骨FPS蛋白与同属于被子植物的五加科植物FPS蛋白亲缘关系较近,说明FPS基因在进化过程中相对比较保守。根据蛋白调控网络预测分析结果发现该蛋白可能与IPP1、IPP2、GGPS3、GGPS6和ERA1相互作用,参与类异戊二烯的合成代谢过程。通过实时荧光定量PCR分析发现IcFPS1基因在枸骨各个组织部位中均有表达,其中在枸骨根中表达量最高,在茎和雌花中表达量最低。 展开更多

关键词 枸骨 法尼基焦磷酸合酶 三萜皂苷 克隆 表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

丹参法呢基焦磷酸合酶基因(SmFPPS1)的表达模式 被引量：6

9

作者 周露 化文平 +2 位作者 杨滢 王喆之 李翠芹 《陕西师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期70-75,共6页

克隆了丹参中萜类物质合成相关的法呢基焦磷酸合酶基因(farnesyl diphosphate synthase,SmFPPS1,HQ687768),并对其序列特征进行了分析,发现该基因编码产物含有异戊烯基转移酶的特征结构域定位于细胞质中.功能互补分析显示,SmFPPS1不具... 克隆了丹参中萜类物质合成相关的法呢基焦磷酸合酶基因(farnesyl diphosphate synthase,SmFPPS1,HQ687768),并对其序列特征进行了分析,发现该基因编码产物含有异戊烯基转移酶的特征结构域定位于细胞质中.功能互补分析显示,SmFPPS1不具有牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶(geranylgeranyldiphosphate synthase,GGPPS)活性.实时荧光定量PCR分析结果显示,SmFPPS1在丹参生长的各个时期具有一定的组成性表达,在其花期的各器官中主要在花中表达,而且其表达受到茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)和真菌诱导子信号的诱导. 展开更多

关键词 丹参 法呢基焦磷酸合酶 表达模式

在线阅读 下载PDF 职称材料

基于转录组测序的兔儿伞羽扇豆醇合成途径及关键酶基因研究 被引量：1

10

作者 张京晶 许景垚 +4 位作者 单婷玉 赵历强 钟欣欣 张帅帅 吴家文 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期32-40,共9页

为解析兔儿伞羽扇豆醇生物合成途径,探究其关键酶基因,研究运用DNBSEQ测序平台对兔儿伞的叶、茎、根及根茎进行转录组测序,从头组装后获得了191541条Unigenes。KEGG代谢通路分析表明有961条Unigenes涉及兔儿伞羽扇豆醇生物合成途径,其中... 为解析兔儿伞羽扇豆醇生物合成途径,探究其关键酶基因,研究运用DNBSEQ测序平台对兔儿伞的叶、茎、根及根茎进行转录组测序,从头组装后获得了191541条Unigenes。KEGG代谢通路分析表明有961条Unigenes涉及兔儿伞羽扇豆醇生物合成途径,其中,395条Unigenes编码羽扇豆醇生物合成途径的17个关键酶。根与其他各组织比较,24条共有差异表达基因涉及羽扇豆醇生物合成途径,编码了法尼基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPPS)、角鲨烯合成酶(squalene synthase,SS)、角鲨烯环氧酶(squalene epoxidase,SE)等关键酶。对关键酶FPPS、SS和SE进行结构分析,发现它们均具有保守的催化结构域和底物结合结构域。研究丰富了兔儿伞植物的功能基因数据库,为进一步研究羽扇豆醇生物合成途径及其关键酶基因的功能和调控机制奠定了基础。 展开更多

关键词 兔儿伞 转录组测序 羽扇豆醇 法尼基焦磷酸合酶 角鲨烯合成酶 角鲨烯环氧酶

在线阅读 下载PDF 职称材料

转外源法呢基焦磷酸合酶基因烟草抗赤星病研究 被引量：15

11

作者 崔红 刘海礁 李雪君 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期817-820,I0001,共5页

将已克隆的薄荷(Mentha spicataL.)法呢基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,fps)的cDNA插入载体,构建CaMV35S启动子驱动下的植物表达载体pBinARfps。用捕获该质粒的根癌农杆菌菌株LBA4404与烟草叶片外植体共培养,并在附加30 mg... 将已克隆的薄荷(Mentha spicataL.)法呢基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,fps)的cDNA插入载体,构建CaMV35S启动子驱动下的植物表达载体pBinARfps。用捕获该质粒的根癌农杆菌菌株LBA4404与烟草叶片外植体共培养,并在附加30 mg/L Kan的MS+0.1 mg/L IAA+1.5 mg/L BA培养基上诱导植株分化,再生芽在附加30 mg/L Kan的MS培养基上生根,再生植株。Kan阳性植株经PCR-Southern检测筛选,得到5株PCR阳性植株(K-4,K-6,K-17,K-19,K-35),证明外源fps基因在烟草基因组中的整合;Northern blot检测证明外源fps基因在转录水平进行了表达;离体叶片接种实验表明,转基因植株(T1代)对赤星病抗性明显提高。这表明fps基因在植物抗病基因工程中具有潜在应用价值。 展开更多

关键词 烟草 法呢基焦磷酸合酶 基因转导 赤星病

在线阅读 下载PDF 职称材料

青钱柳法呢基焦磷酸合成酶基因的克隆及功能研究 被引量：3

12

作者 缪倩 曹小迎 +3 位作者 李长根 尹婷 李晓储 蒋继宏 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期323-329,共7页

青钱柳是集药用、材用和观赏等多种价值于一身的珍贵树种。法呢基焦磷酸合成酶(FPS)催化=牛儿基焦磷酸(GPP)与异戊烯基焦磷酸(IPP)缩合成法呢基焦磷酸(FPP),FPP是植物次生代谢产物倍半萜,三萜,甾醇等的前体。本研究通过RACE方法首次从... 青钱柳是集药用、材用和观赏等多种价值于一身的珍贵树种。法呢基焦磷酸合成酶(FPS)催化=牛儿基焦磷酸(GPP)与异戊烯基焦磷酸(IPP)缩合成法呢基焦磷酸(FPP),FPP是植物次生代谢产物倍半萜,三萜,甾醇等的前体。本研究通过RACE方法首次从青钱柳中扩增了法呢基焦磷酸合成酶的全长cDNA序列,序列命名为CpF-PS(Genbank登录号为GU121224),序列长度为1 420 bp,包含1 029 bp的开放阅读框,编码342个氨基酸残基,预测蛋白分子量为39.60 kDa。通过BlASTP分析,推断的青钱柳FPS蛋白序列与木本棉(Gossypium arboreum)(CAA72793.1)、橡胶树(Hevea brasiliensis)(BAF98301)等的FPS蛋白相似度较高。蛋白质保守区、特征区以及进化树分析初步证实扩增到的全长cDNA序列为青钱柳的FPS基因。将该基因连入酵母表达载体并转入麦角甾醇缺陷型酵母菌株CC25(MATa/MATalpha,deltaERG20/+),发现该基因可弥补营养缺陷使得CC25菌株在高温中正常生长,证明所得到的青钱柳CpFPS基因编码的蛋白是有功能的蛋白。 展开更多

关键词 青钱柳 法呢基焦磷酸合成酶 RACE 功能研究

在线阅读 下载PDF 职称材料

刺五加法呢基焦磷酸合酶基因的表达及其与皂苷含量的相关性分析 被引量：6

13

作者 周秘 柴丽花 +1 位作者 修乐山 邢朝斌 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2013年第12期106-109,共4页

根据刺五加法呢基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)基因的cDNA序列信息,设计特异性引物,利用半定量RT-PCR技术,对刺五加FPS基因在不同产地、不同器官、不同发育时期及茉莉酸甲酯(MeJA)处理后的表达情况进行分析。结果表明... 根据刺五加法呢基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)基因的cDNA序列信息,设计特异性引物,利用半定量RT-PCR技术,对刺五加FPS基因在不同产地、不同器官、不同发育时期及茉莉酸甲酯(MeJA)处理后的表达情况进行分析。结果表明,FPS基因在不同产地、时期、器官及MeJA处理后的刺五加中均有表达,但表达量存在显著差异。FPS在萌芽期的表达量最高,盛花期的表达量最低,两者比值为4.19且差异显著;本溪、珲春、鸡西、雾灵山、穆棱、梅河口、伊通产地刺五加的FPS相对表达量依次降低;在不同器官中以叶的表达量最高;MeJA处理后FPS的表达量比用蒸馏水处理的对照组均有显著提高。FPS的相对表达量与刺五加叶器官的皂苷含量存在显著的正相关关系。 展开更多

关键词 刺五加 法呢基焦磷酸合酶基因 表达分析 皂苷

在线阅读 下载PDF 职称材料

青蒿高产株系001法呢基焦磷酸合酶基因的克隆、原核表达及酶活性测定 被引量：2

14

作者 韩军丽 李振秋 +1 位作者 叶和春 李国凤 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期71-75,共5页

法呢基焦磷酸合酶(FPS)是治疗疟疾的特效药物——青蒿素生物合成途径的关键酶。运用RT-PCR方法从青蒿高产株系001中克隆法呢基焦磷酸合酶基因;构建His标签融合蛋白FPS表达载体,进行原核诱导表达、蛋白纯化及酶活性测定的研究。结果表明... 法呢基焦磷酸合酶(FPS)是治疗疟疾的特效药物——青蒿素生物合成途径的关键酶。运用RT-PCR方法从青蒿高产株系001中克隆法呢基焦磷酸合酶基因;构建His标签融合蛋白FPS表达载体,进行原核诱导表达、蛋白纯化及酶活性测定的研究。结果表明:克隆的FPS基因和文献已报道的2个青蒿FPS基因编码的氨基酸序列的同源性分别为98.83%和99.42%;原核诱导表达的His标签融合蛋白FPS的表达量高、可溶性好,具有FPS酶活性。 展开更多

关键词 法呢基焦磷酸合酶(fps) 青蒿(Artemisia annua L.) 基因克隆 原核表达 蛋白纯化

在线阅读 下载PDF 职称材料

三七法呢基焦磷酸合酶原核表达载体的构建及其表达 被引量：3

15

作者 周娟 赵瑞强 +1 位作者 陈莉 吴耀生 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期130-133,共4页

在克隆得到三七法呢基焦磷酸合酶(FPS)cDNA的基础上,构建原核表达载体pET32 a(+)/FPS,并转化大肠杆菌BL21(DE3)受体菌,在37℃,1 mmol/L IPTG浓度条件下,诱导表达FPS融合蛋白,对诱导表达条件进行了优化。结果表明:成功构建了原核表达载体... 在克隆得到三七法呢基焦磷酸合酶(FPS)cDNA的基础上,构建原核表达载体pET32 a(+)/FPS,并转化大肠杆菌BL21(DE3)受体菌,在37℃,1 mmol/L IPTG浓度条件下,诱导表达FPS融合蛋白,对诱导表达条件进行了优化。结果表明:成功构建了原核表达载体pET32 a(+)/FPS,并在大肠杆菌中成功表达FPS蛋白,分子量约为40 kD,为进一步开展FPS的蛋白纯化和功能分析奠定了基础。 展开更多

关键词 三七 法呢基焦磷酸合酶 原核表达 pET32a(+) 融合蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

柴胡皂苷合成途径中三个关键酶基因片段的克隆与序列分析 被引量：17

16

作者 董乐萌 刘玉军 魏建和 《世界科学技术-中医药现代化》 2008年第5期56-60,15,共6页

本文以北柴胡幼嫩根的总RNA为模板,通过RT-PCR方法,克隆出3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase,HMGR)、异戊烯基焦磷酸异构酶(isopentenyl diphosphate isomerase,IPPI)和法尼基焦磷酸合酶(... 本文以北柴胡幼嫩根的总RNA为模板,通过RT-PCR方法,克隆出3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase,HMGR)、异戊烯基焦磷酸异构酶(isopentenyl diphosphate isomerase,IPPI)和法尼基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)基因的cDNA片断,大小分别为470bp、532bp、466bp,分别编码157、177、155个氨基酸多肽。提交到Gen- Bank上,得到登陆号分别为:HMGR(EU400217)、IPPI(EU400218)、FPS(EU400219)。NCBI在线blast结果表明,推断的北柴胡HMGR、IPPI和FPS基因的氨基酸序列分别与杜仲、三岛柴胡和雷公藤的一致性最高,分别为93%、99%、97%。对HMGR基因和FPS基因进行特征性保守域分析,结果显示,推断的HMGR氨基酸序列存在两个NADPH结合基序,FPS存在三个特征性保守序列:DDIMD、GQMID和KL。构建的植物IPPI的分子进化树表明,北柴胡IPPI基因与伞形科植物(胡萝卜和三岛柴胡)亲缘关系最近,与单子叶植物(玉米和水稻)亲缘关系较远。本文首次分离报道了北柴胡柴胡皂苷合成途径中三个关键酶基因(HMGR、IPPI和FPS)cDNA的克隆,新获得的基因片段序列为进一步克隆全序列和了解调控柴胡皂苷的生物合成奠定了基础。 展开更多

关键词 北柴胡 柴胡皂苷 3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR) 异戊烯基焦磷酸异构酶(IPPI) 法尼基焦磷酸合酶(fps)

在线阅读 下载PDF 职称材料

巴西橡胶树法尼基焦磷酸合酶基因5'调控序列的克隆及功能初步鉴定 被引量：8

17

作者 郭冬 李辉亮 彭世清 《热带农业工程》 2010年第6期31-36,共6页

法尼基焦磷酸合酶是异戊二烯生物合成途径中的一个关键酶,根据NCBI数据库中巴西橡胶树法尼基焦磷酸合酶基因HbFPS序列设计引物,克隆了HbFPS起始密码子上游1066bp的5'调控序列。序列分析表明,该序列A/T含量为77.39%,含有典型的真核... 法尼基焦磷酸合酶是异戊二烯生物合成途径中的一个关键酶,根据NCBI数据库中巴西橡胶树法尼基焦磷酸合酶基因HbFPS序列设计引物,克隆了HbFPS起始密码子上游1066bp的5'调控序列。序列分析表明,该序列A/T含量为77.39%,含有典型的真核生物核心启动子区域,在该序列中发现了一些与真核生物典型的顺式调控元件相似的TATA-box、增强子元件、CAAT-box和GATA-box以及一些与激素、胁迫诱导、转录因子相关的顺式作用元件。构建了含有该序列的植物表达载体并转化烟草,对获得的转基因烟草T0代植株GUS染色发现转基因植株呈现蓝色,表明HbFPS的5'调控序列可以驱动GUS基因的表达,具有启动子的活性。 展开更多

关键词 巴西橡胶树 法尼基焦磷酸合酶 5'调控序列 顺式作用元件

在线阅读 下载PDF 职称材料

甘草酸合成生物学元件初探：甘草法呢基焦磷酸合酶基因的克隆及序列分析

18

作者 李滢 牛云云 +3 位作者 宋经元 罗红梅 李秋实 孙超 《世界科学技术-中医药现代化》 北大核心 2013年第3期355-359,共5页

甘草酸是中药甘草的主要有效成分,法呢基焦磷酸合酶(FPS)是甘草酸合成途径中关键酶之一。根据甘草转录组数据设计引物,对FPS基因进行克隆,获得甘草FPS基因的全长编码序列。甘草FPS基因编码区全长1 029 bp,编码342个氨基酸残基。将甘草FP... 甘草酸是中药甘草的主要有效成分,法呢基焦磷酸合酶(FPS)是甘草酸合成途径中关键酶之一。根据甘草转录组数据设计引物,对FPS基因进行克隆,获得甘草FPS基因的全长编码序列。甘草FPS基因编码区全长1 029 bp,编码342个氨基酸残基。将甘草FPS基因与GenBank中其他植物FPS基因序列进行比对分析,发现其核酸序列与鹰嘴豆、苜蓿、蒺藜苜蓿、大豆、百脉根的序列相似度最高,分别达到94%、94%、93%、93%、92%。进一步的系统进化分析表明FPS基因具有较高的保守性,其序列进化树与植物分类一致。 展开更多

关键词 甘草 法呢基焦磷酸合酶 甘草酸 基因克隆

在线阅读 下载PDF 职称材料

甜橙来源法尼烯合成酶的异源表达及酶学性质研究 被引量：2

19

作者 付闻文 王均华 +1 位作者 李由然 石贵阳 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2021年第21期79-85,共7页

法尼烯是一种倍半萜化合物,在食品、香料等领域有广泛应用价值。法尼烯合成酶是法尼烯合成途径中的关键限速酶,对法尼烯的合成有重要催化作用。通过生物信息学方法获取了甜橙来源萜类合成酶(farnesene synthase from Citrus sinensis,FS... 法尼烯是一种倍半萜化合物,在食品、香料等领域有广泛应用价值。法尼烯合成酶是法尼烯合成途径中的关键限速酶,对法尼烯的合成有重要催化作用。通过生物信息学方法获取了甜橙来源萜类合成酶(farnesene synthase from Citrus sinensis,FSCS)基因Fscs,通过异源表达对其进行了功能鉴定,研究了重组酶的酶学性质并将其应用于酿酒酵母法尼烯合成。结果显示,在以法尼基焦磷酸为底物时,FSCS可催化其生成α-法尼烯;Mg ^(2+)为酶必需的辅因子,K^(+)可促进产物生成,8 mmol/L以上Mn^(2+)对产物生成有抑制作用,最适金属离子条件为30 mmol/L Mg^(2+),40 mmol/L K^(+);最适反应温度为20℃,酶对高温耐受性差。将酶学性质应用于酿酒酵母重组表达菌株,最适金属离子条件下法尼烯产量提升了30%,达到43.76 mg/L;温度条件的改变对发酵后期法尼烯积累有一定促进作用。该研究对一种新的萜类合成酶进行了功能表征,并通过酶学性质研究为构建微生物细胞工厂高效生产法尼烯提供了参考。 展开更多

关键词 法尼烯合成酶 酶学性质 法尼基焦磷酸 倍半萜 酿酒酵母

在线阅读 下载PDF 职称材料

卷叶贝母法尼基焦磷酸合酶基因的克隆及表达分析 被引量：3

20

作者 李锐 陈晓仪 +2 位作者 张阳 张甜甜 赵琦 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1111-1116,共6页

为了探究卷叶贝母(Fritillaria cirrhosa)法尼基焦磷酸合酶基因(FcFPPS)是否参与甾类生物碱合成、萜类合成等代谢过程,该研究基于转录组测序结果,通过PCR技术克隆卷叶贝母FPPS基因(FcFPPS)开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)序列,运用... 为了探究卷叶贝母(Fritillaria cirrhosa)法尼基焦磷酸合酶基因(FcFPPS)是否参与甾类生物碱合成、萜类合成等代谢过程,该研究基于转录组测序结果,通过PCR技术克隆卷叶贝母FPPS基因(FcFPPS)开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)序列,运用生物信息学方法对该基因进行分析,预测其编码蛋白的结构与功能,并通过qRT-PCR检测FcFPPS基因在野生鳞茎和再生鳞茎(通过激素组合刺激获得的组织培养物)中的表达情况,以及利用煎煮法测定野生鳞茎和再生鳞茎的总生物碱含量。结果表明:获得了1 059bp的FcFPPS ORF片段,编码352个氨基酸,并与NCBI上公布的麝香百合、虎眼万年青、春兰等植物FPPS蛋白的相似性在85%以上;对FcFPPS蛋白的二级、三级结构预测发现FcFPPS蛋白主要由α螺旋构成;qRT-PCR与总生物碱含量测定结果显示FcFPPS基因的表达水平与总生物碱含量的变化趋势一致,都是再生鳞茎高于野生鳞茎。FcFPPS蛋白质特征区及同源性等生物信息学分析结合qRT-PCR的测定结果证明FcFPPS可能是一个有生物学功能的蛋白质,这为后续利用基因工程手段提高卷叶贝母中生物碱含量奠定了理论基础。 展开更多

关键词 卷叶贝母 法尼基焦磷酸合酶 克隆 生物信息学 基因表达

在线阅读 下载PDF 职称材料