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猫冠状病毒和猫细小病毒双重荧光定量PCR方法的建立: 1; 作者郭存杰王蕾 +3 位作者毕振威钱晶张传美谭业平《中国动物检疫》 CAS 2024年第4期91-95,共5页; 为建立猫冠状病毒(feline coronavirus,FCoV)和猫细小病毒(feline parvovirus,FPV)的双重荧光定量PCR方法,选取FCoV 3'UTR和FPV VP2基因保守区域,分别设计2对特异性引物和TaqMan MGB探针,并进行反应体系和条件优化,以及特异性、敏... 展开更多; 关键词猫冠状病毒猫细小病毒双重荧光定量pcr; 在线阅读下载PDF 职称材料

布氏杆菌和结核杆菌二重实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用被引量：17: 2; 作者孟茹陈创夫 +4 位作者张辉乔军任艳王正荣蒋松《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1012-1017,共6页; 本试验旨在利用二重实时荧光定量PCR技术建立鉴别诊断布氏杆菌和结核杆菌的方法。通过筛选布氏杆菌omp10、omp19、omp17、omp25、omp31和结核杆菌cfp10基因的最佳引物组合,建立二重实时定量PCR鉴别诊断方法,对该方法进行稳定性、特异性... 展开更多; 关键词布氏杆菌结核杆菌二重实时荧光定量pcr; 在线阅读下载PDF 职称材料

一种快速检测HBV基因的荧光定量PCR法的建立被引量：5: 3; 作者赵清许颂霄 +3 位作者袁军罗进勇单幼兰尹一兵《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期244-246,共3页; 目的利用二聚体蝎型荧光探针技术,建立一种能用于临床的快捷、敏感、特异、价格低廉的HBV实时荧光定量PCR检测方法。方法根据HBV基因组保守区域precore/core设计二聚体蝎型荧光探针和引物,构建质粒标准品,优化荧光定量PCR条件,并进行方... 展开更多; 关键词乙型肝炎病毒二聚体蝎型荧光探针荧光定量pcr; 在线阅读下载PDF 职称材料

鉴别高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：3: 4; 作者孔刚锐吴志明 +7 位作者闫若潜赵明军王东方赵雪丽闫志玲程俊贞陈慧娟靳利粉《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第12期27-33,共7页; 据GenBank登录的高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(highly and lowly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP/LP-PRRSV)的非结构蛋白2(Nsp2)基因序列设计特异性引物和TaqMan MGB荧光探针,经优化反应条... 展开更多; 关键词高低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重实时荧光定量RT—pcr TAQMAN MGB荧光探针检测应用; 在线阅读下载PDF 职称材料

转基因大豆及其制品二重荧光定量PCR的建立与验证被引量：3: 5; 作者王凤军叶素丹 +1 位作者陈冠武包永华《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期236-239,271,共5页; 研究选用花椰菜花叶病毒35S启动子(P-35S)和根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因终止子(T-NOS)为靶标基因,运用多重实时荧光PCR技术对转基因大豆及其制品进行快速筛选检测。实验通过样品核酸提取与质控,多重引物及荧光探针的设计与筛选,反应条... 展开更多; 关键词转基因大豆二重实时荧光pcr 快速筛选检测深加工制品; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪圆环病毒2型和3型双重荧光定量PCR检测方法的建立被引量：3: 6; 作者牟泓晔周小杰 +3 位作者杨永春王晓杜周莹珊宋厚辉《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第3期457-463,共7页; 为建立一种同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的方法,参照GenBank上已登录的PCV2 Cap基因和PCV3 Cap基因的保守序列,设计特异性引物和TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了同时检测PCV2和PCV3的双重荧光定量PCR检测方法... 展开更多; 关键词猪圆环病毒2型猪圆环病毒3型 TAQMAN探针双重荧光定量pcr; 在线阅读下载PDF 职称材料

细菌性条斑病菌JH01诱导水稻抗病均一化差减文库的构建被引量：1: 7; 作者凌丹燕路梅《安徽农业科学》 CAS 2016年第2期188-191,共4页; [目的]构建细菌性条班病菌诱导下的水稻抗病均一化差减eDNA文库，对获得的差异表达ESTs进行生物信息学及抗病相关基因的表达分析。[方法]以水稻IR26（Tester）和两优培九（Driver）幼苗5～6叶期叶片为材料，采用双链特异性核酸酶（DSN... 展开更多; 关键词细菌性条斑病水稻双链特异性核酸酶(DSN) 均一化差减杂交荧光定量pcr; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猫冠状病毒和猫细小病毒双重荧光定量PCR方法的建立: 1; 作者郭存杰王蕾毕振威钱晶张传美谭业平; 机构青岛农业大学动物医学院江苏省农业科学院兽医研究所南通伊仕生物技术股份有限公司; 出处《中国动物检疫》 CAS 2024年第4期91-95,共5页; 文摘为建立猫冠状病毒(feline coronavirus,FCoV)和猫细小病毒(feline parvovirus,FPV)的双重荧光定量PCR方法,选取FCoV 3'UTR和FPV VP2基因保守区域,分别设计2对特异性引物和TaqMan MGB探针,并进行反应体系和条件优化,以及特异性、敏感性和重复性试验,探讨所建方法的可行性。结果显示:该方法可特异性检出FCoV和FPV,与猫疱疹病毒、猫杯状病毒、猫轮状病毒、支原体、衣原体、波氏杆菌、犬腺病毒和犬副流感病毒等病原核酸无交叉反应,对FCoV和FPV检测限均为1 copies/μL;FCoV和FPV阳性参考质粒组间和组内重复试验变异系数均小于3%;对35份临床样本进行检测,发现建立的双重荧光定量PCR方法阳性检出率比普通PCR方法高。结果表明,本研究建立的双重荧光定量PCR方法具有灵敏、特异和稳定等优点,可用于临床FCoV和FPV感染的早期鉴别诊断。; 关键词猫冠状病毒猫细小病毒双重荧光定量pcr; Keywords FCoV FPV duplex fluorescent quantitative pcr; 分类号 S851.3 [农业科学—预防兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名布氏杆菌和结核杆菌二重实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用被引量：17: 2; 作者孟茹陈创夫张辉乔军任艳王正荣蒋松; 机构石河子大学动物科技学院; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1012-1017,共6页; 基金国际合作重点项目(2006DFA33740) 国家自然科学基金项目(30760187); 文摘本试验旨在利用二重实时荧光定量PCR技术建立鉴别诊断布氏杆菌和结核杆菌的方法。通过筛选布氏杆菌omp10、omp19、omp17、omp25、omp31和结核杆菌cfp10基因的最佳引物组合,建立二重实时定量PCR鉴别诊断方法,对该方法进行稳定性、特异性和敏感性试验,并对临床样品及模拟样品进行检测。经筛选布氏杆菌的omp25基因与结核杆菌cfp10基因引物组合最佳,该二重实时荧光定量PCR方法中布氏杆菌Tm值为88～89℃,结核杆菌Tm值为90～91℃,对其他供试的菌株则为阴性;该方法对布氏杆菌的DNA最低检出量为20拷贝.μL-1,结核杆菌为50拷贝.μL-1,两病原都存在时为100拷贝.μL-1,比常规PCR高100倍。利用所建立的二重荧光定量PCR方法及常规PCR,对24份结核痰样、11份布氏杆菌基因粗提物及30份模拟奶样进行检测,符合率为100%。本试验建立的方法可用于同时检测布氏杆菌和结核杆菌,并且具有良好的特异性、敏感性和稳定性。; 关键词布氏杆菌结核杆菌二重实时荧光定量pcr; Keywords Brucella Mycobacterium tuberculosis duplex real-time fluorescence quantitative pcr; 分类号 S852.614 [农业科学—基础兽医学] S852.618 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名一种快速检测HBV基因的荧光定量PCR法的建立被引量：5: 3; 作者赵清许颂霄袁军罗进勇单幼兰尹一兵; 机构重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室; 出处《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期244-246,共3页; 基金国家自然科学基金(30471838); 文摘目的利用二聚体蝎型荧光探针技术,建立一种能用于临床的快捷、敏感、特异、价格低廉的HBV实时荧光定量PCR检测方法。方法根据HBV基因组保守区域precore/core设计二聚体蝎型荧光探针和引物,构建质粒标准品,优化荧光定量PCR条件,并进行方法学评价。结果所建方法的检测范围为101～108copies/μl,灵敏度达到10copies/μl,低拷贝样品的批内和日间重复性(CV)分别为1.71%和2.57%,高拷贝样品的批内和日间CV分别为3.00%和3.86%。与商品化TaqMan试剂盒相比,本法阳性检出率较高,且检测时间缩短了45min(约减少1/3),成本降低50%。结论成功建立了快速检测HBVDNA的二聚体蝎型荧光定量PCR方法,为研发适合临床应用的HBV基因定量检测试剂盒奠定了基础。; 关键词乙型肝炎病毒二聚体蝎型荧光探针荧光定量pcr; Keywords Hepatitis B virus duplex scorpion primer fluorescent quantitative pcr; 分类号 R446.6 [医药卫生—诊断学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名鉴别高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：3: 4; 作者孔刚锐吴志明闫若潜赵明军王东方赵雪丽闫志玲程俊贞陈慧娟靳利粉; 机构河南科技大学动物科技学院河南省动物疫病预防控制中心; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第12期27-33,共7页; 基金河南省科技创新人才计划项目(豫科人组[2011]1号); 文摘据GenBank登录的高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(highly and lowly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP/LP-PRRSV)的非结构蛋白2(Nsp2)基因序列设计特异性引物和TaqMan MGB荧光探针,经优化反应条件,建立鉴别HP/LP-PRRSV二重TaqMan MGB实时荧光定量RT-PCR(Real-time fluorescent quantitative RTPCR)检测方法;对该二重实时荧光定量RT-PCR方法进行了敏感性、特异性和重复性试验;对疑似PRRSV感染临床样品进行了应用检测,同时与建立的HP/LP-PRRSV二重RT-PCR方法进行了对比试验。结果显示,成功建立了鉴别HP/LPPRRSV的二重实时荧光定量RT-PCR检测方法,HP/LP-PRRSV标准曲线的循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数分别为0.998和0.997;该方法灵敏度可达101拷贝/μL;特异性高,对HP/LP-PRRSV阳性对照扩增呈阳性反应,而对5个对照病原均呈阴性反应;不同浓度的HP/LP-PRRSV重组质粒分别重复扩增3次,重复结果良好;对25份临床疑似PRRSV感染样品进行了应用检测,阳性检出率为92%,较普通二重RT-PCR方法阳性检出率高。; 关键词高低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重实时荧光定量RT—pcr TAQMAN MGB荧光探针检测应用; Keywords highly/lowly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus duplex real-time fluorescent quantitative RT-pcr TaqMan MGB fluorescence probe detection application; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名转基因大豆及其制品二重荧光定量PCR的建立与验证被引量：3: 5; 作者王凤军叶素丹陈冠武包永华; 机构浙江经贸职业技术学院汕头出入境检验检疫局; 出处《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期236-239,271,共5页; 基金浙江经贸职业技术学院科研项目(16QN02) 浙江省供销社科研项目(16SSY04); 文摘研究选用花椰菜花叶病毒35S启动子(P-35S)和根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因终止子(T-NOS)为靶标基因,运用多重实时荧光PCR技术对转基因大豆及其制品进行快速筛选检测。实验通过样品核酸提取与质控,多重引物及荧光探针的设计与筛选,反应条件和反应体系的对比优化,摸索出二重荧光定量PCR检测的最佳反应体系。同时通过特异性、重复性、灵敏性和适用性实验验证,确保了该方法在同时检测2个靶标基因时,无荧光信号的相互干扰,不会出现假阴性和假阳性结果。结果表明,方法特异性高,可同时筛查两个靶标基因,扩增效率在90%~110%之间,标准曲线决定系数R2>0.98,确定了最低检测限为2拷贝/μL。开发和建立的二重荧光定量PCR检测技术可以实现一管多检的实际需要,降低试剂成本,缩短检测时间,为大豆及其深加工产品转基因成分的快速检测提供了有效方法,为促进食品进出口提供技术保障。; 关键词转基因大豆二重实时荧光pcr 快速筛选检测深加工制品; Keywords genetically modified soybean duplex fluorescence quantitative pcr rapid detection deeply processed products; 分类号 TS214.2 [轻工技术与工程—粮食、油脂及植物蛋白工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪圆环病毒2型和3型双重荧光定量PCR检测方法的建立被引量：3: 6; 作者牟泓晔周小杰杨永春王晓杜周莹珊宋厚辉; 机构浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江农林大学动物科技学院·动物医学院; 出处《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第3期457-463,共7页; 基金国家自然科学基金(31902249) 浙江省基础公益研究计划(LQ19C180003) 浙江省重点研发计划(2019C02043,2019C02052,2018C02028)。; 文摘为建立一种同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的方法,参照GenBank上已登录的PCV2 Cap基因和PCV3 Cap基因的保守序列,设计特异性引物和TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了同时检测PCV2和PCV3的双重荧光定量PCR检测方法,并对其进行特异性、灵敏性、可重复性检验。特异性试验结果显示,该方法除了对PCV2和PCV3的检测结果为阳性外,对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)检测均呈阴性,无交叉反应,特异性较强。敏感性试验结果显示,该检测方法同时检测猪圆环病毒2型和3型质粒标准品的最低检测极限均可达到10拷贝·μL^(-1),敏感性较高;该方法组内和组间的变异系数均小于2%,重复性较好。采集浙江省181份猪肉及全血样品,分别利用本文建立的检测方法与标准普通荧光PCR检测方法进行检测,结果显示,PCV2的阳性率为50.83%(92/181),PCV3的阳性率为37.57%(68/181),PCV2和PCV3共感染率为12.15%(22/181);而普通荧光PCR的上述检测结果分别为50.28%(91/181)、36.46%(66/181),共感染率为11.60%(21/181),两种方法对PCV2和PCV3的检测符合率分别可达98.91%和97.06%,对PCV2和PCV3混合感染符合率为95.45%。综上所述,本试验建立的双重荧光定量PCR检测方法可同时对PCV2和PCV3进行快速鉴别检测,可用于病原学检测和流行病学调查等。; 关键词猪圆环病毒2型猪圆环病毒3型 TAQMAN探针双重荧光定量pcr; Keywords porcine circovirus 2 porcine circovirus 3 TaqMan probe duplex fluorescence quantitative pcr; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名细菌性条斑病菌JH01诱导水稻抗病均一化差减文库的构建被引量：1: 7; 作者凌丹燕路梅; 机构浙江师范大学化学与生命科学学院; 出处《安徽农业科学》 CAS 2016年第2期188-191,共4页; 基金浙江省自然科学基金项目(Y3110194); 文摘 [目的]构建细菌性条班病菌诱导下的水稻抗病均一化差减eDNA文库，对获得的差异表达ESTs进行生物信息学及抗病相关基因的表达分析。[方法]以水稻IR26（Tester）和两优培九（Driver）幼苗5～6叶期叶片为材料，采用双链特异性核酸酶（DSN）介导的均一化消减杂交技术，构建细菌性条斑病菌JH01诱导的水稻抗病相关基因差减eDNA文库，以pLB-F和pLB-R为引物，通过菌液PCR扩增对差减文库的质量进行检测。【结果】eDNA文库的插入片段分布在0．5～2．0kb，平均大小约为1．0kb．重组率达95％。序列测定分析发现，随机挑取的504个克隆中有98条差异表达基因；经BLAST比对和GO注释发现，59条序列具有同源基因，分别参与信号转导、能量代谢、过敏性坏死反应、防卫反应等；另外39条序列无相似基因，有待进一步研究。通过实时荧光定量PCR发现，从该文库中分离得到的OsNDPK4参与细菌性条斑病菌JH01诱导的水稻防卫反应。[结论]水稻受细菌性条斑病菌侵染的eDNA文库质量较好，为研究条斑病菌致病性因子与水稻互作机制奠定基础.; 关键词细菌性条斑病水稻双链特异性核酸酶(DSN) 均一化差减杂交荧光定量pcr; Keywords Bacterial leaf streak Rice duplex-specific nnclease （DSN） Normalized subtractive hybridization Real-tine fluorescence quantitative pcr; 分类号 S432.1 [农业科学—植物病理学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	猫冠状病毒和猫细小病毒双重荧光定量PCR方法的建立	郭存杰王蕾毕振威钱晶张传美谭业平	《中国动物检疫》 CAS	2024	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	布氏杆菌和结核杆菌二重实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用	孟茹陈创夫张辉乔军任艳王正荣蒋松	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2010	17	在线阅读下载PDF 职称材料
3	一种快速检测HBV基因的荧光定量PCR法的建立	赵清许颂霄袁军罗进勇单幼兰尹一兵	《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心	2007	5	在线阅读下载PDF 职称材料
4	鉴别高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用	孔刚锐吴志明闫若潜赵明军王东方赵雪丽闫志玲程俊贞陈慧娟靳利粉	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2013	3	在线阅读下载PDF 职称材料
5	转基因大豆及其制品二重荧光定量PCR的建立与验证	王凤军叶素丹陈冠武包永华	《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心	2018	3	在线阅读下载PDF 职称材料
6	猪圆环病毒2型和3型双重荧光定量PCR检测方法的建立	牟泓晔周小杰杨永春王晓杜周莹珊宋厚辉	《浙江农业学报》 CSCD 北大核心	2022	3	在线阅读下载PDF 职称材料
7	细菌性条斑病菌JH01诱导水稻抗病均一化差减文库的构建	凌丹燕路梅	《安徽农业科学》 CAS	2016	1	在线阅读下载PDF 职称材料