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夹心ELISA方法检测生肉混合物中的猪肉成分的研究 被引量：19
1
作者 骆训国 栗绍文 +5 位作者 周蕾蕾 赵苏红 皮远鹏 王倩 孟宪荣 毕丁仁 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第S1期20-22,共3页
肉品掺假的鉴别是影响食品安全的一个重要问题。采用抗猪IgG-Fc单克隆抗体作为捕获抗体,以猪IgG作为检测标志物,建立了检测猪肉成分的夹心ELISA方法。单抗最佳包被浓度为1μg/mL,酶标抗体最佳浓度为1∶5 000稀释。结果混合物中猪肉掺杂... 肉品掺假的鉴别是影响食品安全的一个重要问题。采用抗猪IgG-Fc单克隆抗体作为捕获抗体,以猪IgG作为检测标志物,建立了检测猪肉成分的夹心ELISA方法。单抗最佳包被浓度为1μg/mL,酶标抗体最佳浓度为1∶5 000稀释。结果混合物中猪肉掺杂仅为1%时,有明显反应。该方法具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点。 展开更多
关键词 夹心elisa 检测 猪肉 IGG
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犬细粒棘球绦虫粪抗原夹心ELISA检测方法的建立 被引量：13
2
作者 张旭 古努尔.吐尔逊 +11 位作者 米晓云 石保新 张睿 巫剑 赵莉 阿布力克木 张玲 丁晓玲 阿布力兹 李国庆 卡那提拜克.开比热 张壮志 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第3期19-23,共5页
为建立特异性和敏感性高的检验犬细粒棘球绦虫感染的方法。用细粒棘球绦虫(简称,Eg)成虫抗原分别免疫兔和绵羊,收集高免血清,纯化的高免抗体。依据抗体夹心ELISA工作原理,以兔抗体包被,检测感染Eg、不同犬带科绦虫的实验犬和空白犬粪样... 为建立特异性和敏感性高的检验犬细粒棘球绦虫感染的方法。用细粒棘球绦虫(简称,Eg)成虫抗原分别免疫兔和绵羊,收集高免血清,纯化的高免抗体。依据抗体夹心ELISA工作原理,以兔抗体包被,检测感染Eg、不同犬带科绦虫的实验犬和空白犬粪样,绵羊抗体扑捉抗原,HRP标记兔抗绵羊IgG(1∶8 000)催化显色,用酶标仪测定OD 405nm吸光度,用以确定其特异性和敏感性。试验结果表明,敏感性为82.69%(43/52),特异性为85.88%(140/163);粪抗原在感染细粒棘球绦虫16d后可检出,最低抗原浓度为9.7ng/mL即犬感染5条成虫时可检测出阳性。该检测方法具有较好的特异性和灵敏性,为进一步研制检测细粒棘球绦虫虫体抗原ELISA检测试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 粪抗原 双抗夹心elisa 特异性 敏感性
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双抗夹心ELISA方法检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌 被引量：18
3
作者 段霞 黄欣 +2 位作者 黄岭芳 魏华 赖卫华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第24期272-276,共5页
采用0.5%福尔马林灭活的单核细胞增生李斯特氏菌作为免疫原免疫日本大耳兔,获得抗单核细胞增生李斯特氏菌多克隆抗体,并以此多克隆抗体作为捕获抗体,以抗单核细胞增生李斯特氏菌InternalinA(InlA)单克隆抗体作为检测抗体,建立快速、特... 采用0.5%福尔马林灭活的单核细胞增生李斯特氏菌作为免疫原免疫日本大耳兔,获得抗单核细胞增生李斯特氏菌多克隆抗体,并以此多克隆抗体作为捕获抗体,以抗单核细胞增生李斯特氏菌InternalinA(InlA)单克隆抗体作为检测抗体,建立快速、特异的检测该菌的双抗夹心ELISA方法。结果表明:该方法对单核细胞增生李斯特氏菌纯培养液的最低检测量为1.7×105CFU/mL。在检测食品样品的实验中,食品样本对本方法干扰较小,运用选择性增菌液进行前增菌可提高该方法的准确性。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特氏菌 多克隆抗体 单克隆抗体 双抗夹心elisa方法
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双抗夹心ELISA检测转Bar基因抗除草剂大豆 被引量：9
4
作者 李小宇 张春雨 +5 位作者 郭东全 张淋淋 尤晴 董英山 王永志 李启云 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第4期222-225,共4页
为快捷有效地检测转Bar基因抗除草剂大豆,利用已制备的抗除草剂Bar基因编码蛋白,膦丝菌素乙酰转移酶(phosphinothricin acetyltransferase,PAT)单克隆抗体和多克隆抗体,建立PAT蛋白双抗夹心酶联免疫吸附检测方法,对转Bar基因抗除草剂大... 为快捷有效地检测转Bar基因抗除草剂大豆,利用已制备的抗除草剂Bar基因编码蛋白,膦丝菌素乙酰转移酶(phosphinothricin acetyltransferase,PAT)单克隆抗体和多克隆抗体,建立PAT蛋白双抗夹心酶联免疫吸附检测方法,对转Bar基因抗除草剂大豆不同组织材料进行定量检测。结果显示,最佳检测条件为捕获抗体质量浓度0.125μg/m L,包被酶标板,37℃孵育1 h后4℃静置过夜,检测样品37℃孵育1.5 h,检测抗体质量浓度6.25μg/m L,37℃孵育1.5 h;PAT蛋白的最低检测限为0.04 ng/m L,大豆蛋白体系中为8 ng/m L;重复性变异系数小于3%。利用上述检测条件,对实验建立的转Bar基因抗除草剂大豆进行PAT蛋白定量检测,成功地在根、茎、花、叶、种子不同部位检测到该蛋白的表达。 展开更多
关键词 BAR 双抗夹心酶联免疫吸附 大豆 检测
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血清载脂蛋白A5 ELISA法的建立及评价 被引量：10
5
作者 魏红霞 张葵 +3 位作者 李雷 倪军 邱方 顾光煜 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期355-357,共3页
目的建立定量测定人血清中载脂蛋白A5(apoA5)浓度的ELISA双抗体夹心法,评价该法的敏感性、特异性、批内批间变异系数(CV),并分析apoA5与血脂指标的相关性。方法方阵法确定apoA5单克隆抗体的最佳检测浓度,建立apoA5标准曲线,ELISA双抗体... 目的建立定量测定人血清中载脂蛋白A5(apoA5)浓度的ELISA双抗体夹心法,评价该法的敏感性、特异性、批内批间变异系数(CV),并分析apoA5与血脂指标的相关性。方法方阵法确定apoA5单克隆抗体的最佳检测浓度,建立apoA5标准曲线,ELISA双抗体夹心法测定重组apoA5蛋白,确定最低检测限及批内、批间CV,并检测300例正常人apoA5浓度和血脂指标,应用百分位数法计算apoA5的参考值。结果制备的apoA5单克隆抗体的最佳检测浓度为1∶800,最低检测限为2.12μg/L;特异性检测试验表明:apoA5单克隆抗体只针对重组apoA5蛋白和血清中天然的apoA5,apoA1和BSA的A值均<0.2;批内CV<3.5%,批间CV<5.5%。血清apoA5的参考值范围为255.92～383.81μg/L。相关性分析表明:apoA5与TG呈负相关(r=-0.27,P<0.05),与TC存在负相关趋势,与HDL-C呈正相关(r=0.36,P<0.05)。结论本实验室建立的ELISA双抗体夹心法灵敏度和特异性均较好,为apoA5的临床检测提供了可行的方法。 展开更多
关键词 栽脂蛋白A5 双抗体夹心酶联免疫吸附试验
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猪轮状病毒性腹泻的ELISA双抗夹心法检测及防治建议 被引量：7
6
作者 王玲 蒲万霞 +4 位作者 孟小琴 邓海平 崔东安 焦硕 杨志强 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第5期1990-1990,2013,共2页
[目的]为猪轮状病毒的针对性防治提供建议。[方法]以不同来源、不同饲养方式下218头猪的粪便为材料,用ELISA双抗夹心法检测其中的轮状病毒(RV)抗原,结合流行病学调查对猪轮状病毒的发病因素及发病特点进行分析。[结果]RV多为隐性感染,... [目的]为猪轮状病毒的针对性防治提供建议。[方法]以不同来源、不同饲养方式下218头猪的粪便为材料,用ELISA双抗夹心法检测其中的轮状病毒(RV)抗原,结合流行病学调查对猪轮状病毒的发病因素及发病特点进行分析。[结果]RV多为隐性感染,且感染率较高。从所取218份样品中共检测出RV阳性50头份,阳性率为22.94%,其中,仔猪170头份,阳性率22.35%,中猪48头份,阳性率25.0%;笼养模式下猪的发病率最低,为17.43%,农户圈养方式下猪的发病率最高,达36.84%。[结论]流行病学调查结果显示,仔猪对RV的感染率高于中猪,采取笼养模式,并对仔猪进行RV防治可降低猪RV的发病率。 展开更多
关键词 猪轮状病毒 流行病学 elisa双抗夹心法
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柱状黄杆菌双抗体夹心ELISA检测方法的建立 被引量：8
7
作者 吕娜 殷晓平 +4 位作者 张虹茜 张懋岚 孙强 赵国坤 张捷 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第3期19-23,共5页
为快速检测柱状黄杆菌,本研究以纯化的柱状黄杆菌单克隆抗体为捕获抗体,以多克隆抗体为检测抗体,建立了双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)检测法。最佳的方案为用0.08μg/孔纯化的单克隆抗体4℃包被过夜,30g/L牛血清白蛋白37℃封闭90min,多克... 为快速检测柱状黄杆菌,本研究以纯化的柱状黄杆菌单克隆抗体为捕获抗体,以多克隆抗体为检测抗体,建立了双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)检测法。最佳的方案为用0.08μg/孔纯化的单克隆抗体4℃包被过夜,30g/L牛血清白蛋白37℃封闭90min,多克隆抗体的工作浓度为0.11μg/孔,检测抗原、多克隆抗体、酶标抗体均为37℃作用1h,显色15min后终止反应,当D492nm值≥0.776且P/N≥2.1时判定为阳性。该方法特异性强,与迟钝爱德华氏菌、大肠杆菌、嗜水气单胞菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌、哈维氏弧菌等水产病原菌均无交叉反应。最低检测剂量为1×103 CFU。本研究首次建立了检测柱状黄杆菌的双抗体夹心ELISA方法,经验证该方法特异性强、灵敏度高。 展开更多
关键词 柱状黄杆菌 双抗体夹心elisa 单克隆抗体
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单克隆抗体夹心ELISA检测蚕豆萎蔫病毒研究 被引量：3
8
作者 吴建祥 陈正贤 +2 位作者 娄沂春 周雪平 李德葆 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期500-502,共3页
利用 ２ 株特异性单抗，建立了检测蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）的灵敏度高、特异性好的单抗夹心ＥＬＩＳＡ 方法⒚经测定，ＭｃＡｂ 最适包被浓度为０４ μｇ／ｍ Ｌ，ＨＲＰＭｃＡｂ 最佳工作浓度为１∶２ ０００，该方法最小检出浓... 利用 ２ 株特异性单抗，建立了检测蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）的灵敏度高、特异性好的单抗夹心ＥＬＩＳＡ 方法⒚经测定，ＭｃＡｂ 最适包被浓度为０４ μｇ／ｍ Ｌ，ＨＲＰＭｃＡｂ 最佳工作浓度为１∶２ ０００，该方法最小检出浓度为０１６ μｇ／ｍ Ｌ，与几种常见的病毒无交叉反应⒚对杭州地区的 １４０ 多个样本进行了检测，发现蚕豆、豌豆中ＢＢＷ Ｖ 的阳性率达 ８０％ 展开更多
关键词 蚕豆萎蔫病毒 单克隆抗体 夹心elisa
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白念珠菌烯醇化酶双抗体夹心ELISA检测方法的建立 被引量：4
9
作者 胡毓安 李芳秋 +1 位作者 马春芳 年娜 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期565-567,574,共4页
目的建立检测白念珠菌烯醇化酶(enolase,Eno)的双抗体夹心ELISA法,并试用于几种真菌培养上清液的检测。方法将抗白念珠菌Eno单抗作为包被抗体,辣根过氧化物酶标记的羊抗Eno抗体作为检测抗体,用方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体浓度,建... 目的建立检测白念珠菌烯醇化酶(enolase,Eno)的双抗体夹心ELISA法,并试用于几种真菌培养上清液的检测。方法将抗白念珠菌Eno单抗作为包被抗体,辣根过氧化物酶标记的羊抗Eno抗体作为检测抗体,用方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体浓度,建立检测Eno的ELISA法,对方法的精密度、特异性、最低检测限等指标进行评价。用该法检测白念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、季也蒙念珠菌、新生隐球菌和酿酒酵母等不同真菌培养上清中Eno水平。结果 Eno浓度为20 ng/mL和5 ng/mL时,批内和批间变异系数(CV)分别为6.61%、9.19%和6.98%、13.81%;最低检测限为1.25ng/mL。本法可从白念珠菌37℃培养24 h后的上清中检出Eno,Eno含量与白念珠菌菌丝含量呈正相关。本法对近平滑念珠菌有微弱交叉反应,与热带念珠菌、光滑念珠菌、季也蒙念珠菌、新生隐球菌和酿酒酵母均无交叉反应。结论建立的检测白念珠菌Eno的双抗体夹心ELISA方法有较好的特异性,可用于评价Eno检测在侵袭性白念珠菌感染中的诊断价值。 展开更多
关键词 侵袭性念珠菌病 白念珠菌 烯醇化酶 双抗体夹心酶联免疫吸附试验
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双抗体夹心ELISA法测定猪α-干扰素的浓度 被引量：6
10
作者 蒋佳颖 王一成 +3 位作者 杨孝朴 袁秀芳 李军星 徐丽华 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期740-745,共6页
为了能够准确测定猪血清中猪α-干扰素（Po IFN-α）含量及猪α-干扰素制品的浓度,本研究以制备并经过亲和层析提纯的兔抗猪α-干扰素Ig G多克隆抗体为包被抗体,以制备的鼠抗猪α-干扰素单克隆纯化抗体作为二抗,建立了测定猪α-干扰素... 为了能够准确测定猪血清中猪α-干扰素（Po IFN-α）含量及猪α-干扰素制品的浓度,本研究以制备并经过亲和层析提纯的兔抗猪α-干扰素Ig G多克隆抗体为包被抗体,以制备的鼠抗猪α-干扰素单克隆纯化抗体作为二抗,建立了测定猪α-干扰素浓度的双抗体夹心ELISA法（DAS-ELISA）。通过条件优化,最佳兔抗猪α-干扰素Ig G多克隆纯化抗体包被浓度为12.5μg·m L^-1,最佳鼠抗猪α-干扰素单克隆纯化抗体作用浓度为6.25μg·m L^-1,利用本实验室制备的已知浓度猪α-干扰素标准蛋白建立标准曲线,确定该方法检测猪α-干扰素浓度范围为0.0781-2.50μg·m L^-1。与Lowry法、冻干称量法测定猪α-干扰素浓度相比较,3种方法检测结果无显著差异,但所建立的双抗体夹心ELISA法能够检测血清中猪α-干扰素浓度,且方法简便。 展开更多
关键词 猪α-干扰素 双抗体夹心elisa 定量检测
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双抗夹心ELISA检测食品中大肠杆菌O157:H7方法研究 被引量：31
11
作者 葛萃萃 钟青萍 +1 位作者 张旺 欧阳鑫 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第1期171-175,共5页
研究获得纯化抗大肠杆菌O157:H7IgY抗体,经检测10mg/ml纯化IgY抗体的效价为1:320;以大肠杆菌O157:H7免疫新西兰大耳白兔,获得兔抗大肠杆菌O157:H7IgG抗体,效价达1:25600。以兔抗大肠杆菌O157:H7IgG抗体稀释3200倍作为捕获抗体,抗大肠杆... 研究获得纯化抗大肠杆菌O157:H7IgY抗体,经检测10mg/ml纯化IgY抗体的效价为1:320;以大肠杆菌O157:H7免疫新西兰大耳白兔,获得兔抗大肠杆菌O157:H7IgG抗体,效价达1:25600。以兔抗大肠杆菌O157:H7IgG抗体稀释3200倍作为捕获抗体,抗大肠杆菌O157:H7IgY抗体为检测抗体建立双抗夹心ELISA方法检测大肠杆菌O157:H7,正交试验分析表明,捕获抗体于37℃包被2h、不封闭、抗原与捕获抗体于37℃结合2h、检测抗体浓度为0.25mg/ml、与抗原于37℃结合1h为最优反应条件。该方法对纯培养菌液检出限为105CFU/ml,具有良好的敏感性及特异性。染菌样品经在EC增菌液中选择性培养后进行双抗夹心ELISA检测,接种量为0.1～1CFU/g(ml)的样品在培养12h后可检出阳性反应,1～10CFU/g(ml)的样品在培养8h后可检出阳性反应。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157:H7:双抗夹心elisa 检测
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双抗夹心ELISA法定量检测食品中大肠杆菌O157:H7初探 被引量：9
12
作者 宋宏新 马冬 +1 位作者 薛海燕 李红心 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第10期528-530,共3页
以鸡抗O157:H7特异性脂多糖(LPS)抗体(IgY)为捕获抗体,酶标抗体(HRP-IgY)为检测抗体建立双抗夹心ELISA法检测食品中大肠杆菌O157:H7的方法,确定了抗原浓度对数与OD450值的高度线性相关性,根据检测OD450值可从拟合回归曲线确定样品中的... 以鸡抗O157:H7特异性脂多糖(LPS)抗体(IgY)为捕获抗体,酶标抗体(HRP-IgY)为检测抗体建立双抗夹心ELISA法检测食品中大肠杆菌O157:H7的方法,确定了抗原浓度对数与OD450值的高度线性相关性,根据检测OD450值可从拟合回归曲线确定样品中的含菌量,含菌量≥104CFU/ml的食品样品可直接用双抗夹心法进行检测,含菌量≤104CFU/ml的食品样品可增菌14h后检测。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157:H7 食源性病原菌定量检测 双抗夹心elisa
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检测乳粉中克罗诺杆菌属穆汀斯克罗诺杆菌的双抗夹心ELISA方法的研究 被引量：4
13
作者 石曼 生威 +5 位作者 杜欣军 王帅 杨丽 余桂春 郭柏雪 王硕 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期335-337,共3页
获得了抗穆汀斯克罗诺杆菌的多克隆抗体,抗体只对穆汀斯克罗诺杆菌菌株有特异性识别,而对非穆汀斯克罗诺杆菌无交叉反应。利用所得到的抗体,建立了一种双抗夹心ELISA检测方法,该方法对纯培养穆汀斯克罗诺杆菌菌液检出限为105cfu/mL;经过... 获得了抗穆汀斯克罗诺杆菌的多克隆抗体,抗体只对穆汀斯克罗诺杆菌菌株有特异性识别,而对非穆汀斯克罗诺杆菌无交叉反应。利用所得到的抗体,建立了一种双抗夹心ELISA检测方法,该方法对纯培养穆汀斯克罗诺杆菌菌液检出限为105cfu/mL;经过17h增菌,全脂乳粉染菌样品中的穆汀斯克罗诺杆菌的检出限为0.1cfu/g。该方法为快速检测乳粉中穆汀斯克罗诺杆菌的污染奠定了基础。 展开更多
关键词 穆汀斯克罗诺杆菌 双抗夹心elisa 全脂乳粉 检测
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卵转铁蛋白双抗夹心ELISA方法的建立 被引量：2
14
作者 李晶 王薇 +2 位作者 张燕 陆旸 王硕 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2015年第17期15-18,共4页
卵转铁蛋白是鸡蛋中的主要过敏原,针对鸡蛋中主要过敏原卵转铁蛋白建立了双抗夹心ELISA方法,该方法检出限为(15.37±1.20)ng/m L。除白蛋白外,该方法对粘蛋白、溶菌酶、α-乳白蛋白、牛奶总蛋白、β-乳球蛋白、酪蛋白、花生总蛋白... 卵转铁蛋白是鸡蛋中的主要过敏原,针对鸡蛋中主要过敏原卵转铁蛋白建立了双抗夹心ELISA方法,该方法检出限为(15.37±1.20)ng/m L。除白蛋白外,该方法对粘蛋白、溶菌酶、α-乳白蛋白、牛奶总蛋白、β-乳球蛋白、酪蛋白、花生总蛋白、大豆、杏仁和绿豆等致敏蛋白几乎没有交叉反应。板内重复性和板间重复性较好,因此所建立的方法可用于对卵转铁蛋白的检测。 展开更多
关键词 卵转铁蛋白 双抗夹心elisa方法 过敏原
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双抗原夹心ELISA检测抗HCV总抗体 被引量：12
15
作者 韩振格 孟继鸿 周镇先 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期246-248,共3页
目的建立检测抗HCV抗体的双抗原夹心ELISA法,评价其可行性。方法将与His或GST融合表达的HCV基因工程抗原,分别用作ELISA的包被和酶标记抗原,建立用于抗HCV总抗体检测的双抗原夹心ELISA。用此方法检测1 968份临床血清标本,并以间接ELISA... 目的建立检测抗HCV抗体的双抗原夹心ELISA法,评价其可行性。方法将与His或GST融合表达的HCV基因工程抗原,分别用作ELISA的包被和酶标记抗原,建立用于抗HCV总抗体检测的双抗原夹心ELISA。用此方法检测1 968份临床血清标本,并以间接ELISA(北京万泰试剂)与之对照;此外,用套式RT-PCR检测部分血清的HCV RNA。结果有1 761份血清2种ELISA检测均为阴性,有190份血清均为阳性,两种方法符合率为99.1%;有17份血清的检测结果不相符,间接法阳性而本法阴性的14份,其中HCV RT-PCR阳性1份;本法阳性而间接ELISA阴性的3份,其中RT-PCR阳性2份。双抗原夹心ELISA与间接ELISA的敏感性分别为99.48%、98.96%,特异性分别为99.94%、99.27%。结论新研制的检测抗HCV总抗体的双抗原夹心ELISA具有较高的敏感性和特异性,值得作进一步的深入研究。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 抗体检测 双抗原夹心elisa
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传染性胰坏死病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立 被引量：5
16
作者 张琳琳 连科迅 +7 位作者 张英 蒋烨 姜艳萍 崔文 乔薪瑗 唐丽杰 李一经 刘敏 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2014年第4期57-62,72,共7页
以纯化的兔抗传染性胰坏死病病毒(IPNV)VP2重组蛋白多克隆抗体为包被抗体,抗IPNV VP2单克隆抗体为检测抗体建立了IPNV双抗体夹心ELISA方法。优化反应条件为:兔抗IPNV VP2重组蛋白多克隆抗体包被浓度为1.28μg/mL,抗IPNV VP2单克隆抗体... 以纯化的兔抗传染性胰坏死病病毒(IPNV)VP2重组蛋白多克隆抗体为包被抗体,抗IPNV VP2单克隆抗体为检测抗体建立了IPNV双抗体夹心ELISA方法。优化反应条件为:兔抗IPNV VP2重组蛋白多克隆抗体包被浓度为1.28μg/mL,抗IPNV VP2单克隆抗体的工作浓度为1.34μg/mL,酶标二抗稀释比例为1∶2 000,以P/N>2,且OD490 nm>0.101 494作为阳性判定标准。该方法的重复性变异系数均小于10%,与传染性造血器官坏死病毒(IHNV)、病毒性出血败血症病毒(VHSV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、轮状病毒(HRV)无交叉反应。对41份虹鳟肝脏样品分别进行双抗体夹心ELISA和RT-PCR检测,结果双抗体夹心法与RT-PCR法检测符合率为97%,表明本实验建立的双抗体夹心ELISA检测方法检测IPNV具有较高的敏感性和特异性,可用于IPNV的病原学检测。 展开更多
关键词 传染性胰坏死病毒 双抗体夹心elisa检测方法 单克隆抗体 兔抗血清
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胃蛋白酶原Ⅱ单抗制备及夹心ELISA的初步建立 被引量：3
17
作者 张红绪 孙青芸 +7 位作者 王继创 李恒思 张怡青 董彩文 李玉林 刘旺根 景建洲 王云龙 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第4期56-59,共4页
制备配对胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)单抗,建立人血清中胃蛋白酶原Ⅱ夹心ELISA检测方法。用胃蛋白酶原Ⅱ免疫Balb/c小鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0融合,用HAT培养基进行筛选培养,间接ELISA检测阳性克隆,对阳性孔进行多次单克隆化,选出效价高、分... 制备配对胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)单抗,建立人血清中胃蛋白酶原Ⅱ夹心ELISA检测方法。用胃蛋白酶原Ⅱ免疫Balb/c小鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0融合,用HAT培养基进行筛选培养,间接ELISA检测阳性克隆,对阳性孔进行多次单克隆化,选出效价高、分泌性能稳定的杂交瘤细胞,制备腹水并进行纯化。进行单抗配对,建立胃蛋白酶原Ⅱ双抗体夹心检测方法。获得1D8、1C6、2H11、2E3等4株杂交瘤,经配对试验,确定1D8、2H11可作为夹心ELISA检测PGⅡ的单抗。成功制备出配对单抗,初步建立了PGⅡ双抗体夹心ELISA方法。 展开更多
关键词 胃蛋白酶原 单克隆抗体 双抗体夹心elisa
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J亚群禽白血病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立 被引量：8
18
作者 廖亚琳 梁艺瑜 +3 位作者 王秀珑 冯敏 谭利强 曹伟胜 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第9期15-18,共4页
本研究利用J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus,ALV-J)gp85单因子血清纯化后的抗体成功建立了检测ALV-J抗原的双抗体夹心ELISA方法(DAS-ELISA)。结果表明,该方法具有良好的特异性、重复性和稳定性,对ALV-J抗原的最小检... 本研究利用J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus,ALV-J)gp85单因子血清纯化后的抗体成功建立了检测ALV-J抗原的双抗体夹心ELISA方法(DAS-ELISA)。结果表明,该方法具有良好的特异性、重复性和稳定性,对ALV-J抗原的最小检出量为0.165μg/mL。用该法对48份临床血浆样品进行检测,结果与PCR方法的符合率达到85.2%。 展开更多
关键词 禽白血病 J亚群禽白血病病毒 双抗体夹心elisa
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SIVp27抗原双抗体夹心ELISA检测方法的研究 被引量：3
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作者 孙敏 魏强 +4 位作者 梁成珠 佟巍 丛喆 蒋虹 涂新明 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2007年第4期32-35,共4页
目的建立检测SIVp27抗原的双抗体夹心ELISA方法并进行初步应用。方法使用ProteinA亲和层析柱纯化腹水中的SIVp27单抗,用过碘酸钠法对单抗进行辣根过氧化物酶标记。经抗体配对实验确定包被抗体和检测抗体,再用棋盘滴定法确定抗体工作浓度... 目的建立检测SIVp27抗原的双抗体夹心ELISA方法并进行初步应用。方法使用ProteinA亲和层析柱纯化腹水中的SIVp27单抗,用过碘酸钠法对单抗进行辣根过氧化物酶标记。经抗体配对实验确定包被抗体和检测抗体,再用棋盘滴定法确定抗体工作浓度后,探索构建检测SIVp27抗原的双抗体夹心ELISA法。应用建立的双抗体夹心ELISA法,对SIV模型猴血浆标本和SHIV模型猴病毒分离培养上清标本进行了检测,并将其结果与Coulter公司试剂盒检测结果进行比较。结果以稀释至20ug/mL的2E12为包被抗体、1:400稀释的酶标3G3为检测抗体为ELISA最优体系。模型猴血浆标本和病毒分离培养上清标本的检测结果表明自建体系可以用于SIVp27抗原的检测,特异性良好,灵敏度略低于Coulter公司试剂盒。结论检测SIVp27抗原的双抗体夹心ELISA方法初步建成,为研制有独立知识产权的检测试剂奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 SIV P27抗原 单克隆抗体 双抗体夹心elisa
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鹿流行性出血病病毒双抗夹心ELISA方法的建立 被引量：4
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作者 陈兵 李健波 +6 位作者 杨俊兴 阮周曦 孙洁 张彩虹 刘建利 花群义 周晓黎 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第10期1-5,共5页
为建立鹿流行性出血病病毒(EHDV)病原学检测方法,用纯化的抗EHDV特异性单克隆抗体包被ELISA板,用兔抗EHDV IgG作为夹心抗体,IgG作为夹心抗体建立EHDV双抗夹心ELISA方法,并对该方法的特异性和敏感性进行了试验。用ELISA分别检测EHDV、蓝... 为建立鹿流行性出血病病毒(EHDV)病原学检测方法,用纯化的抗EHDV特异性单克隆抗体包被ELISA板,用兔抗EHDV IgG作为夹心抗体,IgG作为夹心抗体建立EHDV双抗夹心ELISA方法,并对该方法的特异性和敏感性进行了试验。用ELISA分别检测EHDV、蓝舌病病毒(BTV)、水疱性口炎病毒(VSV)、赤羽病病毒(AKV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)样品,用RT-PCR作对照。结果表明,ELISA具有良好的特异性和敏感性。用夹心ELISA和RT-PCR同时检测128份参考样品,结果表明夹心ELISA的特异性和敏感性分别为100%和96.3%,两种方法的符合率为99.2%。本研究结果为EHDV检测及鹿流行性出血病流行病学调查提供了有效的工具。 展开更多
关键词 鹿流行性出病 鹿流行性出病病毒 双抗体夹心elisa 单克隆抗体
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