目的利用噬菌体抗体库技术制备特异性的抗缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor,HIF-1α)肺腺癌人源单链抗体(scFv),并用于荷人肺腺癌裸鼠体内放射免疫显像(radioimmunoimaging,RII)研究。方法利用噬菌体抗体库技术筛选特异性抗HI...目的利用噬菌体抗体库技术制备特异性的抗缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor,HIF-1α)肺腺癌人源单链抗体(scFv),并用于荷人肺腺癌裸鼠体内放射免疫显像(radioimmunoimaging,RII)研究。方法利用噬菌体抗体库技术筛选特异性抗HIF-1α肺腺癌人源scFv,并将其感染大肠杆菌HB2151,进行scFv的可溶性表达。接种肺腺癌A549细胞复制荷瘤裸鼠模型,尾静脉注射131I标记可溶scFv,于注射后24、48、72、120h进行SPECT平面静态检查,观察肿瘤内放射性浓聚情况,用感兴趣区(region of interest,ROI)技术分析T/NT值,取平面静态检查肿瘤显影清晰时进行SPECT/CT图像融合。结果经鉴定证实制备出特异性的抗HIF-1α肺腺癌人源scFv,荷瘤裸鼠体内RII结果显示131I-可溶scFv可以选择性地积聚于肿瘤组织,肿瘤区放射性浓聚、T/NT值均在72h达到高峰,利用ROI技术得到的T/NT值此时最大可达3.19。72h时融合图像肿瘤显像良好,图像清晰。结论成功制备特异性抗HIF-1α肺腺癌人源scFv,131I标记后荷人肺腺癌裸鼠RII肿瘤显影良好。展开更多
目的扩增、表达抗人宫颈癌单链抗体(ScFv)基因;对ScFv蛋白进行活性鉴定、二级结构、三维结构预测和理化性质分析。方法采用基因重组技术构建抗人宫颈癌ScFv基因,进行TG1和HB2151两个原核体系的表达:SDS-PAGE、 Western bloRing、竞争抑...目的扩增、表达抗人宫颈癌单链抗体(ScFv)基因;对ScFv蛋白进行活性鉴定、二级结构、三维结构预测和理化性质分析。方法采用基因重组技术构建抗人宫颈癌ScFv基因,进行TG1和HB2151两个原核体系的表达:SDS-PAGE、 Western bloRing、竞争抑制实验、免疫组化反应检测ScFv;用Antheprot4．3软件、Swiss-model、3dpssm进行蛋白理化性质分析和立体结构模拟。结果抗人宫颈癌可溶性ScFv大小为32 000左右,与预计蛋白相对分子质量相符:可溶性和展示性ScFv均可与人宫颈癌细胞株细胞膜表面抗原结合。免疫组化显示能与宫颈癌组织特异性结合而不与正常宫颈组织和其他肿瘤组织结合。ScFv蛋白等电点预测值为7．215,属于α+β蛋白;VH和VL区均有多个蛋白激酶C磷酸化位点和酪氨酸激酶Ⅱ磷酸化位点。三维结构预测显示linker贴近,使VL和VH形成一个疏水的“口袋”,这一结构有利于抗原的结合。结论经基因工程方法制备的抗人宫颈癌ScFv具有与亲本单克隆抗体相似的抗体活性和特异性。抗人宫颈癌ScFv构建为进一步构建双特异性ScFv和双功能ScFv基因创造了条件:其成功的表达为人宫颈癌的早期诊断和特异性治疗打下了基础。计算机对ScFv蛋白的空间结构的模拟和理化性质的分析为ScFv的进一步政建和抗原、抗体反应的研究提供了宝贵的资料。展开更多
文摘目的利用噬菌体抗体库技术制备特异性的抗缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor,HIF-1α)肺腺癌人源单链抗体(scFv),并用于荷人肺腺癌裸鼠体内放射免疫显像(radioimmunoimaging,RII)研究。方法利用噬菌体抗体库技术筛选特异性抗HIF-1α肺腺癌人源scFv,并将其感染大肠杆菌HB2151,进行scFv的可溶性表达。接种肺腺癌A549细胞复制荷瘤裸鼠模型,尾静脉注射131I标记可溶scFv,于注射后24、48、72、120h进行SPECT平面静态检查,观察肿瘤内放射性浓聚情况,用感兴趣区(region of interest,ROI)技术分析T/NT值,取平面静态检查肿瘤显影清晰时进行SPECT/CT图像融合。结果经鉴定证实制备出特异性的抗HIF-1α肺腺癌人源scFv,荷瘤裸鼠体内RII结果显示131I-可溶scFv可以选择性地积聚于肿瘤组织,肿瘤区放射性浓聚、T/NT值均在72h达到高峰,利用ROI技术得到的T/NT值此时最大可达3.19。72h时融合图像肿瘤显像良好,图像清晰。结论成功制备特异性抗HIF-1α肺腺癌人源scFv,131I标记后荷人肺腺癌裸鼠RII肿瘤显影良好。
文摘目的扩增、表达抗人宫颈癌单链抗体(ScFv)基因;对ScFv蛋白进行活性鉴定、二级结构、三维结构预测和理化性质分析。方法采用基因重组技术构建抗人宫颈癌ScFv基因,进行TG1和HB2151两个原核体系的表达:SDS-PAGE、 Western bloRing、竞争抑制实验、免疫组化反应检测ScFv;用Antheprot4．3软件、Swiss-model、3dpssm进行蛋白理化性质分析和立体结构模拟。结果抗人宫颈癌可溶性ScFv大小为32 000左右,与预计蛋白相对分子质量相符:可溶性和展示性ScFv均可与人宫颈癌细胞株细胞膜表面抗原结合。免疫组化显示能与宫颈癌组织特异性结合而不与正常宫颈组织和其他肿瘤组织结合。ScFv蛋白等电点预测值为7．215,属于α+β蛋白;VH和VL区均有多个蛋白激酶C磷酸化位点和酪氨酸激酶Ⅱ磷酸化位点。三维结构预测显示linker贴近,使VL和VH形成一个疏水的“口袋”,这一结构有利于抗原的结合。结论经基因工程方法制备的抗人宫颈癌ScFv具有与亲本单克隆抗体相似的抗体活性和特异性。抗人宫颈癌ScFv构建为进一步构建双特异性ScFv和双功能ScFv基因创造了条件:其成功的表达为人宫颈癌的早期诊断和特异性治疗打下了基础。计算机对ScFv蛋白的空间结构的模拟和理化性质的分析为ScFv的进一步政建和抗原、抗体反应的研究提供了宝贵的资料。
